周期型马来丝虫微丝蚴液氮内保存的初步观察

丝虫幼虫置液氮内冷冻保存国外已有报道,国内报道甚少。1985年我们参考国外有关文献,并改进一些方法,进行了周期型马来丝虫微丝蚴液氮内冷冻保存的试验,取得初步结果,现报告如下。材料和方法一.微丝蚴(mf)的收集及冷冻保护液用腹腔内灌洗法从马来丝虫感染的长爪沙鼠腹腔液中收集微丝蚴。实验前用灭菌的37℃Earle 氏液冲洗微丝蚴,并于1500rpm 离心10分钟,弃去上清液,反复三次。     

冷冻保存马来丝虫成虫

近年来,国内外学者对微丝蚴及感染期蚴的低温冷冻保存已有不少报道。经冷冻后的幼虫仍具有原有的生物学特性。成虫的低温冷冻保存,国内尚未见公开报道;国外,Townson等(1986)首次报道了牛盘尾丝虫(Onchocerca gutturosa)成虫雄虫在液氮中保存36天,仍具有活力。本实验用液氮冷冻保存马来丝虫成虫获得成功,冷冻后的虫体能在体外培养液中存活并继续产出微丝蚴。材料与方法一、虫源:周期型马来丝虫(Brugia malayi)雌性成虫,取自本实验室动物模型,长爪沙鼠腹腔,生理盐水洗涤后备用。     

马来丝虫微丝蚴低温保存及在东乡伊蚊体内发育的观察

丝虫幼虫置液氮内(-196℃)冷冻保存作为“虫库”,对开展丝虫病的生物学和免疫学研究开辟了新的途径。1969年以来国外已有报道,但国内报道甚少。1985年我们开始进行马来丝虫微丝坳(Mf)于液氮内不同时间的低温保存研究,并观察它在东乡伊蚊体内发育的情况,现报告如下。材料和方法一、Mf 的收集及低温保护剂用腹腔内灌洗法从马来丝虫感染的长爪沙鼠腹腔液内收集 Mf 于离心管内,加入10倍37℃灭菌生理盐水,1500rpm 离心10分钟,     

间接荧光抗体技术在晚期丝虫病患者中的初步观察

近年来,随着免疫学的不断发展,微丝蚴阳性者免疫荧光研究已见于多篇文献;而对晚期丝虫病患者,国内外尚无这方面的报道。为此,我们用马来丝虫成虫冰冻切片抗原(Aw—Ag)及微丝蚴抗原(Mf—Ag)对马来和班氏丝虫病晚期患者作间接荧光抗体(IFA)试验,以了解晚期患者血中抗体水平。材料与方法一、试验血清标本的收集、保存、稀释1988～1989,我们分别在德江、务川、独山三县静脉采集班氏和马来丝虫病晚期患者血清标本51份,微丝蚴阳性血清10份,并在上述     

马来丝虫成虫冰冻切片抗原间接荧光抗体试验诊断丝虫病的初步观察

丝虫病间接荧光抗体试验(IFA)始于1962年,Chowdhury 等用微丝蚴为抗原诊断班氏和盘尾丝虫病,继而 Coudert(1968)、Ambrise—Thomas(1969)(1974)和 Diesfeld 等(1979)用 Dipetalonema viteae 丝虫成虫冰冻切片为抗原 IFA 试验诊断丝虫病和流行病学调查取得一些进展。Grove(1978)用感染沙鼠腹腔的马来丝虫成虫为抗原 IFA 试验可提高其敏感性和特异性。国内河南医学院冯祖梅等(1982)以马来丝虫成虫为抗原对丝虫病患者进行检查阳性符合率为92.81～98.39%、假阳性为0.66%,与钩虫、蛔虫、鞭虫等其他蠕虫感染未见交叉反应。1983年我们采用同法试验,现将结果介绍如下:材料和方法一.抗原的制备:断头法杀死实验感染马来丝虫的沙鼠,收集丝虫成虫,灭菌生理盐水     

~(14)C—呋喃嘧酮的合成

呋喃嘧酮(Furapyrimidone,代号 M-170)化学名为:1-〔(5-硝基-呋喃-2-)甲叉胺基〕-四氢嘧啶-2-酮〔Tetrahydro-1-〔(5-nitro-furfurylidene)-amino〕-2(1H)-pyrimidone〕。是一个有希望的治疗丝虫病新药。药理试验表明,对棉鼠体内的棉鼠丝虫成虫和微丝蚴及长爪沙鼠体内的马来丝虫成虫、血液和腹腔内的微丝蚴均有明显的杀灭作用,其中对棉鼠丝虫成虫作用尤为显著。     

苯硫脲嗪对棉鼠丝虫和马来丝虫感染的治疗

新化合物苯硫脲嗪(4-硝基-4’-(1-甲基哌嗪-4-硫代甲酰氨基)二苯胺)具有抗丝虫作用。感染棉鼠丝虫的棉鼠或长爪沙鼠和感染马来丝虫的长爪沙鼠用苯硫脲嗪ig 200mg/(kg·d)×3d皆获治愈。苯硫脲嗪对微丝蚴亦有作用,给药开始后3d,受治棉鼠周围血中的微丝蚴即消失,而受治长爪沙鼠腹腔内的马来丝虫微丝蚴活动减弱、僵直或自溶。两种丝虫经苯硫脲嗪作用后,虫体被破坏、崩解,特别是马来丝虫,出现大量死虫肉芽肿,虫周细胞反应强烈。     

周期型马来丝虫微丝蚴在不同基础培养液中存活情况的比较观察

1983年WHO丝虫病专家委员会报道班了氏丝虫微丝蚴能在培养液中进行培养,大部分微丝蚴脱鞘后8天发育为第一期蚴虫(L_1)。1987年2月,我们对马来丝虫微丝蚴(mf)在不同基础培养液中存活情况进行了观察比较,现将结果报道如下: 一、mf的收集: 以生理盐水腹腔灌洗法从感染丝虫的鼠体内获取mf。方法详见贵州省丝虫病防治与科研资料汇编(1955—1966页) 二、培养技术: (一)基础培养液:应用Earle液;Earle加0.5％水解乳旦白(L+E);Hanks液;RPMI—1640;No199。每种培养液取2ml加     

丝虫周期性机理的研究——微丝蚴的自身萤光及其周期性

本文作者搜集了具有夜现周期性、亚周期性、前夜现周期性、日现周期性及无周期性的人和动物丝虫共21个种、株,通过荧光显微镜观察及微量荧光测定法检查这些丝虫的微丝蚴体内是否存有自身荧光及其相对的荧光强度;并对微丝蚴体内的荧光颗粒的有无及其密度与周期性型之间的关系进行了探讨。实验结果证明,在高度夜现周期性型的班氏丝虫(普通株)、马来丝虫(逞罗株)及寄生猫体的派特丝虫(Brugia patei),的微丝坳体内,不经任何染色,可见到弥散性自身荧光和许多自身荧光颗粒;在低度夜现周期性型的犬恶丝虫及马来丝虫(伦敦和东京的猫体及朝鲜的人体)微丝坳体内的荧光颖粒较少,在前夜现周期性型     

周期型马来丝虫感染期幼虫在人卵巢癌细胞中的体外培养(科研简报)

1985年我室成功地建立了我国第一株人卵巢粘液性囊腺癌细胞系(OMC_(685))。1986年7～10月我们用 OMC_(6(?)5)细胞系作营养层的培养系统,体外培养周期型马来丝虫感染期幼虫(L_(?)),L_3可在体外蜕皮发育为第四期幼虫(L_4),幼虫最长可存活66天。从感染周期型马来丝虫的阳性沙鼠腹腔液获取微丝蚴,人工感染中华按蚊,7.5～8天后收集 L_(?),置于含有高浓度青、链霉素(各1000 u/ml)的培养液中37±0.5℃温箱中静置约2小时,再用该培养液换液洗涤三次。     

周期型马来丝虫微虫蚴的体外培养

建立丝虫的体外培养系统对丝虫病的防治与监测有着重要的价值。Sawyer和Weinstein(1963)首次报道犬恶丝虫在NCTC_(109)培养液中可发育到一期。1966年Wood和Suitor利用埃及伊蚊细胞的Grece＇s细胞系培养台湾猴丝虫微丝蚴,至第19天发育到第2期幼虫。此后,体外培养受到广泛注意,并取得一定进展。1987年,姜维维用CaCl_2人工脱鞘的马来丝虫微丝蚴在HamF_(12)和RPMI_(1640)含30％小牛血清中最高有20％可发育至腊肠期。陶鸿章(1989)用CaCl_2脱鞘的马来丝虫微丝蚴在含中华按蚊细胞系的TC_(199)培养液中有25.5％发育致腊肠期,并且认为有鞘微丝虫蚴的体外培养,脱鞘是使其发育的先决条件。本文报道未经人工脱鞘及人工脱鞘的微丝蚴在各种培养液及含东乡伊蚊胸肌细胞系的培养液中发育情况。     

周期型马来丝虫—长爪沙鼠模型实验技术的改进

1974年,我们同广西寄生虫病研究所合作,以周期型马来丝虫皮下感染长爪沙鼠获得成功,以后为获取较大数量的虫源,改用腹腔接种法。最初实验方法以腹腔穿刺获取阳性沙鼠腹腔液,针挑法收集3期幼,并以中华按蚊为媒介,实践中发现,腹腔穿刺抽液困难,一次接种常需准备数只种鼠,针挑法耗时长,易损伤幼虫,中华按蚊娇嫩不易饲养,蚊卵保存时间短,不利于保种。1979年以来,我们改用腹腔灌洗法获取微丝蚴,贝氐分离法收集3期幼,并以东乡伊蚊为媒介,提高了接种成功率。     

丝虫病新药研究进展简报

丝虫病是我国危害人民健康最烈的五大寄生虫病之一。过去一直使用海群生治疗,对微丝蚴作用较强,对成虫效力不明显,不能作为根治药物,且副反应较大,特别是在治疗马来丝虫病患者时,往往因严重副反应而影响普治工作的开展。30多年来迄无新药问世。为了寻找对微丝蚴和成虫均有强烈作用的新药,上海医药工业研究院与中国医学科学院寄生虫病研究所协作发现硝基呋喃甲醛缩氨基衍生物类型对棉鼠丝虫阳性棉鼠体内成虫及微丝蚴均有较明     

马来丝虫感染期蚴低温保存

丝虫感染期蚴(L_3)的低温保存,国内外已有一些报道。冷冻后的L_3仍能保持原有的生物学特性,在易感宿主体内能继续发育至成虫;亦能在体外继续培养,蜕皮发育至童虫(L_4)。鉴于L_3的来源和虫种的不同,所采用的冷冻方法也各异,目前尚无标准化的方法。本实验采用不同冷冻方法,对马来丝虫L_3进行低温保存研究,以探索长时间冷冻保存L_3的实验方法。材料与方法一、虫源周期型马来丝虫(Brugia malayi)感染期蚴,从本实验室马来丝虫长爪沙鼠动物模     

伊维菌素降低马来丝虫感染东乡伊蚊和长爪沙鼠传播能力的效果观察

作者用伊维菌素(IVM)0.05ug/ml、0.1 ug/ml和海群生(DEC)150ug/ml浓度在体外与兔血混合马来丝虫微丝蚴实验感染东乡伊蚊。12天后全部蚊虫进行个体解剖:伊维菌素组蚊体内未发现马来丝虫三期幼虫,而海群生组东乡伊蚊感染率为30.5％、对照组为36.0％。单剂量的伊维菌素以400ug/kg体重,对照组用无菌生理盐水,经皮下或腹腔液内注入微丝蚴阳性的长爪沙鼠。治疗组和对照组分別于治疗后间隔1、7、30和75天喂饲东乡伊蚊。实验组于治疗后1—15天蚊体内未发现幼虫,对照组东乡伊蚊自然感染率为13.6％—14.6％。在治疗后75天蚊体内检获L_3数目,仍低于对照组。本研究提示伊维菌素能降低马来丝虫在蚊媒中的传播作用。其作用方式将进一步探讨。     

呋喃嘧酮试治班氏丝虫病临床观察

1947年Hewitt等发现海群生对丝虫有效至今,尚无更理想的药物取代之。1969年Foster等报告呋喃妥因能杀死多乳鼠的棉鼠丝虫成虫,而对微丝蚴的效用则较差。上海医药工业研究院在大量合成和筛选硝基呋喃类衍生物过程中,1978年参照Michek(1960)的方法合成呋喃嘧酮(furapyrimidone),经席裕瑞等(1980)实验观察,证实其对棉鼠丝虫成虫的作用比对微丝蚴强,对长瓜沙     

经卫生部初步选定的我省部分重大医药卫生科研成果

周期型马来丝虫长爪沙鼠模型主要研究单位:遵义医学院建立人体寄生丝虫病的动物模型,对丝虫生物学特性的认识、抗丝虫药物的筛选、丝虫病免疫和免疫诊断方法的研究以及丝虫病理学的研究都有重要的意义。以往用大动物猴和猫建立马来丝虫动物模型。至于用小动物感染人体丝虫的研究,国外报导是用人体的亚周期型马来丝虫人工感染长爪沙鼠成功。但我国寄生人体的马来丝虫属于周期型,与国外的不同。一九七四年遵义医学院用人工接种(腹腔注射)的方法,成功地将我国寄生人体的周期型马来丝虫感染长爪沙鼠成功,并可传种接代,今已     

棉鼠丝虫动物模型应用于药物筛选

为了寻找新的口服抗丝虫药物,1972年从国外引进棉鼠、棉鼠丝虫和柏氏禽剌螨后在我所建立了棉鼠丝虫动物模型,并开展了药物筛选工作。几年来筛选已知的和新合成的化合物共150个以及中草药7个。有14个化合物对棉鼠丝虫微丝蚴和/或成虫具有明显的杀死作用。其中硝硫氰胺、氨硝喹唑啉、呋喃西林、6-对氨基苯基-2,3,5,6-四氢咪唑并(2,1-6)噻唑-盐酸盐、2-(4-蜜胺2-基苯基)-4-羟甲基-1,3-二噻砷环戊烷和5个2-[2-(5-硝基呋喃-2)乙烯-1]-1,3,4-(口恶)二唑-5-酮的衍生物的作用较显著,尤其是对成虫。 本文也报道了用棉鼠丝虫动物模型进行药物筛选的有关实验方法以及棉鼠体内的微丝蚴和成虫的消长。     

棉鼠丝虫动物模型应用于药物筛选

为了寻找新的口服抗丝虫药物,1972年从国外引进棉鼠、棉鼠丝虫和柏氏禽剌螨后在我所建立了棉鼠丝虫动物模型,并开展了药物筛选工作。几年来筛选已知的和新合成的化合物共150个以及中草药7个。有14个化合物对棉鼠丝虫微丝蚴和/或成虫具有明显的杀死作用。其中硝硫氰胺、氨硝喹唑啉、呋喃西林、6-对氨基苯基-2,3,5,6-四氢咪唑并(2,1-6)噻唑-盐酸盐、2-(4-蜜胺2-基苯基)-4-羟甲基-1,3-二噻砷环戊烷和5个2-[2-(5-硝基呋喃-2)乙烯-1]-1,3,4-(口恶)二唑-5-酮的衍生物的作用较显著,尤其是对成虫。本文也报道了用棉鼠丝虫动物模型进行药物筛选的有关实验方法以及棉鼠体内的微丝蚴和成虫的消长。     

马来与班氏丝虫微丝蚴分离方法的实验研究

微丝蚴分离技术,1974年以来国外已陆续报告,八十年代进展甚速。我们参照国外经验做了改进,分离出纯净活的微丝蚴,现将几种分离方法报告如下。材料和方法一、聚蔗糖梯度离心分离法:从长爪沙鼠腹腔液中分离微丝蚴。 (一)聚庶糖[Ficoll,分子量400,000Type400(sigma)]以生理盐水成PBS配制10％浓度的溶液; (二)取5ml10％Ficoll溶液置10ml锥