5种造血生长因子对造血祖细胞集落形成的影响

目的 探讨IL－3、IL－6、GM－CSF、G2、PIXY321对骨髓造血祖细胞集落形成的影响。方法 5种造血生长因子分别采用100、250、500、750、1000u/ml浓度,进行骨髓造血祖细胞集落培养,从中找出峰值浓度,然后在峰值浓度下进行集落培养,计数不同造血生长因子条件下所形成的集落。结果 IL－3、IL－6、GM－CSF、G2、PIXY321对造血祖细胞集落形成的峰值浓度分别为100、100、250、750、250u/ml。峰值浓度下,对CFU－E、BFU－Em、BFU－Eim、CFU－GM形成的作用强度不同,PIXY321条件下所形成的集落数最多。结论 这五种造血生长因子对骨髓造血祖细胞的集落形成均有促进作用,PIXY321效果显著。     

骨髓基质细胞体外扩增能力及支持造血的研究

目的：观察成纤维细胞集落形成单位（CFU－F）贴壁层的形成,体外传代培养,扩增的情况,研究各阶段（CFU－F）对粒－单核细胞集落形成单位（CFU－GM）和红细胞集落形成单位（CFU－E）生长及细胞因子对造血的支持作用,并测定骨髓有核细胞对基质细胞的粘附能力,方法：利用改进的液体培养法,培养骨髓基质细胞并传代,利用甲基纤维素半固体培养法,培养人骨髓细胞,观察CFU－GM,CFU－E集落数,：人骨髓基质细胞在体外可以传代培养4代并能扩增28倍,其中F3代对CFU－GM和CFUE的促进增殖作用最强,且对骨髓有核细胞的粘附能力最强,结论：人,骨髓基质细胞可体外传代扩增并支持造血细胞生长。     

RhIL-2对人骨髓CFU-GM,CFU-E和BFU-E的影响

采用甲基纤维素体外半固体培养法证明，50～1000U／mlrhIL－2单用对人骨髓造血祖细胞的CFU－CM，CFU－E及BFU－E无直接刺激增生作用；当与GM－CSF联用时．100～400U／mlrhIL－2其CFU－GM集落形成率明显高于单用GM－CSF的对照组（P＜0．05）；当与EPO联用时，其CFU－E及BFU－E集落形成率也明显高于单用EPO对照组（P＜0．05），而1000U／mlrhIL－2其3种集落形成数目呈下降趋势，可能有抑制作用。说明100～400U／mlrhIL－2可应用于协同GM－CSF及EPO体外扩增骨髓干／祖细胞以进行骨髓移植是有重要意义的。     

芍药苷对放射线致血虚证小鼠骨髓Epo和G-CSF基因表达的影响

目的:考察芍药苷对放射线致血虚证小鼠的生血作用及对骨髓Epo、G CSF基因表达的影响,为阐明芍药苷补血作用的分子机制提供依据。方法:采用3.5Gy60 Coγ射线全身1次性照射,制备小鼠血虚证模型,检测外周血象,骨髓集落培养观察并计数CFU GM、BFU E、CFU E、CFU mix ,RT PCR观察并检测骨髓Epo和G CSF基因表达。结果:芍药苷显著升高放射线致血虚证小鼠外周血白细胞数量和骨髓CFU GM、BFU E、CFU E、CFU mix数量,上调骨髓Epo和G CSF基因表达。结论:芍药苷具有生血作用,促进骨髓Epo和G CSF基因的表达可能是其生血作用的机制之一。     

儿童再生障碍性贫血骨髓祖细胞的测定和意义

目的通过对再生障碍性贫血 (AA)患儿红系 (BFU E、CFU E)、粒单核系 (CFU GM)及巨核系 (CFU Meg)祖细胞培养 ,了解骨髓祖细胞增殖情况。方法抽取 4 7例AA患儿骨髓分别作四类祖细胞培养 ,在 7、14d测定其集落数。结果 4 7例AA患儿中 ,四类集落数均值与对照组比较均有显著下降 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1) ,且四类集落数均值在AA三种类型中 ,基本上随病情加重均值逐步下降 ,其中四类集落数低于对照组下限的患儿分别为BFU E 36 .17%、CFU E 85 .11%、CFU GM 74 .4 7%、CFU Meg 91.4 9 %。BFU E、CFU GM和CFU Meg随着患儿疾病的加重 ,低于对照组下限的患儿百分比同步上升 ,且三者的表现与外周血三系表现一致 ,而CFU E却未见上述现象。结论在部分AA患儿中存在着四类祖细胞培养集落数的下降 ,且基本上与患儿病情成正比 ;BFU E的变化较CFU E更能代表患儿骨髓红系祖细胞的变化。     

高原缺氧条件下急性放射损伤造血系统变化特点的研究

目的：探讨高原缺氧条件下,急性放射损伤小鼠存活率和造血系统的变化特点。方法：小鼠模拟5000m高原缺氧3d后,接受6Gy一次性γ射线全身照射,照后继续在缺氧条件下饲养,观察其存活率。外周血指标,骨髓有核细胞数,血清TGF－β1和EPO的含量,CFU－GM和CFU－E集落形成能力的改变,实验动物血清对CFU－GM和CFU－E集落形成的影响。结果：发现模拟高原缺氧条件下可提高急性放射损伤小鼠的存活率,并在照射后第3天,表现为外周血红细胞和骨髓红系造血损伤较平原照射损伤为但外周血白细胞和骨髓粒系造血损伤则有所加重。结论：模拟高原缺氧条件,可使小鼠红系造血功能对急性放射损伤的抗性有所增强。     

全反式维甲酸对正常人脐血及正常小鼠造血细胞作用的研究

目的 了解全反式维甲酸（ATRA）在体外对正常人脐血造血细胞的作用以及其在体内对正常小鼠造血细胞的作用。方法 （1）在人脐血单个核细胞（MNC）的粒系集落形成单位（CFU－GM），红系集落形成单位（BFU－E）和混合集落形成单位（CFU－GEMM）的半固体培养基中加入不同浓度的维甲酸，观察其对人脐血造血细胞集落形成的影响；（2）用含0.5μmol/L ATRA和IL－6，G－CSF，EPO，SCF的体系培养人脐血MNC，第7，14天时检测扩增后的人脐血有核细胞（NC）数，CD34^ 细胞数并观测其CFU－GM，BFU－E和CFU－GEMM形成；（3）用不同剂量的ATRA处理BABL／c小鼠，分别于处理后2，4，6，8，10d检测小鼠外周血中CD34^ 细胞，WBC，RBC及PLT含量的变化，从而观察ATRA在体内对造血2细胞的影响。结果 （1）一定浓度的ATRA在体外能明显促进人脐血CFU－GM的生长，但对BFU－E，CFU－GEMM的形成无影响；高浓度时抑制CFU－GM，BFU－E和CFU－GEMM的形成。促进CFU－GM形成的最佳ATRA浓度为0．5μmol/L，浓度为5．0μmol/L时开始起抑制作用；当浓度达到10μmol/L时，无任何集落形成。（2）0．5μmol/LATRA联合IL－6，SCF，G－CSF和EPO须体外孵育人脐血MNC，第7天和第14天时，ATRA组NC数与对照组相比无显性差异；但其CD34^ 细胞数明显高于对照组，差异有显性（P＜0．05）；且ATRA组CFU－GM， CFU－GEMM及BFU－E的形成数均明显高于对照组（P＜0．05）；（3）不同剂量的ATRA处理小鼠8d后，其WBC及CD34^ 细胞均开始升高，与对照组相比，差异有显性（P＜0．05）；但不同剂量的ATRA对小鼠的RBC及PLT均无明显影响。结论 （1）浓度为0．1－0．5μmol/L的ATRA在体外能促进人脐血造血细胞CFU－GM的生长，但对BFU－E及CFU－GEMM的形成无影响；当浓度达到5μmol/L时，ATRA对各系集落的形成均起抑制作用，且随浓度的增加抑制作用增强。（2）液体培养时，ATRA联合造血细胞刺激因子能延迟人脐血CD34^ 细胞的分化。（3）在正常小鼠体内ATRA能促进小鼠WBC及CD34^ 细胞的增殖，但对小鼠RBC及PLT无影响。     

小鼠骨髓基质细胞系QXMSC1促进骨髓移植后的造血重建

目的：观察骨髓基质细胞系QXMSC1在骨髓移植后早期能否加速造血重建。方法：用脾克隆形成单位（CFU-S）测定QXMSC1对造血干细胞的影响。计数每根股骨有核细胞数，用半固体琼脂克隆形成法测定粒单系祖细胞（CFU－GM），微量甲基纤维素法测定红系祖细胞（CFU-E及BFU－E）。结果：QXMSC1细胞可明显增加CFU－S克隆数。在骨髓移植后第10天，QXMSC1可增加骨髓有核细胞数，增加CFU－GM、CFUE克隆数。移植后第20天，这些作用更明显，且对BFU-E也有明显的刺激作用。结论：骨髓基质细胞系QXMSC1与骨髓细胞共移植可明显促进骨髓移植后早期造血功能重建。     

脐血造血细胞体外集落培养最佳收获时机的探讨

目的 探讨脐血（CB）多系造血集落培养在不同培养条件下脐血造血细胞体外扩增的最佳收获时机。方法 将从新鲜CB标本中分离出的单个核细胞（MNC）分别接种于已建立的无血清培养基，该培养基分别含单用人骨髓基质细胞、单用细胞因子及细胞因子联合入骨髓基质细胞（HBMSC）支持培养体系。在0、6、10及14d各时间点分别取细胞进行巨细胞集落形成单位（CFU—MK）、红乐爆式集落形成单位（BFU—E）及粒单细胞集落形成单位（CFU—GM）培养。结果在体外培养过程中，第10d时各组CFU—MK、BFU—E及CFU—GM数均高于组内其它时间点（P〈0．05）；在含HBMSC支持培养的组集落生成数优于其它组（P〈0．05）。结论 脐血MNC体外培养过程中，第10d可能是收获的最佳时机。FIBMSC能更好地维持造血干／祖细胞的活性，使其集落形成能数得到有效扩增。     

补肾复方冲剂影响再生障碍性贫血患者造血祖细胞研究

在探讨补肾复方冲剂治疗肾阳虚型再生障碍性贫血 (简称再障 )临床疗效基础上 ,观察其对于再障患者骨髓造血祖细胞影响。以补肾复方冲剂治疗 30例 ,复方皂矾丸、康力龙各治疗 15例。采用甲基纤维素培养法观察 3组病例治疗前、后骨髓造血祖细胞水平变化 ,并与正常献血员对照。结果示补肾复方组临床有效率为 80 % ,明显高于复方皂矾丸 ( 4 0 % )与康力龙组 ( 4 6 67% ) ;且补肾复方组治疗有效病例的骨髓造血祖细胞 (BFU E及CFU GM )恢复明显优于复方皂矾丸与康力龙组 ;3组间无效者骨髓BFU E及CFU GM水平无明显变化。说明补肾复方冲剂治疗肾阳虚型再障疗效不仅高于复方皂矾丸和康力龙组 ,且其有效者血液学恢复更为完全。     

钝顶螺旋藻多糖对辐射所致小鼠造血功能抑制的对抗影响

目的　观察钝顶螺旋藻多糖 (Spirulinaphatensispolysaccharide ,SPP)对辐射损伤小鼠造血功能的影响。方法　小鼠5Gy全身照射后 5、10、15d分别取材 ,作骨髓粒单系、红系造血祖细胞培养 ,造血干细胞集落测定 ,以及外周血常规计数等。SPP用量为 12 5mg·kg 1 ·d 1 ,ip,伤后连续注射 6d。结果　辐射损伤后骨髓有核细胞数、粒单系CFU GM、红系CFU E、BFU E及造血干细胞CFU S集落数均显著低于正常对照组 (P <0 .0 1) ,但应用SPP后 ,上述各项指标数值 ,均比同伤情的不用药组显著提高 ,尤以伤后10d恢复最快 (P <0 .0 1)。结论　SPP对辐射损伤有明显保护和促进造血恢复的作用。     

rhIL－3对人骨髓粒单祖细胞集落的影响

应用骨髓细胞体外培养技术，观察了国产重组人白细胞介素３（ｒｈＩＬ－３）对人骨髓粒单祖细胞集落的影响。结果显示，ｒｈＩＬ－３能刺激正常骨髓细胞形成由粒细胞或（和）单核细胞构成的细胞集落，这种效应在一定范围内与ｒｈＩＬ－３剂量呈依赖关系。     

多种细胞因子在CD34+细胞增殖分化中的作用

目的:探讨血小板生成素（TPO）等多种细胞因子在分离后的脐血造血干/祖细胞体外扩增中的作用。方法:在集落培养体系及体外液体扩增体系中,分别用含有和不含有TPO细胞因子组合实验,比较其结果。结果:含有TPO组其诱导红系爆式集落单位(BFU-E )和粒巨细胞集落形成单位(GFU-GM)集落形成倍数、细胞总数和CD34⁺细胞增殖倍数明显高于不含有TPO组。 结论：TPO与干细胞因子(SCF)、白细胞介素3(IL-3)等其他细胞因子协同可明显提高早期造血干/祖细胞扩增效率。     

解毒生血法对造血系统促进作用的实验研究

本实验报告了清热解毒中药的复方制剂对小鼠造血系统的促进作用。结果表明，无论是经胃肠道给药还是在体外培养体系中加药都能够刺激造血祖细胞增殖，使小鼠骨髓细胞形成红系造血祖细胞及粒系造血祖细胞的数量都显著增加，增加的情况与用药剂量明显相关，从而证明了清热解毒药可以生血这一新观点。     

小鼠颌下腺组织培养上清液影响红系造血的实验研究

为了研究颌下腺是否合成造血因子以及合成的造血因子的可能种类 ,进一步研究颌下腺对血发生的调控 ,采用造血祖细胞体外培养和流式细胞术检测细胞表面标记物。结果显示 ,小鼠颌下腺组织培养上清液(SGCM)在体外培养中 ,对早期和晚期红系造血祖细胞有促进增殖和分化的作用 ,实验组集落数远远高于阴性对照组 (P<0 .0 5 ) ;晚期红系祖细胞 (CFU- E)培养体系雄性小鼠颌下腺组织培养上清液组集落数明显高于雌性组 (P<0 .0 5 ) ,早期红系祖细胞 (BFU- E)培养体系没有明显差异 (P>0 .0 5 ) ,贫血模型小鼠颌下腺促进 BFU- E和 CFU- E增殖和分化的活性高于正常小鼠 (P<0 .0 5 ) ,IL- 3与 SGCM有协同刺激作用 ,说明小鼠颌下腺确能合成和分泌促进红系造血的细胞因子 ,雄性小鼠颌下腺促进 CFU- E增殖和分化细胞因子的活性高于雌性小鼠。本实验为进一步研究小鼠颌下腺合成造血因子和其与造血调控的关系提供了实验依据。     

用小鼠骨髓内皮细胞条件培养液代替造血刺激因子培养CFU-GM和HPP-CFC

利用大于 10kD组分的小鼠骨髓内皮细胞条件培养液 (mBMEC CM)作刺激物体外琼脂培养CFU GM ,与rmGM CSF合用培养HPP CFC获得成功。就培养CFU GM和HPP CFC而言 ,用细胞因子作刺激物与并用大于 10kD组分的mBMEC CM作刺激物相比较 ,以后者的CFU GM及HPP CFC产率最高     

激活骨髓和淋巴因子激活的杀伤细胞生物活性的实验研究

目的 :证实激活骨髓 (Activated bone marrow,ABM)具有与淋巴因子激活的杀伤 (LAK)细胞不同的生物学效应。方法 :应用重组白细胞介素 - 2 (r IL - 2 )、抗 CD3 单抗体外激活骨髓和外周血单个核细胞 ,以 MTT比色分析法测定 ABM、L AK细胞的杀伤活性 ,采用甲基纤维素半固体培养法进行粒 -巨噬细胞系祖细胞 (CFU- GM)、红系祖细胞 (BFU- E)培养。结果 :r IL- 2 +抗 CD3 单抗激活的 ABM组杀伤活性最强 (6 5 .8± 9.2 ) % ,r IL - 2激活的 ABM组次之为 (5 6 .3± 7.9) % ,活性强于相同条件下的 L AK组 ,两组差异具有显著性 (P<0 .0 1)。增殖倍数与相同条件下的 LAK细胞相比差异亦具有显著性。体外激活 3～ 5 d的 ABM与同期培养的未激活的骨髓细胞相比 BFU- E、CFU- GM形成率差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ,LAK细胞则不具有造血祖细胞活性。结论 :ABM的杀伤活性和增殖效应明显强于 L AK细胞 ,且能保持造血祖细胞活性 ,抗 CD3 单抗能够促进 r IL - 2诱导的 ABM抗肿瘤活性和增殖效应 ,不损伤造血祖细胞活性 ,是优于 LAK细胞的过继免疫疗法。     

骨髓增生异常综合征发病机制探讨

目的 :探讨骨髓增生异常综合征 (MDS)的发病机制。方法 :采用造血祖细胞体外培养技术 ,观察 40例MDS患者骨髓细胞粒 巨噬细胞集落形成单位 (GM CFU)体外生长情况及患者血清、骨髓细胞对正常人造血祖细胞体外增殖作用的影响。结果 :MDS中的难治性贫血 (RA) 74%为造血干细胞缺损 (HSCD) ;原始细胞增多的难治性贫血 (RAEB)、转化中的原始细胞增多的难治性贫血 (RAEB T)、慢性粒单细胞白血病 (CMML) 10 0 %为免疫介导型 (IC) ;环形铁粒幼红细胞增多的难治性贫血 (RAS)仅 2例 ,造血微环境缺陷 (HMED)及IC型各 1例。结论 :RA、RAS与RAEB、RAEB T、CMML患者可能是两种本质不同的群体 ,研究MDS的发病机制对克服治疗上的盲目性 ,提高疗效、判断预后具有重要意义     

次氯酸钠溶液冲洗根管对粪肠球菌的作用研究

[目的]研究次氯酸钠溶液对根管内粪肠球菌的作用效果。[方法]将20个离体前磨牙的感染根管标本随机均分为两组,5．25％次氯酸钠溶液冲洗组（NaClO0）和0．9％生理盐水冲洗组（NaCl）。在根管预备、冲洗后取样培养,分别检测24、48h、1周时粪肠球菌的菌落数目。[结果]24、48h,5．25％NaClO组粪肠球菌完全被杀灭,菌落计数为0CFUmL^-1,NaCl组均数分别为1．2×10^6CFUmL^-1、1．7×10^6CFUmL^-1;1周时,5．25％NaClO组有极少量的粪肠球菌被检出,菌落计数为109CFUmL^-1,而NaCl组均数为3．8×10^6CFUmL^-1,两组于3个时间点的差异均具有显著性意义（P〈0．01）。[结论]5．25％次氯酸钠溶液冲洗根管能立即抑制粪肠球菌,但不能完全清除粪肠球菌。