珊瑚转化型羟基磷灰石与纯相β-磷酸三钙对成骨细胞增殖活性实验研究

目的:研究珊瑚转化型羟磷灰石(CHA)、纯相β一磷酸三钙(β-TCP)对成骨细胞增殖的影响.从细胞水平评价生物材料的生物相容性,为组织工程人工骨材料的选择提供实验依据.方法:培养ST2细胞株并诱导生成成骨细胞,接种在CHA、β-TCP种植材料的表面,采用附着细胞直接计数法、MTT法检测种植后3,5,7天的细胞增殖率.结果:CHA、β-TCP均具有较好的细胞相容性,成骨细胞在CHA表面的增殖速度较β-TCP快.讨论:体外复合细胞培养可以直接观察细胞与两种可降解的生物材料(CHA、β-TCP)复合生长的情况,可以较好地评价材料细胞相容性.结论:珊瑚转化型羟基磷灰石(CHA)细胞相容性更好,更适宜作为骨组织工程支架材料.     

BMSCs复合PRP修复牙种植体周围骨缺损的实验研究

目的:探讨骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)复合富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)修复牙种植体周围骨缺损的可行性。方法:拔除6只Beagle犬双侧下颌8颗前磨牙,术后1个月抽取犬骨髓,采用全骨髓贴壁法培养BMSCs,并向成骨细胞诱导,将BMSCs与PRP、β-磷酸三钙(β-tricalcium phosphate,β-TCP)分别复合形成组织工程化复合物。术后2个月,在实验犬每侧下颌缺牙区分别植入BLB4mm×11mm种植体4颗,同时在每个种植体的近中制造4mm×4mm×5mm大小的骨缺损,分别植入BMSCs-PRP复合凝胶、自体骨、BMSCs-β-TCP复合物以及空白对照,分别于种植术后4、8、12周各处死2只犬,行大体、环境扫描电镜及组织学检查,观察各个时期各组骨缺损区的成骨情况以及新生骨与种植体间骨结合情况。结果:3个实验组在术后4、8、12周均有不同程度的骨组织再生,而空白对照组只有少量骨组织再生。各个时期内扫描电镜观察显示BMSCs-PRP组新生骨与种植体间的骨结合较其他三组多。结论:BMSCs-PRP复合凝胶是一种良好的骨修复材料,具有促进新骨形成及种植体骨结合的效应。     

改良型富血小板纤维蛋白与β-磷酸三钙复合物诱导成骨作用与机制

目的 探讨改良型富血小板纤维蛋白（advanced platelet-rich fibrin,A-PRF）与β-磷酸三钙（β-tricalcium phosphate,β-TCP）构成比例对兔股骨缺损模型骨形成的作用及机制,为临床治疗骨缺损提供新思路。方法24只新西兰大白兔构建骨缺损模型并分为模型组、1∶1复合物组（A-PRF∶β-TCP=1∶1）、2∶1复合物组（A-PRF∶β-TCP=2∶1）与4∶1复合物组（A-PRF∶β-TCP=4∶1）,每组6只。复合物组在骨缺损处填充复合材料,模型组不充填材料,8周后安乐法处死动物采标本。采用micro-CT测定股骨缺损区新生骨的骨密度（bone mineral density,BMD）、骨体积分数（bone volume fraction,BV/TV）、骨小梁厚度（trabecular thickness,Tb.Th）、骨小梁分离度（trabecular separation/spacing,Tb.Sp）。HE染色观察新骨及新生血管形成情况;扫描电镜观察新生骨组织的形态变化;酶联免疫法检测新生股骨组织中磷酸化丝裂原活化蛋白激酶p38(ph...     

两种人工骨材料在修复即刻种植体周骨缺损成骨效果的实验研究

目的:比较β-磷酸三钙(β-tricalcium phosphate,β-TCP)、珊瑚转化型羟基磷灰石生物陶瓷(coral-hydroxyapatite,CHA)两种人工骨材料在引导骨再生中成骨质量的差别,为临床应用提供指导.方法:拔除 Begeal 犬的下颌双测第二三四前磨牙,并植入种植体,在种植体颈部颊侧植被缺损,并以不同人工骨材料修复.结果:种植体均未脱落,缺损区粘膜愈合良好. A 组:1、4个月时新骨生成率分别为23.00%±0.82%、58.00%±1.83%,种植体颈缘到颊侧骨缺损底部的距离为1.05±0.13mm、1.09±0.10mm. B 组:1、4个月时的新骨生成率分别为23.75%±0.96%、57.75%±1.89%,种植体颈缘到颊侧骨缺损底部的距离分别为1.09±0.10mm、1.13±0.10mm. C 组:1 个月和4个月时的新骨生成率分别为4.25%±0.96%、16.50%±1.91%,种植体颈缘到颊侧骨缺损底部的距离分别为4.38±0.17mm、3.75±0.13mm.结论: CHA 及β-TCP 都具有良好的骨引导作用,可用于即刻牙种植骨缺损的修复.     

P-15对β-TCP多孔材料修复兔下颌骨缺损的影响

目的本研究旨在探讨β-TCP(β-磷酸三钙)/P-15(P-15多肽)复合材料修复兔下颌骨骨缺损的能力。方法将β-TCP完全浸入到P-15多肽溶液中,制备出β-TCP/P-15多孔复合材料。在日本大耳白兔的下颌骨体部制备出骨缺损区,随机植入β-TCP/P-15(TP组)、β-TCP(T组)及空白对照组,在术后第4周、8周和12周分别处死动物,进行大体观察、组织学染色观察及成骨量(新生骨面积)的测定。结果随着时间的延长,三组骨缺损区的成骨量均增加,同一时间的不同组之间,以及同一组的不同时间段之间均有显著差异(P<0.001),TP组成骨量增加最快;各时间点TP组的成骨量均大于同一时间的对照组(P<0.001)。结论本实验中所用的β-TCP/P-15复合材料具有良好的骨诱导活性、降解性、生物相容性以及成骨性能,可促进骨缺损的修复,具有进一步的研究和临床应用价值。     

Clinical value of oral repair membrane and β-tricalcium phosphate in the treatment of the postoperative bone defect of jaw cyst

目的 探讨口腔修复膜和β-磷酸三钙（β-TCP）在颌骨囊肿术后骨缺损修复中的临床效果。方法 对81例颌骨囊肿病例进行回顾性分析,收集临床资料,比较传统手术刮治（A组,27例）、刮治后放置修复膜覆盖创面（B组,27例）和刮治后放置骨粉充填骨缺损并覆盖修复膜（C组,27例）3种治疗方式的疗效。结果 81例患者术后均无复发。3组患者术前CT值差异无统计学意义（P<0.05）;术后3、6、12个月复查CT,3组CT值间差异具有统计学意义（P<0.05）,C组优于B组和A组（P<0.05）。结论 相对于传统的颌骨囊肿刮治疗法,应用修复膜具有较好的成骨效果,联合应用β-TCP和修复膜可获得更佳的疗效。     

犬骨髓基质细胞和β-磷酸三钙复合物在裸鼠体内的成骨性能

目的：观察犬骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells，BMSCs）和支架材料β-磷酸三钙（β-TCP）复合物植入裸鼠体内的成骨情况。方法：首先在体外构建BMSCs和β-TCP的复合物，大小3mm^3左右。实验分为3组：裸鼠体内植入单纯β-TCP，植入未经体外培养的BMSCs和β-TCP复合体，植入体外培养5d的BMSCs和β-TCP复合体。植入后1周、1个月和3个月取出标本，进行大体观察、X线片观察、灰度测定、组织学观察及成骨图像分析。结果：植入后3个月，BMSCs＋B-TCP体外培养组X线片密度最高，DigiDens X线片灰度值3组分别为：0．605〉0．555〉0．473（P〈0．01）。HE染色显示：1个月后，BMSCs＋β-TCP体外培养组见新骨和血管形成；3个月后，BMSCs＋β-TCP体外培养组新骨形成明显，并有大量血管生成．BMSCs＋β-TCP体外未培养组少量成骨，单纯β-TCP组未见明显成骨。成骨罔像分析3组成骨密度均数分别为：23．99％、8．36％、1．23％（P〈0．05）。结论：BMSCs＋β-TCP复合物植入裸鼠体内4周出现新骨形成．3个月时．骨形成明显并有血管化生成。     

富血小板血浆与多孔矿化骨修复兔下颌骨双皮质骨缺损作用

目的探讨富血小板血浆(PRP)与多孔矿化骨(BPBM)修复下颌双皮质骨缺损作用。方法 54只健康白兔分为3组,制作下颌双皮质骨缺损模型,治疗1组植入PRP+BPBM+GBR,治疗2组植入BPBM+GBR,对照组植入明胶海绵,用X线、光学显微镜、电子显微镜观察术后4、8、12周骨缺损修复情况,测定血中碱性磷酸酶(ALP)、钙磷变化。结果 PRP血小板为全血4.19⁴.43倍;X线片示在4、8、12周时治疗1和2组骨密度明显高于对照组;HE染色见在4周时治疗1组缺损边缘有少许新骨生成,移植物部分降解,治疗2组新骨形成较少;在8周时治疗1组新骨数量明显多于治疗2组;12周时治疗1组充填物吸收被新骨代替,新生骨骨小粱和骨陷窝增多;治疗2组成骨细胞和新骨数量比治疗1组少;对照组新骨形成明显减少。电镜发现,治疗1组各时间点成骨细胞突起和向移植物浸润能力、成骨细胞内线粒体和粗面内质网数量多于治疗2组,治疗2组成骨细胞内线粒体数量和成骨细胞突起向移植物浸润能力强于对照组。在4、8、12周时治疗1组和治疗2组碱性磷酸酶和钙磷含量与对照组比有显著性差异。结论联合PRP和BPBM及GBR技术对下颌双皮质骨缺损有良好修复能力,其作用与PRP中高浓度血小板分泌生长因子和BPBM多孔支架结构有关。     

3D打印技术制备β-TCP仿生骨支架的形态结构特点及其成骨性能分析

目的 分析3D打印技术制备β-磷酸三钙（β-TCP）仿生骨支架的形态结构特点及其成骨性能。方法 随机选取24只新西兰兔，建立股骨髁部缺损模型。采用3D打印技术制备β-TCP仿生骨支架，将实验兔随机分为2组，每组12只。其中对照组未植入任何材料；实验组植入β-TCP仿生骨支架，观察4周、8周和12周后的两组骨修复结果，评价其成骨性能。结果 实验组术后第4周、8周、12周时的骨组织学评分均高于对照组，骨小梁厚度、数目、骨小梁体积/总体积均高于对照组（P<0.05）。3D打印的仿生骨支架的直径、高度、孔隙率以及抗压强度、弹性模量与天然松质骨之间的差异无统计学意义（P>0.05）。结论 3D打印技术制备的β-TCP仿生骨支架，可促进骨缺损的修复，支架形态学结构及成骨性能与松质骨相近。     

富血小板血浆与骨诱导活性材料复合物促种植体周骨缺损修复的实验研究

目的:观察富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)、PRP复合骨诱导活性材料(osteoinduction active material,OAM)对种植体周围骨缺损的修复效果,探讨其作为种植体周围骨缺损修复材料的可行性.方法:Beagle犬4只,拔除双侧下颌第一、二、四前磨牙,3个月后植入种植体,制备种植体周围骨缺损并植入相应骨移植材料.A组植入PRP/ OAM,B组植入PRP,磷酸三钙,对照组植入磷酸三钙.种植术后8、16周各处死2只动物,进行组织学观察,能谱分析种植体-新骨界面Ca2+含量,采用SPSS13.0软件包对数据进行单因素方差分析.结果:8周时,实验A组新骨与种植体形成区段性骨结合;实验B组种植体边缘可见新骨形成,但量较少;对照组种植体边缘为纤维性界面.16周时,实验A组可见哈佛系统,实验A、B组新骨与种植体形成骨整合;对照组为纤维性结合.能谱分析显示,8、16周时各组间钙含量百分比均存在显著差异.实验A组最高,实验B组其次,对照组最低.结论:PRP及PRP/OAM应用于种植体周围骨缺损中,可以促进骨缺损的修复,并形成理想的种植体-骨结合界面.     

富含血小板血浆诱导口腔种植体周围骨再生的实验研究

目的:通过犬下颌骨种植周围缺损模型,探讨与评估富含血小板血浆与磷酸三钙联合应用后,对种植体骨结合的效应。方法:采用自身对照,在6只成年杂种犬双侧下颌骨下缘各植入2颗纯钛种植体(共24颗)并在种植体周围造成缺损。右下颌2颗为对照组,在缺损处填入磷酸三钙和生理盐水的混合物,左下颌2颗为实验组,在缺损处填入磷酸三钙和富血小板血浆的混合物;术后4、8、12周分别处死2只犬,先后行大体观察、电镜观测和组织学观察。结果:大体观察实验组比对照组缺损处愈合更平整且种植体更稳定;4、8、12周电镜观测时均示实验组和对照组有显著性差异,实验组种植体骨结合率高;组织学观察在实验组可见大量成骨细胞、骨细胞及新生骨小梁,新生骨组织较成熟,而对照组成骨细胞少、骨小梁细而少、纤维组织多见。结论:富含血小板血浆可能具有促进新骨形成及种植体骨结合的效应。     

在即刻种植术中应用两种不同方法处理骨缺损效果的比较

目的:比较珊瑚羟基磷灰石(CHA)复合富血小板血浆(PRP)或覆盖生物膜在即刻种植术中对骨再生效果的影响。方法:8只成年实验用犬,拔除双侧第2、3、4下颌前磨牙,同期植入种植体,制备种植体颈部的环状骨缺损,每侧植入3颗种植体,将种植体随机分为3组:A组,植入珊瑚羟基磷灰石和富血小板血浆的混合物;B组植入珊瑚羟基磷灰石,并覆盖可吸收胶原膜;C组作为对照组,不植入任何材料。术后3个月处死动物,先后进行大体观察、组织形态学观察、及生物力学测定,比较组间差异。结果:A组新生骨质较优,骨量多,B组骨缺损区无软组织长入,两者间骨结合率差异无统计学意义(P>0.05)。C组骨再生效果较差,与A、B两组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。3组标本生物力学测试结果差异均有统计学意义。结论:两种处理方法对种植体周的骨再生均有积极作用,富血小板血浆在促进骨组织生长方面优势明显,生物膜在阻挡软组织长入方面效果较优。     

Facilitation of beta-tricalcium phosphate-induced alveolar bone regeneration by platelet-rich plasma in beagle dogs: a histologic and histomorphometric study

PURPOSE: The effects of 2 graft materials, beta-tricalcium phosphate (Cerasorb) alone and a combination of Cerasorb and platelet-rich plasma (PRP), on the bone regeneration process were evaluated in the canine mandible. MATERIALS AND METHODS: The mandibular premolars of 12 beagle dogs were surgically removed. The extraction sockets were filled with Cerasorb on the control side and a mixture of Cerasorb and PRP on the test side. Bilateral biopsy samples were taken from the graft insertion sites at 6, 12, and 24 weeks after surgery. Sections were prepared from the undecalcified resin-embedded samples. RESULTS: Six weeks after grafting, the proliferation of cellular osteogenic mesenchyma was more abundant in the test group. The histomorphometric data revealed a significantly higher percentage of bone area in the test group (45.9%) than in the control group (30.8%) (P < .05). Twelve weeks after grafting, the test group still had some advantage over the control group in terms of bone regeneration (52.5% bone in the test group versus 49.4% in the control group, P < .05). Twenty-four weeks after grafting, bone-forming activity was nearly equal in the 2 groups, and the bone area in the 2 groups did not differ significantly (62.9% and 61.9%, respectively) (P < .05). DISCUSSION: The histomorphometric results suggested more intensive bone regeneration in the early healing phase following the topical application of PRP. CONCLUSION: The increase in bone density facilitated by grafting with a combination of Cerasorb and PRP requires thorough study in humans.     

不同植骨材料在上颌窦开窗提升植骨同期种植体植入术的初期临床效果评价

目的 对不同植骨材料在上颌窦开窗提升植骨同期种植体植入术的初期临床效果进行评价。方法 根据上颌窦植骨材料的不同分为3组：β-磷酸三钙（β-TCP）组;同种异体冻干骨组;β-TCP+同种异体冻干骨组。分别评估各组术后临床情况、修复时移植骨垂直高度保留率、修复时的种植体的稳定系数,并加以比较。结果 3组初期临床效果良好,无失败病例。β-TCP组垂直骨高度保留率（58.82±8.17）%,种植体的稳定系数75.36±3.72。同种异体冻干骨组垂直骨高度保留率（61.81±10.26）%,种植体的稳定系数78.20±3.77。β-TCP+同种异体冻干骨组垂直骨高度保留率（60.56±7.06）%,种植体的稳定系数75.06±4.20。各组数据无统计学差异。结论 3种不同植骨材料在上颌窦开窗植骨同期种植体植入术中均具有良好初期临床效果。     

Bone regeneration of canine artificial alveolar clefts using bone-marrow-derived mesenchymal stromal cells and β-tricalcium phosphate: A preliminary study

ObjectiveCleft lip and palate is a congenital disease showing the highest incidence in the maxillofacial field. In this study, bone regeneration in the canine artificial alveolar clefts using bone-marrow-derived mesenchymal stromal cells (MSCs) and β-tricalcium phosphate (β-TCP) was attempted.MethodsArtificial clefts were prepared in 2-year-old dogs and the animals were divided into three groups. Canine MSCs cultured on β-TCP were grafted in the MSCs/β-TCP group. β-TCP without cells was grafted in the β-TCP group. Nothing was grafted in the control group.ResultsSerial X-ray photographs showed that absorption of β-TCP and substitution with bone progressed favorably and regenerated bone had smooth continuity with the surrounding bone in the MSCs/β-TCP group. In contrast, a bone defect remained at 13 weeks after the cleft formation in the other two groups. Bone mineral density of regenerated bone in the MSCs/β-TCP group was between the density of normal bone and that of β-TCP. Bone mineral content of the cleft region in the MSCs/β-TCP group was three times higher than that in the other two groups. Histologically, the artificial bone in the MSCs/β-TCP group showed replacement with bone. In the control group, most of the cleft region was filled with fibrous tissue.ConclusionsBone regeneration using MSCs and β-TCP presents the possibility of a less-invasive new approach to alveolar bone reconstruction.     

血管化组织工程骨模型的体内构建

目的：用动静脉束、β-磷酸三钙和钛网预构建血管化组织工程骨模型。探索该模型的可行性。方法：解剖分离出新西兰兔左腿的隐动静脉束并预构建肌肉袋。在肌肉袋中放置β-磷酸三钙＋钛笼＋动静脉束。于1、2、3月分别处死动物行HE染色及CD31免疫组织化学染色。结果：HE及CD31免疫组化染色可以看出,该模型成骨及血管生成情况良好。结论：中心动静脉束能促使组织工程植入物成骨及血管生成,该动物模型是可行的。     

载辛伐他汀β-磷酸三钙支架复合脂肪干细胞修复兔颅骨缺损

目的：应用辛伐他汀(simvastatin)作用于脂肪干细胞,研究其对细胞生长、成骨、成血管分化的影响;利用β-磷酸三钙(β-tricalcium phosphate,β-TCP)三维支架材料负载辛伐他汀,与脂肪干细胞复合,构建组织工程骨,用于兔颅骨缺损模型的修复。方法：原代培养兔脂肪干细胞(rabbit adipose-derived stem cells, rASCs),分别以含0、0.01、0.1和1 μmol/L辛伐他汀的培养液培养,计数法检测细胞数目;以0、0.05、0.1 μmol/L浓度辛伐他汀培养ASCs,1、7 d后,实时定量PCR检测成骨、成血管基因的表达(RUNX2、OPN、OCN、VEGF); 7 d后行ALP染色;14 d后行茜素红染色。12只新西兰大白兔颅顶双侧8 mm缺损,分别以4组材料修复(A: β-TCP,B: β-TCP/Cell,C: β-TCP/Sim,D: β-TCP/Cell/Sim),每组6例,植入8 周后取材,进行组织学观察。采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学分析。结果：0.05 μmol/L辛伐他汀对脂肪干细胞RUNX2、OCN、OPN和VEGF等成骨、成血管基因的表达具有明显促进作用,碱性磷酸酶染色和von Kossa染色更为明显;植入体内8周后,β-TCP/Cell/Sim组材料的成骨面积显著大于其他3组。结论：0.05 μmol/L辛伐他汀在体外对ASCs具有明显的促成骨作用,载辛伐他汀β-TCP复合脂肪干细胞可促进兔颅骨缺损的修复。     

BMSC/β-TCP修复犬下颌骨缺损的实验研究

目的:通过动物实验探索β-磷酸三钙(β-TCP)复合组织工程骨应用于颌骨缺损修复的可行性。方法:3只杂交犬的双侧下颌骨人工制备3 cm×1 cm×1 cm缺损后,采用自体对照实验方法。实验侧植入骨髓基质细胞和β-磷酸三钙复合物(BMSC/β-TCP),对照侧仅植入β-TCP,在植入后均使用四环素荧光标记。分别于术后1、3、6个月进行CT扫描,之后处死实验犬,制备组织标本,进行HE染色、苦味酸品红染色、四环素荧光检测,并加以评价。对分析数据结果使用SAS 6.0进行统计学分析,P<0.05为有统计学意义。结果:BMSC/β-TCP修复犬颌骨缺损,有大量的编织骨生成;对照组虽然在6个月后也有一定量的骨质形成,但未见到编织骨。四环素标记结果显示,实验组术后6个月,骨质形成速率较对照组高;对照组在最初的3个月,骨质形成明显比实验组低。在第3～6个月期间,实验组和对照组骨质形成均明显加快。结论:BMSC/β-TCP修复犬的颌骨缺损可以形成质量较高的板层骨,而单纯β-磷酸三钙所形成的骨质纤维较紊乱,哈弗氏骨管的数量也较少。     

犬骨髓基质细胞体外成骨的实验研究

目的:研究犬骨髓基质细胞(bonemarrowderivedstromacell,BMSC)定向分化为成骨样细胞(osteoblasts-like,OBL)后的体外成骨能力和细胞内钙离子浓度的变化。方法:分离、培养犬骨髓基质细胞,并使用诱导培养液进行成骨诱导,取第3代成骨样细胞。通过碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)染色和vonKossa染色检测BMSC分化为OBL的程度。检测细胞增殖率,比较细胞与多孔支架材料β-磷酸三钙(β-TCP)黏附前后的生长情况,用对BMSC分化前后、OBL黏附多孔β-TCP前后细胞内钙离子浓度荧光值进行统计学分析。结果:ALP染色和vonKossa染色均显示为阳性。细胞增殖率曲线结果显示,细胞黏附多孔β-TCP后增殖率没有明显差异。统计学分析发现,BMSC分化前后和OBL黏附β-TCP前后细胞内钙离子浓度荧光值均有明显的差异,P<0.05,有统计学意义。结论:犬OBL有很好的体外增殖能力和成骨能力,黏附多孔β-TCP之后,细胞的生长状况没有差别,多孔β-TCP材料对BMSC细胞内钙离子浓度有很大的影响。