兔视网膜色素上皮细胞移植的实验研究

目的 用改良的二步酶法制备视网膜色素上皮（RPE）细胞悬液，不做玻璃体切割，直接进行视网膜下间隙的移植。方法 用酶I（含220kU/L)透明质酸酶和0.1%胰蛋白酶）分离视网膜神经上皮层与RPE之间的联系，再用酶Ⅱ（含0.25%胰蛋白酶）将RPE从玻璃膜上分离下来获得悬浮的RPE细胞，用特制的移植针头通过人为造成的局限性视网膜脱离区将其移植入受体视网膜下间隙。结果 术后2周供体RPE细胞呈单层排列于受体视网膜下间隙并存活，未见明显炎症反应。电镜观察术后5周供体RPE细胞位于受体Bruch膜上并与受体感光细胞外节盘膜形成镶嵌关系。结论 改良的内路法可以将供体RPE细胞成功移植在受体眼视网膜下间膜，并至少存活7周。     

兔视网膜色素上皮细胞的体外培养及超微结构研究

目的：将兔视网膜色素上皮（ＲＰＥ）细胞进行体外培养,观察其超微结构。方法：用胰酶消化法培养兔ＲＰＥ细胞并传代。扫描电镜和透射电镜观察其超微结构。结果：原代培养的ＲＰＥ细胞含大量色素呈多角形,传代的细胞透明呈梭形。电镜显示它们具有细胞极性,含黑色素颗粒、各种细胞器、细胞间连接复合体,与体内一致。结论：培养的大量细胞可用于ＲＰＥ的体外实验研究。     

糖尿病兔胆囊细胞超微结构改变

【目的】观察四氧嘧啶致糖尿病兔的胆囊细胞超微结构的改变。【方法】选择大耳白兔26只，随机分为2组，即正常组、四氧嘧啶致糖尿病组，根据血糖情况，适量皮下注射胰岛素，控制餐后血糖在20mmol/L左右，饲养6周后处死观察胆囊超微结构的变化。【结果】糖尿病组14只人组，终末存活11只，电镜下发现糖尿病兔发生胆囊微血管内皮细胞功能不良，内皮细胞核呈坏死病理改变，胞浆有部分崩解，内皮细胞基底板呈高度增厚。胆囊平滑肌细胞可见细胞凋亡，细胞间可见成堆的大量髓磷体。胆囊上皮细胞、胆囊壁微血管内皮细胞均可见到超微结构的改变。【结论】实验结果证实糖尿病兔早期胆囊微血管内皮细胞及胆囊平滑肌细胞均发生超微结构的改变。     

近代西医对视网膜色素变性动物实验研究的新发现

Journal Nature于2006年11月8日报导Robert Maclaren与他的研究员通过植入即将成为光感细胞的干细胞在老鼠的视网膜替代己受损伤的光感受器细胞，结果发现它们的眼睛恢复视觉。这是第一次成功的的通过移植手术使老鼠眼睛恢复视觉。这也是给视网膜色素变性与老年黄斑变性的患者带来一线希望。Robert Maclaren是一位临床科学家，现任职于Institure of Ophthalmology，London，England，同时也是Moorfields　Eye　Hopital，London，England的眼科外科医生。他描述这是眼科领域里一项重大的里程碑，就象第一次成功的进行心脏移植手术一样。此项研究是由英国的医学研究学会（UK’S　Medical　Research　Council）赞助。在这次的研究，他们把即将成为光感细胞的干细胞植入病变的老鼠眼睛，在宿主视网膜成功的建立有效的，足够的联系而产生光感。以前也有科学家尝试把光感受器细胞从健康的眼睛植入病变的眼睛，但未能成功。Maclaren认为手术成功的关键在于移植手术时植入的干细胞已停止分化以及在干细胞开始变成光感细胞前进行植入。Robert　Lanza（Advanced　Cell　technology的研究与科学发展副总理）认为在实验室制造移植细胞已不成问题，已经能成功的把人的胚胎干细胞分化成光感细胞。Advanced　Cell　Techology的研究也提示人的上皮细胞，能濡养视网膜里的光感细胞，亦能防止他们继续退化。Maclaren说有实验研究证明干细胞（stemcell-1ikecellS）存在于成人的眼里，可以从患者身上获取，然后在他们分化成光感细胞后重植于视网膜。他说视网膜下腔足免疫赦免区域，排斥的机率减小，患者也不需要服抑制免疫力的药，使得人类的视网膜移植的成功有望成为现实。     

在视网膜色素变性中抑制细胞凋亡的研究进展

视网膜色素变性（retinitis pigmentosa，RP）是一组以视网膜光感受器和色素上皮功能进行性受损为主要特征的致盲性眼病。临床上以夜盲、进行性视野损害、眼底视乳头呈蜡黄色、视网膜血管变细、网膜散在骨细胞样色素沉着和视网膜电流图异常甚至熄灭为主要特征。RP是较为常见的眼科遗传病，发病率为1／4000，目前己分离出的致病基因达数十种，通过对RP患者视网膜组织病理学和免疫细胞化学的研究证实，     

肾上腺素诱导人视网膜色素上皮细胞凋亡的实验研究

目的　观察肾上腺素对体外培养人视网膜色素上皮 (RPE)细胞凋亡的影响 ,探讨细胞凋亡与中心性浆液性脉络膜视网膜病变的关系。方法　通过流式细胞技术 (FCM )、光镜、TUNEL细胞凋亡原位末端标记法检测肾上腺素和 β 受体阻滞剂普萘洛尔对体外培养的人RPE细胞凋亡的作用。 结果　人RPE细胞对低浓度的肾上腺素有一定耐受作用 ,10 pg/ml～ 10 4pg/ml肾上腺素组无明显凋亡的发生 ;10 5pg/ml～ 10 8pg/ml肾上腺素诱导RPE细胞 72h可以检测到凋亡峰 ,与对照组比较有显著性差异 (P <0 0 1) ;加入 10 3 pg/ml普萘洛尔可以提高RPE细胞对肾上腺素毒性作用的耐受 ,未检见RPE细胞凋亡的发生。TUNEL法光镜下观察到细胞核被蓝色染料标记的凋亡细胞。结论　肾上腺素可以诱导培养的人RPE细胞凋亡 ,这可能是中心性浆液性脉络膜视网膜病变早期病理改变的机制之一。     

兔视网膜色素上皮细胞培养和鉴定

目的：进行兔视网膜色素上皮细胞(RPE)细胞的体外培养，探讨RPE培养与鉴定方法，为研究其生理功能、生化特征和病理过程提供细胞模型。方法：用改良的眼杯固定法，将其固定在眼球托上，用胰酶直接消化视网膜色素上皮面，收取RPE细胞。作细胞形态学、免疫组织化学、免疫荧光鉴定。结果：RPE细胞培养早期生长活跃、胞核透明、胞浆含丰富黑色素颗粒，多巴氧化酶呈阳性反应．免疫组织化学染色和免疫荧光染色提示角蛋白表达强阳性。结论：培养的大量细胞可用于RPE的体外实验研究，多巴染色是鉴定RPE细胞一种较好的方法。     

糖尿病兔胆囊细胞超微结构改变

[目的]观察四氧嘧啶致糖尿病兔的胆囊细胞超微结构的改变.[方法]选择大耳白兔26只,随机分为2组,即正常组、四氧嘧啶致糖尿病组,根据血糖情况,适量皮下注射胰岛素,控制餐后血糖在20 mmol/L左右,饲养6周后处死观察胆囊超微结构的变化.[结果]糖尿病组14只入组,终末存活11只,电镜下发现糖尿病兔发生胆囊微血管内皮细胞功能不良,内皮细胞核呈坏死病理改变,胞浆有部分崩解,内皮细胞基底板呈高度增厚.胆囊平滑肌细胞可见细胞凋亡,细胞间可见成堆的大量髓磷体.胆囊上皮细胞、胆囊壁微血管内皮细胞均可见到超微结构的改变.[结论]实验结果证实糖尿病兔早期胆囊微血管内皮细胞及胆囊平滑肌细胞均发生超微结构的改变.     

兔视网膜色素上皮细胞移植术后急性排斥反应的病理学研究

目的：研究视网膜色素上皮细胞移植后排斥反应的发生及其控制过程。方法：以经巩膜外路移植方法行家兔同种异体视网膜色素上皮细胞移植,应用光镜及电镜观察移植后１４ｄ受体视网膜及移植细胞的病理学改变和免疫抑制剂对其影响。结果：单纯移植组移植排斥反应变化明显;免疫抑制剂组无排斥反应的变化。结论：家兔同种异体间视网膜色素上皮细胞移植有急性排斥反应的发生,但在控制排斥反应的情况下,移植细胞可保持原有形态     

微波致兔晶状体的超微结构改变

作者采用频率2450MHz、功率密度30mW/cm~2的微波,辐照大白兔头部,每天4小时共30天。在裂隙灯显微镜下检查大白兔晶状体,未发现有新的混浊产生,但光镜和电镜观察则已出现病理改变。     

胎兔视网膜色素上皮移植的初步研究

目的:观察受体Bruch膜和视网膜色素上皮(retrial pigment epithelial,RPE)受损情况下供体RPE细胞的增殖、分化和凋亡状况。方法:制备有色素胎兔RPE细胞悬液,移植至破坏了Bruch膜和RPE细胞的12只成年新西兰大白兔的视网膜下腔。左眼作为实验组,右眼作为对照,于术后3、7和14d, 采用Ki-67免疫组化和TUNEL染色,并提取RPE细胞DNA作琼脂糖凝胶电泳,观察Ki-67阳性RPE细胞及移植的RPE细胞和受体ONL细胞的凋亡百分率,行统计学分析。结果:术后随着时间的延长,实验组或对照组Ki-67阳性RPE细胞数显著增加(P<0.05);术后14 d实验组或对照组的TUNEL染色ONL核阳性百分率较术后3 d显著减少(P<0.05);术后实验组TUNEL染色阳性和细胞核深染的RPE细胞无显著增加(P>0.05);细胞核深染的RPE细胞百分率明显高于TUNEL阳性的细胞(P<0.01)。对照组未见TUNEL阳性的RPE细胞。术后14d,移植的RPE细胞DNA电泳出现典型的凋亡带。结论:在受体Bruch 膜、RPE受损状态下,供体的RPE细胞具有良好的增殖和分化能力。     

高速枪击伤后兔眼前节组织结构改变

目的研究眼钝挫伤的损伤机制的实验动物模中多以重力为主要致伤因素,文中以高速枪弹击伤制作兔眼眼前节动物损伤模型,探讨高速枪弹钝挫伤损伤机制。方法实验组12只新西兰兔用汽步枪以90m/s的速度射发TB弹(平均质量0.20122 g)击中左眼角膜中央区,对照组2只新西兰兔不致伤(单眼处理)。裂隙灯下观察伤后3h、6h、1d、3d、7d、14d6个时相点眼前节组织的病理改变。结果致伤后球结膜水肿逐渐加重,第3天开始缓解;角膜损伤严重,雾状混浊2周后才稍有好转,同时,周边可见大量新生血管长入;前房可见大量新鲜出血,实验结束时仍未吸收;瞳孔呈外伤性散大,10只实验兔眼出现不可逆的瞳孔变形;晶体浑浊。结论高速枪弹钝挫伤可对眼前节造成严重的损伤。     

缺氧条件下玉米黄质对视网膜色素上皮细胞生长的影响

目的〓〖HTK〗探讨缺氧条件下玉米黄质对体外培养视网膜色素上皮细胞生长的影响。〖HTW〗方法〓〖HTK〗建立人视网膜色素上皮细胞的缺氧模型（缺氧培养,体积分数为95%N2和体积分数为5%CO2）,用玉米黄质进行低、中、高不同剂量（10-8、10-7、10-6mol·L-1）干预。测定对照组、缺氧模型组和玉米黄质各剂量组总活性氧（ROS）产生量、脂质过氧化物(LPO)、总超氧化物歧化酶（SOD）活性以及细胞活力。〖HTW〗结果〓〖HTK〗缺氧条件下视网膜色素上皮细胞可产生大量活性氧自由基;与缺氧组模型相比,玉米黄质各剂量组可有效抑制ROS产生量和LPO,提高总SOD活性和细胞活力（P＜0.01）。〖HTW〗结论〓〖HTK〗玉米黄质可有效淬灭缺氧条件产生的活性氧,从而保护视网膜上皮色素细胞免受损伤。     

复明片对兔视网膜脱离后视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的研究复明片对兔实验性视网膜脱离后视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)增殖的影响。方法用有色家兔96只设正常对照组(A组),制作视网膜脱离模型后分模型组(B组)、西药对照组(C组)、复明片组(D组)。并于造模后7、14、21 d分别取视网膜组织制备细胞悬液,流式细胞仪检测各兔增殖细胞核抗原(PCNA)在视网膜神经上皮层的表达。结果脱离后视网膜神经上皮层PCNA阳性细胞表达均呈上升趋势,7d后开始下降,且复明片组相较其余各组比较均有统计学意义(P<0.05)。结论复明片通过恢复视网膜色素上皮与神经上皮之间的接触,阻止RPE的增殖即PCNA的表达。     

卵白蛋白介导白毛黑眼兔变应性鼻炎模型树突状细胞功能的改变

目的 比较观察卵白蛋白（OVA）诱导的白毛黑眼兔（WHBE兔）和日本大耳白兔（JW兔）变应性鼻炎（allergic rhinitis,AR）模型外周血来源树突状细胞（dendritic cells,DC）的功能,揭示WHBE兔对AR敏感的可能机制。方法 以OVA诱导建立WHBE兔和JW兔AR模型,每次激发后观察动物一般体征,进行鼻黏膜HE染色,观察组织病理学改变。分离外周血DC,流式细胞仪检测外周血DC表面分子CD86的表达以及DC摄取抗原的能力,同时,采用荧光定量PCR检测外周血DC甘露糖受体（mannose receptor,MR）的mRNA表达水平。进一步以CFSE标记T细胞,流式细胞仪检测外周血DC诱导T细胞增殖能力。结果 一般体征和HE染色观察显示,WHBE兔和JW兔模型组动物均表现为典型的变应性鼻炎症状和组织病理学改变,提示模型构建成功。WHBE兔AR模型组外周血DC CD86的表达不仅极显著高于正常对照组,亦极显著高于JW兔AR模型组（P<0.01,P<0.01）。正常稳态下,WHBE兔外周血DC MR的mRNA相对表达量极显著高于JW兔（P<0.01）,经OVA诱发建立AR模型,WHBE兔外周血DC MR的mRNA表达水平显著升高（P<0.05）,且显著高于JW兔模型组（P<0.05）。并且,WHBE兔模型组外周血DC摄取OVA₆₄₇的能力极显著高于正常对照组（P<0.01）,亦极显著高于JW兔模型组（P<0.01）。结论 WHBE兔DC对变应原更敏感,可能与其高表达抗原识别受体MR,具备更强的分化成熟、摄取抗原能力有关。     

姜黄素抑制脂多糖诱导视网膜色素上皮细胞炎症反应

目的：探讨姜黄素（curcumin）对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导视网膜色素上皮细胞（retinal pigment epithelial cells, RPE）炎症反应的抑制作用。方法：体外培养人RPE细胞株ARPE-19,CCK-8测定不同浓度姜黄素（5、10、20、30、40 ?滋mol/L）或不同浓度姜黄素和脂多糖（5 ?滋g/mL）刺激后细胞的活性,以此确定姜黄素的最适作用浓度。实时荧光定量（real-time poly－merase chain reaction, RT-PCR）检测白细胞介素（interleukin,IL）-8和IL-6的mRNA表达变化,酶联免疫吸附测定法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）测定IL-6和IL-8的蛋白表达水平。Western blot检测IκB-α、p-IκB-α蛋白表达变化。结果：CCK-8：不同浓度姜黄素对ARPE-19细胞活性无影响（P5 ?滋mol/L=0.998,P10 ?滋mol/L=1.000,P20 ?滋mol/L=0.124,P30 ?滋mol/L=0.092,P40 ?滋mol/L=0.078）,预先作用不同浓度的姜黄素对细胞活性有保护作用,20 ?滋mol/L保护作用明显（P=0.041）。PCR：姜黄素+LPS组IL-8的mRNA相对表达量（4.965±3.863）比LPS组（106.331±37.314）明显降低（P=0.000）,姜黄素+LPS组IL-6的mRNA相对表达量（0.992±0.374）比LPS组（2.175±0.560）明显降低（P=0.005）。ELISA：姜黄素+LPS组IL-8的蛋白表达量[（191.600±18.773） pg/mL]比LPS组[（589.025±38.880） pg/mL]明显降低（P=0.000）,姜黄素+LPS组IL-6的蛋白表达量[（113.906±27.947） pg/mL]比LPS组[（243.380±38.001） pg/mL]明显降低（P=0.000）。Western blot：与LPS组相比较,姜黄素+LPS组的p-IκB-α蛋白的表达水平降低（P=0.001）。结论：姜黄素通过抑制NF-κB活性抑制了脂多糖诱导视网膜色素上皮细胞的炎症反应,保护视网膜色素上皮细胞。     

CO2气腹对慢性肺功能不全兔血气影响的实验研究

目的本研究主要探讨腹腔镜手术中建立的CO2气腹对慢性肺功能不全兔动脉血气及肺功能的影响和损伤机制.方法设正常对照组、实验对照组(仅插入导气针)和气腹组,气腹组又分为气腹结束时和气腹结束后2、4、6、18h 5个时相点.兔肺气肿模型稳定后,施加CO2气腹,压力为10mm Hg(1mm Hg=0.133 kPa)和15mm Hg 两种,作用时间2h.检测各组及各时相点动脉血pH值、PaCO2和PaO2.结果气腹注入后动脉血气开始变化,气腹后2h pH值、PaO2降至最低,PaCO2升至最高,此后pH值、PaO2浓度开始升高,而PaCO2浓度开始降低,至18h后pH值、PaO2浓度比气腹结束时稍低,PaCO2浓度则稍高.15mm Hg压力下各指标变化则更为显著.结论在CO2 气腹条件下慢性肺功能不全机体易发生血流动力学紊乱和肺通气障碍、顺应性降低,导致了肺功能的损伤.气腹压力越高损伤越显著.