脐血与脐带间充质干细胞的分离、扩增、分化比较

目的比较人脐血、脐带组织间充质干细胞体外分离、扩增与成骨、成脂肪细胞分化的方法与条件．比较相应实验的难易度。方法脐血采用沉降红细胞后密度梯度法及CD34^＋免疫磁珠负选法分离单个核细胞＋10％胎牛血清或Mesencuit^TM培养基培养传代,集落生长细胞向成骨、脂肪细胞定向诱导分化;脐带沿血管灌入胶原酶悬液,获取细胞培养、扩增,细胞呈集落生长后传代,定向成骨、成脂肪细胞分化。结果脐血经沉降红细胞后分离的MNCs,使用Mesencult^TM培养基＋10％胎牛血清培养成功率高,集落细胞能向成骨、成脂肪细胞定向诱导分化。脐带去除血管后灌注可获得贴壁生长的细胞,能扩增形成集落,并向成骨、成脂肪细胞定向分化。结论脐血中可分离出MSCs,并可在体外进行培养扩增及分化,但难度较大。脐带组织存在间充质干细胞,并可在体外进行培养扩增形成集落细胞传代,集落细胞能够向成骨、成脂肪细胞分化,方法较脐血容易。     

人脐带间充质干细胞的分离、鉴定及向肝细胞的定向诱导分化

目的 分离纯化人脐带间充质干细胞(UCMSCs),探讨UCMSCs是否能在体外条件下被诱导成为肝细胞样细胞.方法 无菌条件下采集健康新生儿脐带,采用胰酶、胶原酶顺序消化法分离单个细胞,通过贴壁培养方法分离纯化间充质干细胞(MSCs).从形态、表面抗原、成脂肪细胞和成骨细胞分化潜能三方面进行鉴定.随后通过细胞因子诱导的方法将间充质干细胞诱导为肝细胞样细胞.结果 从人脐带中成功分离纯化得到UCMSCs,细胞呈纤维状;表达CD44、CD105、CD73、CD90,不表达与造血细胞和内皮细胞相关的CD34、CD45、CD31等标志物,不表达与移植物抗宿主病相关的HLA-DR等分子;在不同细胞因子作用下,可以被诱导分化为脂肪细胞、成骨细胞和卵圆形肝细胞样细胞.结论 人脐带中含有较丰富的MSCs,在体外条件下可以被诱导为肝细胞样细胞.     

人脐带间充质干细胞的分离、鉴定及向肝细胞的定向诱导分化

目的 分离纯化人脐带间充质干细胞(UCMSCs),探讨UCMSCs是否能在体外条件下被诱导成为肝细胞样细胞.方法 无菌条件下采集健康新生儿脐带,采用胰酶、胶原酶顺序消化法分离单个细胞,通过贴壁培养方法分离纯化间充质干细胞(MSCs).从形态、表面抗原、成脂肪细胞和成骨细胞分化潜能三方面进行鉴定.随后通过细胞因子诱导的方法将间充质干细胞诱导为肝细胞样细胞.结果 从人脐带中成功分离纯化得到UCMSCs,细胞呈纤维状;表达CD44、CD105、CD73、CD90,不表达与造血细胞和内皮细胞相关的CD34、CD45、CD31等标志物,不表达与移植物抗宿主病相关的HLA-DR等分子;在不同细胞因子作用下,可以被诱导分化为脂肪细胞、成骨细胞和卵圆形肝细胞样细胞.结论 人脐带中含有较丰富的MSCs,在体外条件下可以被诱导为肝细胞样细胞.     

改良的人脐带间充质干细胞培养方法

目的:建立人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)的分离和培养方法,探讨hUCMSCs的成脂成骨分化潜能。方法:用酶消化法、传统组织块法和改良组织块法从人脐带中分离间充质干细胞,流式细胞仪检测其免疫表型;用不同的培养体系诱导hUCMSCs向成骨细胞及成脂细胞分化,并对其进行鉴定。结果:改良的hUCMSCs培养方法培养细胞纯度更高,在相同的培养时间内,改良组织块法所获得的细胞数量是酶消化法的2～3倍,是传统组织块法的20～30倍,细胞呈长梭形生长;高表达CD73、CD90、CD44、CD105,不表达CD31、CD45、CD34;茜素红染色及油红O染色证实了hUCMSCs可分化为脂肪细胞和成骨细胞。结论:建立了hUCMSCs的培养新方法,证实了hUCMSCs的增殖能力和多向分化潜能,为其治疗应用提供支持。     

诱导脐血间充质干细胞分化为神经细胞的研究综述

脐血间克质干细胞是指从脐带血中分离、培养出来的一种成体肝细胞,具有多潜能性,可以向神经细胞分化。临床研究发现,脐血间充质干细胞于神经损伤、神经退行性疾病、卒中等神经系统疾病临床治疗中具有显著功效。近年来,关于脐血间充质干细胞相关研究工作不断推进,取得了多项研究成果。本文着重针对诱导脐血间充质干细胞分化为神经细胞问题进行了分析总结。     

间充质干细胞向肝细胞分化研究

目的探讨间充质干细胞在体外诱导分化为肝细胞后,细胞增殖能力和免疫抑制能力等干细胞生物学的改变。方法间充质干细胞在体外进行向肝细胞诱导分化培养,分化为具有部分成熟肝细胞功能的肝细胞样细胞,并对这些肝细胞样细胞继续培养。流式细胞仪检测细胞表型,BrdU法检测细胞增殖能力,与CD4⁺T淋巴细胞共孵育实验检测细胞免疫抑制实验。结果间充质干细胞分化为肝细胞后,虽然具备了部分成熟肝细胞的功能,亦丧失了间充质干细胞本身的一些特性;BrdU法测增值能力,其OD值从1.859±0.117降到1.24±0.103,抑制CD4+T细胞激活的能力从94.8%(100%-5.2%)降到68.8%(100%-31.2%)等;而且分化后的细胞处于不稳定的分化状态,继续培养后,其细胞生物学相关特性和功能均出现去分化的现象,比如增殖能力恢复到OD值为1.501±0.229,免疫抑制能力恢复到81.8%(100%-18.2%)。这种不稳定的状态,进入体内后,是否会增加突变或致癌的概率,仍需进一步的研究。结论间充质干细胞比其向肝细胞诱导分化后的细胞更具安全性,更适合肝病治疗。     

5-氮胞苷诱导脐带间充质干细胞分化为心肌细胞表达cTnI的研究

目的 通过对5-aza诱导人脐带间充质干细胞分化为心肌样细胞后行免疫组化检测cTnI表达,以确定心肌样细胞的形态结构.方法 取传2代hUC-MSCs,分别加入终浓度为2.5、5、10、20、40、80μmo1/L的5-aza,培养4周之后观察诱导后的细胞形态学的变化以及生长情况.在诱导后的第二周进行免疫组织化学染色检测cTnI的表达,并计算阳性细胞转化效率.之后采用RT-PCR技术,在诱导后的第1、2、3、4周,对hUC-MSCs的ANP、BNP、a-skeletal actin的基因表达进行检测.结果 5-氮胞苷诱导7d之后,细胞形态出现变化.细胞多呈现紧密生长、平行排列,细胞的体积逐渐增大,梭形细胞的比例逐渐下降.40 μmol/L,80 μmoL/L组细胞形态变化明显.4周时,40,80 μmol/L组诱导的细胞折光性降低、细胞活性减弱,并且出现死亡的细胞.诱导后2周,5、10,20,40,80μmol/L组hUC-MSCs可见表达阳性的cTnI.cTnI阳性染色细胞数率比较,10 μmol/L,20 μmol/L,40μmol/L,80 μmol/L组之间无明显差异,均明显高于5 μmol/L组(P＜0.05).RT-PCR检测到ANP、BNP、a-skeletal actin基因表达增加;10 μmol/L组基因的表达量在不同时间点与其他各组的基因量相比较在数值上均高于其他各组,且在大部分的时间点上差异有统计学意义(P＜0.05),仅少部分差异无统计学意义(P＞0.05).结论 经5-aza诱导的人脐带间充质干细胞有cTnI表达,具有心肌细胞的特异的免疫组化表现.     

脐带间充质干细胞卵巢局部移植在卵巢早衰大鼠体内的分布

目的 观察脐带间充质干细胞(UCMSCs)卵巢局部移植在卵巢早衰大鼠体内的分布.方法 建立模型移植标记UCMSCs,观察各脏器绿色荧光细胞分布情况.结果 卵巢内发现移植细胞,肺、脾可见到较多移植细胞,心、肝、肾可见到散在分布移植细胞.结论 UCMSCs能在卵巢组织内存活,部分滞留在肺、脾等组织.     

脐带间充质干细胞移植缓解肺泡细胞衰老的作用探讨

目的 探讨脐带间充质干细胞（UC-MSCs）移植对放射性肺纤维化（RIPF）、RIPF小鼠的肺内衰老细胞的作用。方法 C57BL/6小鼠单侧右肺接受17 Gy照射构建RIPF模型,照射后3个月尾静脉注射UC-MSCs,照后6个月取材,记录小鼠生存率、统计肺脏器比,苏木素-伊红（H&E）染色、Masson染色观察肺部结构及胶原沉积;qRT-PCR检测衰老分泌相关表型（SASP）表达情况;β-Gal免疫组化评估肺内细胞衰老;WB检测P53-P21、P16通路关键蛋白表达水平;组织免疫荧光检测肺内P21表达情况。结果 经UC-MSCs治疗的RIPF小鼠生存率较未治疗组升高,胶原蛋白沉积减少,塌陷增厚的肺泡结构改善;RIPF小鼠肺内增多的β-Gal阳性衰老细胞和高表达的SASP(IL-6、IL-8、IL-1β)在UC-MSCs治疗后均下降;UC-MSCs治疗降低了RIPF小鼠体内异常增高的P53、p-P53、P21、P16蛋白水平。结论 UC-MSCs可能通过抑制P53-P21及P16通路减轻纤维化肺内细胞的衰老,缓解放射性肺纤维化,有望用于放射性肺损伤的治疗。     

人脐带间充质干细胞移植后在ATN大鼠的分布

目的观察DAPI标记的人脐带间充质干细胞经外周静脉移植后在ATN大鼠体内的分布。方法 SD大鼠120只随机平均分为三组。移植组:将总量900mg/kg庆大霉素,首次300mg/kg,12h后200mg/kg,余400mg/kg分两次每隔24h皮下注射,共3天,建立ATN大鼠模型,采用经尾静脉注射法移植人脐带间充质干细胞。模型组:造模方法同移植组。空白组:正常大鼠。分别于造模成功后1d、4d、1w、2w及4w处死大鼠,留取血液做生化检测,取肾组织荧光显微镜下观察人脐带间充质干细胞植入实验动物体内后的分布情况。结果移植组大鼠,肾组织仅在肾小管中见到DAPI阳性细胞,而肾小球中为阴性,且肾小管上皮荧光从1d持续至4w仍可见,但强度有减弱的趋势。结论 HUCMSCs移植后仅在肾小管中分布,但不同时间点分布比较逐渐减低。     

人脐血间充质干细胞分离培养方法的优化

目的探索脐血来源的间充质干细胞体外分离培养的更优方法。方法无菌条件下抽取正常足月剖宫产胎儿的脐带血,肝素抗凝,用淋巴细胞分离液分离脐血单个核细胞。50份脐血分为对照组和改良组,每组25份,分别以1.5×10^7/ml的细胞密度接种于25 cm^2培养瓶中。对照组贴壁3 d后弃上清,去除未贴壁细胞,更换新鲜培养液;改良组贴壁0.5 h后弃上清,去除未贴壁细胞,更换新鲜培养液。结果对照组杂细胞较多,最终成功培养出8份脐血间充质干细胞;改良组杂细胞较少,最终成功培养出18份脐血间充质干细胞。经流式细胞仪检测脐血间充质干细胞的免疫表型,结果显示,所培养出的脐血间充质干细胞不表达或极弱表达CD34、CD106等造血细胞标志,稳定地高表达CD29、CD44、CD105等间充质细胞相关的表面抗原标记物。结论采取脐血单个核细胞贴壁0.5 h弃上清更换新鲜培养液可以明显提高脐血间充质干细胞的培养成功率,其结果优于脐血单个核细胞贴壁3 d弃上清更换新鲜培养液。     

正常新生儿脐血18项检验指标值观察

目的　探索新生儿脐血血脂、蛋白质、酶类及红细胞、白细胞、血小板、红细胞压积、血红蛋白的参考值。方法　生化项目采用全自动生化分析仪法 ,血常规项目采用血液分析仪法。结果　建立了脐血ALT、AST、WBC等 18项检验指标的参考值。新生儿脐血中ALT、CK、TP、ALB、TBIL、WBC与孕周有关 ,呈升高趋势 (P <0 0 5 ) ;ALP、GGT随孕周增加呈下降趋势 (P <0 0 5 )。各项指标男女性别间均无显著性差异(P >0 0 5 )。结论　新生儿脐血血清蛋白、血脂、酶及白细胞等与其胎龄具有一定的相关性 ,与成人存在显著性差异。     

脐带间充质干细胞与脐血造血干细胞临床应用的研究进展

人胚胎干细胞(HESC)系及生殖细胞系的建立,被美国时代周刊(Times)列为20世纪世界十大科技成就之首。脐带间充质干细胞(UC-MSC)和脐血造血干细胞(UCB-HSC)的研究作为其中的一部分,具有广阔的临床应用前景。UC-MSC和UCB-HSC是具有自我更新、分化能力和产生多系或单系特异细胞功能的细胞,位于细胞发育谱系的顶端。笔者拟对UC-MSC和UCB-HSC的来源、生物学特点及其临床应用等方面的进展,综述如下。     

On the Value of the Umbilical Cord Blood Supply

Background

Several public cord blood banks are struggling financially, and the question remains as to whether additional allocations of funds to them are justified.

四联袋分离脐血干细胞方法及临床效果初步研究

目的探讨一种高效实用、安全且具有临床应用价值的分离脐血干细胞方法，并研究多次、多份脐带血干细胞静脉叠加输注治疗股骨头坏死的临床安全性和疗效。方法①应用四联袋结合无菌接口技术制备脐血干细胞，对分离后单个核细胞（MNC）数、MNC收率、CD^34＋细胞数、台盼蓝拒染率、红细胞混入量进行检测。②将四联袋分离的脐血干细胞静脉输注给8例股骨头坏死患者，观察患者髋关节疼痛程度、性质及时间变化、髋关节外展与内旋功能变化、行走距离及步态变化；细胞移植后6个月，观察X线图像、股骨头形态学变化。结果①四联袋结合无菌接口技术分离的脐血MNC收率高，效果好且分离过程不易发生微生物污染。②8例患者临床症状均有不同程度的缓解或消失，有效率100％；细胞移植后6个月，X线图像、股骨头形态学有不同程度改善。③在细胞移植过程中及移植后均未发生并发症和发热、过敏等不良反应。结论①四联袋分离脐血干细胞是一种效率高、安全且具有临床应用价值的分离方法。②经静脉多次、多份输注脐血间质干细胞，是全身整体治疗股骨头坏死的一种新手段。③多份脐血干细胞不需ABO、HLA配型输注。     

新生儿脐带血血铅浓度及其环境影响因素探讨

为了解新生儿脐带血血铅浓度及其环境影响因素，在南通市收集脐带血标本１３９份。用火焰原子吸收法测定血铅浓度，并以访谈式问卷调查的形式对相应的１３９名产妇进行了环境因素的调查，用多因素统计分析的方法，分析对脐血铅水平有影响的环境因素。     

胎儿脐血流检测电路的研究

目的：针对目前胎儿脐血流监护仪的灵敏度与方向性的不足,设计一种新型的胎儿脐血流检测电路。方法：基于超声多普勒血流测量的理论模型,通过比较不同检测电路的特点,提出并实现由有源晶振超声发射电路和谐振放大同步解调接收电路组成的脐血流检测电路的方案。结果：使用血流动力学模拟实验装置进行检测,能正确地显示脐血流方向的声谱图,不存在反向的血流假象。结论：该脐血流检测电路灵敏度高,提取脐血流方向的性能显著提高。为医生评估胎儿状态提供了良好的参考指标。     

新生儿脐带暴露法对脐部感染和脐带残端脱落的影响

目的 比较应用WHO倡导的脐带暴露法与传统的脐带包扎法对预防新生儿脐部感染和脐带残端脱落时间长短的影响.方法 选择2012年10月至11月住院分娩的356例新生儿,随机分为脐带暴露法组与脐带包扎法组,两组脐带结扎方法相同,脐带暴露法组断脐后在产房开始即暴露脐带,日常护理用清水清洁脐部,不用任何消毒液;脐带包扎法组断脐后使用脐带卷包扎,日常护理仍然使用75％酒精消毒脐部并每日包扎.比较分析两组新生儿脐带残端脱落时间、脱落率、脐部分泌物及脐炎发生率情况.结果 脐带暴露法组脐带残端脱落时间多集中在6～7天,而脐带包扎法组多在7天以上,两组脱落率分别有显著差异（P＜0.01）;脐带暴露法组脐部分泌物和轻度脐炎发生率明显低于脐带包扎法组（P＜0.01和P＜0.05）.结论 采用脐带暴露法可明显缩短脐带残端脱落时间,并能降低脐部感染率,是一种安全有效的新生儿脐部护理方法.     

脐血铅与初乳铅含量与新生儿神经行为发育关系

目的探讨在宫内低水平铅暴露状态下,新生儿脐血铅含量及初乳铅铅含量与神经行为发育的关系。方法随机选取南京市妇幼保健院医院产科2010-01/04出生的足月新生儿170例。以脐血铅和初乳铅铅含量作为新生儿铅暴露的指标,新生儿神经行为（NBNA）发育评分作为效应指标。结果高暴露组在新生儿主动肌张力、原始反射和神经行为发育总评分上低于低暴露组,差异有统计学意义（t=4.625,P〈0.05）,在新生儿行为能力、被动肌张力、一般估价上差异无统计学意义。结论初乳铅脐血铅水平和与婴儿的早期发育有关,铅可通过乳汁和脐血造成新生儿的铅接触,对新生儿婴儿早期神经行为发育产生不良影响。