药物抑制后成纤维细胞再增殖的实验研究

应用细胞培养的方法，采用体外培养的兔结膜成纤维细胞，观察氟尿嘧啶和地塞米松对成纤维细胞的抑制情况及抑制后细胞再增殖情况。结果：氟尿嘧啶能有效地抑制成纤维细胞增殖，药物抑制后细胞增殖速度明显减慢，当浓度达到１００ｍｇ／Ｌ时，抑制后细胞再增殖达到融合时间平均３３ｄ，地塞米松对成纤维细胞的抑制作用较弱，且具有双重性，药物抑制后细胞仍能迅速增生。提示：氟尿嘧啶能有效地应用于防治眼内增殖性病变，地塞米松抑制     

增殖性玻璃体视网膜病变的药物体外筛选试验

目的：研究４种药物对体外成纤维细胞培养的增殖抑制作用及有效浓度。方法：对传代培养的成纤维细胞经一定浓度的柔红霉素、阿霉素、地塞米松、５－ＦＵ培养４８ｈ后，观察细胞生长情况，并分别求得对兔皮肤成纤维细胞的半数抑制浓度（ＩＤ５０）。结果：柔红霉素、阿霉素对体外成纤维细胞的增殖均有显著抑制作用，呈浓度依赖性改变；地塞米松和５－ＦＵ的抑制作用相对较弱，但地塞米松分别与其他３种药物的半数抑制浓度合用后的效果，比单用上述４种药物的抑制作用明显增强。结论：柔红霉素、阿霉素能有效抑制体外兔成纤维细胞，并提示与地塞米松合用可能成为有价值的防治增殖性玻璃体视网膜病变（ＰＶＲ）的用药方式     

增殖性玻璃体视网膜病变的药物体外筛选试验

目的：研究４种药物对体外成纤维细胞培养的增殖抑制作用及有效浓度。方法：对传统代增减的成纤维细胞经一定浓度的柔红霉素、阿霉素、地塞米松、５－ＦＵ培养４８ｈ后，观察细胞生长情况，并分别求得对兔皮肤成纤维细胞的半数抑制浓度（ＩＤ５０）。结果：柔红霉素、阿霉素对体外成纤维细胞的增殖均有显著抑制作用，呈浓度依赖性改变；地寒米松和５－ＦＵ的抑制相对较弱，但地寒米松分别与其他３种药物的半数抑制浓度合用后的效果，     

白藜芦醇合阿糖胞苷对HL-60细胞的增殖抑制作用

目的：观察白藜芦醇（resveratrol，Res）体外单独及联合阿糖胞苷（Ara-c）对白血病HL-60细胞的抑制作用。方法：在体外培养条件下观察不同浓度Res、Ara-c作用48小时后分别对HL-60细胞增殖的影响。然后根据以上抑制结果，选择对HL-60细胞抑制率15％～30％的Ara-c药物浓度，再与不同浓度的Res联合用药。在联合药物处理HL-60细胞48小时后，同样用MTT法检测联合用药对细胞增殖抑制作用。结果：Res、Ara-c体外单独用药均能显著抑制HL-60细胞的生长增殖，Res联合Ara-c（2．5μg／m1）后，对HL-60细胞的增殖抑制作用显著提高，与单独用药组比较，差异有显著性意义（P〈0．05）。结论：Res体外能显著抑制人HL-60细胞的增殖，Res联合Ara-c能显著提高对HL-60细胞的增殖抑制作用。     

中药丹参、川芎对硬皮病成纤维细胞增殖的影响

目的 观察中药丹参、川芎嗪对硬皮病患者体外培养的成纤维细胞增殖的抑制作用.方法 原代培养成纤维细胞,加入不同浓度的丹参、川芎嗪注射液24h后,用MTT法检测其增殖活性.结果 丹参在10mg/mL以上时对成纤维细胞增殖有抑制作用;川芎嗪在0.5mg/mL以上时对成纤维细胞增殖有抑制作用,达到5.0mg/mL则能完全抑制成纤维细胞的增殖.结论 丹参、川芎嗪对硬皮病患者成纤细胞增殖有抑制作用,这可能是中药治疗硬皮病的机制之一.     

无花果叶水提物对体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的抑制

目的探讨无花果叶水提物对人瘢痕疙瘩成纤维细胞的生长抑制作用。方法用无花果叶水提物处理体外培养的人成纤维细胞后,进行细胞形态学检测,细胞增殖试验（MTT法）、氯胺T法检测无花果叶提取物对成纤维细胞胶原蛋白合成的抑制。结果无花果叶提取物处理后,成纤维细胞增殖活性降低;同时,胶原蛋白的合成受到抑制。结论无花果叶提取物对瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖有显著地抑制作用,并抑制其合成胶原蛋白。     

地白忍煎剂对角朊细胞和成纤维细胞的细胞生物学效应

目的：观察地白忍煎剂（ Ｄ Ｂ Ｒ Ｄ）对角朊细胞和成纤维细胞增殖的影响以及对成纤维细胞收缩功能的潜在作用．方法：将人角朊细胞和真皮成纤维细胞分别培养于含不同稀释度 Ｄ Ｂ Ｒ Ｄ 的培养基中，以噻唑蓝染色法测定细胞增殖率．采用体外胶原立体培养模型观察 Ｄ Ｂ Ｒ Ｄ 作用后成纤维细胞收缩功能的变化． 结果：１∶１０７ 稀释的 Ｄ Ｂ Ｒ Ｄ对角朊细胞和成纤维细胞均具有促增殖作用，而１∶１０ 稀释的 Ｄ Ｂ Ｒ Ｄ 仅促进角朊细胞的增殖． Ｄ Ｂ Ｒ Ｄ 剂量依赖性地抑制含成纤维细胞的胶原凝胶块的收缩率，且该抑制作用可被仅含１００ ｍ Ｌ／ Ｌ胎牛血清的培养基逆转． 结论： Ｄ Ｂ Ｒ Ｄ可促进角朊细胞和成纤维细胞的增殖，并可逆性地抑制胶原立体培养的成纤维细胞的收缩功能     

Bcl-2 对病理性瘢痕成纤维细胞增殖活性及细胞凋亡的影响

目的：研究Bcl-2对病理性瘢痕成纤维细胞的生物学作用。方法：用MTT法检测成纤维细胞增殖活性，流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果：Bcl-2能抑制成纤维细胞的凋亡，促进其增殖。结论：Bcl-2在病理性瘢痕的形成中起一定的作用。     

姜黄素诱导增生性瘢痕成纤维细胞凋亡机制研究

目的:研究姜黄素对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的作用,以期为姜黄素用于增生性瘢痕的治疗提供实验依据。方法:以增生性瘢痕成纤维细胞(HSFBs)和正常皮肤成纤维细胞(NSFBs)作为工具细胞,分别通过MTT细胞毒性试验、细胞生长曲线和蛋白印记法分析姜黄素对细胞的增殖影响。结果:姜黄素能够抑制HSFBs细胞的增殖而姜黄素对NSFBs的抑制作用相对较小;在姜黄素处理后NSFBs细胞p-JNK蛋白表达上调,使用JNK抑制剂后,能阻断JNK蛋白的磷酸化,并且降低姜黄素诱导细胞凋亡的能力。结论:姜黄素能够选择性的抑制HSFBs细胞的增殖,或可成为治疗增生性瘢痕的药物。     

小鼠胚胎成纤维细胞的分离、扩增和抑制

目的 建立有效的胚胎成纤维细胞饲养层体系，用于分离和克隆胚胎干细胞研究。方法 取胎鼠组织制备小鼠原代成纤维细胞，观察不同分离和培养条件对细胞增殖的影响，以及丝裂霉素C对细胞增殖的抑制作用；细胞增殖的数量用MTT法测定。结果 分离小鼠胚胎原代成纤维细胞的最适胎龄是12．5—14．5d；20℃-25℃时，用0．25％胰蛋白酶消化组织的最佳时间为3min；可在培养3—6d后进行传代。细胞冻存于-80℃3-4个月，复苏后能正常传代。丝裂霉素C抑制胚胎成纤维细胞增殖的合适浓度为每毫升20μg/10^5细胞，作用2-4h，可维持小鼠原代胚胎成纤维细胞9d内不增殖也不死亡。结论 在合适条件下，小鼠原代胚胎成纤维细胞能顺利分离和培养，并能多次传代和冻存；经丝裂霉素C处理后增殖受抑制，可作为饲养层细胞用于胚胎干细胞的研究。     

兔成纤维细胞增殖抑制的药物体外筛选试验

成纤维细胞增生是增殖性玻璃体视网膜病变（ＰＶＲ）的主要原因。柔红霉素、阿霉素能有效抑制细胞增殖，而５氟脲嘧啶（５Ｆｕ）具有抗代谢活性，地塞米松对细胞也有抑制作用［１，２］。因此，我们观察它们对体外成纤维细胞的抑制，旨在筛选出抗ＰＶＲ药效强而毒性低...     

钙拮抗剂对兔结膜成纤维细胞的抑制增殖作用

目的：研究钙拮抗剂维拉帕米（verapamil,Ver)和硝苯地平（nifendipin,Nif)单独及与5-氟脲嘧啶（5-Fu)联合使用时对兔结膜成纤维细胞的抑制增殖作用。以探讨防治增殖性玻璃体视网膜病变发生的理想药物。方法：取培养第3-5代的成纤维细胞接种于24孔培养板中,加入含不同浓度Ver和Nif的培养液,培养48h后计算细胞抑制率,并逐日在倒置显微镜下观察细胞形态变化。同样将前两个药物与5-Fu合用,观察细胞抑制效果。结果：在5、10、20、40mg/L浓度时Ver和Nif对细胞增殖均表现出抑制作用,并呈浓度依赖性,与1mg/L和10mg/L5-Fu合用时,两者的抑制作用都得到加强,两种钙拮抗剂单独使用时对细胞形态无明显影响,与5-Fu合用时,随药物浓度的提高,出现细胞的皱缩和死亡。结论：钙拮抗剂Ver和Nif对兔结膜成纤维细胞的增殖具有抑制作用,两药与抗肿瘤药物5-Fu合用时,抑制作用得到加强。     

地塞米松抑制人肺成纤维细胞增殖和丝裂原活化蛋白激酶信号转导途径

目的探讨地塞米松对人肺成纤维细胞周期和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路的作用.方法不同浓度的地塞米松作用于培养的人肺成纤维细胞,采用直接计数法测定细胞的增殖,PI(propidium iodide)染色流式细胞仪分析细胞周期和细胞凋亡,用特异的抗磷酸化抗体、Western印迹法分别检测c-Jun N-末端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)和p38蛋白的磷酸化,用特异的MAPK抗体分别检测相应的JNK、ERK和p38蛋白.结果1×10-7mol/L和1×10-6mol/L地塞米松抑制肺成纤维细胞增殖,4 d时细胞增殖分别减少了34%和72%,呈剂量依赖关系;地塞米松阻断肺成纤维细胞的细胞周期,G0/G1期细胞比率从(81.9±3.0)%增加到(90.1±1.4)%(P＜0.05),但地塞米松不能诱导肺成纤维细胞的凋亡;地塞米松抑制ERK的磷酸化,但不影响肺成纤维细胞中JNK和p38的激活.结论地塞米松能够抑制肺成纤维细胞的增殖,这种作用部分是通过抑制MAPK信号转导通路的ERK途径实现的,对JNK和p38途径影响较少;地塞米松不能直接诱导肺成纤维细胞的凋亡.     

雷帕霉素对培养的人Tenon′s囊成纤维细胞的作用

目的：观察雷帕霉素(rapamycin)对培养的人Tenon′s囊成纤维细胞的增殖及细胞周期的作用。方法：将培养的人Tenon′s囊成纤维细胞用含不同雷帕霉素浓度的培养液培养24h后, 用MTT法测定细胞的增殖情况，用流式细胞仪测定细胞周期的变化情况。结果：用含10、20、40、80和160ng/ml雷帕霉素的培养液培养细胞时，细胞增殖抑制率分别为9.32%，22.55%，41.42%，42.25%，43.57%。细胞周期分析显示，雷帕霉素(40ng/ml)作用后，G0/G1期细胞较对照组增多(41.76% vs 44.19%，P＜0.05)，S期细胞较对照组减少(45.42%　vs　40.18%，P＜0.05)。结论：雷帕霉素具有抑制人Tenon′s囊成纤维细胞增殖的效果，且随浓度增加抑制作用增强，并将细胞抑制在G1期的限制点内。     

脂溶性HHRT与水溶性MMC、5-Fu对人Tenon's囊成纤维细胞抑制作用的研究

目的比较脂溶性高杉尖三酯碱(HHRT)与水溶新丝裂霉素C(MMC)和5-氟尿嘧啶(5-Fu)三种药物对人Tenon's囊成纤维细胞(HTFs)增殖率的抑制情况。方法采用冻存的人眼Tenon's囊成纤维细胞,常规复苏体外培养稳定后,接种于96孔板,分别加入不同浓度HHRT、MMC及5-Fu,继续培养;采用MTT法于加药后24h、48 h、72 h检测不同浓度HHRT、MMC及5-Fu对体外培养的人眼Tenon囊成纤维细胞增值率的抑制情况。结果一定浓度的HHRT、MMC及5-Fu,对HTFs的抑制作用呈现不同的剂量和时间依赖性,在药物浓度达到相应程度作用72 h后三者对HTFs的最大抑制率均可达70%以上,且组间对比差异有统计学意义。结论三种药物均对人眼Tenon's囊成纤维细胞增殖具有明显抑制作用,其最大抑制率均可达70%以上,三种药物对成纤维细胞抗增殖效应的时间浓度依赖性有所差别。     

五倍子瘢痕膏水溶液对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响

目的探讨五倍子瘢痕膏治疗瘢痕疙瘩的作用机制。方法采取瘢痕疙瘩成纤维细胞原代培养,用四甲基偶氮唑盐比色法测定不同浓度药物对原代培养的第4~8代瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响。结果各不同浓度的药物组对瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖都有一定的抑制作用(P<0.01),并且有时间和剂量依赖。对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞周期研究表明,各药物组S期的细胞百分比显著高于对照组,其间有显著性差异(P<0.01);而各药物组G2 M期细胞百分比却明显低于对照组,其间有显著性差异(P<0.01),并且这种对S期的阻滞作用和对G2 M期细胞的抑制作用随药物浓度的增加而增强(P<0.05)。结论不同浓度的五倍子瘢痕膏水溶液对瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖都有一定的抑制作用,其重要的作用途径是使瘢痕疙瘩成纤维细胞S期的细胞数上升,出现S期阻滞,分裂期的细胞数下降,从而抑制了瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖,并且这种抑制作用有一定的时间和剂量依赖。     

阿托伐他汀对转化生长因子β1诱导的大鼠肺肌成纤维细胞分化的影响

目的以转化生长因子β(1TGF-β1)诱导肌成纤维细胞的分化作为切入点,观察经阿托伐他汀干预后肌成纤维细胞的标志性产物α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及细胞增殖情况的改变,探讨他汀类药物抑制肺纤维化的机制。方法气管内注入博莱霉素复制大鼠肺纤维化模型,分离培养博莱霉素实验组和生理盐水对照组大鼠的肺成纤维细胞,分别分为空白对照亚组、TGF-β1诱导亚组和不同剂量阿托伐他汀阻断亚组。用倒置纤维镜观察细胞的形态结构,MTT计数法观察细胞的增殖情况,免疫组化染色法半定量观察α-SMA的表达情况。结果阿托伐他汀对TGF-β1诱导α-SMA具有明显的抑制作用。阿托伐他汀能够抑制TGF-β1诱导的大鼠肺肌成纤维细胞的增殖。结论阿托伐他汀能够抑制TGF-β1诱导的肌成纤维细胞的分化,主要表现在细胞形态、细胞增殖情况及α-SMA等指标的改变上。     

地塞米松、氨甲喋呤对人眼球后成纤维细胞增殖的影响

目的：探讨地塞米松、氨甲喋呤对人眼球后成纤维细胞增殖的影响。方法：采用体外培养人眼球后成纤维细胞（ＨＲＯＦｂ）,用ＭＴＴ比色法测定ＨＲＯＦｂ增殖程度,并观察了不同浓度地塞米松、氨甲喋呤单独及联合使用对ＨＲＯＦｂ生长、增殖的影响。结果和结论：ＭＴＴ比色法能精确反映ＨＲＯＦｂ的增殖程度,所测定吸收值与细胞数目成正相关（ｒ＝０．９９６,Ｐ＜０．００１）,地塞米松、氨甲喋呤均可抑制ＨＲＯＦｂ的增殖,且随剂     

茶多酚对成纤维细胞L929中鸟氨酸脱羧酶的抑制作用

目的:探讨茶多酚对成纤维细胞L929的增殖抑制作用及其作用机制。方法:体外培养小鼠成纤维细胞L929,加入茶多酚、二氟甲基鸟氨酸(DFMO)作用于细胞。用MTT法观察茶多酚对细胞增殖抑制作用,利用琼脂糖凝胶电泳和流式细胞技术检测细胞的调亡,RT鄄PCR技术检测鸟氨酸脱羧酶(ODC)基因的表达。结果:20μmol/L的茶多酚即能明显抑制L929细胞的增殖,促进细胞的调亡,其半数有效浓度为200μmol/L。RT鄄PCR显示细胞中ODCmRNA表达明显下降(P<0.05)。200μmol/L的茶多酚的抑制效果与5mmol/L的DFMO的作用效果相似。二者共同作用于细胞时,对ODC的活性抑制作用更强,抑制效果更佳。结论:茶多酚能通过抑制细胞中ODC的表达来抑制细胞的增殖。     

槲皮素对TNF-α诱导的乳鼠心肌成纤维细胞增殖及P38MAPK、HMGB1蛋白表达的影响

目的 研究槲皮素对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的心肌成纤维细胞增殖及P38MAPK、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达的影响.方法 通过胰酶消化法和差速贴壁法获得纯化的心肌成纤维细胞,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测心肌成纤维细胞的增殖,采用Western blot法测定P38MAPK、HMGB1蛋白的表达.结果 槲皮素对基础状态下的心肌成纤维细胞的增殖无影响,但对TNF-α诱导的心肌成纤维细胞的增殖有抑制作用,且各组细胞的吸光度(A)值随槲皮素浓度的增加而减小(P＜0.05),各组细胞P38MAPK、HMGB1蛋白表达随槲皮素浓度的增加而减弱(P＜0.05).结论 槲皮素对TNF-α诱导的心肌成纤维细胞增殖有一定地抑制作用,其机制可能是通过P38 MAPK信号通路抑制HMGB1的表达,参与抑制心肌成纤维细胞的增殖.