对约氏疟原虫不同易感性的大劣按蚊和斯氏按蚊基因组RAPD序列比较

目的分析对约氏疟原虫不易感的大劣按蚊和易感的斯氏按蚊基因组RAPD谱带并测序,探讨媒介按蚊基因型与疟原虫基因型间的相互关系。方法用已筛选的一条随机引物,随机扩增大劣按蚊和斯氏按蚊成蚊的基因组DNA,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后,对相同迁移率的DNA条带克隆、测序,并采用相关在线程序及软件进行序列比较分析。结果大劣按蚊和斯氏按蚊RAPD谱带具有明显的种间差异,但有4对相同迁移率的条带。序列分析显示4对DNA条带在序列长度和组成上呈现多态性,序列的GC含量和简单重复序列存在差异,序列相似性介于48％～52％之间。结论大劣按蚊和斯氏按蚊之间存在不同的遗传背景,其基因多态性可能与产生对约氏疟原虫的易感性不同有关,为进一步研究按蚊与疟原虫之间的相互作用奠定了基础。     

约氏疟原虫感染斯氏按蚊与大劣按蚊前后中肠前酚氧化酶的变化

目的比较分析约氏疟原虫感染斯氏按蚊与大劣按蚊前后中肠前酚氧化酶(prophenoloxidase,PPO)的分布及其变化,探讨中肠PPO与按蚊抗疟原虫感染免疫防御反应的关系.方法解剖分离约氏疟原虫感染前和感染后3、5、7、11和15 d斯氏按蚊与大劣按蚊的中肠.利用烟草天蛾PPO抗体分别进行免疫组化染色和免疫印迹分析.结果斯氏按蚊与大劣按蚊在未感染约氏疟原虫前的中肠循环管道内均已存在PPO,而感染后循环管道内的PPO扩散到中肠组织间隙并聚集成片状、块状或条索状,大劣按蚊中肠PPO的聚集程度大于斯氏按蚊;在感染前和感染后不同时期免疫印迹均可检测到斯氏按蚊与大劣按蚊中肠PPO蛋白带,分子量约为67×103,感染后的PPO蛋白带型比感染前明显增强,而且大劣按蚊中肠PPO蛋白带型比斯氏按蚊尤为明显.结论约氏疟原虫感染前按蚊中肠循环管道内存在的PPO可能是经与血淋巴相通的循环管道扩散而来,感染后导致的中肠内PPO不同分布及其变化可能与疟原虫感染按蚊密切相关,并可能具有重要的生理学意义以及与激活按蚊抗疟原虫感染的免疫防御反应相关.     

实验室斯氏按蚊的饲养方法

<正> 斯氏按蚊(Anopheles stehpensi·Liston 1901)是实验室研究人,类人猿和鼠类疟原虫的重要媒介。国内外学者对实验室饲养斯氏按蚊作了大量研究。近二十年来,由于我们进行猴疟原虫和鼠疟原虫方面的研究时,需要按时提供大量斯氏按蚊供研究之用,因此,大是饲养斯氏按蚊成为一项重要研究环节。     

海南岛按蚊名录

本名录收集整理1991年以来的有关文献和海南按蚊调查研究的结果,迄今记录海南岛共有按蚊32种,分属于按蚊亚属13种,塞蚊亚属19种,其中6种发现自然感染疟原虫,以大劣按蚊和微小按蚊两种为主要传疟媒介。     

温度对斯氏按蚊传疟能力的影响及分子机制初探

目的 研究环境温度对按蚊传疟能力的影响,并通过比较分析不同温度下斯氏按蚊天然免疫关键分子TEP1转录水平,初步探讨相关分子机制,为气候变化对疟疾传播和流行的影响提供理论依据。 方法 本研究利用斯氏按蚊-约氏疟原虫动物模型,分别在24 ℃和28 ℃的环境温度下利用约氏疟原虫感染斯氏按蚊,感染后9 d解剖蚊中肠,荧光显微镜下观察疟原虫卵囊发育情况并计数,比较不同温度条件下疟原虫感染率和感染度。然后,利用荧光定量PCR方法比较不同温度条件下,感染前后不同时间点的斯氏按蚊TEP1分子的转录水平。 结果 在24 ℃的环境温度下,斯氏按蚊的感染率为91.7%,感染度为(403.9 ± 37.09)个/蚊。在28 ℃的环境温度下,斯氏按蚊的感染率为38.8%,感染度为(38.63 ± 13.91)个/蚊。24 ℃组的按蚊感染率和感染度均显著高于28 ℃组（P<0.001）。于吸血感染当天但尚未吸血时和吸血感染疟原虫后的第5天、第7天及第9天,斯氏按蚊的TEP1转录水平在28 ℃的条件下均高于24 ℃,提示斯氏按蚊TEP1参与的感染前基础免疫力和疟原虫感染中后期的免疫杀伤力28 ℃组均高于24 ℃组。结论 环境温度对按蚊传疟能力的影响较大,24 ℃较28 ℃的环境更适宜于约氏疟原虫感染斯氏按蚊;TEP1参与的天然免疫反应可能是温度对按蚊传疟能力影响的原因和分子机制之一。     

约氏疟原虫约氏亚种在斯氏按蚊体内发育及三种按蚊敏感性的观察

约氏疟原虫约氏亚种(Plasmodium yoelii yoelii)为国内外用于疟疾研究的较常见的一种实验动物疟原虫。但对其在蚊媒宿主体内的发育过程,迄今尚未见系统研究的资料,本文首次报道该种疟原虫在斯氏按蚊(Anopheles stephensi)体内发育过程,对其各发育阶段所出现的时间及形态特征作了较详细的描述;同时,对国内的大劣按蚊(A.duris)和中华按蚊(A.hyrcanus sinensis)与斯氏按蚊对该种疟原虫的敏感性作了初步比较。     

影响按蚊吸血行为的相关因素研究

目的有效阻止蚊虫的叮咬是预防蚊虫传播类疾病的重要手段,本研究旨在较系统地观察影响按蚊吸血行为的相关因素。方法首先确定按蚊50%吸血率并作为评判按蚊吸血效率的标准;然后系统观察环境温度、时间周期、蚊龄、鼠龄以及疟原虫感染等因素对按蚊吸血效率的影响。结果按蚊完成50%吸血率的时间为7.8 min,饥饿状态和早期蚊龄(2～8日蚊)是促进按蚊吸血的自身因素;相对低温(21℃)和夜间时段(20时～凌晨2时)是利于按蚊吸血的环境因素,幼鼠和疟原虫感染的小鼠是提高按蚊吸血的宿主因素,其中疟原虫、宿主的贫血和体温变化并非促进按蚊吸血的直接因素。结论影响按蚊叮咬宿主的因素较为复杂,不但受按蚊饥饿状态、蚊龄等内在因素的影响,而且还受外界温度、时间节律、鼠龄及其感染状况的影响。这可为有效预防蚊虫叮咬措施的制定提供重要的理论和实验依据。     

海南省大劣按蚊感染约氏疟原虫试验观察

由于斯氏按氏(ArophelesStephensi)对人疟原虫很敏感,可传播人疟,用此蚊种作疟疾研究,具有一定的危险,因此在国内蚊种中找出对约氏疟原虫敏感的实验媒介,即摸索建立约氏疟原虫——大劣按蚊系统的研究具有重要实用价值。我们从1990年5月起开始用大劣按蚊感染约氏疟原虫进行了试验观察。现将结果报告如下:     

微小按蚊实验室养殖的研究

按蚊实验室养殖对于疟疾实验研究、灭蚊方法和蚊虫抗药性等的研究均有重要意义。我国按蚊实验室养殖的研究始于60年代,先后养成了雷氏按蚊和中华按蚊;但这两种按蚊对疟原虫的易感性不高,作为实验室蚊媒不够理想。因此我室于1977年开始进行微小按蚊实验室养殖的研究。迄今国外关于微小按蚊的养殖仅有依靠人工交配繁殖传代的报告。我们经过将近3年的养殖研究,终于成功地能使微小按蚊在实验室自然交配连续传代,大量繁殖。现将结果报导如下。     

亚致死剂量球形芽孢杆菌对按蚊传疟能力的影响

目的 探讨亚致死剂量球形芽孢杆菌(Bacillus sphaericus,Bs)对斯氏按蚊传疟能力的影响.方法 利用亚致死剂量Bs 2 362株处理斯氏按蚊Ⅳ龄幼虫,收集存活按蚊并常规饲养.正常对照组按蚊Ⅳ龄幼虫不进行Bs处理,常规饲养.对3～5d龄的斯氏按蚊成蚊进行约氏疟原虫攻击感染,并于按蚊吸血后第9天解剖蚊胃,观察卵囊的发育情况,比较分析Bs处理对斯氏按蚊传疟能力的影响.结果 正常对照组和Bs处理组按蚊对疟原虫的感染率分别为92.1％和97.6％,Bs处理组感染率高于正常对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).Sigma 3.5统计软件分析显示,正常对照组和Bs处理组斯氏按蚊对疟原虫的感染度分别为(56.69±69.29)和(84.19 ±75.64),Bs处理组按蚊卵囊数量显著高于正常对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 亚致死剂量Bs 2362株处理显著增加约氏疟原虫对斯氏按蚊的感染率和感染度,提高了按蚊的传疟能力.