Doranidazole对乏氧胰腺癌细胞放射增敏研究

目的　研究新一代硝基咪唑衍生物 Doranidazole在低氧环境下对胰腺癌细胞的放射增敏效果。方法　在低氧和加Doranidazole环境下对人胰腺癌细胞系施行单次大剂量γ线照射 ,通过微孔板荧光酶标仪检测细胞死亡率来研究放射增敏作用。细胞死亡的增敏效果从时间相关性及形态学方面进行评价。Doranidazole在低氧环境下的选择性增敏效果利用流式细胞技术进行验证。结果　在7种胰腺癌细胞系中 ,5种细胞实行 30Gy大剂量照射 5d后的细胞死亡率在低氧环境下因Doranidazole的添加而显著增高 ;而常规环境下却无明显的增敏作用。同时提示Doranidazole在低氧环境下的选择性增敏作用有时间相关性。结论　Doranidazole在低氧环境下对胰腺癌细胞大剂量γ线照射具有明确的增敏效果     

p38MAPK抑制剂SB203580抑制人绒癌JAR细胞的体外侵袭作用

目的：研究p38MAPK通路在人绒癌JAR细胞体外侵袭中的作用。方法：用细胞ELISA法测定JAR细胞中p38MAPK的活性变化，用Transwell细胞侵入系统检测细胞的侵袭作用。结果：PMA呈浓度依赖性地激活JAR细胞中p38MAPK,PMA能促进人绒癌JAR细胞的体外侵袭作用，而p38特异性抑制剂SB203580抑制了JAR细胞的侵袭能力。结论：p38MAPK通路在人滋养细胞的侵袭行为以及人绒癌的形成中具有重要作用，P38抑制剂可能会为人绒癌的防治提供新的途径。     

LY294002抑制 PI3K-Akt 通路对富集肝癌干细胞细胞球增殖的影响

目的：探讨 LY294002对富集肝癌干细胞的细胞球增殖和磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶 B （PI3K-Akt）通路的影响。方法对人肝癌 HepG2细胞进行无血清悬浮培养获得富集肝癌干细胞的细胞球,消化后使用 LY294002（10、20、30μmol/ L）培养作为实验组,对照组不使用 LY294002。细胞活性计数法检测细胞增殖活性,Western blotting 检测 Akt,实时定量 PCR 检测 PI3K-Akt 信号通路下游基因诱骗受体3（DcR3）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、B 淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、细胞周期蛋白 D1（Cyclin D1）的表达。结果与对照组相比,30μmol/ L LY294002可显著抑制富集肝癌干细胞的细胞球增殖,吸光度（A）值有显著差异[（0.14±0.03）：（0.56±0.01）,t =-8.915,P =0.000];磷酸化 Akt 表达水平明显降低[（0.57±0.08）：（0.16±0.42）,t =6.027,P =0.026];DcR3[（0.38±0.08）：1,t =13.060, P =0.006]、mTOR[（0.37±0.04）：1,t =30.363,P =0.001]、Bcl-2[（0.26±0.04）：1,t =33.554,P =0.001]、Cyclin D1[（0.1±0.02）：1,t =63.528,P =0.000]表达明显减少。结论 LY294002可能通过抑制 PI3K-Akt 通路而抑制富集人肝癌干细胞的细胞球的增殖。     

放射诱导的六株细胞系细胞周期和细胞凋亡变化的观察

目的:探讨放射诱导的6株细胞系细胞周期和细胞凋亡的变化特点.方法:正常肝细胞系HL-7702,肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721,肺小细胞癌HCI-H460,肺腺癌A549和宫颈癌细胞系Hela常规培养48 h后接受4 Gy X射线照射;收获受照前(0h)和受照后6、12、24、36和48h的细胞,采用流式细胞术(FCM)检测各细胞系细胞凋亡和细胞周期.结果:在4 Gy X线照射前,SMMC-7721和HCI-H460细胞凋亡率明显高于其他4株细胞系,两者差异有统计学意义(t=20.98,P<0.005);在照射后12 h,与照射前相比6株细胞系细胞凋亡率均有显著增加(t=5.27,P<0.05),SMMC-7721、HCI-H460和A549同时伴有S期和G2～M期细胞比率的降低;在照射后36h HCI-H460出现第2个细胞凋亡峰,伴有极低比例的S期和G2～M期细胞;HepG2在照射后12h、HL-7702和Hela在照射后24h均有明显的G2/M期阻滞.结论:4 Gy X线诱导的细胞凋亡主要发生在射线照射后12～36h,6株细胞系可能均发生了"有丝分裂前凋亡";每株细胞还呈现了不同的细胞凋亡和细胞周期变化特点,具有组织细胞特异性.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂对乏氧宫颈癌HeLa细胞放射敏感度的影响

目的:观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A(trichostatin A,TSA)对乏氧状态下人宫颈癌HeLa细胞放射敏感度的影响。方法:应用不同浓度TSA作用经乏氧预处理的人宫颈癌HeLa细胞12、24、48和72 h,MTT法检测HeLa细胞的增殖率,计算半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)和IC10值;克隆形成实验检测TSA(IC10)作用24 h对乏氧HeLa细胞的放射增敏效应;免疫细胞化学法检测TSA(IC10)对HeLa细胞中乏氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1 alpha,HIF-1α)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白表达的影响。结果:TSA对乏氧宫颈癌HeLa细胞的增殖率有明显的抑制作用,且随着TSA浓度的增加和作用时间的延长,其抑制作用逐渐增强。与乏氧照射组比较,TSA(IC10)作用乏氧HeLa细胞24 h,可增加细胞的放射敏感度(P<0.05)。乏氧HeLa细胞中HIF-1α和VEGF蛋白的表达明显高于常氧组细胞;与乏氧组比较,TSA(IC10)作用乏氧HeLa细胞24 h后,细胞中HIF-1α和VEGF蛋白表达下调。结论:TSA可能通过抑制乏氧HeLa细胞中HIF-1α和VEGF蛋白的表达而发挥放射增敏效应。     

K-ras基因点突变的反义寡脱氧核苷酸对体外培养的人胰腺癌细胞PC-2凋亡的影响

目的观察针对于胰腺癌K-ras基因点突变的反义寡脱氧核苷酸对体外培养人胰腺癌细胞株PC-2凋亡的影响。方法脂质体将人工合成的针对于K-ras基因第12位密码子点突变的反义寡脱氧核苷酸转染体外培养的人胰腺癌细胞株PC-2,流式细胞仪、凋亡细胞原位末端标记（TUNEL）、倒置相差显微镜检测反义寡脱氧核苷酸对人胰腺癌细胞PC-2凋亡的影响。结果转染48小时后,流式细胞仪：实验组有明显的凋亡峰,细胞大部分被阻滞于G1期,S期比例减少。TUNEL：实验组凋亡细胞明显增多。倒置相差显微镜：实验组凋亡小体明显增多。结论针对于K-ras基因点突变的反义寡脱氧核苷酸作用于体外培养的胰腺癌细胞PC-2,对癌细胞的凋亡有明显的促进作用。     

肿瘤微环境乏氧对化疗敏感性的影响

肿瘤微环境乏氧不仅使肿瘤自身更具侵袭性,容易发生远处转移,而且能使肿瘤对放化疗的抗拒性增加,从而降低其疗效.肿瘤微环境乏氧影响化疗敏感性的机制可分为直接耐药和间接耐药两种,现简要综述此方面的研究进展.     

放射对乏氧胃癌细胞PTEN基因和VEGF等蛋白表达的影响

越来越多的证据表明乏氧可以诱导血管内皮细胞生长因子（VEGF）、表皮生长因子受体（EGFR）的表达，VEGF、EGFR与肿瘤的放射敏感性关系密切。笔者拟通过观察胃癌细胞系MGC803乏氧不同时间后细胞周期、抑癌基因PTEN mRNA及VEGF、EGFR蛋白表达的变化及乏氧与乏氧照射后细胞存活情况，探讨乏氧时间对细胞放射后存活的影响。     

微环境乏氧对肿瘤细胞DNA损伤修复的影响

微环境乏氧是肿瘤组织内常见的现象之一,研究表明乏氧通过激活多条DNA损伤效应信号途径诱发肿瘤细胞的基因组不稳定与肿瘤的侵袭与转移及化放疗的抵抗密切相关.目前微环境乏氧对肿瘤细胞接受放化疗后DNA损伤修复3条主要途径错配修复(MMR)、同源重组(HR)和非同源性末端连接(NHEJ)这3种方式研究最为广泛.     

三氧化二砷对人肝癌细胞作用的研究

目的 :应用体外培养的肝癌细胞株 (SMMC 772 1)观察砷剂 (As2 O3)的凋亡诱导作用。方法 :采用MTT法检测As2 O3对肝癌细胞增殖的影响 ,DNA电泳及流式细胞仪检测不同浓度As2 O3作用不同时间对肝癌细胞的凋亡诱导作用及细胞周期的影响。结果 :As2 O3抑制肝癌细胞的增殖并具有剂量 -时效关系 ;As2 O3可使肝癌细胞周期改变 ,与浓度有关 ,与作用时间未见明显关系 ;As2 O3诱导肝癌细胞发生凋亡 ,并与浓度、时间有关。结论 :As2 O3能抑制肝癌细胞增殖 ,改变肝癌细胞周期 ,诱导肝癌细胞凋亡     

吉西他滨抑制骨肉瘤细胞系MG-63增殖和诱导凋亡的实验研究

目的研究吉西他滨对骨肉瘤细胞系MG-63的增殖抑制和凋亡诱导作用。方法利用光镜检测吉西他滨作用后MG-63的形态学变化;MTT法检测吉西他滨对MG-63的增殖抑制;流式细胞仪AnnexinV-FITC法检测细胞凋亡,琼脂糖凝胶电泳检测DNA ladder。结果吉西他滨可明显地抑制MG-63细胞生长,各实验组24、48、72小时抑制率随时间的增加而增加,差异有统计学意义（P〈0.05）,0.1 mg/L及以上浓度的吉西他滨对MG-63骨肉瘤细胞的抑制率可达50%,0.1-100 mg/L的吉西他滨对MG-63的抑制率相似。吉西他滨可诱导MG-63细胞凋亡,在不同浓度吉西他滨（0.1,1.0,10.0,100 mg/L）作用48小时后,MG-63的凋亡率差异无统计学意义（P〉0.05）。并且经琼脂糖凝胶电泳可以显示DNA ladder。结论吉西他滨对骨肉瘤细胞系MG-63具有增殖抑制作用,并且各实验组24、48、72小时抑制率随时间的增加而增加;吉西他滨对骨肉瘤细胞系MG-63具有诱导凋亡作用;0.1-100 mg/L吉西他滨对MG-63的增殖抑制和诱导凋亡作用相似。     

耐药喉癌Hep-2/VCR细胞ATP7B表达与顺铂耐药的相关性

目的 检测copper transporting P-type adenosine triphosphatase(ATP7B)在人喉癌耐药细胞株中的表达,并研究其与喉癌细胞顺铂耐药的关系.方法 人喉鳞癌Hep-2细胞和Hep-2/长春新碱(vincristine,VCR)耐药细胞分别给予顺铂作用24小时和48小时,应用细胞增殖/毒性检查试剂盒(cell counting kit-8,CCK8)细胞活力试验、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法[terminal dexynueleotidyl transferase (TdT)-mediated dUTPnick end labeling,TUNEL]细胞凋亡实验分别检测细胞增殖和凋亡.分别用免疫荧光染色和实时RT-PCR检测ATP7B蛋白和mRNA在细胞中的表达.结果 50 μmol/L和l00μmol/L的顺铂作用24小时后,Hep-2细胞活力下降为71.0％,而Hep-2/VCR细胞活力无下降,差异有统计学意义(P＜0.01).50 μmol/L顺铂能够诱导Hep-2和Hep-2/VCR细胞表达ATP7B.Hep-2细胞在作用后3小时表达增强,6小时达到峰值,12小时下调(P＜0.05);而Hep-2/VCR细胞在3小时表达增强,6小时达到峰值(P＜0.05),持续高表达24小时无明显变化.结论 喉癌耐药细胞Hep-2/VCR的ATP7B蛋白的高表达与喉癌细胞的顺铂耐药有关.     

盖诺与顺铂联合化疗加同期放射对乳腺癌MCF-7细胞作用的研究

目的：探讨盖诺（NVB）联合顺铂（DDP）的放化同期治疗乳腺癌的有效性、时机选择和作用机制。方法：NVB和DDP（NP方案）对乳腺癌MCF-7细胞联合化疗同期放射。比较照射加联合化疗组和单纯照射组、不同间隔时间联合化放疗的细胞存活率（SF）、凋亡和细胞周期阻滞差异。结果：联合化疗加同期放射后SF较单独放疗更低。化疗处理后间隔4、12和36h照射的SF值最低,0h居中,而阃隔48和72h后,SF值明显上升,放化疗协同杀灭效应减弱,SF最低与最高值相差约15倍。联合化疗加照射组细胞凋亡指数（AI）明显高于单独放射和联舍化疗组。6、8Gy放射后36h时,放化疗联合组与单独放射组比较A1分别高达30．7％、38．35％和2．22％、3．27％,差异有统计学意义,P〈0．05。化疗处理MCF-7细胞1h后在间隔4、12、36和72h处,G2／M周期细胞比例较高,0.48h处较低。结论：联合化放疗对乳腺癌MCF-7细胞具有较强的协同杀灭作用,化放联合治疗的时机选择在肿瘤细胞杀灭过程中具有重要的意义,这种协同杀灭作用与增加细胞凋亡率和化疗造成的细胞G2／M周期阻滞有关。     

肉桂醛对肝癌HepG2细胞p21和CDK4蛋白的影响

目的检测肉桂醛对肝癌HepG2细胞p21和细胞周期依赖性蛋白激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)蛋白表达的影响。方法肉桂醛(3.13、1.56、0.78、0.39、0.20、0.10 g/L)作用肝癌HepG2细胞后,MTT比色法检测HepG2细胞增殖活性和半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))。流式细胞术检测肉桂醛对HepG2细胞凋亡影响。免疫荧光法检测HepG2细胞p21和CDK4蛋白的表达。结果肉桂醛能抑制HepG2细胞增殖,且呈剂量和时间依赖性,24小时、48小时和72小时IC_(50)值分别为0.68、0.45、0.35 g/L(P<0.01)。肉桂醛组(0.900、0.450、0.225 g/L)肝癌HepG2细胞凋亡率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。肉桂醛能增加p21蛋白和降低CDK4蛋白在HepG2细胞中的表达,各浓度肉桂醛组的p21、CDK4蛋白表达与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论肉桂醛可抑制人肝癌细胞HepG2的增殖,可能与调节p21和CDK4的蛋白表达有关。     

食管癌细胞系CSEC的建立及其生物学特性

目的建立人食管癌细胞系为潮汕沿海地区食管癌研究提供实验模型。方法采用胶原酶消化法建立人食管癌细胞系CSEC。研究培养细胞的形态特点、生长特征、对Scid小鼠的致瘤性、细胞遗传学特点及肿瘤相关标志物（AE3、p53）的表达。结果细胞系CSEC在体外持续稳定生长超过13个月，已传至80代以上，群体倍增时间为39．6小时。CSEC细胞具有鳞状细胞的形态和结构特点，胞浆富含张力原纤维束，细胞间可见桥粒。Sdd小鼠移植瘤的组织学形态与患者的原发肿瘤一致。细胞系CSEC呈近四倍体核型，染色体结构改变常见而且复杂。肿瘤相关标志物（AE3、p53）呈强阳性表达。结论人食管癌细胞系CSEC是一分化较高且生物学特性稳定的鳞状细胞癌细胞系，可为食管癌的发病机制和治疗研究提供有价值的实验模型。     

miR-18a对肝癌细胞侵袭及迁移能力的影响及其机制

目的 探讨miR-18a对肝癌患者血清肝癌细胞侵袭及迁移的影响及其作用机制.方法 细胞经培养、传代、冻存、复苏后采用脂质体介导转染法进行转染.肝癌细胞株HepG2.2.15及HepG2分别转染miR-18a inhibitor和miR-18a inhibitor阴性对照24 h后,应用transwell侵袭和迁移实验测定肝癌细胞的侵袭和迁移能力.肝癌细胞株HepG2和HepG2.2.15分别转染miR-18a inhibitor、miR-1 8a inhibitor阴性对照、共转染miR-18ainhibitor和Dicer siRNA以及共转染miR-18a inhibitor和Dicer siRNA阴性对照48 h后,应用Western blot法比较各组Dicer1蛋白表达的差异,应用transwell侵袭和迁移实验比较各组细胞侵袭以及迁移能力的差异.结果 转染miR-18a inhibitor 后,HepG2和HepG2.2.15细胞的侵袭和迁移能力均降低,差异均具有统计学意义(均P＜0.05).转染miR-18a inhibitor组Dicer1蛋白表达水平较转染miR-18a inhibitor阴性对照组升高,差异具有统计学意义(P＜0.05).共转染Dicer siRNA+ miR-18a inhibitor组Dicerl蛋白表达水平较Dicer siRNA阴性对照+miR-18a inhibitor组降低,差异具有统计学意义(P＜0.05);细胞的侵袭和迁移能力均增强,差异均具有统计学意义(均P ＜0.05).结论 miR-18a 促进肝癌细胞的侵袭和迁移能力,其机制可能与Dicer1蛋白表达抑制有关.     

拓扑替康联合放射线对人肺腺癌细胞的作用

目的:探讨拓扑替康(TPT)对人肺腺癌细胞的放射增敏作用及机制。方法: 用克隆形成试验检测TPT对人肺腺癌细胞放射效应的影响;用流式细胞技术检测TPT联合放射线作用后人肺腺癌细胞的周期分布。结果:按照多靶单击模型拟合单纯照射组及加药照射组的细胞放射存活曲线,两组的D0、Dq 及N 值分别为1. 605、1 .734 和2 .946;1 .340、0. 587 和1.550。放射增敏比(SERD0)为1 .2。流式细胞仪分析显示,单纯照射组的S期细胞比例较空白对照组明显增高,加药照射组细胞S期堆积被消除。结论:TPT对人肺腺癌细胞具有放射增敏作用。其机制与TPT抑制人肺腺癌细胞放射损伤的修复并杀伤对放射线不敏感的S期细胞有关。     

胰岛素对人乳腺癌细胞株化疗增效作用的体外研究

目的：探讨用胰岛素提高肿瘤细胞生长代谢水平对化疗药物敏感性的影响。方法：以体外培养的人乳腺癌细胞株（MBA-MD-543）为靶细胞,以胰岛素作为代谢促进剂,运用四氮唑盐、直接细胞计数等方法观察化疗药物诺维本与胰岛素对MBA-MD-543细胞活力及细胞代谢,细胞总数等的影响。结果：胰岛素（0．5～16mU／mL,8～18h）使MBA—MD-543的细胞活力及细胞代谢增加,胰岛素（7．5mU／mL）可以增加诺维本的细胞毒作用。结论：在体外,胰岛素可诱导人乳腺癌细胞株MBA-MD-543增殖,胰岛素对诺维本有一定的化疗增效作用,其用药时机和浓度的选择是实现增效的关键。“提高癌细胞的生长代谢水平,继之给予化疗,可提高化疗药物细胞毒作用”是可行的。     

顺维甲酸体外诱导肺腺癌细胞A549凋亡的研究

目的:探讨9-顺维甲酸(9-cis-RA)对人肺腺癌细胞A549的诱导凋亡作用。方法:体外培养肺腺癌细胞株A549,用MTT法观察9-cis-RA对细胞的生长抑制作用,采用电镜、流式细胞仪等方法检测9-cis-RA对细胞的诱导凋亡作用。结果:9-cis-RA对A549细胞有生长抑制效应,抑制率随着9-cis-RA浓度、作用时间的增加而增加。9-cis-RA明显诱导A549细胞的凋亡,可观察到凋亡小体和凋亡峰,药物作用48h后,9-cis-RA浓度为5、10μmol/L的细胞凋亡率分别为7.2%和13.3%,细胞凋亡率呈现量效关系。结论:9-cis-RA可能通过诱导肺癌细胞凋亡抑制肺癌细胞增殖,发挥其抗癌作用。