二苯乙烯苷对血小板聚集和细胞质游离钙离子浓度的影响

［摘要］目的观察二苯乙烯苷对兔血小板内游离钙离子浓度（［Ca2+］i）的影响,探讨其抗血小板聚集的作用机制。方法采用比浊法测定兔血小板聚集功能;双波长荧光探针Fura 2测定血小板细胞质内［Ca2+］i。结果1～10 μmol•L 1二苯乙烯苷体外给药对二磷酸腺苷（ADP）和凝血酶引起的血小板聚集有浓度依赖性抑制作用。有无细胞外钙时, 1～10 μmol•L 1二苯乙烯苷对静息态血小板的［Ca2+］i均无明显影响,但对激活态血小板［Ca2+］i的升高有明显抑制作用,呈剂量依赖性。结论二苯乙烯苷抑制血小板聚集的作用机制可能与其抑制血小板细胞质 ［Ca2+］i的升高有关。     

钩藤碱对血小板解聚作用及红细胞变形运动的影响

探讨了中药钩藤所含主要成分钩藤碱对血小板和红细胞的药理作用。浓度为0.325～1.30mmol/L时钩藤碱对ADP所致兔血小板聚集有明显促进解聚的作用,此作用较ASA略强。钩藤碱对正常血小板内cAMP浓度无明显影响,但显著抑制血小板聚集剂凝血酶及ADP所引起的血小板内cAMP浓度下降。钩藤碱具有明显改善红细胞变形能力的作用.     

槲皮素单硫酸酯钠盐对凝血酶诱导的猪血小板聚集的抑制作用

目的:研究槲皮素单硫酸酯钠盐(SQMS)对凝血酶诱导的猪血小板聚集的抑制作用。方法:用比浊法测定血小板聚集。Fura 2-AM荧光法检测胞浆游离钙浓度([Ca~(2 )]_i)。用组蛋白ⅢS,[γ-~(32)P]ATP与蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)酶液一起温育的方法测定PKC的活性。用SDS-PAGE分离骨架蛋白。结果:SQMS对凝血酶诱导的血小板聚集有抑制作用。SQMS抑制凝血酶诱导的血小板胞外钙内流和胞内钙释放;SQMS也降低静息血小板[Ca~(2 )]_i。SQMS抑制血小板胞浆PKC的活性,但不影响胞膜PKC。SQMS对凝血酶诱导的血小板肌动蛋白聚合有强的抑制作用。结论:SQMS对凝血酶诱导的猪血小板聚集有抑制作用,其分子作用机制可能与其抑制血小板外钙内流,内钙释放,PKC的活性,和肌动蛋白聚合有关。     

镉诱导HEK293细胞胞内钙稳态的失调引发细胞凋亡

目的　研究镉诱导HEK2 93细胞钙稳态失调及其引发细胞凋亡的机制。方法　通过吖啶橙 /溴乙锭双荧光染色法检测细胞凋亡 ,并通过MTT法检测细胞生长抑制 ;以Fluo 3/AM和Fura 2 /AM为探针检测胞浆内游离钙离子浓度 ([Ca2 +]i)的变化 ;使用钙调磷酸酶试剂盒测定镉对钙调磷酸酶活性的影响。结果　镉诱导HEK2 93细胞的凋亡和生长抑制呈浓度依赖性 ;镉通过引发胞内钙库的释放后引起胞外钙离子内流 ;钙信号阻断剂能显著地抑制镉引起的细胞凋亡 ;镉使胞内钙调磷酸酶的活性显著增加。结论　 [Ca2 +]i 升高使钙调磷酸酶活化可能在镉引发细胞凋亡过程中起重要作用。     

丹酚酸B镁抑制ATP和KCl诱导大鼠主动脉平滑肌细胞内钙的升高

目的研究丹酚酸B镁(M agnesium lithosperm ate B,MLB)对去内皮离体血管舒缩反应以及对血管平滑肌细胞内游离钙浓度[Ca2+]i的影响。方法去内皮大鼠胸主动脉血管环等张收缩实验和采用钙离子荧光指示剂F luo-3,运用F-4500阳离子测定系统动态检测胸主动脉平滑肌细胞[Ca2+]i。结果血管舒缩实验显示,无钙或常钙条件下MLB对血管基础张力均无作用。MLB 50~200μmol.L-1预给药组抑制无钙条件下苯肾上腺素(PE)1μmol.L-1诱导的血管收缩以及常钙条件下KC l 60 mmol.L-1诱导的血管收缩,并呈浓度相关性。而钙离子通道阻滞剂维拉帕米(Ver)10μmol.L-1则完全阻断KC l诱导的血管收缩。在复钙实验中观察到,MLB 50~200μmol.L-1不仅抑制PE 1μmol.L-1诱导的内钙依赖性血管收缩,而且对复钙后外钙依赖性的血管收缩也有抑制作用。细胞内钙测定实验表明,MLB预孵育的AVSMCs静息态[Ca2+]i没有变化。无钙条件下,MLB 50、100和200μmol.L-1抑制ATP20μmol.L-1诱导内钙释放引起的[Ca2+]i升高,抑制率分别为17.4%、32.4%和61.1%,显示较好的浓度相关性。AVSMCs于常钙条件下用Thapsigargin耗竭钙库后,KCl 60 mmol.L-1诱发外钙内流,引起[Ca2+]i升高,10μmol.L-1的Ver则能完全阻断这种外钙内流。在MLB预给药组,KCl诱导的[Ca2+]i升高降低,抑制率分别为20.0%、32.8%和52.6%。结论MLB能够抑制PE、高K+和复Ca2+诱导的血管收缩,并能抑制ATP和KCl诱导的血管平滑肌细胞内钙的升高,提示MLB对血管平滑肌细胞内钙的影响可能与抑制细胞内钙释放和电压依赖性钙通道有关。     

小檗碱对豚鼠心室肌细胞胞浆内游离钙离子浓度的影响

研究小檗碱对豚鼠心肌细胞胞浆 [Ca2 + ]i 的影响 .用酶解法分离单个豚鼠心肌细胞 ,Fluo- 3/AM标记胞浆内游离钙离子 ,激光扫描共聚焦显微镜实时测定胞浆 [Ca2 + ]i变化 .结果 ,小檗碱 1 -1 0 0 μmol· L-1对正常台氏液中静息状态细胞胞浆[Ca2 + ]i 无明显影响 ;小檗碱 1 μmol·L-1对 KCl30mmol·L-1引起的细胞外钙内流有抑制作用 ( P<0 .0 1 ) ,而小檗碱 1 0 0 μmol·L-1对细胞内钙库释放有强烈激动作用 ( P<0 .0 1 ) .结果提示在豚鼠心肌细胞上低浓度小檗碱即能抑制电压依赖性钙通道 ,而高浓度时又能激动细胞内钙库释放 .     

J—894对人体血小板激活时胞浆内游离钙浓度的影响

细胞内游离钙浓度在细胞反应的调节中作为第二信使起很重要的作用。本文实验采用荧光钙指示剂quin-2测定血小板胞浆内游离钙浓度[Ca^2 ]i的变化。结果表明在1mmol/L外钙的存在下，凝血酶（0.3U/ml）使血小板[Ca^2 ]i增高4－5倍。但在外钙缺乏的情况下，凝血酶使血小板[Ca^2 ]i增加较少，似科凝血酶增加[Ca^2 ]i，部分是通过释放内钙，但主要是通过钙内.J-894通过减少钙内流和释放明显抑制凝血酶引起的血小板[Ca^2 ]i的升高，剂量与效应相关。提示J－894可能是一种钙通道阻滞剂。     

小檗胺对ROCC介导的血管平滑肌细胞内游离钙的影响

目的　研究小檗胺 (BA)对受体调控性Ca2 +通道介导的家兔胸主动脉血管平滑肌细胞内游离钙 ([Ca2 +]i)的影响。方法　家兔主动脉血管平滑肌以Fluo 3/AM负载 ,通过激光扫描共聚焦显微镜 (LSCM )测定 [Ca2 +]i。结果　在细胞外Ca2 +存在的条件下 ,BA 30 μmol·L-1不影响静息[Ca2 +]i;但对去甲肾上腺素 (NE) 30mmol·L-1、5 羟色胺 (5 HT) 1μmol·L-1诱导的 [Ca2 +]i 升高有明显的抑制作用。在无胞外钙时 ,对咖啡因 40mmol·L-1诱导的 [Ca2 +]i 升高没有作用。结论　BA对ROCC激活后的外钙内流有明显的抑制作用 ,对内钙释放没有影响。其作用与维拉帕米相似     

螺旋藻多糖对小鼠腹腔巨噬细胞游离Ca~(2+)浓度的影响

目的 :研究探讨螺旋藻多糖 (SPP)的免疫调节机制。方法 :采用荧光分光光度法 ,测定SPP对小鼠腹腔巨噬细胞 (MΦ)游离Ca2 +浓度 ([Ca2 +]i)的影响。结果 :SPP能剂量依赖性地引起小鼠腹腔MΦ[Ca2 +]i 明显升高 ,[Ca2 +]i 的升高是由胞外钙内流和胞内钙释放共同作用的结果。结论 :SPP所产生的免疫调节作用与其能够使巨噬细胞[Ca2 +]i 升高有关。     

槲皮素对血小板聚集和胞浆游离钙的影响(英文)

目的:研究槲皮素对凝血酶诱导的血小板聚集和胞浆游离钙浓度的影响及钙对槲皮素的血小板聚集抑制效应的作用。方法:用荧光钙离子指示剂观察槲皮素对血小板胞浆游离钙的影响.结果:槲皮素明显抑制凝血酶诱导的血小板聚集和游离钙的升高.IC_(50)和95％可信区间分别为146.2(92.4～231.3)和78.5(49.5—124.4)μmol·L~(-1).槲皮素对血小板的抑制作用可被钙翻转.槲皮素对凝血酶诱导的钙释放无影响.结论:抑制钙内流是槲皮素抑制血小板聚集和[Ca~(2 )]_i升高的机制.     

三七皂甙Rg1对大鼠实验性血栓形成,血小板聚集率及血小板内游离钙水平的影响

三七皂甙Rg₁可明显降低实验性血栓形成, 并且以剂量依赖方式抑制凝血酶诱导的血小板聚集. 此外, Rg₁还可抑制凝血酶诱导的正常血压及肾性高血压大鼠血小板内游离钙(［Ca²⁺］_i)升高. 表明Rg₁的抗血栓形成和抗血小板聚集作用可能与抑制血小板［Ca²⁺］_i升高有关.     

小檗碱对神经递质引起的新生大鼠脑细胞内游离钙升高的影响

以Ｆｕｒａ－２／ＡＭ为荧光指示剂，利用ＡＲ－ＣＭ－ＭＩＣ阳离子系统测定小檗碱（Ｂｅｒ）对新生大鼠脑细胞静息Ｃａ２＋和神经递质引起的脑细胞内游离钙浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）变化的影响．Ｂｅｒ１，１０，３０μｍｏｌ·Ｌ－１对脑静息［Ｃａ２＋］ｉ无明显影响．Ｂｅｒ１～１００μｍｏｌ·Ｌ－１剂量依赖的抑制谷氨酸引起的［Ｃａ２＋］ｉ升高．Ｂｅｒ１０μｍｏｌ·Ｌ－１能降低Ｈａｎｋｓ液有Ｃａ２＋和无Ｃａ２＋时去甲肾上腺素引起的［Ｃａ２＋］ｉ升高，且能降低５－羟色胺引起的［Ｃａ２＋］ｉ升高（在细胞外液有Ｃａ２＋时）．结果提示Ｂｅｒ可降低谷氨酸，去甲肾上腺素和５－羟色胺引起的［Ｃａ２＋］ｉ升高，这可能是其抗脑缺血机理之一．     

溶血性磷脂酰胆碱诱导血小板活化及蛋白质酪氨酸激酶和蛋白激酶C的作用

应用双道血小板聚集仪和荧光分光光度计分别测定溶血性磷脂酰胆碱(LysoPC)诱导的兔洗涤血小板聚集,细胞内钙离子浓度(［Ca²⁺］_i),细胞内pH值(pH_i)的变化及5-羟色胺(5-HT)的释放,并观察蛋白质酪氨酸激酶(PTK)抑制剂金雀异黄素(Gen)和蛋白激酶C(PKC)抑制剂星形孢菌素(Sta)对其作用的影响. 结果表明：LysoPC(30-300 μmol·L^-1)诱导血小板聚集,5- HT释放和［Ca²⁺］_i 升高,均呈现良好的浓度依赖性,100 μmol·L^-1以上时伴有pH_i的增加;Gen使LysoPC 诱导的聚集浓度效应曲线右移,半效聚集浓度值从(100±23) μmol·L^-1增加到(200±42) μmol·L^-1,明显抑制 ［Ca²⁺］_i 升高和胞浆碱化,对5-HT释放无明显影响;Sta对较低浓度LysoPC 诱导的血小板聚集,5-HT释放, ［Ca²⁺］_i 和pH_i的增加均有明显抑制作用,但对高浓度LysoPC 诱导的血小板活化无明显影响. 提示：LysoPC通过内Ca²⁺调节和Na^＋/H^＋交换介导血小板聚集和致密颗粒释放;PTK的激活参与了LysoPC诱导的血小板聚集,内Ca²⁺调节和Na^＋/H^＋交换,而在5-HT释放的机理中意义不大;PKC的激活在较低浓度LysoPC 诱导的血小板活化中起重要作用,高浓度LysoPC通过不依赖于PKC的途径激活血小板.     

丙泊酚抑制去甲肾上腺素诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞内游离钙浓度升高作用的机理

用荧光分光光度法及同位素放射免疫分析法检测丙泊酚(30-300 μmol·L^-1)影响大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)内游离钙离子浓度(［Ca²⁺］_i)与肌醇-1,4,5-三磷酸(IP₃)合成作用,以探讨丙泊酚舒张肺动脉平滑肌的作用机理.结果表明,与丙泊酚共同培养72 h,对PASMC ［Ca²⁺］_i 基础水平无明显影响,但可浓度依赖性抑制去甲肾上腺素(NE 3 μmol·L^-1)引起的［Ca²⁺］_i升高作用;当细胞外液无钙或存在钙通道阻滞剂维拉帕米(30 μmol·L^-1)时,丙泊酚抑制NE升高［Ca²⁺］_i作用被增强;丙泊酚还可浓度依赖性抑制NE促进 IP₃合成作用. 结果提示丙泊酚舒张血管平滑肌作用与抑制IP₃介导的细胞内钙释放密切相关.     

家兔主动脉血管平滑肌细胞内钙动员及小檗胺作用的共聚焦研究

观察小檗胺 (Ber) 对高钾除极,Bay K8644,5-羟色胺 (5-HT) 及咖啡因升高细胞内钙水平 (［Ca²⁺］_i) 的影响。以Fluo-3/AM负载家兔培养的主动脉平滑肌细胞 (VSMC),共聚焦显微术测定［Ca²⁺］_i,结果以荧光强度(FI)表示. 结果：(1) 在细胞外钙为1.3 mmol·L^-1时, VSMC胞浆静息FI明显高于核区, 且不受Ber的影响. (2) Ber 10-100 μmol·L^-1预处理可抑制KCl 60 mmol·L^-1或Bay K8644 100 μmol·L^-1升高的［Ca²⁺］_i,抑制5- HT 1 μmol·L^-1升高［Ca²⁺］_i的持续相,但不影响［Ca²⁺］_i的一过性升高。维拉帕米10 μmol·L^-1具有相似作用. (3) 在无钙Hanks液中,Ber预处理对咖啡因100 mmol·L^-1升高的［Ca²⁺］_i无明显抑制作用。结果表明,Ber可阻断外钙内流,但不抑制内钙释放,这可能与Ber阻断电压依赖性钙通道和受体依赖性钙通道的作用有关.     

比较不同类型抗抑郁剂对新生大鼠神经细胞内游离Ca2+浓度的影响

The ability of antidepressant drugs to increase the concentration of intracellular Ca²⁺(［Ca²⁺］_i) was examined in dispersed brain cells from neonatal rat cortex and hippocampus using the Ca²⁺ sensitive fluorescent indicator Fura-2. Desipramine (DIM 0.1-1.0 mmol·L^-1) increased ［Ca²⁺］_i in a concentration-dependent manner. DIM (1.0 mmol·L^-1) and fluoxetine (1.0 mmol·L^-1) induced ［Ca²⁺］
_i increases were not altered by the absence of external Ca²⁺ or by the presence of nimodipine (10 μmol·L^-1). Pretreatment with neomycin (10 mmol·L^-1), an inhibitor of inositol 1,4,5-trisphosphate production, significantly inhibited DIM-induced ［Ca²⁺］_i increase but could not effectively inhibit fluoxetine-induced ［Ca²⁺］_i increase. Pretreatment with dantrolene (0.05 mmol·L^-1), an exhaustor of Ca²⁺ store, inhibited fluoxetineinduced ［Ca²⁺］_i increase, suggesting that DIM and fluoxetine provoke intracellular Ca²⁺ mobilization. In addition, fluoxetine-induced ［Ca²⁺］_i increase was about 1.5 times higher than that induced by DIM at the same concentration (0.4 mmol·L^-1). Moclobemide, an inhibitor of monoamine oxidase A, did not affect ［Ca²⁺］_i. It is concluded that DIM and fluoxetine may be Ca²⁺ mobilizing agents.     

全反式维A酸对血管平滑肌细胞增殖，细胞内钙离子和氢离子含量的影响

The effect of all trans retinoic acid (ATRA) on changes of DNA synthesis, intracellular free calcium content (［Ca²⁺］_i) and intracellular pH (pH_i) of cultured rabbit vascular smooth muscle cells (VSMC) induced by fetal calf serum (FCS) were studied by ［³H］ thymidine incorporation, Fura-2/AM and BCECF/AM fluorescent probe mark and digital image processing techniques. The results showed that (1) ATRA (0.01, 0.1 and 1.0 μmol·L^-１) significantly inhibited 20% FCS-induced VSMC DNA synthesis and its maximal inhibitory rate at 1 μmol·L^-１was 90%; (2) incubated with 20% FCS for 5 min, VSMC ［Ca^２＋］_i increased and VSMC ［H^＋］_i decreased. These effects of FCS were significantly inhibited by ATRA 0.1 μmol·L^-1 preincubated for 10 min. The results indicate that ATRA lowering VSMC ［Ca²⁺］_i and pH_i may be attribute to inhibition of the proliferation of VSMC.     

垂体腺苷酸环化酶激活肽减轻谷氨酸引起的大鼠海马神经元细胞内钙离子浓度升高的可能机理

目的　探讨垂体腺苷酸环化酶激活肽 38(PACAP 38)稳定海马神经元细胞内钙离子浓度([Ca2 + ]i)作用的可能机理。方法　取新生SD大鼠海马 ,用B2 7无血清培养基培养神经元 ;经Fura 2 /AM标记后 ,共聚焦显微镜下测定 [Ca2 + ]i。结果PACAP 38(10pmol·L- 1)能抑制谷氨酸 (5 0 0 μmol·L- 1)所致海马神经元 [Ca2 + ]i 升高 ,而Rp型硫化环腺苷酸 (2 0 μmol·L- 1)或氯化白屈菜赤碱 (0 .1μmol·L- 1)能阻断PACAP 38的抑制作用。二丁基环腺苷酸 (0 .1～ 10 0 μmol·L- 1)和豆寇酰佛波醇乙酯(0 .0 1～ 10 μmol·L- 1)也能抑制谷氨酸引起的海马神经元 [Ca2 + ]i 升高。结论　PACAP 38减轻谷氨酸引起的海马神经元 [Ca2 + ]i 升高可能与激活细胞内蛋白激酶A和蛋白激酶C信号转导系统有关     

牛磺酸对培养乳鼠心肌细胞胞浆游离钙浓度的影响

在培养的单个SD乳鼠心肌细胞,观察了牛磺酸对KCl, 去甲肾上腺素(NE)和毒毛花苷G引起的胞浆游离Ca^２＋浓度(［Ca^２＋］_i)变化的影响. 当细胞外CaCl₂浓度为1.3 mmol·L^-１时, 牛磺酸10, 20 mmol·L^-１不影响心肌细胞静息［Ca^２＋］_i; 但能浓度依赖性地抑制35 mmol·L^-１ KCl和1 μmol·L^-１毒毛花苷G升高［Ca^２＋］_i的作用.10 μmol·L^-１ NE在含Ca^２＋的缓冲液中能引起双相的［Ca^２＋］_i变化, 即快速升高相和持续升高相.牛磺酸20 mmol·L^-１能抑制NE引起的［Ca^２＋］_i持续升高, 而对快速升高相无显著影响. 在无 Ca^２＋ 的缓冲液中, 牛磺酸不影响NE升高［Ca^２＋］_i的作用. 结果提示牛磺酸可能通过减少心肌细胞电压依赖性Ca^２＋内流和Na⁺/Ca^２＋交换而抑制KCl, NE和毒毛花苷G引起的［Ca^２＋］_i升高.     

羊角拗苷对豚鼠心室肌细胞内游离钙离子浓度的影响

目的观察羊角拗苷(Div)对豚鼠心室肌细胞内游离钙离子([Ca2+]i)浓度的影响,以探讨Div正性肌力作用的机制。方法Fura-2/AM荧光探针标记豚鼠心室肌细胞,应用荧光离子成像系统观察Div800nmol.L-1对心室肌细胞[Ca2+]i的影响。结果在正常台氏液中,Div使心室肌细胞[Ca2+]i显著升高(243±36)%,在无钙液中对[Ca2+]i无明显影响。在无Na+、无K+台氏液中,Div使[Ca2+]i升高(96±20)%。给予L型钙通道阻滞剂CdCl2100μmol.L-1预处理后,Div仍使[Ca2+]i升高(63±10)%。给予T型钙通道阻滞剂NiCl240μmol.L-1预处理后,Div引起的[Ca2+]i升高基本被阻断。结论体外应用Div800nmol.L-1时使豚鼠心室肌细胞[Ca2+]i升高,该升高作用依赖于细胞外Ca2+的存在,可能主要由T型钙通道介导,L型钙通道和Na+-Ca2+交换蛋白亦参与其中。其正性肌力作用与心室肌细胞[Ca2+]i升高有关。