莫诺苷和马钱素对人神经母细胞瘤株SY5Y生长的影响

目的：观察山茱萸环烯醚萜苷进一步分离所得有效成分莫诺苷和马钱素对人神经母细胞瘤株SY5Y生长的影响。在体外寻找具有神经营养作用，促进神经细胞生长的最适浓度。为进一步研究药物对细胞损伤的保护作用提供理论依据。方法：利用MTT代谢率测定细胞存活率以筛选莫诺苷促进神经细胞生长的最佳有效浓度。以MTT代谢率、乳酸脱氢酶漏出率、细胞轴突长度、胞体面积为观察指标，分析莫诺苷和马前素对人神经母细胞瘤株SY5Y生长的影响。     

山萸肉炮制前后4种环烯醚萜苷类成分的含量变化研究

目的:研究山萸肉炮制前后4种环烯醚萜苷类成分的含量变化情况。方法:以同一种山萸肉为原料,分别依法炮制,制成酒蒸、酒炖、加压酒蒸萸肉,再采用高效液相色谱法测定各样品中4种环烯醚萜苷类成分的含量。色谱柱为Waters sunfire C18(250mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(梯度洗脱),柱温为(30±1)℃,流速为0.8 ml/min,进样量为10μl,莫诺苷、獐牙菜苷、马钱苷和山茱萸新苷的检测波长分别为240、246、237、219 nm。结果:炮制前,莫诺苷、獐牙菜苷、马钱苷和山茱萸新苷在山萸肉中的含量分别为10.66、0.56、4.90、1.48 mg/g,但炮制后4种成分均有不同程度的下降,其中酒炖萸肉中莫诺苷、獐牙菜苷和马钱苷的含量最低,加压酒蒸萸肉中山茱萸新苷的含量最低。结论:山萸肉炮制后4种环烯醚萜苷类成分的含量均有下降。     

酒龙胆中总多糖和总环烯醚萜苷保肝作用的研究

目的研究酒龙胆中总多糖和总环烯醚萜苷对四氯化碳(CCl4)所致大鼠急性肝损伤的保护作用。方法将50只大鼠随机分为空白组、模型组、总多糖组、总环烯醚萜苷组和阳性对照药联苯双酯组,给药7 d后,除空白组外,其余各组大鼠腹腔注射2.5%CCl_4植物油溶液(1.5 mL·kg~(-1)),复制急性肝损伤模型。测定各组大鼠血浆中丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素-6(IL-6)以及肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量以及HE染色法观察各组大鼠急性肝损伤程度。结果总多糖和总环烯醚萜苷均能使肝损伤大鼠体内SOD、GSH-Px、GSH的含量升高、MDA的含量降低,其中总多糖的升高或降低作用更优;总多糖可使肝损伤大鼠体内AST、ALT的含量下降,总环烯醚萜苷则几乎没有这些作用;总多糖和总环烯醚萜苷均能使肝损伤大鼠体内TNF-α、MCP-1、IL-6的含量降低,其中总环烯醚萜苷的降低作用更优。肝组织病理切片显示,总多糖和总环烯醚萜苷均一定程度减轻肝脏组织病理性改变,其中总多糖较总环烯醚萜苷作用更强。结论酒龙胆中总多糖、总环烯醚萜苷均对CCl4所致的大鼠急性肝损伤有一定保护作用,其中总多糖较总环烯醚萜苷作用更强。     

正交试验优选山茱萸总环烯醚萜苷的提取、纯化工艺

目的优选山茱萸总环烯醚萜苷的提取、纯化工艺。方法以总苷含量为指标,选择料液比、乙醇浓度和提取温度为考察因素,采用L9(34)正交试验来优选提取工艺;选择洗脱剂浓度及用量为考察因素,采用单因素试验考察SP825型大孔吸附树脂的纯化工艺。结果山茱萸总环烯醚萜最佳提取工艺为料液比1∶25、乙醇浓度10%、提取温度95℃。纯化工艺为10%乙醇洗脱10 BV。结论优选的山茱萸总环烯醚萜苷提取工艺稳定可行,SP825型大孔吸附树脂可富集山茱萸总环烯醚萜苷。     

山茱萸环烯醚萜苷类成分对AGEs诱导HUVEC损伤的保护作用

目的探讨山茱萸环烯醚萜苷类特征成分马钱苷、莫诺苷对糖基化终末产物(AGEs)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用。方法体外培养HUVEC,用马钱苷、莫诺苷(终浓度分别为100、10、1μmol·L-1)预孵1 h后,再加入AGEs(200 mg·L-1)刺激,并设氨基胍为阳性对照,孵育24 h后,采用MTT法检测马钱苷、莫诺苷对HUVEC增殖率的影响;采用试剂盒检测细胞上清液中一氧化氮(NO)、内皮素(ET-1)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和血管细胞黏附分子-1(VCAM-1);采用Western blot法检测HUVEC中糖基化终末产物受体(RAGE)、核转录因子(NF-κB)的蛋白表达。结果山茱萸环烯醚萜苷类特征成分马钱苷、莫诺苷能抑制AGEs导致的HUVEC损伤,与空白对照组比较,模型组细胞RAGE、NF-κB蛋白表达上调(P<0.01),ET-1、MCP-1、VCAM-1分泌增加(P<0.01),NO水平降低(P<0.01)。马钱苷、莫诺苷给药组能不同程度地下调RAGE、NF-κB蛋白表达,减少ET-1、MCP-1、VCAM-1分泌,升高NO水平,与模型组比较差异具有显著性(P<0.05~0.01)。结论山茱萸环烯醚萜苷类特征成分马钱苷、莫诺苷对AGEs导致的HUVEC损伤具有明显的保护作用,其作用机制为下调RAGE蛋白表达,抑制RAGE受体相关NF-κB信号通路发挥抗炎作用,从而改善内皮细胞功能。     

山茱萸环烯醚萜苷主要药理作用研究进展

山茱萸为山茱萸科植物山茱萸(Cornus officinalis Sieb.et Zucc.)的干燥成熟果肉,别名蜀枣、鼠矢、鸡足、山英肉、实枣儿、枣皮、英肉等.临床常以除去种的成熟果实入药.其味酸、涩,微温,归肝、肾经,有补益肝肾、涩精固脱的功效,临床用于内热消渴、眩晕耳鸣、腰膝酸痛、阳痿遗精、遗尿、尿频、崩漏带下、大汗虚脱等.近年来研究发现,山茱萸的有效部位山茱萸环烯醚萜苷(CIG)具有广泛的生物学活性,能够抑制免疫作用、抗炎、抗血栓等,对糖尿病的多种并发症具有治疗作用,尤其对神经系统疾病有很好的治疗作用.     

HPLC法同时测定不同产地及不同采收时间山茱萸中3个环烯醚萜苷的含量

目的:采用高效液相色谱法测定不同产地及不同采收期山茱萸中的莫诺苷、马钱苷及獐牙菜苷3个环烯醚萜苷类的含量。方法:采用Welchrom-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,柱温35℃,以甲醇-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL.min-1,检测波长240 nm。结果:莫诺苷、马钱苷和獐牙菜苷的进样量分别在12.0～600.0,8.64～432.0,3.72～186.0μg.mL-1范围内,与色谱峰面积呈良好线性关系(r=0.9997,n=6);平均回收率(n=6)分别为96.3%,103.4%,98.8%。不同产地的山茱萸中,莫诺苷以西北大学果园采收的含量最高,马钱苷以陕西省丹凤县产的含量最高,獐牙菜苷以西北大学果园采收的含量最高;不同采集时间的西北大学果园山茱萸中莫诺苷、马钱苷和獐牙菜苷的含量范围分别为15.21～50.50,2.72～8.21,0.30～1.43 mg.g-1。结论:本方法操作简单、快速,重复性好,可同时测定山茱萸中莫诺苷、马钱苷和獐牙菜苷的含量。     

独一味环烯醚萜苷外用止血作用研究

目的 研究藏药独一味有效部位总环烯醚萜苷外用止血效果. 方法 采用小鼠断尾出血模型、兔腹主动脉出血模型、兔耳中动脉出血模型和大鼠肝脏组织损伤出血模型,比较淀粉、云南白药、独一味水提物和独一味总环烯醚萜苷的外用止血效果. 结果 独一味总环烯醚萜苷组断尾出血停止时间为(64.8±25.0) s,独一味水提物组为(97.2±44.0) s,云南白药组为(105.1±65.0) s,淀粉对照组为(124.8±43.2) s.总环烯醚萜苷组平均肝脏损伤出血停止时间为(93.8±39.5) s, 独一味水提物组为(101.1±25.9) s, 云南白药组为(74.0±26.3) s, 淀粉对照组为(152.8±47.1) s.独一味总环烯醚萜苷外用使兔腹主动脉、耳中动脉平均出血时间显著缩短,与淀粉对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),而且优于同剂量的云南白药,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).独一味水提物与淀粉对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),但止血时间长于总环烯醚萜苷组. 结论 独一味总环烯醚萜苷外用对小鼠断尾、兔腹主动脉和耳中动脉以及大鼠肝脏止血效果明显,且优于水提物和云南白药.     

环烯醚萜类化合物在阿霉素肾病大鼠肠道菌中的代谢差异研究

目的 以梓醇、京尼平苷、车叶草苷、龙胆苦苷和莫诺苷为代表化合物,考察环烯醚萜类化合物在阿霉素肾病大鼠肠道菌群的代谢产物及代谢途径。方法 通过构建阿霉素肾病模型,在厌氧条件下将5种环烯醚萜单体分别与离体大鼠肠道菌群孵育8,24 h,采用高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱(HPLC-Q-TOF-MS)对代谢产物进行定性分析。通过对照品对照、准确分子量、裂解方式等手段,分析推测这5种环烯醚萜在肠道菌的作用下均可发生I相代谢反应,包括水解、氧化、还原、甲基化反应。结果 孵育24 h后,京尼平苷和莫诺苷,其苷元水平相应较高;而梓醇、车叶草苷、龙胆苦苷的原型和苷元均相应较低。京尼平苷、车叶草苷、龙胆苦苷和莫诺苷均检测到含N代谢产物,其水平和孵育时间有关。在该体系中未发现Ⅱ相代谢产物。结论 该结果揭示了5种环烯醚萜类化合物在阿霉素肾病大鼠肠道菌中的代谢差异,为其体内研究及进一步开发提供了依据。     

独一味镇痛作用及其有效成分研究

目的研究独一味镇痛活性,镇痛作用部位及其有效成分。方法通过小鼠和大鼠福尔马林致痛模型(第Ⅰ相急性疼痛和第Ⅱ相中枢敏感化疼痛)、大鼠脊神经结扎致神经源性疼痛模型和大鼠骨癌疼痛模型研究独一味水提物的镇痛活性;给予黄酮和不同环烯醚萜苷含量的独一味提取物以及环烯醚萜类单体,考察其对小鼠福尔马林致痛模型镇痛效果的变化研究独一味镇痛的有效成分;通过脊髓给予山栀子苷甲酯和8-O-乙酰山栀子苷甲酯以确定独一味镇痛的作用部位。结果独一味水提物灌胃小鼠可抑制福尔马林导致的Ⅱ相中枢敏感化疼痛,但对Ⅰ相急性疼痛没有影响;也可以抑制大鼠脊神经结扎和骨癌疼痛导致的痛觉过敏。镇痛作用呈剂量依赖性,在三个模型中独一味的最大抑制率分别为82%,50%和54%,半数有效量分别为133.7,236.5和242.9 mg·kg-1。连续给药7 d在大鼠神经源性疼痛模型中不产生镇痛耐受。独一味提取物的镇痛活性随其中总环烯醚萜苷含量的提高而增强而黄酮(1000 mg·kg-1)无镇痛作用,在小鼠福尔马林致痛模型中,独一味提取物中总环烯醚萜苷的含量与其对Ⅱ相疼痛的镇痛活性呈正性相关。脊髓给予山栀子苷甲酯和8-O-乙酰山栀子苷甲酯剂量依赖式抑制大鼠福尔马林Ⅱ相疼痛,抑制率为70%～80%。结论独一味对慢性疼痛包括神经源性疼痛和骨癌疼痛表现较强的镇痛活性,山栀子苷甲酯和8-O-乙酰山栀子苷为代表的环烯醚萜苷是其镇痛的有效成分,其镇痛主要作用部位在脊髓。     

环烯醚萜类化合物的结构和生物学活性研究进展

目的：详细综述了新发现的、具有较新结构特点的环烯醚萜类化合物及生物学活性研究,为环烯醚萜类化合物的结构活性研究提供新的思路。方法：查阅总结近30年国内外发表的关于环烯醚萜新化合物的文献,总结结构和活性的研究概况。结果：环烯醚萜的主要结构类型环烯醚萜苷类、裂环环烯醚萜和环烯醚萜酯。环烯醚萜类化合物主要临床生物活性具有神经系统的保护作用、抗肿瘤作用和保肝作用等。结论：环烯醚萜类化合物的分布广泛,具有较大的药用价值。通过对环烯醚萜类化合物结构和生物学活性的总结和分析,探讨环烯醚萜化合物结构与活性之间的关系,为药物开发和利用提供文献和数据支持。     

HPLC法测定鸡矢藤药材中环烯醚萜苷含量

目的:采用高效液相色谱和二极管阵列检测器法(HPLC-DAD)同时测定鸡矢藤药材中3种主要环烯醚萜苷类成分的含量,研究不同产地鸡矢藤药材中环烯醚萜苷的含量.方法:色谱分析采用Shim-pack VP-ODS C18分析柱,0.1%的甲酸(A)和乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,检测波长:240nm.结果:3个环烯醚萜苷[鸡矢藤苷酸(1)、鸡矢藤苷(2)、鸡矢藤苷酸甲酯(3)]在标准曲线内均有较好的线性(r2>0.9999),且该方法具有良好的精密度,灵敏度,重复性和准确度;应用所建立的方法同时测定了8批鸡矢藤药材中三个环烯醚萜苷的含量.结论:本文首次报道建立HPLC-DAD方法同时测定鸡矢藤中主要环烯醚萜苷类成分含量,该方法简单、快速、可靠,适用于鸡矢藤药材及其制剂的质量控制.     

毛冬青中环烯醚萜苷类化学成分的分离与鉴定

目的研究毛冬青中的环烯醚萜苷类化学成分。方法将硅胶、ODS、Sephadex LH-20柱色谱、制备薄层色谱、半微量制备型高效液相色谱法相结合,对毛冬青的体积分数70%乙醇溶液提取物的乙酸乙酯萃取物进行分离、纯化,通过~1H-NMR、~(13)C-NMR等波谱数据鉴定分离得到化合物的结构。结果分离鉴定了7个环烯醚萜苷类化合物,分别为oleoacteoside(1)、nuezhenide(2)、7″-epifraxamoside(3)、(7″S)-7″-ethoxyoleuropein(4)、(7″R)-7″-ethoxyoleuropein(5)、(7″S)-7″-methoxyoleuropein(6)、(7″R)-7″-methoxyoleuropein(7)。结论化合物3-7为首次从冬青属植物中分离得到的环烯醚萜苷类化合物。     

筋骨草中总环烯醚萜苷的提取动力学研究

目的研究筋骨草中总环烯醚萜苷提取过程的动力学机制。方法采用比色法,测定不同提取温度条件下筋骨草水提液中总环烯醚萜苷的含量。以Fick扩散定律为基础,建立其提取过程的动力学方程,并由此推算出提取的速率常数、活化能、半衰期等动力学函数值。结果所得的动力学模型能较好地描述筋骨草中总环烯醚萜苷提取的动态过程,其表观活化能为45.18 kJ.mol 1。结论筋骨草中总环烯醚萜苷提取过程的动力学符合一级动力学方程特征。     

藏药独一味总环烯醚萜对纤溶系统的实验研究

目的探讨独一味总环烯醚萜苷对大鼠机体纤溶系统的影响。方法通过对大鼠优球蛋白溶解时间、全血浆凝块溶解时间以及血浆复钙溶解时间的测定,评价独一味总环烯醚萜苷对纤溶功能和凝血功能的影响。结果独一味总环烯醚萜苷能明显延长大鼠优球蛋白溶解时间和全血浆凝块溶解时间,延长离体大鼠血浆复钙时间。结论独一味总环烯醚萜苷能通过抑制纤溶激活物而发挥止血作用。     

山茱萸环烯醚萜苷对D-GalN/TNF-α损伤肝细胞的保护作用研究

目的研究山茱萸环烯醚萜苷(CIG)对D-Gal N联合TNF-α造成的肝细胞损伤模型的保护作用。方法提取并分离、制备CIG;体外培养人源性肝细胞L-02,建立D-Gal N/TNF-α致L-02细胞损伤模型,以总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、细胞内钙离子浓度为指标,观察CIG对损伤肝细胞的保护作用;Western blot检测p-PERK、p-e IF-2α、caspase-3蛋白的表达,进行机制研究。结果44 mg·L^-1D-Gal N联合100μg·L^-1TNF-α可作为细胞损伤模型的剂量。CIG高、中、低剂量预保护组可明显提高损伤细胞的活性,明显提高损伤细胞的SOD活性、T-AOC能力,与模型组比较差异具有显著性(P<0.05),降低MDA活性,但低浓度组对MDA活性的降低不明显;Western blot结果显示,CIG不同浓度组可以明显降低内质网应激关联蛋白p-PERK、p-e IF-2α、凋亡关联蛋白caspase-3表达。结论山茱萸环烯醚萜苷对D-Gal N/TNF-α造成的肝细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与增强细胞的抗氧化能力,降低内质网应激造成的损伤,降低凋亡相关蛋白的表达有关。     

响应面法优化生地黄中4种环烯醚萜苷提取工艺及热稳定性考察

目的优选生地黄中环烯醚萜苷类成分的提取工艺条件,并考察温度对其成分含量变化的影响。方法以4种环烯醚萜苷类成分(梓醇、桃叶珊瑚苷、地黄苷D、地黄苷A)含量为评价指标,通过单因素试验考察不同提取方法、提取时间、溶媒种类、温度、溶媒量对生地黄提取量的影响,并结合响应面法和Box-Behnken优化生地黄提取工艺参数;通过测定4种成分在不同温度下含量的变化,考察其热稳定性。结果生地黄环烯醚萜苷类成分提取最适条件为:加10倍量20%乙醇,浸渍36 h,浸渍温度35℃。验证试验结果显示该条件下提取的4种环烯醚萜苷类成分总量均值为7.520 mg·g~(-1),与预测值7.707 mg·g~(-1)相比,RSD<5%。热稳定性考察结果表明温度对生地黄环烯醚萜苷类成分含量影响较大,4种环烯醚萜苷类成分在加热8 h内均发生了不同程度的降解。结论优选的环烯醚萜苷类成分提取工艺条件稳定可行,在提取液浓缩干燥过程中,为防止生地黄中环烯醚萜苷类成分的降解,应采用低温方法,避免长时间高温受热。     

独一味总环烯醚萜苷分离纯化工艺的优化

目的 优化独一味总环烯醚萜苷的制备工艺,获取纯度相对较高的总环烯醚萜苷。方法 以甲醇-水为流动相,梯度洗脱方式建立分离分析独一味总环烯醚萜苷的高效液相色谱方法,实现各组分的最佳分离,统计、记录其三维吸收图谱,并结合紫外全波长扫描,对前期制备的独一味总环烯醚萜苷中影响纯度的杂质特征进行分析,根据杂质特性优化大孔树脂结合聚酰胺柱制备过程,紫外实时监测,剔除杂质,产品溶液经冷冻干燥获得冻干粉,并以HPLC对比前后制备工艺产品成分差异。结果 工艺优化前产品中环烯醚萜苷含量为69.06%,优化后含量为90.60%,含量提升21.54%;本次制备总产率为16.70%（以水提取物的质量为参照）,总环烯醚萜苷转移率为74.72%（相对于水提取物中总环烯醚萜苷的质量）。结论 优化过程简单,操作步骤可控,易于实现,纯化效果显著。     

威弛搽剂治疗家兔急性软组织损伤的实验研究

目的:研究糙叶败酱中环烯醚萜苷元成分体外抗小鼠结肠癌细胞株C26作用和对小鼠结肠癌(C26)移植性肿瘤的作用。方法:采用四唑盐(MTT)比色法研究糙叶败酱中环烯醚萜苷元PS-Ⅰ和BJ3401对小鼠结肠癌细胞株C26生长的影响;于F1小鼠皮下注射小鼠结肠癌细胞株(C26)建立小鼠结肠癌移植性肿瘤模型,观察糙叶败酱中总环烯醚萜苷元对结肠癌移植性肿瘤小鼠的影响。结果:环烯醚萜苷元PS-Ⅰ、BJ3401可显著抑制小鼠结肠癌细胞株C26的生长,并且具有一定的剂量依赖关系;总环烯醚萜苷元可显著减轻荷瘤鼠瘤重。结论:糙叶败酱中环烯醚萜苷元具有抗结肠癌的作用。     

山茱萸环烯醚萜苷对家兔、大鼠血小板聚集及出血时间的影响

目的：研究山茱萸环烯醚萜苷（CIG）对血小板聚集和出血时间的影响。方法：应用比浊法测定家兔（体外实验）及血瘀模型大鼠（体内实验）的血小板聚集率;断尾法观察大鼠出血时间。采用肾上腺素加冰水刺激法制备血瘀大鼠模型。结果：在体外实验中,CIG（0.75～3 mg/mL）能明显抑制二磷酸腺苷（ADP）或花生四烯酸（AA）诱导的家兔血小板聚集（P〈0.05,P〈0.01）,对血小板活化因子（PAF）诱导的血小板聚集无显著影响,但更大剂量（6～12 mg/mL）能抑制PAF诱导的血小板聚集（P〈0.01）。在体内实验中,CIG大剂量（180 mg/kg）灌胃给药能显著抑制ADP诱导的血瘀模型大鼠血小板聚集（P〈0.01）,延长正常大鼠的出血时间（P〈0.05）。结论：山茱萸环烯醚萜苷具有抗血小板聚集作用,大剂量能够延长出血时间。