槲皮素拮抗酒精性肝损伤中胆红素的介导效应

目的探讨槲皮素诱导Ⅰ型血红素氧合酶(heme Oxygenase-1,HO-1)及其代谢产物胆红素对肝细胞酒精性氧化损伤的保护效应。方法二步胶原酶灌注技术分离培养SD大鼠原代肝细胞,在孵以200 mmol乙醇建立酒精性肝细胞氧化损伤模型的同时,加入槲皮素(100μmol)、hemin(20μmol)等及不同剂量(2-100μmol)的胆红素干预24 h后,检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活力及谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)及氧自由基(ROS)水平及培养基中总胆红素水平。结果槲皮素明显抑制了乙醇孵育后细胞MDA和ROS水平的升高,有效维持了细胞内GSH水平和SOD活力;加入外源性胆红素也显示出相同的保护效应,且具有一定的剂量依赖性;锌原卟啉IX(ZnPP-IX)则明显抑制了上述槲皮素的保护效应。结论槲皮素诱导HO-1对酒精所致大鼠原代肝细胞氧化损伤具有保护作用,其机制与HO-1的代谢产物之一胆红素有关。     

槲皮素对酒精性肝损伤的防护作用及其与I型血红素氧化酶关系的研究

目的研究槲皮素对大鼠原代肝细胞酒精性氧化损伤的防护作用及其与I型血红素氧化酶(HO-1)的关系。方法二步胶原酶技术分离培养大鼠原代肝细胞。分别在酒精染毒前、后及同时用50μmol/L槲皮素作用,作用结束后检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)活性,细胞丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)水平和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性;槲皮素预作用同时加入HO-1抑制剂锌原卟啉Ⅸ(ZnPPⅨ),作用结束后测上述指标。结果酒精暴露前2 h经50μmol/L槲皮素干预,肝细胞LDH、AST和MDA水平较酒精组明显降低,GSH、SOD和CAT水平较酒精组明显升高;槲皮素预干预同时加ZnPPⅨ可抑制HO-1活性,LDH、AST和MDA水平较未加有明显升高,而GSH、SOD和CAT水平则明显降低。结论槲皮素预干预对肝细胞酒精性氧化损伤具有防护作用,其保护效应可能通过HO-1介导。     

Nrf2/HO-1通路在氧化损伤保护机制中研究进展

Nrf2[NF-E2(Nuclear factor-erythroid 2)related factor 2]属于转录因子亮氨酸拉链转录激活因子(CNC)家族成员,为细胞防御多种应激损伤的关键因子[1].Nrf2是诱导Ⅱ相酶基因表达的必需调节因子[2].Ⅱ相酶中的血红素加氧酶-1(HO-1)对细胞具有保护作用,它可催化血红素产生胆绿素、一氧化碳(CO)和铁,胆绿素可形成胆红素,二者在体内是强有力的自由基清除剂.本文通过介绍氧化损伤的形成和保护机制,并对Nrf2/HO-1通路在氧化保护中的重要作用进行综述.     

萝卜硫素激活Nrf2/HO-1通路对阿霉素急性肝损伤小鼠起保护作用及细胞凋亡的影响

目的 探讨萝卜硫素对阿霉素诱导的急性肝损伤小鼠转录因子NF-E2相关因子2/Ⅱ相酶血红素加氧酶1(Nrf2/HO-1)通路及细胞凋亡的影响。方法 小鼠腹腔注射阿霉素建立急性肝损伤小鼠模型，将小鼠随机分成6组：正常组、模型组、萝卜硫素低剂量、中剂量、高剂量组(20 mg/kg、40 mg/kg、60 mg/kg)、干预组(萝卜硫素15 mg/kg)。以肝匀浆指标超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(NO)、乳酸脱氢酶(LDH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)评价萝卜硫素的抗氧化预保护作用，以Western blot法测定肝组织中Nrf2/HO-1水平，以TUNEL法检测组织凋亡细胞。结果 萝卜硫素抗阿霉素所致急性肝损伤与激活Nrf2,调节下游基因HO-1,活化抗氧化因子，抑制细胞凋亡有关。结论 萝卜硫素对阿霉素所致的肝损伤有保护作用，可能是通过Nrf2/HO-1使肝细胞凋亡减少以及调控氧化应激反应，从而恢复正常的肝细胞功能。     

姜黄素激活Nrf2-ARE通路抑制镉肾毒性的研究进展

长期暴露于镉可造成机体肾脏的慢性氧化损伤。姜黄素作为一种天然抗氧化物,能上调多种细胞核转录相关因子2(Nrf2)核转位,保护机体免受氧化应激的损伤。应用姜黄素激活Nrf2-抗氧化反应元件(ARE)信号通路、拮抗镉所致肾毒性可能为镉中毒的防治提供新的手段。该文就Nrf2信号通路在镉致肾脏损伤中的拮抗作用及姜黄素诱导Nrf2-ARE信号通路活化对机体的保护作用进行综述。     

MAPK信号转导通路与神经损伤研究进展

丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)是一种胞浆内广泛分布的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在真核细胞中,由4条平行的信号转导通路组成。细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK 1/2)通路、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和(或)应激活化蛋白激酶(SAPK)通路、p38 丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)通路和细胞外信号调节蛋白激酶5(ERK 5)/大丝裂原活化蛋白激酶1(BMKl)通路。近年来的研究发现MAPK信号通路与神经损伤相关。ERK 1/2和p38在神经损伤的区域迅速磷酸化激活,减少神经损伤对机体带来的影响;磷酸化JNK在神经损伤部位聚集,促进神经细胞的凋亡,加重神经损伤的发生;ERK 5是细胞增殖与分化、器官发生与胚胎发育中不可缺少的信号蛋白,磷酸化ERK 5通过促进胰岛素在神经元中的表达促进神经细胞存活。除此之外MAPK各分子在不同刺激和不同疾病中的作用不同。     

原花青素对氯氰菊酯致小鼠小脑组织氧化损伤及核转录因子NF-E2相关因子2、血红素氧合酶-l表达的影响

目的研究原花青素(proanthocyanidin,PC)对氯氰菊酯(cypermethrin,CYP)所致小鼠小脑组织氧化损伤及核转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶-l(HO-1)表达的影响。方法将50只雄性昆明小鼠随机分为5组:双蒸水对照组,染毒组(以CYP 10 mg/kg进行灌胃),PC保护组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ(分别以50、100和200mg/kg PC预先给小鼠灌胃,再以10 mg/kg CYP染毒)。连续3周经口灌胃,之后颈椎脱臼法处死小鼠,检测小脑组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量;免疫组化分析Nrf2在小脑组织中的表达;RT-PCR检测Nrf2及HO-1 mRNA的表达。结果染毒组小鼠小脑组织MDA含量升高,GSH-Px、T-SOD、CAT活性降低;Nrf2胞核阳性细胞比例增加;Nrf2及HO-1 mRNA表达增加,与对照组比较差异具有统计学意义(P0.05)。与染毒组相比,PC保护组MDA水平降低,T-SOD、GSH-Px、CAT活性增加;胞核Nrf2阳性细胞逐渐减少;Nrf2及HO-1 mRNA表达下降,与染毒组比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论 CYP暴露可诱导小鼠小脑组织氧化损伤,使Nrf2由胞质向胞核转位,同时诱导下游靶基因HO-1的表达;抗氧化剂PC能够使活化的Nrf2及HO-1mRNA表达回调至基础水平,从而拮抗CYP所致的氧化损伤。     

石英致MAPK/cyclinD1-CDK4信号转导通路的活化

目的探讨石英诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)中丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)/细胞周期蛋白和细胞周期蛋白依赖激酶(cyclin D1-CDK4)信号转导通路的活化。方法两种处理方式:(1)石英刺激细胞2h后,收获细胞;(2)石英长时间(2个月)作用于细胞,使细胞具有部分转化细胞的特征(S-HELF),检测信号蛋白因子和细胞周期的变化。分别采用Western blot、免疫细胞化学和流式细胞术方法检测细胞内信号蛋白和细胞周期的改变。选用特异化学抑制剂或分子抑制剂抑制上游激酶,检测下游激酶的变化。结果HELF暴露于石英粉尘2 h后,可以导致MAPK家族中ERK1/2、p38和JNK1/2 3个亚家族的磷酸化水平升高。在S-HELF中,只有细胞外调节蛋白激酶(ERK)和C-Jun氨基末端激酶[JNK1(p46)]较未处理的HELF磷酸化水平增高,而JNK2(p54)的磷酸化水平没有变化,p38的磷酸化水平反而下降。cyclin D1和CDK4蛋白在S-HELF中较HELF中表达增多。抑制ERK和JNK活化或者抑制核转录因子活化蛋白1(AP- 1)的活化后,S-HELF中cyclin D1和CDK4蛋白过表达得到控制。而抑制p38的活性不能改变cyclin D1和CDK4蛋白过表达。结论石英刺激HELF2h后可诱导ERK、JNK和p38的活化,而S-HELF中ERK、JNK活化,p38没有被活化。S-HELF中,cyclin D1和CDK4蛋白质过表达与ERK、JNK和AP-1活化有关。     

番茄红素对人肝L02细胞氧化损伤的保护作用及其机制

目的探索番茄红素(Lyc)对过氧化氢(H_2O_2)诱导的人肝L02细胞氧化损伤的保护作用及其机制。方法以H_2O_2诱导的L02细胞氧化损伤为模型,通过测定不同浓度番茄红素预处理后L02细胞的生存率以确定最佳处理浓度;通过测定细胞活性氧(ROS)水平、细胞内超氧化物歧化酶(SOD)与谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、细胞内丙二醛(MDA)水平,培养液上清中的丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)及乳酸脱氢酶(LDH)活性等指标观察番茄红素对细胞氧化损伤的保护作用;通过检测细胞核蛋白中的核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白表达量及其靶基因血红素加氧酶1(HO-1)和辅酶Ⅰ醌类氧化还原酶1(NQO1)的mRNA表达水平等指标,观察番茄红素对Nrf2的核转位及其下游靶基因的激活作用。结果 10μmol/L番茄红素可显著提高H_2O_2培养条件下L02细胞的生存率,提高细胞内SOD、GSH-Px酶活性,降低胞内MDA含量及培养液中的ALT、AST、LDH酶活性(P0.05),并能提高细胞核蛋白的Nrf2含量及Nrf2靶基因HO-1和NQO1表达水平(P0.05)。结论番茄红素可通过促进Nrf2的核转位、增强其下游抗氧化基因的表达从而对H_2O_2诱导的L02细胞氧化损伤起保护作用。     

p38MAPK和ERK1／2对镉诱导NRK肾细胞c-myc与c-fos基因mRNA表达的影响

目的研究p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）和细胞外信号调节激酶（ERK）1／2抑制剂对镉染毒NRK肾细胞后原癌基因c—myc与c—fos表达的影响。方法用不同剂量CdCl2（0、2．5、5．0、10．0μmol／L）染毒大鼠NRK细胞12h,p38MAPK抑制剂SB20358010．0μmol／L和ERK1／2抑制剂PD9805910μmol／L预处理NRK细胞0．5h后,再加入10．0μmol／LCdCl2染毒细胞,用流式细胞技术检测细胞凋亡率,SYBRGreenI荧光定量PCR检测c-rnyc与c-fosmRNA表达。结果流式细胞仪检测NRK细胞染镉后细胞凋亡率随染毒剂量增加而增加;p38MAPK抑制剂SB203580＋10．0μmol／LCdCl2组与单独染镉组比较,细胞凋亡率显著下降;但ERK1／2抑制剂PD98058＋10．0μmol／LCdCl2组与单独染镉组比较,细胞凋亡率显著升高。实时荧光定量PCR检测NRK细胞染镉后c—myc和c—fosmRNA表达明显增强;单独用SB203580和PD98058刺激NRK细胞后c-myc和c—fosmRNA表达与对照组比较,差异无统计学意义,但SB203580和PD98058预处理NRK细胞0.5b后加入10．0μmol／LCdCl2与单纯10．0μmol／L染镉组比较,c—myc和c-fosmRNA表达显著降低。结论MAPK信号转导通路可能在镉诱导原癌基因c—myc和c—fos表达中发挥作用。     

Quercetin Is An Active Agent in Berries against Neurodegenerative Diseases Progression through Modulation of Nrf2/HO1

Berries are well-known fruits for their antioxidant effects due to their high content of flavonoids, and quercetin is one of the potent bioactive flavonoids. Although oxidative stress is an inevitable outcome in cells due to energy uptake and metabolism and other factors, excessive oxidative stress is considered a pivotal mediator for the cell death and leads to the progression of neurodegenerative diseases (NDDs). Furthermore, oxidative stress triggers inflammation that leads to neuronal cell loss. Alzheimer’s, Parkinson’s, Huntington’s disease, amyotrophic lateral sclerosis, multiple sclerosis, and so on are the main neurodegenerative diseases. Hence, AD and PD are the most affected NDDs and cause the most lethality without any effective cure. Since AD and PD are the most common NDDs, therefore, in this study, we will describe the effect of oxidative stress on AD and PD. Targeting oxidative stress could be a very effective way to prevent and cure NDDs. Thus, the nuclear factor erythroid 2–related factor 2 (Nrf2) and heme oxygenase-1 (HO1) are potent endogenous antioxidant modulatory pathways, which also show cytoprotective activities. Modulation of Nrf2/HO1 signaling pathways through a biological approach could be an effective way to treat with NDDs. Quercetin is a natural polyphenol, which protects neurodegeneration, remarkably by suppressing oxidative stress and inflammation. Thus, quercetin could be a very effective agent against NDDs. We will discuss the benefits and challenges of quercetin to treat against NDDs, focusing on molecular biology.     

p38/ERK激酶调控TGF-β1诱导的HLF-02细胞Ⅰ型胶原表达及MMP-2活力

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路在调控人肺成纤维细胞Ⅰ型胶原表达、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)活力中的作用.方法 以人肺成纤维细胞HLF-02细胞系为研究对象,给予10 ng/ml的TGF-β1刺激不同时间;阻断实验以P38激酶特异性抑制剂(SB203580)、ERK激酶特异性抑制剂(PD98059)分别阻断p38通路和细胞外调控激酶(ERK)通路;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞内Ⅰ型胶原mRNA的表达;运用Western印迹检测细胞上清液中Ⅰ型胶原蛋白表达;酶谱分析细胞上清液中MMP-2、MMP-9的活力.结果 (1)TGF-β1刺激HLF-02细胞,24、48、72 h组的Ⅰ型胶原mRNA表达水平分别为1.33±0.07、2.46±0.09、2.39±0.08;Ⅰ型胶原蛋白表达水平分别为114.89±8.95、208.16±6.75、211.46±8.05;MMP-2的活力分别为190.33±5.86、214.33±8.39、212.67±11.59.(2)SB203580对TGF-β1诱导的Ⅰ型胶原mRNA水平、蛋白水平及MMP-2活力的抑制率分别为51%、24%、20%.(3)PD98059对TGF-β1诱导的Ⅰ型胶原mRNA水平、蛋白水平以及MMP-2活力的抑制率分别为42%、13%、16%.结论 TGF-β1可促进HLF-02细胞Ⅰ型胶原的转录和蛋白表达,上调MMP-2活力;p38、ERK激酶通路在此过程中具有重要的调控作用.     

槲皮素对大鼠原代肝细胞酒精性氧化损伤的防护作用

目的:观察槲皮素(quercetin)对大鼠原代肝细胞酒精性氧化损伤的防护作用。方法:经二步胶原酶技术分离培养大鼠原代肝细胞,用100mmol/L无水乙醇染毒细胞8h,作为酒精损伤模型。乙醇染毒前经不同剂量槲皮素(25～200μmol/L)预作用不同时间(0～8h),观察槲皮素干预对细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)活性,丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)水平和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性的影响。结果:大鼠原代肝细胞经100mmol/L酒精暴露8h后,LDH、AST活性,MDA、GSH含量和SOD、CAT活性与对照组相比,均有非常显著性差异;酒精暴露前1～4h经50～75μmol/L槲皮素干预效果最明显,LDH、AST、MDA和GSH、SOD、CAT水平分别较酒精组非常显著性降低和升高。结论:槲皮素可能通过减少GSH耗竭,提高抗氧化酶活性,抑制脂质过氧化来保护大鼠原代肝细胞抗酒精性氧化损伤,保护作用呈剂量与时间效应关系。     

Bilirubin participates in protecting of heme oxygenase-1 induction by quercetin against ethanol hepatotoxicity in cultured rat hepatocytes

To attenuate alcohol liver disease (ALD) is extremely urgent since ALD has been emerged as a major liver disease. The aim of the present study is to investigate the hepatoprotective effect against ethanol-induced injury of bilirubin, a product of heme metabolism degradation via HO and biliverdin reductase catalysis. Ethanol-incubated primary rat hepatocytes (100 mmol/L) were treated by quercetin, bilirubin, inflammatory factors, and/or HO-1 inducer/inhibitor for 24 h, and the cellular damage was assayed. Quercetin lowered ethanol-induced glutathione depletion and superoxide dismutase inactivation, inhibited the overproduction of malondialdehyde and reactive oxygen species, and decreased the leakage of cellular aspartate aminotransferase and lactate dehydrogenase, accompanying the normalization of bilirubin level. The effect of quercetin was mimicked by exogenous bilirubin in a dose-dependent manner to some extent (within 25 μmol/L) and pharmacological HO-1 inducer hemin, but abolished by HO-1 inhibitor zinc protoporphyrin-IX. Inflammatory challenge of TNF-α plus IL-6 further aggravated ethanol-induced oxidative damage, which was also attenuated by bilirubin in part. These findings shed a light on the anti-oxidative and anti-inflammatory role of bilirubin released from quercetin/HO-1 and biliverdin reductase pathway against ethanol hepatotoxicity and highlight a prospective strategy of nutritional intervention for ALD by naturally occurring quercetin to induce HO-1 with the release of bioactive end-products.     

丝裂原活化蛋白激酶信号途径在苯并[a]芘影响内皮细胞热休克蛋白70基因表达中的作用

目的研究丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)信号途径在苯并[a]芘(BaP)影响内皮细胞热休克蛋白70(HSP70)基因表达中的作用.方法猪主动脉内皮细胞以不同浓度BaP(0、0.1、0.5、1.0、5.0、10.0 μmol/L)染毒24 h,或以PD98059(10μmol/L)或SB203580(20μmol/L)预处理1 h后再加一定剂量的BaP共同孵育24 h.分别以Western-blot法检测各组细胞磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶(extracellularsignal regulated protein kinase,ERK)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(c-Jun amino-terminal kinase,JNK)、磷酸化p38和HSP70表达水平的改变.结果随BaP浓度的升高,MAPK途径的3种磷酸化激酶表达水平出现不同程度的改变,其中磷酸化ERK1表达改变最明显,呈剂量反应性增加.BaP抑制内皮细胞HSP70表达,在中、高剂量(≥1.0μmol/L)暴露时,HSP70表达明显低于对照组,差异有显著性(P＜0.05);尽管ERK途径抑制剂PD98059可部分减弱BaP对HSP70表达的抑制效应,但经PD98059预处理后内皮细胞HSP70表达水平仍明显低于正常状态下的表达水平,差异亦有显著性(P＜0.05).结论BaP可能通过ERK1途径而影响内皮细胞HSP70基因表达,同时可能还有其他信号途径在BaP影响HSP70基因表达过程中起作用.     

槲皮素对大鼠原代肝细胞HO-1蛋白表达及活性的影响

目的研究槲皮素对大鼠原代肝细胞中I型血红素氧化酶(HO-1)蛋白表达及酶活性的影响。方法二步胶原酶技术分离培养大鼠原代肝细胞。用不同剂量(25、50、100、200 mol/L)槲皮素作用大鼠原代肝细胞12 h,或用50 mol/L槲皮素作用肝细胞不同时间(2～12 h)后,提取肝细胞微粒体,检测HO-1酶活性变化,并用WesternBlot方法检测HO-1蛋白表达水平的变化。结果大鼠原代肝细胞经50～200 mol/L槲皮素处理12 h,或用50 mol/L槲皮素处理4～12 h后,HO-1蛋白表达水平和酶活性与对照组比较明显升高(P<0.05)。结论槲皮素能够诱导大鼠原代肝细胞的HO-1蛋白表达,提高肝细胞内HO-1的酶活性。     

转化生长因子β1和丝裂原活化激酶通路调控人肺成纤维细胞表型

目的　探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在转化生长因子β1(TGF β1)诱导人肺成纤维细胞表型分化中的作用。方法　以人肺成纤维细胞HLF 0 2细胞系为研究对象,给予10ng/mlTGF β1刺激不同时间;阻断实验以SB2 0 35 80、PD980 5 9分别阻断p38通路和细胞外调控激酶(Erk)通路;采用逆转录-聚合酶链反应(RT PCR)检测细胞内表型分化标志物α-平滑肌肌动蛋白(αSMA)mRNA的表达;运用Western印迹检测细胞内p38、Erk、c jun氨基末端激酶(JNK)磷酸化以及αSMA蛋白表达的强度。结果　(1)TGF β1刺激HLF 0 2细胞2 4h组、4 8h组、72h组的αSMAmRNA表达水平分别为:1.87±0 .11、2 .4 9±0 .10、3.0 2±0 .15 ;αSMA蛋白表达水平分别为:3.2 0±0 .14、3.96±0 .2 1、4 .5 7±0 .13。(2 )TGF β1可以激活HLF 0 2细胞内p38和Erk通路,对JNK没有活化作用。(3)SB2 0 35 80、PD980 5 9各自抑制了TGF β1诱导的p38、Erk激酶的磷酸化。(4)SB2 0 35 80抑制了TGF β1诱导的αSMAmRNA和蛋白表达(抑制率分别为30 %和4 0 % ) ;PD980 5 9同样抑制了TGF β1诱导的αSMAmRNA和蛋白表达(抑制率分别为10 %和2 0 % )。结论　TGF β1可诱导HLF 0 2细胞表型的分化,p38、Erk激酶参与了调控TGF β1的促表型分化作用