盐酸克伦特罗体外抑制大鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化的研究

目的探讨盐酸克伦特罗对大鼠胚胎肢芽细胞的影响。方法采用大鼠胚胎肢芽细胞培养方法,观察盐酸克伦特罗对大鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响。结果盐酸克伦特罗对大鼠胚胎肢芽细胞增殖、分化均有抑制作用;细胞增殖:y^=0.507-0.000 7x,r=-0.949(P<0.01);细胞分化:y^=87.63-0.286x,r=-0.945(P<0.01),存在明显的剂量—反应关系,并呈显著性负相关;胚胎肢芽细胞半数抑制细胞增殖浓度(IP50)为0.34μg/L,半数抑制分化浓度(ID50)为0.09μg/L,IP50/ID50=3.78。结论盐酸克伦特罗可抑制大鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化作用。     

乙醛对大鼠胚胎肢芽细胞增殖分化的影响研究

目的研究乙醛的发育毒性和致畸性。方法从１３天龄大鼠胚胎中分离肢芽细胞,体外施予不同剂量的乙醛（０１,０２,０５,２０,８０,１６０,３２０ｍｍｏｌ／Ｌ）连续培养５天,根据肢芽细胞蛋白质合成和集落形成抑制水平反映乙醛的致畸性。结果乙醛在０１ｍｍｏｌ／Ｌ即能影响肢芽细胞的增殖分化,而在２０ｍｍｏｌ／Ｌ以上时细胞则大量死亡,显示其细胞毒性。其ＩＰ５０,ＩＤ５０分别为６８４ｍｍｏｌ／Ｌ,５５０ｍｍｏｌ／Ｌ。增殖分化抑制曲线经拟合后判断乙醛是一种非特异性增殖分化抑制物。结论乙醛具有发育毒性作用和潜在的致畸作用。     

醋酸锌对大鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化影响的研究

目的　研究醋酸锌对原代培养的大鼠胚胎肢芽细胞形态、细胞相对蛋白含量、细胞集落形成率以及肢芽细胞生长发育的影响。方法　取SD大鼠胚胎肢芽组织,分别加入不同浓度的醋酸锌进行体外原代微团培养。用光学显微镜观察细胞形态,在倒置相差显微镜下计数细胞集落数,同时用Folin-酚法检测细胞蛋白含量。结果　当锌浓度为0.05mmol/L时,对肢芽细胞生长和集落的形成无显著影响,而当锌浓度增至0.1mmol/L时,表现出显著促进作用,锌浓度大于1.0mmol/L时则呈现抑制作用,且影响的程度随着锌浓度的增加而增强。醋酸锌对大鼠胚胎肢芽细胞的半数分化抑制浓度(ICD50)为1360.9μg/mL。结论　醋酸锌对胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响呈现双向效应,即低浓度促进,高浓度抑制。     

甲醛对小鼠胚胎肢芽和中脑细胞分化及增殖的影响

目的 探讨甲醛对小鼠胚胎肢芽和中脑细胞分化、增殖的影响. 方法分离12 d龄小鼠胚胎肢芽和中脑细胞,与不同浓度的甲醛共培养,观察肢芽和中脑细胞的分化与增殖. 结果随着甲醛染毒浓度的增加,胚胎肢芽细胞分化为软骨细胞的集落数逐渐减少,中脑细胞形成神经集落数减少、体积小,集落细胞间突起数量减少(P<0.01),肢芽细胞和中脑细胞增殖率下降(P<0.01),均具有剂量-效应关系;甲醛对肢芽细胞的半数分化抑制浓度(dID50)和半数增殖抑制浓度(pID50)分别为14.63μmol/L和27.67μmol/L,对中脑细胞的dID50和pID50分别为16.46 μmol/L和26.92μmol/L. 结论甲醛对胚胎中脑及肢芽细胞的分化和增殖有抑制作用,可能对胚胎骨和脑具有发育毒性.     

镉、镍对小鼠肢芽细胞增殖和分化的影响

目的探讨镉、镍单独及联合作用的发育毒性特点。方法应用小鼠胚胎肢芽细胞微团培养法观察ＣｄＣｌ２、ＮｉＣｌ２单独及联合染毒对胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响。结果０．１～１．２μｇ／ｍｌＣｄＣｌ２或５．５～２７．５μｇ／ｍｌＮｉＣｌ２对胚胎肢芽细胞的增殖均有明显的抑制作用；０．４～１．２μｇ／ｍｌＣｄＣｌ２或５．５～２７．５μｇ／ｍｌＮｉＣｌ２也可明显抑制胚胎肢芽细胞的分化，但ＣｄＣｌ２在０．１和０．２μｇ／ｍｌ时可促进细胞分化。ＣｄＣｌ２和ＮｉＣｌ２联合染毒对胚胎肢芽细胞的增殖和分化的抑制分别表现为相加和加强作用。结论Ｃｄ和Ｎｉ可能通过某种共同机制而对胚胎肢芽细胞的增殖和分化的抑制产生协同作用。     

硫酸铝钾对胎鼠肢芽细胞增殖和分化的影响

目的研究硫酸铝钾对胎鼠肢芽细胞的增殖和分化的影响。方法应用微团培养法探讨不同浓度铝(0~100μmol/L)对体外培养的小鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响。结果铝对肢芽细胞的50%增殖抑制浓度(IP50)和50%分化抑制浓度(ID50)分别为45.97和3.60μmol/L,IP50/ID50值为12.8,并有明显的剂量?反应关系。结论硫酸铝钾对胎鼠肢芽细胞的增殖和分化可能有抑制作用。     

对-壬基酚对大鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响

目的 了解对-壬基酚(p-NP)的体外发育毒性特点,为揭示对-壬基酚的发育毒性作用机制提供实验依据。方法 采用微团培养观察不同浓度的对-壬基酚(0～17.5 mg/L)对体外培养的Wistar大鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响。结果 对-壬基酚对大鼠胚胎肢芽细胞的增殖和分化均有抑制作用,表现为染毒组肢芽细胞集落形成率降低,细胞毒性试验吸光度值下降,并有明显的剂量-反应关系。对-壬基酚对肢芽细胞的50％增殖抑制浓度(IP_(50))和50％分化抑制浓度(IP_(50))分别为15.85 mg/L和11.86 mg/L,IP_(50)/ID_(50)=1.34。结论 按照Renault等人推荐的体外致畸分类标准,对-壬基酚属于阳性致畸物,对大鼠胚胎肢芽细胞的分化和增殖均有特异性抑制作用。     

砷对大鼠肢芽细胞增殖和分化的影响

为了进一步阐明三氧化二砷的发育毒性，本研究应用Ｆｌｉｎｔ等人建立的胚胎肢芽细胞微团培养法，探讨了不同浓度砷对体外培养的ＳＤ大鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响。结果表明砷对大鼠肢芽细胞的增殖和分化均有抑制作用，呈明显的剂量－反应关系；砷对肢芽细胞的５０％增殖抑制浓度（ＩＰ５０）和５０％分化抑制浓度（ＩＤ５０）分别为０．７０ｍｇ／Ｌ和０．２１ｍｇ／Ｌ；ＩＰ５０／ＩＤ５０值为３．３，揭示砷对大鼠肢芽细胞分化的影响要远大于对细胞增殖的影响。根据Ｒｅｎａｕｌｔ等人推荐的体外致畸判断标准，砷属于强致畸物。实验结果提示砷对大鼠肢芽细胞分化的抑制作用可能并非其细胞毒性作用所致，这是砷致畸作用的重要基础之一。此外还初步探讨了大鼠肢芽细胞异常分化的分子机制。     

碱性橙Ⅱ对大鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响

目的探讨碱性橙Ⅱ对13日龄SD大鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响。方法分离13日龄SD大鼠胚胎肢芽细胞进行微团培养,不同浓度的碱性橙Ⅱ(0.0、12.5、25.0、50.0、100.0、200.0和400.0 mg/L)作用于肢芽细胞,采用CCK8试剂盒检测碱性橙Ⅱ对细胞增殖的影响,采用阿利新蓝8GX染色方法检测碱性橙Ⅱ对肢芽细胞分化的影响。结果随着碱性橙Ⅱ染毒浓度的增加,胚胎肢芽细胞分化为软骨细胞集落数逐渐减少,细胞增殖率下降,均具有较明显的剂量-效应关系(r细胞毒性=0.958,r细胞分化=0.946);碱性橙Ⅱ对肢芽细胞的半数增殖抑制浓度(p ID50)和半数分化抑制浓度(d ID50)分别为240.6和69.3 mg/L,对细胞分化的抑制作用大于对增殖的抑制作用。结论碱性橙Ⅱ对胚胎肢芽细胞的增殖和分化有抑制作用,可能对大鼠胚胎具有潜在的发育毒性。     

亚硒酸钠对大鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响

目的 探讨亚硒酸钠对大鼠胚胎的致畸性。方法 采用胚胎肢芽细胞培养方法，观察亚硒酸钠对大白鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响。结果 试验显示亚硒酸钠对大鼠肢芽细胞半数抑制分化浓度（ID50）为10．92μmol/L，半数抑制细胞增殖浓度（IP50）为7．95μmol/L。结论 亚硒酸钠的IP50／ID50值为0．728（＜6）,表明亚硒酸钠只是一种细胞毒性物质，而非致畸物。     

稳恒磁场对大鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响

利用大鼠胚胎肢芽细胞进行原代培养,培养物经不同强度的稳恒磁场作用,研究稳恒磁场对增殖和分化的影响,并利用图象分析细胞形态的变化.结果显示强度大于40mT的稳恒磁场能明显抑制肢芽细胞增殖和分化,集落形成率明显减少,并显示剂量效应关系.拟合细胞分化和增殖抑制曲线,计算得大鼠胚胎肢芽细胞半数分化抑制强度(ICD50)为52mT,半数存活抑制强度(ICV50)为40mT.表明抑制细胞分化、增殖可能是稳恒磁场致发育危害的重要作用.     

同型半胱氨酸对大鼠胚胎肢芽细胞增殖的分化的影响

目的 进一步研究同型半胱氨酸（ＨＣＹ）的致畸性及作用机制。方法 应用大鼠胚胎肢芽细胞微团培养法了解ＨＣＹ对胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响。结果 随着剂量的增加,ＨＣ Ｙ表现了对胚胎肢芽细胞的促进和抑制双相作用。半数抑制分化浓度（ＩＣ５０）是５,０ｍｍｏｌ／Ｌ,当加入Ｓ９时,ＩＣ５０减至３．５ｍｍｌ／Ｌ;半数抑制增殖浓度是９．５ｍｍｏｌ／Ｌ,当加入Ｓ９时,ＩＣ５０为５．８ｍｍｏｌ／Ｌ。结论 ＨＣＹ对胚     

对—壬基酚对大鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响

目的：了解对－壬基酚（p-NP)的体外发育毒性特点，为揭示对－壬基酚的发育毒性作用机制提供实验依据。方法：采用微团培养观察不同浓度的对－壬基酚（0－17.5mg/L)对体外培养的Wistar大鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响。结果：对－壬基酚对大鼠胚胎肢芽细胞的增殖和分化均有抑制作用，表现为染毒组肢芽细胞集落形成率降低，细胞毒性试验吸光度值下降，并有明显的剂量－反应关系。对－壬基酚对肢芽细胞的50％增殖抑制浓度（IP50）和50％分化抑制浓度（IP50）分别为15．85mg/L和11.86mg/L,IP50/ID50=1.34。结论：按照Renault等人推荐的体外致畸分类标准，对－壬基酚属于阳性致畸物，对大鼠胚胎肢芽细胞的分化和增殖均有特异性抑制作用。     

同型半胱氨酸对大鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响

目的 进一步研究同型半胱氨酸(HCY)的致畸性及作用机制。方法 应用大鼠胚胎胚芽细胞微团培养法了解HCY对胚胎胚芽细胞增殖和分化的影响。结果 随着剂量的增加,HCY表现了对胚胎肢芽细胞的促进和抑制双相作用。半数抑制分化浓度(IC_(50))是5.0mmol/L,当加入S9时,IC_(50)减至3.5mmol/L;半数抑制增殖浓度是9.5mol/L,当加入S9时,IC_(50)为5.8mmol/L。结论 HCY对胚胎细胞分化的影响更为显著,对大鼠致畸作用不明显。     

稳恒磁场对大鼠胚胎肢芽细胞发育毒性的研究

目的 研究稳恒磁场对肢芽细胞增殖和分化的强度效应关系。方法 利用大鼠胚胎肢芽细胞进行原代培养,观察培养物经不同强度的稳恒磁场,对细胞增殖和分化的影响。有效期利用图像分析细胞形态的变化。结果 各组磁场强度能明显抑制肢芽细胞增殖和分化,集落形成率明显减少,并显示强度效应关系。拟合细胞分化和增殖抑制曲线,计算得大鼠半数分化抑制强度（ICD50）为35mT,半数存活抑制强度（IVD50）为48mT。结论 抑制细胞分化、增殖可能是稳恒磁场强度致发育危害的结果。     

锌与金雀异黄素对小鼠胚胎肢芽的影响

[目的]研究锌与金雀异黄素对软骨发育分化的影响。[方法]利用12d小鼠胚胎肢芽体外培养方法,在培养基中分别加入10-7～10-5mol/L不同含量的金雀异黄素以及在加入10-5mol/L金雀异黄素的同时加ZnSO450μmol/L和70μmol/L,并设对照组,培养3d后,收获肢芽用原位杂交的方法测量肢芽软骨细胞II型胶原mRNA及BMP-2mR-NA的表达水平以及IL-6的表达水平。[结果]体外培养3d的肢芽在金雀异黄素(10-5mol/L)组与金雀异黄素(10-5mol/L)加ZnSo4组的II型胶原mRNA及BMP-2mRNA阳性表达密度与积分光密度显著高于对照组;体外培养3d的IL-6表达水平在金雀异黄素(10-5mol/L)组与金雀异黄素(10-5mol/L)加ZnSo4组显著低于对照组。[结论]锌与金雀异黄素在一定浓度下能协同促进胚胎肢芽软骨细胞BMP-2mRNA及II型胶原mRNA的表达,以及降低IL-6的表达水平,促进发育中软骨面积的增加,具有刺激胚胎软骨发育分化的作用。     

四氯化碳对体外培养的大鼠胚胎脊髓神经元分化和增殖的影响

目的研究四氯化碳(CCl4)对大鼠胚胎脊髓神经元生长发育的毒性作用,并探讨其中的机制.方法采用大鼠胚胎脊髓神经元体外培养技术,研究不同浓度的CCl4(0.01～100.0 mg/L)对细胞分化和增殖的影响,并利用图像分析细胞形态的变化、硫代巴比妥酸测定丙二醛(MDA)和溴化四氮唑噻蓝分析蛋白总量.结果10.0～100.0 mg/L CCl4组随浓度的增加细胞数和集落形成率明显下降,细胞内MDA含量增加,蛋白质相对含量降低,并显示剂量效应关系.结论CCl4对体外培养的大鼠胚胎脊髓神经元分化和增殖的抑制作用,可能与其诱导蛋白质合成和脂质过氧化变化有关.     

金雀异黄素对体外小鼠肢芽软骨发育的影响

植物雌激素在结构上与天然及人工合成的雌激素、抗雌激素相似。人类食物中大豆及其制品中植物雌激素含量较高 ,尤以异黄酮类占优势 ,金雀异黄素为其主要成分 ,而且活性也强。本研究以金雀异黄素与第 12天胎鼠肢芽作培养 ,观察其对软骨生长发育的影响 ,为深入研究植物雌激素与骨代谢的关系提供依据。1　材料与方法1 1　实验动物昆明种小鼠 ,选择健康的雌、雄鼠晚上 9∶0 0点按 2∶1合笼 ,次日晨 8∶0 0查见阴栓者定为妊娠 0天 ,第 12天上午 8∶0 0定为妊娠第 12天。1 2　主要试剂金雀异黄素 (Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ,ＧＥＮ ,Ｓｉｇｍａ公司 ) ;…     

镉对小鼠肢芽细胞增殖细胞核抗原和c—myc基因表达的影响

目的探讨镉对胚胎肢芽细胞增殖抑制的机制。方法运用免疫组化ＳＰ法结合图像分析技术观察了ＣｄＣｌ２对增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）和ｃ－ｍｙｃ基因表达的影响。结果ＰＣＮＡ和ｃ－ｍｙｃ基因在正常增殖的胚胎肢芽细胞中均呈强阳性免疫反应；０．１～０．８μｇ／ｍｌＣｄＣｌ２对细胞中ＰＣＮＡ和ｃ－ｍｙｃ的表达均有明显的抑制作用，并呈现明显的剂量－效应关系。结论ＣｄＣｌ２可通过抑制ＰＣＮＡ和ｃ－ｍｙｃ的表达而对胚胎细胞增殖产生抑制作用。     

锌缺乏与过量对体外培养的小鼠胚胎肢芽发育的影响

目的:观察锌缺乏与过量对体外培养的小鼠胚胎肢芽发育的影响,为锌的合理营养提供实验依据。方法:应用恒温旋转胚胎培养箱对12 d孕龄小鼠胚胎前肢芽进行培养,观察锌缺乏与过量对胚胎肢芽发育的影响,并进行Neubert评分。结果:锌浓度为43.0~86.0μmol/L时,对胚胎肢芽发育具有明显的促进作用;锌缺乏(0.0μmol/L)能导致胚胎肢芽发育评分下降,肢芽细胞分化,组织器官形态分化均受到不同程度抑制;锌过量(172.0~215μmol/L以上)时,能使VYS血管形成及神经系统、心脏、肢芽的器官形态分化受抑,所有生长发育和组织器官形态分化指标值均明显低于对照组(P<0.05);肢芽各软骨的发育分化差,Neubert评分少。结论:锌缺乏和锌过量均可影响小鼠胚胎肢芽的发育和分化。