Bcl-2抑制CD3ε分子介导的T淋巴细胞凋亡

目的 研究Ｂｃｌ－２过量表达对人Ｊｕｒｋａｔ Ｔ淋巴细胞凋亡的影响。方法 采用电穿地将ｂｃｌ－２基因表达载体转ε阳性的人Ｊｕｒｋａｔ Ｔ淋巴细胞（ＴＪＫ）,获得稳定Ｂｃｌ－２的细胞株（ＴＪＫ／Ｂｃｌ－２）后,用抗ＣＤ８单克隆抗体刺激和流式细胞仪检测细胞凋亡结果 Ｂｃｌ－２过量表达可显著抑制ＴＪＫ细胞凋亡。结果 Ｂｃｌ－２参与ＣＤ３ε介导的Ｔ淋巴细胞凋亡的调控     

紫杉醇对三株不同类型淋巴瘤细胞的体外作用

目的 观察抗癌新药紫杉醇对不同类型淋巴瘤细胞的作用,探讨其应用价值。方法 应用例置显微镜、显微镜、流式细胞术、ＤＮＡ片段分析等方法,在体外观察了抗癌新药紫杉醇对３株不同类型淋巴瘤细胞株Ｊｕｒｋａｔ（Ｔ细胞淋巴瘤）、ＢＪＡＢ（Ｂ细胞淋巴瘤,ＥＢＶ阴性）及Ｒａｊｉ（Ｂ细胞淋巴瘤,ＥＢＶ阳性）的作用。结果 紫杉醇对３株洒巴瘤细胞生长均有抑制作用,并可诱导细胞凋亡,但敏感性及程度不同。以Ｊｕｒｋａｔ最为敏     

急性T淋巴细胞白血病细胞系JM分泌抑制因子在体外对T细 …

研究急性Ｔ淋巴细胞白血病细胞系ＪＭ分泌的抑制因子在体外对Ｔ细胞凋亡及细胞周期的影响。方法以ＴＬＳＦＪＭ作用于有丝分裂原ＰＨＡ蛋白激酶Ｃ活化剂ＰＭＡ和同种异体抗原（ａｌｌｏａｎｔｉｇｅ）活化的或小鼠Ｔ细胞,应用流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期。结果ＴＬＳＦＪＭ体外在体外可诱导ＰＨＡ／ＩＬ－２活化的小鼠胸腺细胞的凋亡。ＴＬＳＦＪＭ在体外可诱导ａｌｌｏａｎｔｉｇｅｎ活化的人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）的     

胆固醇缺乏对Jurkat细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨胆固缺乏时对Ｊｕｒｋａｔ细胞增殖功能及凋亡的影响。方法 用Ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ抑制Ｊｕｒｋａｔ细胞内源性胆固醇的合成,以低浓度脂蛋白受体（ＬＤＬ－Ｒ）介导的低密谋脂蛋白（ＬＤＬ）内吞提供细胞外源性胆固醇,细胞处理１～３天后,用流式细胞仪分析各细胞周期相绫分布,并定量分析胆固醇缺乏对处理３天后细胞凋亡的影响。结果 Ｊｕｒｋａｔ经去脂血清培养基加Ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ处理３天后,细胞受阻于Ｃｕ     

紫杉醇诱导Jurkat细胞凋亡及其机制探讨

目的　观察抗微管药物紫杉醇对Ｔ细胞淋巴瘤细胞株Ｊｕｒｋａｔ是否具有凋亡诱导作用 ,并进一步研究ｂｃｌ 2基因家族在此过程中的作用。方法　将不同浓度的紫杉醇作用于Ｊｕｒｋａｔ细胞 ,观察其作用的时间效应及剂量效应 ;在光镜和电镜下观察其形态变化 ;用流式细胞术分析细胞ＤＮＡ含量的改变并作ＤＮＡ片段分析 ;用免疫组织化学及半定量逆转录 聚合酶链反应(ＲＴ ＰＣＲ)法观察在紫杉醇作用过程中凋亡调节基因ｂｃｌ 2家族的ｍＲＮＡ和蛋白表达的变化。结果　紫杉醇能抑制Ｊｕｒｋａｔ细胞生长 ,在一定剂量和时间范围内 ,主要引起细胞…     

四种检测细胞凋亡方法的比较

目的：比较４种细胞凋恨检测方法的优缺点。方法：以ｂｕｆａｌｉｎ诱导ＨＬ６０细胞凋亡为例,选择４例方法即电镜（ＥＭ）、ＤＮＡ电泳、原位缺口标记法（ＴＵＮＥＬ）和流式细胞术（ＦＣＭ）检测细胞凋亡,并对凋亡率进行了比较。结果：ＥＭ和ＤＮＡ电泳技术是定性说明凋亡的可靠方法,而ＴＵＮＥＬ和ＦＣＭ擅长于定量检测凋亡细胞,ＥＭ、ＴＵＮＥＬ和ＦＣＭ检测的凋亡率具有显相关性。结论：研究细胞凋亡时宜选用既特异、灵敏     

CD3εY171点突变对CD8ε/CD3ε融合分子介导的T淋巴细胞功能影响及bcl-2基因的抗凋亡作用

目的 观察ＣＤ３εＹ１７１／Ｐ１７１ 点突变及ｂｃｌ－ ２ 基因对Ｔ 淋巴细胞凋亡的影响。方法 通过电穿孔对ＣＤ８ 阴性的人Ｊｕｒｋａｔ Ｔ（ＪＫ） 淋巴细胞转染ＣＤ３εＹ１７１／Ｐ１７１ 点突变的ＣＤ８ε融合分子，对表达野生型ＣＤ８ε融合分子的人ＴＪＫ 转染ｂｃｌ－ ２ 基因分别获得稳定表达细胞株（Ｔ１ＪＫ，ＴＪＫ／ｂｃｌ－ ２），利用ＣＤ８ε单克隆抗体刺激细胞，流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果ＣＤ３εＹ１７１／Ｐ１７１ 点突变或ｂｃｌ－２ 表达增强后，细胞凋亡率均明显降低。结论 本文结果表明ＣＤ３εＹ１７１／Ｐ１７１ 是ＣＤ８ε激活诱导细胞凋亡过程中的一个关键位点，ｂｃｌ－ ２ 对ＣＤ８ε激活诱导细胞凋亡有抑制作用     

幽门螺杆菌cagA蛋白及其疫苗候选抗原对T细胞Fas Ligand介导 …

目的 评价幽门螺杆菌（Ｈｐ）多种功能蛋白致Ｔ细胞凋亡的能力,以探求它们在Ｆａｓ／ＦａｓＬ介导的机体Ｔ细胞耐受中的作用,为Ｈｐ疫苗研制寻求安全有效的免疫原。方法 应用ＪＡＭ技术对ｃａｇＡ阳性Ｈｐ及同源基因突变株、重组尿素酶、粘附素ＨｐａＡ及外膜蛋白Ｈｏｐ２５、３５、３８致Ｔ细胞系凋亡的能力进行了比较;应用流式细胞术对上述因素特别是ｃａｇＡ阳性菌株诱导Ｔ细胞ＦａｓＬ表达的能力进行了检测;应用金属蛋白酶     

CD3εY171点突变对CD8ε／CD3ε融合分子介导的T淋巴细胞？…

目的 观察ＣＤ３εＹ１７１／Ｐ１７１点突变及ｂｃｌ－２基因对Ｔ淋巴细胞凋亡的影响,方法 通过电穿孔对ＣＤ７８阴性的人ＪｕｒｋａｔＴ（ＪＫ）淋巴细胞转染ＣＤ３εＹ１７１／Ｐ１７１点突变的ＣＤ８ε融合分子,对表达野生型ＣＤ８ε融合分子的人ＴＪＫ转染ｂｃｌ－２基因分别获得稳定表达细胞株（Ｔ１ＪＫ,ＴＪＫ／ｂｃｌ－２）,利用ＣＤ８ε单克隆抗体刺激细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 ＣＤ３εＹ１７１／Ｐ１     

VP—16诱导PC—3细胞凋亡和bcl—2及kc—myc基因表达的研究

目的 研究ＶＰ－１６诱导ＰＣ－３细胞凋亡和癌基因ｂｌｃ－２及Ｃ－ｍｙｃ表达的关系。方法 用末端标记法（ＴＵＮＥＬ）和流式细胞术（ＦＣＭ）研究ＰＣ－３细胞凋亡,以免疫组化方法研究ｂｃｌ－２及Ｃ－ｍｙｃ蛋白的表达。结果 ＴＵＮＥＬ和ＦＣＭ检测表明,ＰＣ－３细胞的凋亡率随ＶＰ－１６作用浓度增加和作用时间延长而升高;免疫组化结果显示：ｂｃｌ－２和ｃ－ｍｙｃ基因表达的阳性百分率随ＶＰ－１６作用浓度增加和作用     

乳香提取物诱导Jurkat细胞凋亡的实验研究

目的 :检测不同浓度、不同时间作用下乳香提取物 (BCBE)对人急性T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat细胞的促凋亡作用。方法 :用琼脂糖凝胶电泳技术、透射电子显微镜 (TEM)和流式细胞仪 (FCM)分别检测Jurkat细胞的DNA梯状带 ,形态学改变及凋亡峰与药物作用的细胞周期。结果 :在一定作用时间和剂量下BCBE能诱导Jurkat细胞凋亡 ,电泳出现典型的限制性降解片段梯带 ;TEM发现胞浆浓缩 ,并有大量空泡染色质聚集 ,有凋亡小体形成 ;FCM发现sub G1 凋亡峰 ,并有时间依赖性 ,G1 期细胞增多 ,S期细胞减少。结论 :BCBE能诱导Jurkat细胞凋亡 ,其作用在一定范围内呈现药物浓度与时间的依赖性     

Experimental study on induction of apoptosis of leukemic cells by Boswellia carterii Birdw extractive]

The purpose of the study was to investigate the apoptosis of leukemic cells induced by Boswellia Carterii Birdw(BCB). The target leukemia cell line HL60 and bone marrow leukemic cells from 30 acute non-lymphocytic leukemic(ANLL) patients (3 M1 11 M2a 10 M3 1 M4a 5 M5b) were studied. Apoptosis was detected by morphological observation, DNA electrophoresis, percentage of DNA fragmentation test and flow cytometric cell cycle analysis. It is concluded that BCB can induce apoptosis in ANLL cells and HL60 cells.     

乳香提取物诱导急性非淋巴细胞性白血病细胞凋亡的实验研究

目的：研究乳香提取物诱导急性非淋巴细胞性白血病细胞凋亡作用。方法：应用形态学观察、ＤＮＡ电泳、ＤＮＡ片段百分率、流式细胞仪分析检测白血病细胞凋亡。结果：乳香提取物能诱导急性非淋巴性白血病细胞凋亡。结论：乳香提取物具有诱导急非淋白血病细胞凋亡作用     

雷公藤甲素对白血病HL-60和Jurkat细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨雷公藤甲素对人急性髓系白血病HL-60细胞、急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖及凋亡的影响。方法:采用MTT法、Annexin V-FITC/PI双染法、PI染色法、透射电镜观察不同浓度雷公藤甲素作用于两种细胞,对其生长增殖、凋亡、细胞周期及形态等方面的影响。结果:雷公藤甲素能显著抑制HL-60、Jurkat细胞的增殖,降低其存活率。给药24 h后,半数细胞抑制剂量(IC50)分别为(42.50±9.38)nmol/L和(60.91±9.77)nmol/L。能以剂量依赖方式诱导两种细胞凋亡,细胞周期分布G1期比例增加,S期比例降低(P<0.05),且伴有典型的细胞凋亡形态学改变。结论:雷公藤甲素能显著抑制HL-60、Jurkat细胞的生长增殖,并诱导细胞凋亡。     

昆明山海棠碱对Jurkat淋巴瘤细胞株的细胞周期和凋亡时相的影响

目的 探讨昆明山海棠(THH)碱对Jurkat T淋巴瘤细胞的细胞毒性、细胞周期和凋亡时相特异性的影响，以了解THH碱诱导细胞凋亡的机制。方法 台盼蓝染色法检测细胞生长和细胞活力；DNA染色法、TUNEL标记结合流式细胞术检测细胞周期和凋亡时相特异性。结果 THH碱能有效抑制Jurkat细胞增殖、细胞活力下降，细胞在增殖周期中被阻滞于G1期。THH碱首先能诱导S、C2／M期细胞凋亡，同时能诱导G1期细胞凋亡。结论 提示THH碱能抑制Jurkat细胞的DNA合成，抑制细胞增增殖，并可显著诱导各期相细胞发生凋亡。     

己烯雌酚诱导人T细胞肿瘤Jurkat细胞系凋亡中转录因子Oct-1的表达

建立丙型肝炎病毒包膜区基因的真核表达载体,并通过对其序列分析阐明其作为基因接种的可能性。方法：经常规 ＲＴ－ＰＣＲ法从 ＨＣＶ ＲＮＡ阳性病人的血清中扩增出 ＨＣＶ Ｅ１区的基因片段,经 ＥｃｏＲ Ⅰ和Ｘｂａ Ⅰ双酶切后将其克隆到真核表达载体 ＰｃＤＮＡ３中,阳性克隆经 Ｓｍａ Ⅰ和 Ｘｂａ Ⅰ双酶切鉴定;用双脱氧终止法测序,同时利用计算机软件对其推定的氨基酸序列进行分析。结果：ＲＴ－ＰＣＲ扩增产物经酶切过夜后与经过同样双酶切的真核表达载体 ＰｃＤＮＡ３连接,阳性克隆经 Ｓｍａ Ⅰ和 Ｘｂａ Ⅰ酶切后产生了预期大小的 １４４ ｂｐ的片段。测序后其核苷酸序列与已经报道的ＨＣＶⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型的同源性分别为７２．８％、９３．２５％、６１．９６％和５６．４４％;其推定的氨基酸序列的同源性分别为 ７７． ３％、９５． ７％、５４ ６％和 ５１． ３５％;与已经报道的中国株的同源性为 ９５． ０６％和９３． ２５％;属 ＨＣＶ Ⅱ型;经计算机辅助分析表明该片段内含有４个可能的糖基化位点, ｌ个跨膜区,其氨基端为信号肽序列,在跨膜区的两端分别含有２个和１个抗原决定簇,而每一个抗原决定簇内均含有１个糖基化位点,该片段内还含有 ２个 Ｔ细胞识别位点。 结论：     

舒林酸对胃癌细胞株BGC-823作用的实验研究

目的: 研究舒林酸对胃癌细胞株BGC-823增殖、凋亡的作用,探讨其作用机制。方法: 体外培养的胃癌细胞株BGC-823加入不同浓度的舒林酸作用不同时间后,用倒置显微镜观察细胞形态学变化,四甲基噻唑氮蓝(MTT)法检测细胞生长抑制率,流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞周期;透射电镜观察细胞超微结构变化及凋亡形态变化,DNA电泳检测细胞凋亡DNA片段。结果: 舒林酸可以改变胃癌细胞株BGC-823的形态,抑制其生长,影响其细胞周期分布,透射电镜观察到细胞凋亡的形态,DNA电泳检测出典型的细胞凋亡的特征性梯状条带。结论: 舒林酸有抑制胃癌细胞株BGC-823增殖,诱导其凋亡的作用,并且可能与舒林酸影响其细胞周期分布、抑制了环氧合酶-2(COX-2)表达有关。     

Role of C6ORF120, an N-glycosylated protein, is implicated in apoptosis of CD4+ T lymphocytes

Background  Although CD4⁺ T cell apoptosis and CD8⁺ T cell responses have been extensively studied during HIV infection, how apoptosis signals being initiated in CD4⁺ T cells still need to be elucidated. The present study was designed to characterize the function-unknown gene, C6orf120, and elucidates its primary role in tunicamycin-induced CD4⁺ T apoptosis.

Methods  The C6orf120 coding sequence was amplified from peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) total RNA of AIDS patients. The DNA fragment was inserted into the pET-32a expression system, transformed into Escherichia coli, and preparation of C6ORF120 recombinant protein. The magnetic cell separation technology was used to prepare primary CD4⁺ T cells and CD8⁺ T cells. The primary T cells were cultured at 1 × 10⁶ cells/ml, treated with 0, 0.1, 1, 10, 100, and 200 ng/ml of C6orf120 recombinant protein for 48 hours, then harvested for cell cycle and apoptosis analysis. Tunicamycin (0.5 μmol/L) was used to induce endoplasmic reticulum stress in Jurkat cells. The biomarker 78 KDa glucose-regulated protein (GRp78) and growth arrest and DNA damage (GADD) were used to evaluate endoplasmic reticulum stress of Jurkat cells.

Results  We prepared C6ORF120 recombinant protein and its polyclonal antibody. Immunohistochemical analysis showed that C6orf120 mainly expressed in hepatocytes and cells in germinal center of lymph node. At concentration of 0.1, 1, 10, 100, and 200 ng/ml, C6orf120 recombinant protein could induce apoptosis of Jurkat cells and primary CD4⁺ T cells, and promoting G2 phase of its cell cycle. Western blotting analysis showed that C6ORF120 recombinant protein increased the expression of GRp78 and GADD in Jurkat cells in vitro.

Conclusion  Our results suggested that C6ORF120 could induce apoptosis of CD4⁺ T cells, at least in part, mediated with endoplasmic reticulum stress.

     

抗人DR5单克隆抗体(mDRA-6)对Jurkat细胞作用研究

目的:观察抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的死亡受体5(DR5)单克隆抗体—mDRA-6对Jurkat细胞的凋亡作用。方法:制备抗人DR5单抗-mDRA-6;检测Jurkat细胞表面DR5表达率;荧光显微镜下观察mDRA-6作用下Jurkat细胞形态变化;MTT法计算mDRA-6对Jurkat细胞存活的影响;FITC-AnnexinⅤ及PI双染流式细胞仪检测mDRA-6对Jurkat细胞凋亡率影响;琼脂糖凝胶电泳检测mDRA-6对Jurkat细胞DNA片段化的作用。结果:Jurkat细胞表面DR5表达率为94.8%;mDRA-6使Jurkat细胞染色质边集、断裂,细胞出芽,凋亡小体形成;MTT法显示mDRA-6具有明显的Jurkat细胞杀伤作用,1.563 mg/L的mDRA-6可使Jurkat细胞死亡60.50%;AnnexinⅤ及PI双染显示0.3mg/L的mDRA-6作用10 h,Jurkat细胞凋亡率达43.22%;10 mg/L mDRA-6作用HL-60细胞3h,DNA琼脂糖凝胶电泳显示明显的“梯形”条带。结论:抗DR5单抗-mDRA-6能够诱导Jurkat细胞凋亡。