芪棱汤对脑缺血-再灌注大鼠 Caspase- 3蛋白表达的影响

目的观察芪棱汤对脑缺血再灌注大鼠Caspase-3蛋白表达的影响。方法采用颈内动脉线栓加环扎法复制大鼠脑缺血再灌注模型,于再灌注后不同时间点采用免疫组化法检测大鼠Caspase-3蛋白表达,采用TUNEL法检测凋亡细胞数。结果补阳还五汤组与芪棱汤组Caspase-3蛋白表达明显低于模型组,芪棱汤组Caspase-3蛋白表达明显低于补阳还五汤组;补阳还五汤组及芪棱汤组均能减少缺血半暗带神经元细胞的凋亡,而以芪棱汤组尤为显著。结论芪棱汤可以通过抑制Caspase-3蛋白表达,减少神经细胞的凋亡,达到神经保护作用。     

芪棱汤对大鼠脑缺血再灌注后兴奋性氨基酸的影响

目的观察芪棱汤对脑缺血再灌注损伤后兴奋性氨基酸（EAA）的影响,为益气养阴活血法治疗缺血性中风提供实验依据。方法将大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组及芪棱汤组。采用颈内动脉线栓加环扎法复制大鼠脑缺血再灌注模型。于再灌注后不同时间段观察大鼠缺血脑组织的谷氨酸（Glu）、门冬氨酸（Asp）的含量。结果模型组再灌注后各时间段的Glu含量及再灌注后24h段的Asp含量较假手术组显著减少,补阳还五汤组在再灌注24h段的Glu含量较模型组升高,芪棱汤组在再灌注24h段的Glu、Asp含量较模型组均明显升高,且芪棱汤组在再灌注24h段升高Glu、Asp方面优于补阳还五汤组。结论芪棱汤可降低EAA的神经毒性,从而对脑缺血再灌注所导致的脑损伤起保护作用。     

芪棱汤对大鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用

目的探讨芪棱汤对大鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用.方法采用线栓加环扎法制备大鼠脑缺血-再灌注模型,将其分为空白对照组、假手术组、缺血再灌注组、芪棱汤组与补阳还五汤组.对大鼠进行神经学评分,并测定脑梗死边缘区 Ca2 浓度.结果缺血 3h时各组神经学评分及细胞 Ca2 相近,缺血 12h之后各个时点两用药组神经学评分及 Ca2 浓度均低于缺血再灌注组,芪棱汤组数据又低于补阳还五汤组.结论芪棱汤对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤有保护作用.     

芪棱汤对脑缺血再灌注大鼠caspase-9蛋白的影响

目的 探讨芪棱汤对大鼠局灶性脑缺血再灌注不同时间点caspase-9表达的影响及其对局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 采用改良线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞致短暂局灶性脑缺血模型，于各灌注时间点拔出线栓使血流再通，形成大鼠脑缺血再灌注模型。大鼠随机分为假手术组、生理盐水组、芪棱汤去养阴药组、芪棱汤组，于缺血2h再灌注2、4、6、12、24、48h进行神经功能评分，用免疫组织化学法检测各组梗死边缘区caspase-9表达的动态变化。结果 各组大鼠神经功能评分差异均有显著性，芪棱汤组明显优于其他各组。随着再灌注时间的延长，caspase-9阳性细胞计数的表达不断增加，至再灌注24h时到达高峰，再灌注48h时阳性细胞计数表达开始减少。再灌注各时点各组阳性细胞计数显示，芪棱汤去养阴药组和芪棱汤组的阳性细胞数均少于对照组；再灌注4h时芪棱汤组与芪棱汤去养阴药组阳性细胞计数差异无显著性；再灌注6、12、24、48h时芪棱汤组阳性细胞数少于芪棱汤去养阴药组。结论 芪棱汤与芪棱汤去养阴药可能通过抑制caspase-9的释放和激活而减少脑缺血再灌注损伤，且芪棱汤疗效优于芪棱汤去养阴药。     

芪棱汤对脑缺血再灌注损伤大鼠VEGF、CD34的影响

目的从血管生成的角度探讨芪棱汤抗大鼠脑缺血再灌注损伤的机理。方法将大鼠随机分为假手术组、模型组、芪棱汤去养阴药组及芪棱汤组。采用颈内动脉线栓法复制大鼠脑缺血再灌注模型。在再灌注不同时点采用免疫组织化学法测VEGF;CD34标记微血管计数。结果假手术组VEGF表达极弱;除缺血再灌注6h外,各相应再灌注时间点12h、1d、3d、7d,芪棱汤组及芪棱汤去养阴药组较模型组的VEGF表达明显增多,且芪棱汤组与芪棱汤去养阴药组有显著差异。CD34标记微血管计数再灌注各时间点芪棱汤组、芪棱汤去养阴药组与模型组比较均有显著差异;芪棱汤组与芪棱汤去养阴药组有显著差异。结论芪棱汤通过促进VEGF表达的上调,促进微血管新生,可能是其抗脑缺血再灌注损伤的作用机制之一。     

芪棱汤对大鼠脑缺血再灌注后卡配因(Calpain1)通路的影响

1材料与方法1·1实验材料1·1·1实验动物SD雄性大鼠126只,SPF级,体重300g±30g,月龄4月左右,由广东省医学实验动物中心提供,合格证号2005A010。1·1·2主要药品与试剂芪棱汤精制液、芪棱汤去养阴药精制液由深圳市人民医院制剂中心提供;Calpain1小鼠单克隆抗体及MAP2小鼠单克隆抗体购自天津灏洋生物有限公司,PowerVision二步法试剂盒及DAB显色系统购自北京中山生物技术有限公司,TUNEL凋亡检测试剂盒购自福州迈新生物技术公司。1·2实验方法1·2·1动物分组大鼠126只用随机数字法分为以下5组:芪棱汤组(治疗组)、芪棱汤去养阴药组(治…     

芪棱汤对大鼠脑缺血再灌注损伤后MAP-2表达的影响

目的探讨芪棱汤对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后微管相关蛋白-2（MAP-2）表达的影响及其神经保护作用机制。方法将大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、补阳还五汤组（对照组）及芪棱汤组（治疗组）。复制大鼠局灶性脑缺血再灌注模型并给予相应药物。在再灌注不同时点采用免疫组织化学法测MAP-2表达。结果正常组、假手术组可见MAP-2广泛表达；模型组、对照组及治疗组梗死中心区和周围区在再灌注即刻均出现表达下降，中心区随着再灌注时间延长持续下降，而梗死周围区在再灌注24h降至最低后表达有所上升；治疗组可增加MAP-2表达、促进其修复，以再灌注24h及48h明显，与模型组有明显差异，对照组在48h MAP-2表达亦增加，而治疗组效果更显著。结论芪棱汤能减少MAP-2丢失和促进其修复，具有良好的神经保护作用。     

芪棱汤对大鼠脑缺血再灌注后热休克蛋白70的影响

目的观察芪棱汤对脑缺血再灌注损伤后热休克蛋白70(Hsp 70)的影响,为益气养阴活血法治疗脑梗死提供实验依据。方法将大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组及芪棱汤组,并予相应药物腹腔注射。采用颈内动脉线栓加环扎法复制大鼠脑缺血再灌注模型。于再灌注后不同时间点观察大鼠缺血脑组织Hsp 70的表达。结果假手术组无Hsp70蛋白表达,其他各组Hsp70蛋白表达较假手术组高,芪棱汤组在再灌注24h、48h段Hsp70表达较模型组高,且芪棱汤组在再灌注24h段增加Hsp70蛋白表达方面优于补阳还五汤组。结论芪棱汤可以促进Hsp70的蛋白表达,对脑缺血再灌注所导致的脑损伤起保护作用。     

芪棱汤对大鼠脑缺血再灌注后一氧化氮合酶的影响

研究发现,一氧化氮( Nitric Oxide,NO)在脑缺血损伤中起着重要作用,而一氧化氮合酶(Nitric oxide synygase,NOS)是NO合成的关键因素,NOS分为3种,即内皮型NOS( endothelial NOS,eNOS)、神经元型NOS(neuronal NOS,nNOS)及诱导型NOS( in - ducible NOS,iNOS),eNOS和nNOS又合称为结构型NOS(constitutcive NOS,cNOS).本实验通过观察芪棱汤对大鼠脑缺血再灌注损伤后一氧化氮合酶的影响,探讨益气养阴活血法治疗缺血性中风的作用机理.     

芪棱汤对大鼠脑缺血再灌注后nestin蛋白表达的影响

目的观察芪棱汤对脑缺血再灌注后nestin蛋白表达的影响,为益气养阴活血法治疗缺血性中风提供实验依据。方法将大鼠随机分为假手术组、模型组、芪棱汤去养阴药组及芪棱汤组,采用颈内动脉线栓加环扎法复制大鼠脑缺血再灌注模型。于再灌注后不同时间点进行神经学评分,用免疫组化法检测nestin蛋白表达。结果假手术组神经学评分均正常,其余各组大鼠神经功能评分差异均有显著性,芪棱汤组明显优于其他组;假手术组未见nestin蛋白表达,模型组、芪棱汤去养阴药组和芪棱汤组nestin蛋白表达差异有显著性,芪棱汤组nestin蛋白表达明显高于其他各组。结论芪棱汤可以促进nestin蛋白表达,从而对缺血再灌注所导致的脑损伤起保护作用。     

水蛭注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤神经细胞凋亡的影响

目的:观察水蛭注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤神经细胞凋亡的影响,探讨其神经保护作用机制。方法:选用健康Wistar大鼠60只随机分为假手术组,生理盐水对照组,川芎嗪对照组,水蛭注射液大、小剂量组,每组各12只。除假手术组外,其余四组均采用栓线法制作大鼠脑缺血再灌注损伤模型。分别于规定时间腹腔注射生理盐水(4ml/kg)、川芎嗪(6ml/kg)、水蛭注射液(2ml/kg或4ml/kg),进行神经功能评分,测定脑梗塞面积,计算脑组织神经细胞凋亡的百分率。结果:水蛭注射液大、小剂量组大鼠再灌注损伤后的神经功能评分、脑梗死面积百分比及脑神经细胞凋亡率与生理盐水对照组比较有显著性差异(P<0.01),尤以水蛭注射液大剂量组为明显。结论:水蛭注射液能改善大鼠脑缺血再灌注损伤的神经功能缺失,减少脑梗死面积,并能减低脑神经细胞凋亡的发生率,从而对脑缺血具有保护作用。     

苓桂术甘汤对大鼠心肌缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响

目的:观察苓桂术甘汤在大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)时对心肌细胞凋亡的影响。方法:40只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,辛伐他汀组,苓桂术甘汤组。辛伐他汀组药量为20 mg·kg-1·d-1,苓桂术甘汤组药量为50 g·kg-1·d-1,另2组给生理盐水1.0 mL·kg-1。采用结扎大鼠左冠状动脉前降支方法制备心肌缺血再灌注模型。缺血30 min、再灌注2 h后,采用流式细胞术检测心肌细胞凋亡情况,采用免疫组化技术检测心肌细胞Smad3,Smad7蛋白表达的变化。结果:与假手术组相比,模型组心肌细胞的凋亡率明显增加(P<0.01),并且Smad3蛋白表达增加(P<0.01),Smad7蛋白表达减少(P<0.01);与模型组相比,苓桂术甘汤和辛伐他汀可明显降低心肌细胞的凋亡率(P<0.01);心肌细胞Smad3蛋白表达减少(P<0.05);Smad7蛋白表达增加(P<0.05)。结论:苓桂术甘汤可以抑制大鼠缺血再灌注损伤时心肌细胞凋亡,上调Smad7蛋白表达,下调Smad3蛋白表达,可能是其保护MIRI的作用机制之一。     

左旋四氢巴马汀对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后神经元凋亡和Caspase-3表达的影响

目的 探讨左旋四氢巴马汀(L-THP)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤神经元凋亡和半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响.方法 实验大鼠随机分为4组,即假手术组、模型组、L-THP高、低剂量组(40、20 mg·kg-1·d-1).采用线栓法阻塞大脑中动脉建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,于缺血1h再灌注6、24...     

左旋四氢巴马汀在大鼠急性脑缺血再灌注时对凋亡相关基因蛋白表达的影响

目的:观察左旋四氢巴马汀(L-tetrahydropalmatine,L-THP)在脑缺血再灌注时对凋亡相关基因蛋白表达的影响。方法:在建立大鼠急性全脑缺血再灌注模型基础上,采用免疫组织化学法、原位末端标记法,分别检测假手术组、脑缺血再灌注组及 L-THP 治疗组:海马 CAl 区 Caspase-3、Fas、c-Fos、c-Myc、P53阳性细胞及凋亡细胞数。结果:脑缺血再灌注时,Caspase-3、Fas、c-Fos、C-Myc、P-53阳性细胞及细胞凋亡数均增加,与假手术组比较差异有显著性(P<0.01),L-THP 可减少这几项参数,L-THP 治疗组与脑缺血再灌注组比较差异亦有显著性(P<0.05,P<0.01)。结论:在脑缺血再灌注细胞凋亡过程中,L-THP 可通过抑制上述凋亡相关基因蛋白的表达,减少神经元凋亡,对脑缺血损伤起保护作用。     

化痰通络汤对脑缺血/再灌注大鼠“肠-脑”轴的干预作用

目的 基于“肠-脑”轴探讨化痰通络汤（HTTLD）对大鼠脑缺血再灌注后脑组织和肠道形态和功能的影响。方法 将60只SPF级雄性大鼠随机分为假手术组,模型组,HTTLD高、中、低剂量组（28.66,14.33,7.16 g·kg^-1）,依达拉奉（4 g·kg^-1）+丁酸梭菌（5.0×10⁸ cfu·mL^-1）组,采用大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,灌胃给药HTTLD,神经功能缺损评分和2,3,5-氯化三苯四氮唑（TTC）染色法测定脑组织损伤,小肠推进率观察脑缺血再灌注对肠道动力的影响,十二指肠黏膜的病理形态学检测评价肠黏膜细胞损伤,酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定血清D-乳酸（D-LAC）,二胺氧化酶（DAO）,细菌内毒素（LPS）含量,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测十二指肠的闭合蛋白（Occludin）,紧密连接蛋白-5（Claudin-5）,闭锁小带蛋白-1（ZO-1）蛋白的表达。结果 脑缺血再灌注后,大鼠出现神经功能缺损症状,与假手术组比较,模型组神经功能缺损评分显著升高（P<0.01）;与模型组比较,HTTLD中、高剂量组能显著减少神经功能缺损症状,降低神经功能缺损评分（P<0.01）。与假手术组比较,模型组大鼠脑组织出现明显梗死灶,脑梗死率显著升高（P<0.01）;与模型组比较,各给药组脑梗死体积明显减少（P<0.01）,以HTTLD高剂量组的效应最佳,且效应具有剂量依赖性。小肠推进率结果显示,与假手术组比较,模型组小肠推进率显著降低（P<0.01）;与模型组比较,各给药组能显著升高小肠推进率（P<0.01）,以HTTLD高剂量效应最佳,且效应具有剂量依赖性。十二指肠黏膜组织病理学检测显示,脑缺血再灌注后十二指肠黏膜可见明显损伤,各给药组黏膜损伤情况明显减轻。与假手术组比较,模型组ZO-1,Occludin,Claudin-5蛋白表达均显著降低（P<0.01）;与模型组比较,HTTLD低、中、高剂量组能不同程度上调ZO-1,Occludin,Claudin-5蛋白表达（P<0.05,P<0.01）,以高剂量组的效应最为显著。与假手术组比较,模型组血清D-LAC,DAO,LPS蛋白含量均显著升高（P<0.01）;与模型组比较,各给药组D-LAC,DAO含量均明显降低（P<0.05,P<0.01）,HTTLD中、高剂量组明显降低LPS含量（P<0.05,P<0.01）,且HTTLD高剂量组的作用最明显。结论 脑缺血再灌注后,大鼠脑组织受损、出现神经功能障碍,同时肠道黏膜损伤、肠道蠕动减弱和肠道黏膜屏障破坏。HTTLD能减少脑组织和胃肠道黏膜损伤,减轻神经功能缺损症状,提高胃肠道动力、改善肠道屏障功能、减少肠道细菌代谢产物和毒物的释放,从而发挥对脑缺血再灌注后“脑-肠”轴损伤的保护作用。     

芍药苷对大鼠脑缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响及其作用机制

目的:探讨芍药苷对大鼠脑缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:选择健康雄性SD大鼠80只,随机分为假手术组、模型组、芍药苷组及尼莫地平组各20只,建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型,观察各组大鼠神经行为学评分及脑梗死面积,TUNEL检测大鼠神经细胞凋亡情况,免疫组化法检测大鼠大脑皮层中Bcl-2和Bax蛋白表达情况。结果:假手术组大鼠未表现出神经功能缺失症状,模型组大鼠神经行为学评分及脑梗死面积高于假手术组,芍药苷组及尼莫地平组均低于模型组,差异具有统计学意义(P0.05);假手术组几乎未见神经细胞凋亡,模型组TUNEL阳性细胞明显多于假手术组,芍药苷组及尼莫地平组细胞凋亡个数及阳性率均低于模型组,其差异具有统计学意义(P0.05);假手术组大鼠大脑皮质中Bcl-2及Bax的灰度值均高于模型组,芍药苷组及尼莫地平组大鼠Bcl-2灰度值较模型组降低,而Bax灰度值较模型组明显升高,2组Bcl-2/Bax灰度值较模型组下降,其差异具有统计学意义(P0.05)。结论:芍药苷可通过抑制Bax的表达,上调Bcl-2的表达来抑制神经细胞凋亡,从而保护神经功能,减轻脑梗死。     

红花黄素预处理对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的研究红花黄素预处理对心肌缺血-再灌注大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法采用在体左冠状动脉前降支结扎法制备心肌缺血-再灌注模型。24只SD大鼠分为3组:假手术组,缺血-再灌注组,红花黄素预处理组。缺血30 min,再灌注60 min。采用缺口末端标记法以及免疫组化法,观测心肌细胞凋亡指数(AI)、Bcl-2、Bax基因蛋白表达。结果与假手术组比较,缺血-再灌注组AI增加,Bax阳性表达增强,Bcl-2阳性表达减弱(P<0.01);与缺血再灌注组比较,红花黄素预处理组AI、Bax阳性表达下降(P<0.01),Bcl-2阳性表达上调(P<0.05)。结论红花黄素预处理通过抑制心肌细胞凋亡,下调Bax基因蛋白表达,上调Bcl-2基因蛋白表达,起到心肌缺血再灌注损伤的保护作用。     

竹节参总皂苷对大鼠局灶性脑缺血/再灌注神经元凋亡的影响

目的：研究竹节参总皂苷（total rhizome panacis japonica saponins,tRPJS）对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的影响及机制。方法：采用大鼠右侧大脑中动脉阻断（middle cerebral artery occulusion,MCAO）局灶性脑缺血再灌注模型,大鼠随机分为假手术组、损伤模型组、tRPJS不同剂量组（50、100、200mg·kg^-1ip）,观察各组大鼠神经功能状态,应用TUNEL法和免疫组化染色分别检测神经凋亡细胞数及bcl-2、Bax蛋白表达。结果：与损伤模型组比较,tRPJS治疗组可明显改善大鼠神经功能的受损程度,并减少神经细胞凋亡数,明显增加bcl-2蛋白表达,减少Bax蛋白表达,并呈剂量依赖性。结论：tRPJS在局灶性脑缺血再灌时具有抗神经细胞凋亡作用,改善受损的神经功能,从而对脑缺血再灌注损伤起保护作用,其机制可能与上调bcl-2蛋白,下调Bax蛋白的表达有关。     

葛根素对大鼠脑缺血再灌注侧皮质区细胞凋亡及p-Akt (Ser473)表达的影响

目的 观察葛根素(Pue)对大鼠脑缺血再灌注缺血半暗带侧皮质区神经细胞凋亡及p-Akt(Ser473)表达的影响,进一步探讨Pue的神经保护机制。方法 48只实验大鼠随机分为4组：假手术组、缺血再灌注组、Pue组及Pue+LY组。应用栓线法建立大鼠脑缺血再灌注模型,Pue组及Pue+LY组分别予Pue及Pue+特异性PI3K激酶抑制剂LY294002进行干预。于缺血1h再灌注24h行神经功能缺损评分,TTC染色测量梗死面积,Tunel法检测细胞凋亡数目,免疫组化检测p-Akt(Ser473)表达,并进行图像分析。结果 Pue组较缺血再灌注组神经功能缺损评分明显降低(P<0.05),凋亡细胞数显著下降(P<0.05),p-Akt(Ser473)表达显著升高(P<0.05);Pue+LY组较Pue组神经功能缺损评分明显升高(P<0.05),凋亡细胞数显著增加(P<0.05),p-Akt(Ser473)表达显著降低(P<0.05)。结论 激活PI3K/Akt信号通路可能是Pue减少神经细胞凋亡、起到神经保护作用的机制之一。