槲皮素拮抗酒精性肝损伤中胆红素的介导效应

目的探讨槲皮素诱导Ⅰ型血红素氧合酶(heme Oxygenase-1,HO-1)及其代谢产物胆红素对肝细胞酒精性氧化损伤的保护效应。方法二步胶原酶灌注技术分离培养SD大鼠原代肝细胞,在孵以200 mmol乙醇建立酒精性肝细胞氧化损伤模型的同时,加入槲皮素(100μmol)、hemin(20μmol)等及不同剂量(2-100μmol)的胆红素干预24 h后,检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活力及谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)及氧自由基(ROS)水平及培养基中总胆红素水平。结果槲皮素明显抑制了乙醇孵育后细胞MDA和ROS水平的升高,有效维持了细胞内GSH水平和SOD活力;加入外源性胆红素也显示出相同的保护效应,且具有一定的剂量依赖性;锌原卟啉IX(ZnPP-IX)则明显抑制了上述槲皮素的保护效应。结论槲皮素诱导HO-1对酒精所致大鼠原代肝细胞氧化损伤具有保护作用,其机制与HO-1的代谢产物之一胆红素有关。     

槲皮素对大鼠原代肝细胞HO-1蛋白表达及活性的影响

目的研究槲皮素对大鼠原代肝细胞中I型血红素氧化酶(HO-1)蛋白表达及酶活性的影响。方法二步胶原酶技术分离培养大鼠原代肝细胞。用不同剂量(25、50、100、200 mol/L)槲皮素作用大鼠原代肝细胞12 h,或用50 mol/L槲皮素作用肝细胞不同时间(2～12 h)后,提取肝细胞微粒体,检测HO-1酶活性变化,并用WesternBlot方法检测HO-1蛋白表达水平的变化。结果大鼠原代肝细胞经50～200 mol/L槲皮素处理12 h,或用50 mol/L槲皮素处理4～12 h后,HO-1蛋白表达水平和酶活性与对照组比较明显升高(P<0.05)。结论槲皮素能够诱导大鼠原代肝细胞的HO-1蛋白表达,提高肝细胞内HO-1的酶活性。     

无机砷对肝细胞转录因子Nrf2及其调控蛋白表达影响

目的 探讨不同时间和不同浓度亚砷酸钠(NaAsO₂)暴露对Chang肝细胞株NF-E2相关因子2(Nrf2)、及其调控的下游抗氧化酶NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO1)和血红素单加氧酶-1(HO-1)蛋白表达的影响。方法 25μmol/L NaAsO₂作用Chang肝细胞2、4、6、12和24 h;或不同浓度的NaAsO₂(10、25和50μmol/L)作用Chang肝细胞6 h,免疫印迹法(western blot)检测细胞内Nrf2、NQO1和HO-1的蛋白表达情况。结果 25μmol/L的NaAsO₂可以明显诱导Chang肝细胞Nrf2、NQO1和HO-1的蛋白表达(P<0.01);Nrf2蛋白2 h开始明显诱导,4 h表达水平最高,此后随暴露时间的延长虽然表达有所下降,但持续至24 h仍明显高于对照组;NQO1的蛋白表达水平也从4 h开始增加并持续至24 h;HO-1的蛋白表达则从6 h开始明显诱导,且随暴露时间的继续延长表达持续上升,具有明显的时间-效应关系;10、25和50μmol/L NaAsO₂染毒6 h,Nrf2、NQO1和HO-1的蛋白表达均随染毒剂量的增加而大量诱导,具有明显的剂量-效应关系(P<0.01)。结论 NaAsO₂暴露能够诱导Chang肝细胞Nrf2、NQO1和HO-1蛋白表达增强,且具有一定的剂量-效应关系。     

槲皮素对酒精性肝损伤的防护作用及其与I型血红素氧化酶关系的研究

目的研究槲皮素对大鼠原代肝细胞酒精性氧化损伤的防护作用及其与I型血红素氧化酶(HO-1)的关系。方法二步胶原酶技术分离培养大鼠原代肝细胞。分别在酒精染毒前、后及同时用50μmol/L槲皮素作用,作用结束后检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)活性,细胞丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)水平和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性;槲皮素预作用同时加入HO-1抑制剂锌原卟啉Ⅸ(ZnPPⅨ),作用结束后测上述指标。结果酒精暴露前2 h经50μmol/L槲皮素干预,肝细胞LDH、AST和MDA水平较酒精组明显降低,GSH、SOD和CAT水平较酒精组明显升高;槲皮素预干预同时加ZnPPⅨ可抑制HO-1活性,LDH、AST和MDA水平较未加有明显升高,而GSH、SOD和CAT水平则明显降低。结论槲皮素预干预对肝细胞酒精性氧化损伤具有防护作用,其保护效应可能通过HO-1介导。     

槲皮素对大鼠原代肝细胞酒精性氧化损伤的防护作用

目的:观察槲皮素(quercetin)对大鼠原代肝细胞酒精性氧化损伤的防护作用。方法:经二步胶原酶技术分离培养大鼠原代肝细胞,用100mmol/L无水乙醇染毒细胞8h,作为酒精损伤模型。乙醇染毒前经不同剂量槲皮素(25～200μmol/L)预作用不同时间(0～8h),观察槲皮素干预对细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)活性,丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)水平和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性的影响。结果:大鼠原代肝细胞经100mmol/L酒精暴露8h后,LDH、AST活性,MDA、GSH含量和SOD、CAT活性与对照组相比,均有非常显著性差异;酒精暴露前1～4h经50～75μmol/L槲皮素干预效果最明显,LDH、AST、MDA和GSH、SOD、CAT水平分别较酒精组非常显著性降低和升高。结论:槲皮素可能通过减少GSH耗竭,提高抗氧化酶活性,抑制脂质过氧化来保护大鼠原代肝细胞抗酒精性氧化损伤,保护作用呈剂量与时间效应关系。     

Nrf2/HO-1通路在氧化损伤保护机制中研究进展

Nrf2[NF-E2(Nuclear factor-erythroid 2)related factor 2]属于转录因子亮氨酸拉链转录激活因子(CNC)家族成员,为细胞防御多种应激损伤的关键因子[1].Nrf2是诱导Ⅱ相酶基因表达的必需调节因子[2].Ⅱ相酶中的血红素加氧酶-1(HO-1)对细胞具有保护作用,它可催化血红素产生胆绿素、一氧化碳(CO)和铁,胆绿素可形成胆红素,二者在体内是强有力的自由基清除剂.本文通过介绍氧化损伤的形成和保护机制,并对Nrf2/HO-1通路在氧化保护中的重要作用进行综述.     

慢性锰暴露对大鼠肾脏氧化损伤和Nrf2信号通路的影响

目的 探讨慢性锰(Mn)暴露对SD大鼠肾脏氧化损伤和核转录相关因子2(Nrf2)信号通路的影响.方法 将48只SPF级健康雄性SD大鼠随机分为高剂量组(50 mg/kg)、低剂量组(10 mg/kg)和对照组(灭菌蒸馏水),每组16只,灌胃染毒12个月.观察肾脏组织病理学变化,检测肾脏中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px...     

原花青素通过Nrf2抑制Erastin介导的细胞铁死亡

目的 探讨原花青素（proanthocyanidins,PC）对Erastin诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞铁死亡的影响及作用机制。方法 通过MTT法检测细胞活力。采用试剂盒测定细胞内铁离子水平、活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平、丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量、谷胱甘肽（glutathione,GSH）水平和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性。通过蛋白质免疫印迹法检测细胞内溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、核转录因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid2-related factor 2,Nfr2)和血红素氧合酶1(heme oxygenase-1,HO-1)的蛋白表达水平。结果 PC预处理能够保护SH-SY5Y细胞免受Erastin诱导的细胞铁死亡,主要是通过抑制ROS生成、铁离子水平和MDA含量升...     

溴氰菊酯及6-羟基多巴胺对PC12细胞Nrf2/ARE通路影响

目的探讨溴氰菊酯(DM)与6-羟基多巴胺(6-OHDA)对转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)通路作用的影响及差异。方法用10μmol/L溴氰菊酯处理PC12细胞1h或用100μmol/L6-OHDA处理PC12细胞17h后,用RT-PCR方法检测细胞Nrf2基因和其驱动的靶基因-γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(GCS,由重亚单位GCSh和轻亚单位GCS1组成)和血红素氧合酶(HO-1)基因 mRNA表达水平,蛋白印迹(Westernblot)方法检测细胞Nrf2蛋白水平,免疫荧光细胞化学技术检测细胞HO-1蛋白水平。结果DM染毒诱导转录因子Nrf2 mRNA表达、激活Nrf2,Nrf2可能参与DM对Nrf2下游基因GCSh、GCS1以及HO-1表达的调控;6-OHDA能诱导PC12细胞Nrf2 mRNA和蛋白的表达以及激活Nrf2;6-OHDA也诱导细胞HO-1或GCSh mRNA和蛋白的表达。结论DM与6-OHDA对Nrf2/ARE通路的作用相似,DM是可干扰Nrf2/ARE通路的神经毒物。     

无机砷对Chang肝细胞核转录因子Nrf2及其下游抗氧化酶mRNA表达的影响

目的观察亚砷酸钠(NaAsO2)对Chang肝细胞株核转录因子Nrf2及Nrf2调控的下游抗氧化酶醌氧化还原酶1(NQO1)和血红素单加氧酶-1(HO-1)mRNA表达的影响。方法分别以不同浓度NaAsO2(5、10、25和50μmol/L)染毒人类Chang肝细胞株6h,采用RT-PCR法测定Nrf2、NQO1和HO-1的mRNA表达水平。结果 5、10、25和50μmol/L NaAsO2暴露6h,Nrf2的mRNA表达分别为对照组的(100.74±3.70)%、(105.96±1.75)%、(101.76±1.01)%和(101.81±6.33)%,与对照组比较,差异未见统计学意义(P>0.05);各暴露组NQO1的mRNA表达均较对照组相比显著增加(P<0.05),分别为对照组的(106.52±3.11)%、(113.27±2.84)%、(111.96±6.96)%和(107.33±2.76)%;NaAsO2暴露还能够显著诱导HO-1的mRNA表达增强,且具有剂量-效应关系,差异具有统计学意义(P<0.01)。5、10、25和50μmol/L NaAsO2暴露,HO-1的mRNA表达分别为对照组的(186.92±1.75)%、(194.08±2.75)%、(196.93±2.55)%和(200.02±0.83)%。结论无机砷暴露未显著增强Chang肝细胞核转录因子Nrf2的转录,却能够显著提高Nrf2调控的下游抗氧化酶NQO1和HO-1的mRNA表达水平。     

一氧化碳对CYP2E1介导的微粒体酒精氧化应激的保护作用

目的探讨诱导I型血红素氧合酶(heme oxygenase-1,HO-1)催化血红素产生的代谢产物一氧化碳(CO)对大鼠肝微粒体细胞色素P4502E1(cytochrome P4502E1,CYP2E1)酶活性影响及其介导的酒精性氧化应激的保护作用。方法超速离心法制备大鼠肝脏微粒体,加入血红素(hemin)、血红蛋白(Hb)、不同剂量的CO释放剂CORM-2(carbonmonoxide-releasing molecules-2),检测CYP2E1酶活性;在微粒体酒精氧化反应体系中加入血红素、血红蛋白及CORM-2,检测微粒体超氧化物歧化酶(SOD)活力及谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)及氧自由基(ROS)水平。结果 hemin处理后肝微粒体CYP2E1的酶活性下降,联合Hb后CYP2E1酶活性明显升高,外源性CO则显示出类似的CYP2E1酶抑制效应;针对乙醇孵育的肝微粒体,hemin处理后明显抑制了肝微粒体MDA和ROS水平的升高,有效维持了GSH水平和SOD活力,联合Hb处理后明显抑制了上述保护效应,外源性CORM-2也显示出类似的保护效应,而灭活的CORM-2则无明显的保护效应。结论 CO对大鼠肝微粒体酒精性氧化应激具有保护作用,其机制可能与CO对CYP2E1酶活性的直接抑制有关。     

槲皮素对小鼠腹腔巨噬细胞氧化应激反应与功能的影响

目的探讨槲皮素对巨噬细胞氧化应激反应与功能的调节作用。方法采用原代培养小鼠腹腔巨噬细胞和LPS诱导氧化应激,以20~80μmol.L-1槲皮素处理48 h,测定细胞培养上清液抗氧化力、一氧化氮(NO)浓度、乳酸脱氢酶(LDH)活性、细胞活性氧含量(ROS)、MDA水平以及吞噬功能的变化。结果LPS对照组细胞培养上清液抗氧化力、NO浓度及LDH活性分别高于正常对照组20.6%、706.6%、27.6%;同时细胞ROS含量、NOS活性、MDA水平也分别高于正常对照组72.9%、331.3%、131.5%,细胞培养上清墨汁潴留也显著增加(A430由4.7±0.6增加到5.5±0.3,P<0.01)。施加20~80μmol.L-1的槲皮素后,与LPS对照组比较,上清抗氧化力升高31.0%~50.6%,上清NO浓度下降18.0%~87.0%,细胞ROS含量、NOS活性及MDA水平分别下降37.4%~72.1%、10.1%~25.4%、15.5%~74.8%。上清LDH活性在20~50μmol.L-1槲皮素组下降21.9%~24.3%,在80μmol.L-1槲皮素组则升高19.6%。细胞培养上清墨汁潴留减少,与正常对照组比较差异无显著性。结论一定浓度的槲皮素可增强小鼠巨噬细胞的抗氧化能力和吞噬能力,并降低氧化应激反应。     

槲皮素对氧化应激大鼠肝细胞代谢组的影响

目的探讨槲皮素对氧化应激大鼠肝细胞代谢的影响。方法用无血清培养液原代培养大鼠肝细胞,以H2O2诱导氧化应激。培养细胞分为空白对照组(仅用培养液培养)、槲皮素组(以20μmol/L槲皮素处理肝细胞24h)、H2O2组(以8.8mmol/LH2O2作用6h诱导细胞产生氧化应激)、槲皮素+H2O2组(先用20μmol/L槲皮素预处理24h后,再用8.8mmol/LH2O2诱导氧化应激)4组。实验结束后,收集各组培养液,离心,以核磁共振谱仪检测培养液中代谢物的变化情况。结果与空白对照组比较,最显著的变化包括:(1)槲皮素和槲皮素+H2O2组二甲胺含量增加;(2)H2O2、槲皮素和槲皮素+H2O2组乙酸含量增加,丙酮酸含量减少。其次的变化包括:(1)槲皮素组乳酸减少,谷胺酰胺增加;(2)H2O2组乳酸、牛磺酸增加,组氨酸减少;(3)槲皮素+H2O2组乳酸、牛磺酸和谷胺酰胺增加,组氨酸减少。结论槲皮素可通过加速糖酵解、促进脂肪酸氧化供能发挥抗氧化应激作用,对某些含氮化合物的代谢也具有调节作用。     

人Nrf2蛋白的结构与功能分析

目的氧化应激与多种急性或慢性疾病相关,核因子红血球相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)作为细胞感受氧化还原状态的关键转录调控因子,是细胞抗氧化系统中的关键调控蛋白,深入了解该蛋白的结构与生物学功能,对防治相关疾病具有重要意义.方法利用NCBI、E...     

微波辐照对培养血管内皮细胞Nrf2的磷酸化作用

目的 研究微波辐照对参与抗氧化应激反应调节的转录因子（Nrf2）的磷酸化作用。方法 培养的ECV304细胞接受微波辐照，辐照后2，4，8，24h进行指标测定。用免疫共沉淀-放射自显影法测定Nrf2磷酸化水平；用Western blot、r-^32P-ATP标记液闪法分别测定蛋白激酶C（PKC）表达量和活性。结果 微波辐照后2，4，8h，Nrf2磷酸化水平比未辐照细胞明显增强（P〈0．05），4h达到峰值，24h回复到正常水平；同时PKC的蛋白表达量在辐照后2，4，8h也比对照细胞明显增加，PKC的活性在这一时段比对照分别增加了36％，93％，47％（P〈0．05）。辐照后24h，PKC含量和活性均下降到正常水平。辐照后PKC含量和活性变化与Nrf2磷酸化水平的变化在时效上有一致性。结论 微波辐照可引起培养血管内皮细胞Nrf2磷酸化水平在一定时段内增强，该过程与PKC激活有关。     

黑米花色苷对血管内皮细胞过氧化损伤的保护作用

目的:探讨黑米花色苷对ox-LDL引起的血管内皮细胞损伤的保护作用。方法:分别在4种黑米花色苷预孵保护作用下用ox-LDL过氧化处理EVC304细胞株,通过加载GIF滤光片的倒置显微镜观察细胞形态;通过MTT实验,荧光分光光度法和2’,7’-二氯荧光素双醋酸盐(DCFH-DA)荧光探针分别检测细胞活力及体内丙二醛和自由基变化;用流式细胞仪分析细胞周期。结果:四种黑米花色苷能明显减轻ox-LDL对内皮细胞形态的损伤,降低ox-LDL对细胞增殖的抑制作用,显著减少细胞内丙二醛增加量;其中,矢车菊素-3-葡萄糖苷还能显著降低ox-LDL所致自由基的生成量,促进细胞由G1期进入S期,促进细胞增殖,减少细胞凋亡。结论:黑米花色苷对ox-LDL引起的血管内皮细胞过氧化损伤有明显保护作用。     

大豆异黄酮对动脉粥样硬化小鼠Nrf2核转位和抗氧化功能的影响

目的研究大豆异黄酮对动脉粥样硬化小鼠核因子2相关因子2(Nrf2)核转位的影响,探讨抗氧化功能在大豆异黄酮抗动脉粥样硬化中的作用。方法采用高脂饲料喂养C57BL/6J小鼠16 w建立动脉粥样硬化损伤模型,通过组织形态学、Westen blot、生化分析等方法观察大豆异黄酮干预与否对小鼠Nrf2核转位和抗氧化功能的影响。结果高脂膳食使Nrf2蛋白在核中的表达显著降低,抗氧化酶活性减弱,脂质过氧化产物增多,形成动脉粥样硬化的早期病变;大豆异黄酮能抑制动脉粥样硬化小鼠的动脉损伤,增强Nrf2蛋白在核中的表达,提高机体抗氧化功能,降低氧化应激损伤。结论大豆异黄酮能通过诱导Nrf2核转位,增强机体抗氧化功能,减轻机体氧化应激损伤,从而发挥抗动脉粥样硬化的作用。     

槲皮素及其糖苷衍生物在Caco-2单层细胞上的吸收特征

目的探讨槲皮素及其糖苷衍生物在人小肠吸收模型Caco-2细胞单层上的吸收特征。方法采用Caco-2单层细胞模型,研究槲皮素、槲皮苷、异槲皮苷的肠道吸收特征,以LC-MS法测定槲皮素、槲皮苷、异槲皮苷、异鼠李亭。结果槲皮素及其糖苷衍生物孵育30～150min后,均能在透过侧检测到槲皮素、槲皮苷和异槲皮苷以及槲皮素的甲基化代谢产物之一异鼠李亭;透过的槲皮素及其代谢产物异鼠李亭含量在150min孵育时间内呈先升后降的趋势特征;而槲皮苷和异槲皮苷的透过量则随孵育时间呈持续升高的趋势,在孵育后期可检测到微量异鼠李亭。结论槲皮素、槲皮苷和异槲皮苷可以完整的分子形式被Caco-2细胞单层吸收,其吸收特征有显著差异,并在吸收过程中伴有广泛的代谢转化。[营养学报,2012,34(4):358-361,367]     

Nrf2对锰致GSH合成障碍的调控作用

锰（manganese, Mn）是一种常见的环境和职业污染物,其主要的毒作用部位是脑。锰神经毒性的主要病变部位位于黑质、纹状体、苍白球和尾状核等,主要表现为锥体外系神经受损。其主要机制之一是由于体内氧化-抗氧化系统的失衡,产生大量的ROS（reactive oxygen species, ROS）引起氧化损伤。谷胱甘肽（Glutathione, GSH）是体内重要的抗氧化物质,锰中毒时可以导致GSH合成障碍。核转录因子NF-E2相关因子2（Nuclear Factor-Erythroid 2 Related Factor 2, Nrf2）是一类具有抗氧化特征的转录因子,具有提高内源性GSH水平的作用。本文拟从锰暴露途径和神经毒性、锰与氧化应激、锰中毒对GSH的影响、Nrf2信号通路对锰致GSH合成障碍的调控四个方面作以综述。