染锰鼠支持细胞波形蛋白表达与精子数量关系

目的探讨染锰鼠支持细胞波形蛋白(vimentin,VM)表达与精子数量关系。方法雄性SD大鼠48只随机分为6组,15,30 mg/kg MnCl2组分别染锰4周和6周,空白对照组给予等溶生理盐水(4,6),腹腔注射;取睾丸和附睾分别检测支持细胞VM表达(免疫组织化学法)和精子数量。结果染锰15,30 mg/kg 4和6周组支持细胞波形蛋白阳性细胞率分别为(30.55±2.33)%,(9.01±2.27)%和(7.62±1.08)%,(2.33±0.63)%;精子数量分别为(0.53±0.11),(0.47±0.06)和(0.26±0.07),(0.23±0.04)×107/mL;与空白对照组比较,各染锰组支持细胞VM阳性细胞率及精子数量均明显降低(P0.01),并呈一定时间-效应和剂量-效应关系;各组大鼠精子数量和支持细胞VM阳性细胞率呈正相关(r=0.895,P0.01)。结论过量锰可诱发支持细胞VM表达降低,导致大鼠精子数量减少,可能是大鼠生精障碍的主要分子机制之一。     

锰诱导的大鼠生精细胞凋亡通路的探索研究

[目的]研究锰对大鼠生精细胞caspase-3表达的影响,探讨锰对大鼠生精细胞caspase-3表达作用的机理.[方法]雄性SD大鼠(体重120±10 g)24只随机分为3组:空白对照组,15 mg/kg和30 mg/kgMnCl2组.8只/组.MnCl2组分别染锰(MnCl2·4H2O)4 w,空白对照组给予等容NS,给药途径均为腹腔注射,5 d/w,1次/d,于第4w末处死,免疫组化(SABC法)法检测睾丸caspase-3和cyto--c表达. [结果]与空白对照组比较,各染锰组cas-pase-3阳性细胞率均显著升高,cyto-c阳性细胞率均显著降低(P＜0.01).染锰时间相同,30 mg/kg MnCl2组与15 mg/kg MnCl2组比较,caspase-3阳性细胞率显著升高,cyto-c阳性细胞率显著降低(P＜0.01).各组caspase-3和cyto-c阳性细胞率呈显著负相关(r=-0.876,P＜0.01). [结论]锰可通过线粒体途径诱发大鼠生精细胞凋亡,且caspase-3的表达随染锰剂量的增加而增加,二者存在一定的剂量-效应关系.     

锰对大鼠生精细胞凋亡及caspase-3表达的影响

[目的]研究染锰大鼠睾丸生精细胞凋亡和caspase-3表达的变化。[方法]雄性SD大鼠48只随机分为6组:空白对照组,15mg/kg、30mg/kgMnCl2组。8只/组。15mg/kg、30mg/kgMnCl2组分别染锰(MnCl2·4H2O)4周和6周,空白对照组给予等容生理盐水(NS),给锰及生理盐水途径均为腹腔注射,5d/周,1次/d,大鼠分别于第4周末和第6周末处死,取睾丸和附睾作以下检测:①检测精子数量;②应用末端脱氧核糖核酸转移酶介导的dUTP切口末端标记技术(terminal deoxynucleotidy transferase mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)检测睾丸生精细胞凋亡指数(apoptosis index,AI);③免疫组组织化学链酶亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(streptavidin-biotin-peroxidase complex,SABC)法检测生精细胞caspase-3表达。[结果]①与空白对照组比较,各染锰组精子数量均显著降低(P﹤0.05),生精细胞AI均升高(P﹤0.05),caspase-3阳性细胞率均显著升高(P﹤0.05)。②染锰剂量相同,染锰6周组与染锰4周组比较,精子数量均显著降低,生精细胞AI与caspase-3阳性细胞率均显著升高(P﹤0.05)。③染锰时间相同,30mg/kgMnCl2组与15mg/kgMnCl2组比较,精子数量均显著降低(P﹤0.05),生精细胞AI和caspase-3阳性细胞率均显著升高(P﹤0.05)。④各组大鼠精子数量和生精细胞AI呈负相关(r=-0.700,P﹤0.05),和生精细胞caspase-3阳性细胞率呈负相关(r=-0.870,P﹤0.05),生精细胞AI和caspase-3阳性细胞率呈正相关(r=0.855,P﹤0.05)。[结论]过量锰诱发大鼠生精细胞caspase-3高表达,从而导致凋亡增加,精子数量减少,这可能是大鼠生精障碍的主要机制。     

锰染毒大鼠睾丸生精细胞乳酸脱氢酶活力的变化

为研究染锰大鼠睾丸生精细胞乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活力的变化,将48只健康清洁级雄性SD大鼠按体重随机分为3组,分别为对照(生理盐水)组和15、30mg/kg锰染毒组,每组16只。采用腹腔注射方式进行染毒,MnCl2溶液染毒容量为5ml/kg,每天1次,每周5d。分别于染毒第4、6周,称重后处死,迅速分离睾丸和附睾,称量睾丸重量,并计算脏器系数;测定精子数量和睾丸组织中LDH活力。结果显示,随着锰染毒剂量的升高,大鼠睾丸系数均呈现上升后下降的趋势。随着锰染毒剂量的升高和染毒时间的延长,大鼠睾丸组织中LDH活力和精子数量均呈下降趋势。表明过量锰可抑制LDH的活力,导致精子数量减少。     

染锰大鼠生精细胞Caspaes-3和Ki-67表达

目的 研究氯化锰对大鼠生精细胞半胱天冬酶(Caspase-3)和抗霍奇金淋巴瘤细胞核抗体(Ki-67)表达的影响及意义.方法 48只雄性SD大鼠随机分为6组:空白对照组,15和30 mg/kg MnCl2组,锰与生理盐水均为腹腔注射,1次/d,5 d/周,分别染锰4和6周.用免疫组化法检测睾丸生精细胞Caspase-3与Ki-67表达.结果 与空白对照组比较,各染锰组Caspase-3阳性细胞率均显著升高(P<0.01);染锰剂量相同,染锰6周组与4周组比较,Caspase-3阳性细胞率均显著升高(P<0.01);染锰时间相同,30 mg/kg MnCl2与15 mg/kg MnCl2组比较,Caspase-3阳性细胞率均显著升高(P<0.01).与空白对照组比较,染锰15 mg/kg MnCl24周组Ki-67阳性细胞率降低(P<0.05);染锰30 mg/kg MnCl2 4周组,15 mh/kg MnCl2 6周组,30 mg/kg MnCl2 6周组Ki-67阳性细胞率均显著降低(P<0.01);染锰时间相同,30 mg/kg MnCl2组与15 mg/kg MnCl2组比较,Ki-67阳性细胞率显著降低(P<0.01).各组大鼠生精细胞Caspase-3阳性细胞率与Ki-67阳性细胞率呈明显负相关(r=-0.798,P<0.01),结论染锰15 mg/kg 4周即可促进大鼠生精细胞Caspase-3表达和抑制大鼠生精细胞Ki-67表达,且存在一定的剂量-效应和时间-效应关系,锰的这种双重作用可能是导致大鼠生精障碍的主要机制.     

氟对雄性大鼠生精细胞Fas蛋白表达影响的研究

目的探讨氟对大鼠生精细胞Fas蛋白表达影响。方法将30只4～5周龄雄性Wistar大鼠随机分为对照组、低剂量组、高剂量组。分别按0、10和20mg/kg染毒剂量隔日灌胃氟化钠(NaF)染毒39天,采用酸浸-氟离子选择电极法测定睾丸氟含量,用放射免疫法测定大鼠血清睾酮含量,用免疫组化(ICH)检测睾丸中Fas蛋白表达情况,同时镜检成熟精子质量。结果各染氟组大鼠睾丸氟含量均高于对照组(P0.05)且随染毒剂量的增加而逐渐升高;各染氟组大鼠血清睾酮含量低于对照组(P0.05),且随着染毒剂量的增加,睾酮含量逐渐降低;各染氟组大鼠生精细胞Fas蛋白阳性表达率高于对照组(P0.05),且随着染毒剂量的增加,Fas蛋白阳性表达率逐渐升高;各染毒组大鼠精子数量和精子活动率低于对照组(P0.05);精子畸形率高于对照组(P0.05)。结论染氟雄性大鼠血清睾酮水平降低,激活了生精细胞Fas/FasL系统,从而导致生精细胞损伤。     

锰对大鼠睾丸抗氧化能力及生精细胞凋亡的影响研究

目的:研究氯化锰对SD大鼠睾丸抗氧化能力和生精细胞凋亡的影响。方法:24只健康雄性SD大鼠随机分为3组。染锰组给予MnCl2.4H2O(15mg/kg、30mg/kg)4周,对照组给予生理盐水,各组给药途径均为腹腔注射,每天1次,每周5天。应用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记技术检测睾丸生精细胞凋亡;化学比色法检测睾丸组织超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性。结果:生精细胞凋亡指数染锰组明显高于对照组,且随染锰剂量的增加而升高(P<0.01);睾丸组织超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性均染锰组明显低于对照组(P<0.01)。结论:锰诱导的抗氧化能力下降可能是大鼠生精细胞凋亡增加的重要原因之一。     

染锰大鼠生殖激素水平与生精细胞凋亡基因表达

目的 探讨染锰大鼠血清生殖激素水平与生精细胞凋亡基因Caspase-3表达关系.方法 雄性SD大鼠48只,随机分为对照组和15,30 mg/kg氯化锰组,分别染锰4,6周,乙醚麻醉,眼眶取血,分离双侧睾丸,称重,采用免疫组织化学方法检测生精细胞caspase-3表达,放射免疫法检测血清睾酮(testosterone,T)、卵泡刺激素(follicle stimulating,FSH)、黄体生成素(luteinizine hormone,LH)水平.结果 30 mg/kg氯化锰组染锰4,6周,血清中T、FSH、LH含量分别为(2.78±0.74)和(2.76±0.81)nmoL/L,(0.44±0.03)和(0.57±0.03),(0.19±0.02)和(0.19±0.03)U/L;Caspase-3表达水平分别为(65.49±11.34)和(82.65±5.26);染锰组大鼠生精细胞Caspase-3表达与血清T含量呈负相关(r=-0.799,P<0.01),与血清中FSH、LH水平呈正相关(r=0.735,r=0.737,P<0.01).结论 染锰大鼠血清T水平降低,FSH和LH水平上升是生精细胞caspase-3表达上调的主要原因.     

锰对大鼠生精细胞半胱氨酰天冬氨酸酶-3和细胞色素C表达的影响

目的研究锰对大鼠生精细胞中半胱氨酰天冬氨酸酶-3(caspase-3)和细胞色素C(cytochrome-c)表达的影响。方法将健康雄性清洁级SD大鼠48只随机分为高(30mg/kg)、低剂量(15mg/kg)MnCl2染毒组和空白对照组(生理盐水),每组16只。采用腹腔注射方式染毒,每天1次,每周5天,连续染毒6周。分别于染毒第4、6周末称重,处死大鼠,分离睾丸,采用免疫组化法检测睾丸生精细胞中caspase-3与cytochrome-c的阳性细胞率。并进行病理学观察。结果与空白对照组比较,高、低剂量MnCl2染毒组大鼠生精细胞中caspase-3阳性细胞率均升高,cytochrome-c阳性细胞率均降低,差异有统计学意义(P<0.01);且随着锰染毒剂量的升高,大鼠生精细胞中caspase-3阳性细胞率呈上升趋势,cytochrome-c阳性细胞率呈下降趋势。与染锰第4周比较,高、低剂量MnCl2染毒组第6周大鼠生精细胞中caspase-3阳性细胞率均升高,cytochrome-c阳性细胞率均降低,差异有统计学意义(P<0.01)。直线相关分析发现,各组大鼠生精细胞caspase-3阳性细胞率与cytoc...     

砷染毒大鼠生精细胞凋亡及端粒酶活力的变化

目的观察不同剂量的染砷(As2O3)大鼠生精细胞凋亡及端粒酶活力表达的变化。方法将40只健康雄性清洁级SD大鼠随机分成4组,分别为低、中、高剂量(0.375、0.75、1.5 mg/kg)砷染毒组和对照组,以灌胃法连续染毒16周后计算各组大鼠精子头计数,并计算睾丸脏器系数、每日精子生成量(DSP)。采用TUNEL原位细胞杂交方法检测大鼠生精细胞凋亡,免疫组化法检测大鼠生精细胞端粒酶活力的表达。结果与对照组比较,中剂量组(0.75 mg/kg)和高剂量组(1.5 mg/kg)睾丸精子头计数和DSP均显著降低(P<0.01),生精细胞凋亡指数(AI)显著升高(P<0.01),生精细胞端粒酶活力表达明显降低(P<0.01);每日精子生成量与生精细胞凋亡呈负相关(r=-0.563,P<0.01);生精细胞凋亡与端粒酶活力呈负相关(r=-0.896,P<0.01)。结论一定剂量的As2O3可通过抑制生精细胞端粒酶活力,促进生精细胞凋亡而导致精子生成量减少,产生雄性生殖毒性。     

过量酒精对大鼠生精细胞凋亡的影响

目的　研究酒精致生精细胞凋亡发生的机制及酒精凋亡相关基因Bcl- 2、Bax在睾丸及生精细胞表达的影响。方法　利用人类饮用白酒制备大鼠的酒精毒性模型 ,采用组织学技术和免疫组织化学技术检测酒精对生精细胞凋亡及其相关基因Bcl- 2、Bax表达的影响。用 2种剂量的酒精作用于大鼠的 2个生精周期 ,检测睾丸生精小管中Bcl- 2、Bax蛋白表达的阳性细胞数和表达强度。结果　每个生精小管中Bcl- 2蛋白表达的阳性细胞数在高剂量组为 96± 3 3 74,低剂量组为 15 6 6± 2 8 5 2 ,均显著低于正常对照组 (2 2 2 6± 5 6 86) (P <0 0 1) ;每个细胞中Bcl- 2蛋白表达强度 (OD值 )在高剂量组 (0 142± 0 0 3 5 )、低剂量组 (0 15 1± 0 0 2 6) ,都明显低于对照组 (0 196± 0 0 3 2 ) (P <0 0 1) ;Bax蛋白表达的阳性细胞数在高剂量组为 (412 4± 96 75 ) ,低剂量组为 (3 3 7 5± 94 3 9) ,均明显高于对照组(2 14± 82 5 7) (P <0 0 1) ,Bax蛋白的表达强度 (OD值 )也有同样的变化 ,高剂量组 (0 113± 0 0 3 6)和低剂量组 (0 0 82± 0 0 17) ,均明显高于对照组 (0 0 5± 0 0 2 4) (P <0 0 1)。凋亡细胞增多 ,平均每个生精小管中的凋亡细胞数目在高剂量组为 15 5 3± 3 75 ,显著高于正常对照组 (2 2     

芹菜对小鼠生精细胞中Bcl-2、Bax蛋白表达影响

目的 探讨芹菜对小鼠生精细胞中Bcl-2、Bax蛋白表达的影响.方法 成年健康SPF级昆明种雄性小鼠72只,按体重随机分为4组:对照组、低、中、高剂量芹菜汁组,各组又随机分成3个时间组即:7、14、28d组,每组6只;以0.3mL不同浓度芹菜汁灌胃,对照组以0.3mL生理盐水灌胃.实验结束处死小鼠,取一侧睾丸,免疫组织化学法( SABC)检测小鼠睾丸生精细胞Bcl-2和Bax蛋白表达.结果 灌胃7d时,对照、低、中、高剂量芹菜汁组Bax蛋白表达平均光密度值分别为0.38、0.35、0.35和0.34,与对照组比较,各剂量芹菜汁组明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05);灌胃28 d时,对照组Bcl-2蛋白表达平均光密度值为0.34,中、高剂量芹菜汁组分别为0.37和0.38,明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 本实验条件下未观察到芹菜对生精细胞的促凋亡作用,而Bcl-2抑制生精细胞凋亡的作用增强.     

丙烯腈对小鼠生精细胞Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的探讨丙烯腈(AN)暴露对小鼠睾丸生精细胞Bcl-2、Bax蛋白表达水平的影响。方法将250只成年健康SPF级昆明种雄性小鼠,按体重随机分为阴性对照组、3个AN染毒组和阳性对照组,阴性对照组用生理盐水,各染毒组分别以1.25、2.50、5.00mg/kg AN腹腔注射(注射剂量为0.01ml/g BW),每天1次,连续5天,阳性对照组注射环磷酰胺40mg/kg一次。分别于首日染毒后的第7、14、21、28和35天采用颈椎脱臼法处死小鼠,采用免疫组织化学法(SABC)检测生精细胞Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果 5个观察时间点AN 2.50mg/kg组和21天AN 1.25mg/kg组Bcl-2平均光密度值均显著低于阴性对照组(P<0.05);除21天AN 1.25mg/kg组外,所有观察时间点AN各染毒组Bax平均光密度值均显著高于阴性对照组(P<0.05)。Bcl-2在中剂量组和阳性对照组各观察时间点降低幅度均较大;Bax在各剂量组的不同时间点均以14天时升高幅度最大。结论 AN可诱导生精细胞Bcl-2蛋白表达减弱,以AN 2.50mg/kg组最为显著;同时可诱导生精细胞Bax蛋白表达增强,以14天时变化幅度较明显。     

应用流式细胞术研究甲基对硫磷对大鼠睾丸生精细胞的毒性作用

目的探讨有机磷农药甲基对硫磷对雄性大鼠的睾丸毒性作用。方法20只SD雄性大鼠（220～240g）随机分为对照组和低（1．2mg／kg）、中（6mg／kg）、高（30mg／kg）剂量甲基对硫磷组，灌胃染毒，容量为5ml／kg，每日1次，连续6周。染毒结束次日处死小鼠，用流式细胞仪对大鼠睾丸生精细胞进行分析。结果①高、中剂量甲基对硫磷组细胞凋亡率均显著高于对照组（P〈0．05或P〈0．01）；②与对照组相比，各剂量甲基对硫磷组1C细胞显著减少，2C细胞显著增加（P〈0．05或P〈0．01）；③与对照组相比，高剂量染毒组G0／G1期细胞比例显著降低，G2／M期细胞比例显著增加（P〈0．05或P〈0．01）。结论甲基对硫磷能够阻滞大鼠生精细胞的细胞周期进程，诱导生精细胞凋亡。     

染氟大鼠生精细胞凋亡和血清雌二醇水平的关系

目的探讨染氟大鼠生精细胞凋亡和血清雌二醇水平的关系。方法雄性Wistar大鼠30只,随机分为6组,即对照28d组、低剂量染毒28d组、高剂量染毒28d组、对照38d组、低剂量染毒38d组和高剂量染毒38d组。通过腹腔注射NaF溶液的方法建立氟中毒模型,采用酸浸-氟离子选择电极法测定睾丸氟含量,放射免疫的方法检测血清雌二醇水平,采用TUNEL方法检测凋亡的生精细胞。结果随着染毒剂量加大和时间延长,染氟大鼠血清雌二醇水平显著下降(P<005),睾丸氟含量显著升高(P<005),生精细胞凋亡率显著升高(P<005),且血清雌二醇水平与睾丸氟含量和生精细胞凋亡率均呈负相关(P<005)。结论氟在一定剂量和作用时间内可致血清雌二醇水平紊乱,是导致生精细胞凋亡的重要原因之一。     

镉对大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响及锌的保护作用

为探讨对镉对睾丸结构和功能损害及锌对其保护作用的分子机制,研究镉对生精细胞凋亡的影响和锌的保护作用,选用２月龄Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠２４只,均分为染镉组、镉加锌组和对照组,分别自腹腔注射氯化镉（２ｍｇ／ｋｇＢＷ）,注射氯化镉同时及其前后２ｈ各注射醋酸锌一次和等量生理盐水,７ｄ后采用原位缺口平移技术（ＩＮＳＴ）检测各组睾丸生精细胞凋亡数目的变化。结果显示与对照组相比,染镉组大鼠睾丸生精细胞凋亡数目明显     

烟草烟雾对大鼠生精细胞凋亡及血清睾酮和抑制素B水平的影响

目的探讨烟草烟雾对大鼠生精细胞凋亡及血清睾酮、抑制素B表达的影响。方法将40只8周龄雄性SD大鼠随机分成4组,分别为对照组及轻、中、重度吸烟组(每天分别暴露于4、8、12支香烟烟雾,早晚各1次),连续染毒8周后成功建立大鼠被动吸烟毒性模型。采用TUNEL法检测睾丸生精细胞凋亡数,分别以直接化学发光和ELISA法检测大鼠血清中睾酮、抑制素B的表达水平。结果对照组及轻、中、重度吸烟组大鼠生精细胞凋亡指数分别为(6.62±0.58)%,(7.08±1.02)%,(8.71±0.76)%,(10.17±1.18)%,各染毒组生精细胞凋亡指数均高于对照组,差异有统计学意义(P0.01)。各染毒组大鼠血清睾酮、抑制素B水平均低于对照组,且均随染毒剂量的增加而降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论烟草烟雾可诱导大鼠睾丸生精细胞凋亡,并影响血清抑制素B及睾酮分泌。