Hedgehog信号通路与LKB1基因在乳腺癌中的达及其相关性研究

Hedgehog信号通路在乳腺癌中过度激活,LKB1是抑癌基因,有抑制乳腺癌增殖的功能.LKB1过表达可调控Hedgehog信号通路的靶基因CyclinD1系列基因的表达,同时研究发现Hedgehog信号通路中PKA基因起重要作用,其激活与cAMP状态有关,而LKB1基因能影响cAMP的状态.因此,LKB1基因与Hed...     

Sonic Hedgehog信号通路与乳腺癌抑癌基因LKB1的相互影响

目的：研究环靶明（cyclopamine）抑制Sonic Hedgehog（SHH）信号通路后,转染LKB1基因的乳癌细胞的凋亡、周期及信号通路相关基因表达的改变。方法：抑癌基因LKB1转染人乳腺癌细胞MDA-MB-231,分MDA-MB-231组（231组）和转染LKB1基因的MDA-MB-231（LKB1组）两组,每组分别采用0,5×10-6mol/L,10×10-6mol/L,20×10-6mol/L 4种浓度的环靶明处理细胞,各小组细胞分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡和周期,用RT-PCR法和Western blot法检测Sonic Hedgehog信号通路相关基因Shh、Smo、Ptch、Sufu、Hip及LKB1的mRNA和蛋白表达水平。结果 ：在LKB1组和231组中,各小组细胞的凋亡率变化与Sonic Hedgehog相关基因Shh、Smo表达变化一致,随环靶明浓度增大凋亡率增加、基因表达受抑制,在环靶明浓度达10×10-6mol/L时变化最明显,且LKB1组较231组的变化更为明显。在231组中,各小组细胞周期变化与Sonic Hedgehog相关抑制基因Sufu、Hip表达变化一致。而在LKB1组中,各小组细胞周期与抑制基因Sufu、Hip表达变化均无明显差异。在231组中,各小组抑癌基因LKB1的表达随药物浓度增加渐增强。Ptch表达在两组均无明显变化。结论 ：抑癌基因LKB1可协同Sonic Hedgehog信号通路抑制剂环靶明促进乳腺癌细胞凋亡,调控细胞周期,推测其机制可能是通过如上信号通路相关基因表达变化而实现。信号通路抑制剂环靶明可提高乳腺癌细胞抑癌基因LKB1的表达,推测此也是信号通路抑制剂降低癌细胞活性机制之一。     

siRNA沉默LKB1基因激活Hedgehog信号通路及对人乳腺癌裸鼠移植瘤模型生长的实验研究

目的探讨应用小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默抑癌基因LKB1对人乳腺癌细胞MDA-MB-231中Hedgehog信号通路相关因子的表达及人乳腺癌裸鼠移植瘤模型的肿瘤生长的影响。方法构建LKB1基因siRNA质粒LKB1-siRNA;建立LKB1表达抑制的MDA-MB-435细胞模型;裸鼠乳晕皮下接种,建立人乳腺癌裸鼠移植瘤动物模型;成瘤后,观察肿瘤体积变化、裸鼠生存时间;并用Western印迹法检测瘤组织中LKB1和Hedgehog信号通路中信号肽Shh、Sufu、膜受体Ptch、Smo、转录因子Gli1、Hip蛋白表达的变化。结果 LKB1-siRNA质粒组裸鼠的肿瘤体积明显增长(P<0.05);肿瘤内LKB1基因表达水平明显下降,而Hedgehog信号通路相关因子Shh、Gli1、Ptch、Smo的表达升高,Hedgehog信号通路抑制因子Sufu、Hip表达下降。结论 LKB1基因siRNA能够明显抑制人乳腺癌裸鼠移植模型的LKB1基因的表达,上调Hedgehog信号通路相关因子的表达,促进肿瘤生长。LKB1基因和Hedgehog信号通路在乳腺癌细胞中呈现负相关表达。     

Hedgehog信号通路相关蛋白Gli1在乳腺癌中的表达及其意义

目的 探讨Hedgehog信号通路转录因子Gli1在乳腺癌组织中的表达及其临床意义。方法 应用免疫组织化学染色检测Hedgehog信号通路相关蛋白Gli1在102例乳腺浸润性导管癌及30例癌旁正常组织中的表达,并分析其表达与临床病理特征的关系。结果 Gli1蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率为75.5％（77／102）,高于癌旁正常组织的26.7％（8／30）,两者差异有统计学意义（P＜0.05）。Gli1蛋白的表达与腋窝淋巴结转移、雌激素受体（ER）表达有关（P＜0.05）,而与患者的年龄、绝经状况、肿瘤直径、病理分期、组织学分级、孕激素受体（PR）及人表皮生长因子受体-2（HER-2）表达状况均无关（P＞0.05）。结论 Hedgehog信号通路相关蛋白Gli1在乳腺癌组织中存在高表达,其一定程度上对ER表达起到负向调节作用。     

LKB1基因与Hedgehog信号通路对乳腺癌MDA-MB-231细胞抑制机制的探讨

目的:探讨乳腺癌细胞中LKB1基因与Hedgehog信号转导途径的关系.方法:以乳腺癌MDA-MB-231细胞为研究对象,LKB1基因转染或干扰处理后,反转录-聚合酶链反应和蛋白质印迹法分别检测Hedgehog信号通路中Shh、Sufu、Ptch、Smo、Gli 1、Hip mRNA和蛋白表达的变化.建立LKBI 基因表达抑制的细胞移植瘤模型,验证体外实验结果并进行对比分析.结果:Hedgehog 信号通路激动因子Ptch的mRNA和蛋白的表达在各组细胞中差异无统计学意义.而激动因子Shh、Gli1和Smo的mRNA和蛋白的表达在MDA-MB-231正常细胞及其空质粒细胞、siRNA无关序列细胞中差异无统计学意义;在LKB1转染细胞中降低(F=29.56,P＜0.05),在LKBI转染siRNA细胞中升高(F=32.15,P＜0.05).而抑制因子Sufu、Hip的mRNA和蛋白的表达正好相反,在LKB1转染细胞中升高,在LKB1转染siRNA细胞中降低,F=30.25,P＜0.05.移植瘤检测Shh、Sufu、Smo、Gli 1、Hip蛋白表达与体外实验相似,F=8.40,P＜0.01.而且发现LKB1转染siRNA细胞组裸鼠肿瘤平均体积显著大于对照组(F=4.68,P＜0.05),生存时间显著短于对照组,F=3.50,P＜0.01.LKB1基因与Hedgehog信号通路相关因子表达呈负相关,r=0.232,P＜0.05.结论:LKB1基因与Hedgehog信号通路相关因子表达在乳腺癌细胞中呈负相关,LKB1基因可能通过Hedgehog信号通路抑制乳腺癌细胞的发生,两者之间的相互作用对乳腺癌的诊治可能有重要影响.     

乳腺癌组织ER与Hedgehog信号通路分子相关性

目的 探讨乳腺浸润性导管癌中雌激素受体(estrogen receptor,ER)的表达与Hedgehog信号通路关键分子Gli1和Ptch之间的关系及临床意义.方法 收集2012-01-01-2013-01-30滨州医学院附属医院甲乳外科手术切除60例ER阳性和60例ER阴性乳腺浸润性导管癌标本,采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测Hedgehog信号通路关键分子Gli1和Ptch mRNA和蛋白的表达情况,分析其相关性及临床意义.结果 RT-PCR检测结果显示,ER阳性组Gli1 mRNA表达量为1.05±0.27,ER阴性组中为2.70±0.26,差异有统计学意义,t=20.751,P＜0.01;ER阳性组Ptch mRNA表达量为1.04±0.29,ER阴性组中为2.34±0.35,差异有统计学意义,t=18.413,P＜0.01;蛋白质印迹法检测结果显示,ER阳性组中Gli1蛋白表达量为0.43±0.007,ER阴性组中为0.71±0.011,差异有统计学意义,t＝11.086,P＜0.01;ER阳性组Ptch蛋白表达量为0.36±0.008,在ER阴性组中为0.58±0.012,差异有统计学意义,t=16.437,P＜0.01.Gli1和Ptch与ER阴性患者的年龄和肿瘤大小无关,P值均＞0.05;Gli1(x2＝16.33,P＜0.001)和Ptch(x2＝24.33,P＜0.001)与TNM分期存在相关性;Gli1(x2=6.50,P＜0.05)和Ptch(x2 =5.09,P＜0.05)与腋窝淋巴结转移存在相关性.结论 在ER阴性乳腺浸润性导管癌中,Hedgehog信号通路呈明显活化状态,可能与TNM分期与腋窝淋巴结的转移有关,阻断Hedgehog信号通路可能成为治疗ER阴性乳腺癌的新靶点.     

Hedgehog信号通路与肿瘤

Hedgehog（Hh）信号通路可以调控细胞的增殖、迁移和分化等许多过程,并且在胚胎发育时期起重要作用。根据Hh信号通路激活后是否依赖Gli蛋白发挥生物学效应,可分为经典的Hh/Gli信号通路和非经典的Hh信号通路。其中,非经典的Hh信号通路可通过小G蛋白Rho家族信号和钙离子依赖的信号通路调控细胞骨架形态、细胞增殖、凋亡及迁移;经典与非经典的Hh信号通路形成相互联系的信号通路网络介导Hh信号的功能。Hh信号通路的异常持续的激活是许多肿瘤发生、发展的原因之一,Hh信号通路还与肿瘤干细胞的调控、肿瘤血管形成和肿瘤的侵袭转移密切相关,对Hh信号通路的深入研究有利于以Hh信号通路蛋白为靶点的抗肿瘤药物的研发与应用。     

Hedgehog信号通路与肿瘤的研究新进展

Hedgehog（Hh）信号通路在果蝇中被首次发现。该信号通路能有效调控哺乳动物的胚胎发育过程,此外,在调控细胞的分化、增殖、血管形成及肿瘤形成方面起重要作用。Hh信号通路是一个Hh-Ptch-Smo-Gli的级联反应过程。该通路的配体包括:Hedgehog配体［Sonic Hh（SHh）、Indian Hh（IHh）和Desert Hh（DHh）］,Ptch受体（Ptch1、Ptch2）,Smoothened受体（Smo）,融合同源物（Sufu）的抑制因子,驱动蛋白Kif7,蛋白激酶A（PKA）和环腺苷一磷酸（cAMP）。该级联反应中的终末转录因子Gli调控的下游基因过度表达可能是导致肿瘤产生的关键因素。许多研究者已经发现,Hegehog信号通路与一系列人类实体瘤的形成关系密切。本文就近年来Hedgehog信号通路及其与肿瘤关系的研究进行综述。     

Hedgehog信号通路转录因子Gli1蛋白在结直肠癌组织中的表达

目的 探讨Hedgehog信号通路转录因子脑胶质瘤相关癌基因l(gli1)蛋白在结直肠癌组织中的表达及作用.方法 免疫组化法检测Gli1蛋白在147例手术切除结直肠癌组织中的表达;Western blotting法检测Glil蛋白在19例结直肠癌新鲜组织和2个结肠癌细胞系中的表达;同时用共聚焦激光显微镜观察Gli1转录水平的抑制剂GANT61对8例直肠癌组织中直接分离的肿瘤细胞的影响.结果 147例结直肠癌根治切除标本中,Gli1蛋白在78.2％(115/147)的结直肠癌组织中表达升高,阳性信号表达在肿瘤细胞的细胞核和细胞浆.Gli1蛋白在结直肠癌组织中的表达与结直肠癌浸润前缘肿瘤细胞团数目、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期有关(P＜0.05).在5例Glil蛋白阳性的结直肠癌组织中,间质细胞,包括肿瘤相关纤维母细胞和内皮细胞内高表达Gli1蛋白.Gli1蛋白在结直肠癌组织和2个结肠癌细胞系中的表达也升高.对结直肠癌组织中直接分离出的肿瘤细胞,培养以后加入GANT61,可以明显抑制肿瘤细胞内Gli1蛋白的表达,而对肿瘤相关纤维母细胞没有显著影响.结论 Gli1蛋白的活化可能增强肿瘤细胞的侵袭和转移能力,从而促进结直肠癌的进展;GANT61可能为进展期结直肠癌的治疗提供新的契机.     

Hedgehog信号通路与肿瘤的关系研究进展

Hedgehog(Hh)信号通路在胚胎时期的细胞分化、组织发育及器官形成中扮演重要角色。近年来,Hh信号通路与肿瘤的关系日益受到人们的重视。多项研究结果显示Hh信号通路在多种肿瘤组织与细胞系中异常激活,并与肿瘤的增殖分化、细胞凋亡、血管新生、侵袭转移等密切相关。阻断肿瘤细胞中Hh信号传导通路将为人类肿瘤的治疗提供一个新的有效手段。     

Hedgehog信号通路与乳腺癌干细胞

Hedgehog (HH) signaling pathway is a classic signaling pathway which controls embryonic development. Recent studies show that HH signaling pathway plays an important role in the tumorigenesis and development of cancer. Breast cancer stem cell (BCSC) is closely associated with malignant tumor metastasis, relapse and treatment resistance. HH pathway plays crucial roles in maintaining the characters of BCSC, and will probably become a novel therapeutic target of breast cancers.     

β-catenin和cyclin D1在乳腺癌中的表达及意义

目的探讨乳腺癌组织中β－连接素(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的表达与乳腺癌发生、浸润及转移的关系.方法应用SP免疫组化方法检测60例乳腺癌组织中β-catenin、cyclin D1的表达.结果乳腺癌组织中有42例(70％)β-catenin异常表达,28例(46.7％)cyclin D1过度表达.β-catenin异常表达率与乳腺癌大小、分化程度及淋巴结转移与否无显著相关性,P>0.05;β-catenin在Ⅲ～Ⅳ期乳腺癌、浸润性小叶癌中的异常表达率(90%、95%)明显高于Ⅰ～Ⅱ期乳腺癌、浸润性导管癌(60%、58.3%),P<0.05,P＜0.01.cyclin D1过度表达率与乳腺癌大小、组织学类型、分化程度无显著相关性,P>0.05;与TNM分期、淋巴结转移与否有显著相关性,P<0.05.β-catenin异常表达病例中,57.1％(24/42)的病例呈现cyclin D1的过度表达,但β-catenin正常膜表达病例中,22.2％(4/18)的病例呈现cyclin D1的过度表达.β-catenin异常表达与cyclin D1过度表达有显著的正相关性,rs=0.321,P<0.05.结论β-catenin的异常表达激活cyclin D1的过度表达,引起细胞增殖和分化失控,在乳腺癌的发生中可能起着重要作用.β-catenin的异常表达不是影响乳腺癌细胞转移的主要因素,但可能是一个协同因素.     

LKB1 regulates PRMT5 activity in breast cancer

Protein arginine methyltransferase 5 (PRMT5) is the main enzyme responsible for the symmetrical dimethylation of arginine residues on target proteins in both the cytoplasm and the nucleus. Though its activity has been associated with tumor progression in various cancers, the expression pattern of this oncoprotein has been scarcely studied in breast cancer. In the current work, we analyzed its expression in a large cohort of breast cancer patients, revealing higher nuclear PRMT5 levels in ERα-positive tumors and an association with prolonged disease free and overall survival. Interestingly, high PRMT5 nuclear expression was also associated with higher nuclear liver kinase B1 (LKB1), suggesting that a functional relationship may occur. Consistently, several approaches provided evidence that PRMT5 and LKB1 interact directly in the cytoplasm of mammary epithelial cells. Moreover, although PRMT5 is not able to methylate LKB1, we found that PRMT5 is a bona fade substrate for LKB1. We identified T132, 139 and 144 residues, located in the TIM-Barrel domain of PRMT5, as target sites for LKB1 phosphorylation. The point mutation of PRMT5 T139/144 to A139/144 drastically decreased its methyltransferase activity, due probably to the loss of its interaction with regulatory proteins such as MEP50, pICln and RiOK1. In addition, modulation of LKB1 expression modified PRMT5 activity, highlighting a new regulatory mechanism that could have clinical implications.     

肝激酶B1和p53在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨肝激酶B1（LKB1）和p53在胃癌中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组织化学SP法检测115例胃癌组织、20例胃正常组织中LKB1和p53的表达.结果 LKB1在胃癌组织中的阳性率为20.9％（24/115）,低于正常胃组织中的95.0％（19/20）（P＜ 0.01）;p53在胃癌组织中的阳性率为45.2 ％（52/115）,高于正常胃组织中的5.00％（1/20）（P＜0.05）.LKB1在胃癌组织中的表达程度与胃癌的TNM分期、淋巴结转移、Lauren分型及预后有关（均P＜0.05）;p53在胃癌中的表达与淋巴结转移、远处转移、TNM分期及预后相关（P＜0.05）.结论 LKB1的表达与胃癌的发生、发展有关,对胃癌恶性生物学行为的评估及预后判断具有重要的指导意义.     

乳腺癌中CXCR4的表达及其与Hedgehog信号通路的相关性

目的 检测乳腺癌组织中CXCR4及Smoothened (Smo)、Patched (Ptch)的表达,对CXCR4表达的临床意义进行分析,并评价CXCR4与Smo、Ptch之间的相关性.方法 以免疫组织化学染色法检测124例乳腺癌组织中CXCR4、Smo、Ptch的表达情况,并对其结果进行分析.结果 乳腺癌组织中CXCR4阳性表达率为66.9％,CXCR4与乳腺癌淋巴结转移呈正相关(r=0.181,P=0.044);Smo、Ptch阳性表达率分别为58.9％和64.5％,与CXCR4表达呈正相关(r=0.189,P=0.036;r=0.230,P=0.0l0).结论 CXCR4的表达与乳腺癌淋巴结转移有关,与Smo、Ptch表达呈正相关,当其与Hedgehog信号通路同时表达时或许与乳腺癌的复发风险增高相关.     

Expression of CXCR4 in breast cancer and the relationship between CXCR4 and Hedgehog signaling pathway

Objective To detect the expressions of CXCR4, Smoothened (Smo） and Patched (Ptch) in breast cancer, to analyze the clinical significance of the expression of CXCR4, and to evaluate the relationships among the CXCR4, Smo and Ptch. Methods The expressions of CXCR4, Smo and Ptch from 121 cases of breast cancer specimens were detected by immunohistochemistry, and the results were analyzed. Results The positive expression rate of CXCR4 in breast cancer was 66.9%, which was positively associated with the lymph node metastasis (r=0.181, P=0.044). The positive expression rates of Smo and Ptch in breast cancer were respectively 58.9% and 64.5%. The expressions of Smo and Ptch were positively associated with the expression of CXCR4 in breast cancer (r=0.189, P=0.036; r=0.230, P=0.010). Conclusion The expression of CXCR4 in breast cancer are associated with the lymph node metastasis. Patients with breast cancer who express both CXCR4 and Hedgehog signaling pathway may have a higher risk of recurrence.