增殖诱导配体及其受体在肿瘤组织中的表达与意义

目的分析增殖诱导配体（APRIL）及其受体在不同肿瘤组织及肿瘤发展不同阶段的表达水平,探讨其与肿瘤发生的关系。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应（RFQ-PCR）检测了临床上常见肿瘤组织中APRIL及其受体mRNA的准确含量,并以靶基因和内参mRNA含量的比值作为评价靶基因表达水平的指标。结果肿瘤组织中APRIL表达水平显著高于交界组织（P〈0．05）和正常组织（P〈0．05）;B细胞成熟抗原（BCMA）和穿膜蛋白活化物（TACI）表达水平在大多数肿瘤组织中与正常组织差异无统计学意义（P〉0．05）;APRIL在肠上皮化生、异型增生和胃癌组织中表达水平显著高于正常黏膜（P〈0．05）,APRIL在胃癌组织中表达水平显著高于肠上皮化生和异型增生（P〈0．05）,而其受体BCMA和TACI在各组胃黏膜病变之间表达水平无统计学意义（P〉0．05）。结论成功建立RFQ-PCR检测APRIL及其受体mRNA含量的方法,具有较好的检测灵敏度和重复性;APRIL在肿瘤发生、发展过程中可能起了重要作用;除了BCMA和TACI外,肿瘤细胞可能还存在APRIL未知受体;APRIL在某些类型肿瘤有可能主要是通过受体BCMA而不是TACI发挥作用。     

实时荧光定量PCR检测抑癌基因PHBI在胃肠肿瘤中的表达

目的检测抑癌基因PHBI在胃肠肿瘤中的表达情况,探讨PHBI在胃肠肿瘤的发生和发展过程中所起的作用。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术进行检测。结果抑癌基因PHBI在胃肠肿瘤组织的表达比在癌旁组织中有显著增高,差异有统计学意义(P0.01);另外对照胃肠肿瘤组织病理切片,发现低分化胃癌组织中PHBI的表达比中分化胃癌组织高,差异有统计学意义(0.01P0.05)。结论抑癌基因PHBI在胃肠癌组织中显著高表达,检测胃肠癌组织中PHB的表达以及组织分化程度,为胃肠肿瘤的治疗和预后提供依据。     

自身免疫病患者增殖诱导配体基因mRNA表达水平的研究

目的建立检测增殖诱导配体(a proliferation-induc ing ligand,APR IL)mRNA的SYBR G reenⅠ实时定量PCR方法,了解系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎(RA)等自身免疫病患者外周血单个核细胞(PBMC)中APR IL的表达水平及其与自身免疫性疾病发病机制、预后之间的关系。方法构建克隆载体pGEM-T Easy-APR IL作为定量模板,定量检测58例自身免疫病(SLE、RA)确诊病人和20例健康献血者的外周血APR IL mRNA表达量,以APR IL mRNA和内参GAPDH mRNA表达量的比值作为APR IL表达水平的指标。结果自身免疫病患者的APR IL mRNA表达范围3.95~192.0,均值为29.68±4.5。20例正常对照者APR IL mRNA的表达范围3.1~18.7,均值为10.56±2.0。自身免疫病患者APR IL mRNA的表达水平高于正常对照组;久治不愈或疗效差者APR IL mRNA表达水平显著高于初发患者及治疗后缓解患者,但后两组差异无显著性意义。结论自身免疫性疾病(SLE、RA)患者的APR IL mRNA表达水平升高,疗效差、久治不愈患者表达水平更高。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL及其受体在急性髓系白血病细胞中的表达及意义

为了检测肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其受体在急性髓系白血病细胞中的表达，并探讨其在白血病治疗中的意义，采用RT-PCR方法及流式细胞术，对39例急性髓系白血病细胞(患者组)、18例完全缓解白血病细胞(缓解组)和21例正常人骨髓或外周血单个核细胞(对照组)表面TRAIL及其受体的表达进行检测。结果表明：①患者组和缓解组TRAIL、DR4和DR5表达高，而DcR1和DcR2表达低。②缓解组DR5的表达高于患者组。③患者组和缓解组DR5的表达均高于DR4。④患者组AML不同亚型表达TRAIL及其受体相似。结论：TRAIL及其受体在急性髓系白血病细胞中的表达具有明显的差异性：DR5在TRAIL介导的急性髓系白血病细胞凋亡中起重要的作用。     

乳腺癌转移抑制因子1在乳腺癌中的表达及其与雌激素孕激素受体的相关性

目的探讨乳腺癌转移抑制因子（BRMS1）在乳腺癌中的表达及其与雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）的相关性。方法提取组织总RNA将mRNA转录成cDNA,然后用实时荧光定量聚合酶链反应（RFQ-PCR）检测乳腺组织BRMS1 mRNA表达,以BRMS1 mRNA和3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）mRNA含量的比值表示BRMS1表达水平。免疫组化检测ER、PR。结果乳腺癌组织中BRMS1表达水平明显低于癌旁组织（P〈0．01）,也明显低于正常乳腺组织（P〈0．01）,BRMS1低表达与临床病理分期和淋巴结转移有关,BRMS1在ER阳性乳腺癌组织中的表达高于在ER阴性组织中的表达（P〈0．05）,BRMS1在PR阳性乳腺癌组织中的表达与在PR阴性组织中的表达比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论乳腺癌组织中BRMS1的低表达与乳腺癌的发展与转移有关,BRMS1表达水平与ER有一定相关性。     

结肠癌组织中蛋白酶活化受体-1的表达及意义

目的 探讨结肠癌组织中蛋白酶活化受体-1（PAR-1）mRNA的表达情况及其临床意义.方法 实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测33例结肠癌患者癌组织及其相应癌旁组织中PAR-1 mRNA的表达情况,分析PAR-1 mRNA与结肠癌分化程度、病理分期以及转移等指标的相关性.结果 结肠癌组织中PAR-1 mRNA的表达明显增高,比邻近癌旁组织平均高4.99倍;二者ΔCt比较,t=9.15,P〈0.01.同时低分化的结肠癌患者组PAR-1 mRNA表达量明显高于中、高分化患者组,P〈0.01;有转移患者组的PAR-1 mRNA表达量明显高于无转移患者组,P〈0.01;而在结肠癌临床Ⅰ~Ⅱ期与Ⅲ~Ⅳ期患者组之间,PAR-1 mRNA表达量差异无统计学意义,P〉0.05.结论 PAR-1 mRNA在结肠癌中高表达,且与结肠癌的分化及是否转移有关.     

VEGF和受体mRNA在子宫肌瘤组织中的表达及意义

目的通过检测VEGF（血管内皮生长因子）和受体mRNA在肌瘤组织中的表达，探讨其在疾病发生、发展中的作用。方法选择40例需要手术的子宫肌瘤患者，手术时留取肌瘤组织及正常组织（作为对照），采用实时荧光定量PCR方法，检测VEGF、VEGFR1和VEGFR2 mRNA的相对表达水平，分析VEGF、VEGFR2 mRNA在肌瘤组织中的表达和肌瘤直径的相关性。结果 VEGF、VEGFR2 mRNA在肌瘤组织的表达明显高于肌层组织，差异有统计学意义（P〈0.05），VEGFR1 mRNA在肌瘤组织的表达高于肌层组织，但差异无统计学意义；VEGF、VEGFR2 mRNA在肌瘤组织的表达与肌瘤直径呈正相关（P〈0.05）。结论 VEGF和受体VEGFR2在子宫肌瘤的发生、发展中起重要作用     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在大肠癌中的表达及意义

目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)在大肠癌组织中的表达情况及其与临床病理的关系。方法采用免疫组化SP法和流式细胞分析方法对41例大肠癌组织和9例癌旁正常组织TRAIL的表达情况进行检测并比较。结果TRAIL蛋白免疫组化染色定位于细胞膜和细胞浆,癌组织中阳性表达率为24.4%,明显低于正常组织的66.7%(P<0.05);流式细胞分析该蛋白表达量,癌组织平均荧光指数为0.92±0.09,亦明显低于正常组织的1.05±0.12(P<0.05)。癌组织中,TRAIL蛋白表达随着分化程度的降低呈逐步下降趋势(P<0.05);淋巴结转移与否的表达无统计学差异。结论大肠癌组织中TRAIL表达下降,并与组织分化程度有关。     

实时荧光定量PCR检测CD44和RHAMM在胃肠肿瘤中的表达研究

目的探讨CD44和透明质酸介导运动的受体（RHAMM）在胃肠肿瘤组织中的表达,研究其在肿瘤诊断中的价值。方法收集病理分期为Ⅱ～Ⅲ级胃肠道恶性肿瘤样本30例,并通过实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）对CD44和RHAMM进行定量分析。结果CD44和RHAMM在癌组织中相对于管家基因GAPDH的表达中位数分别为1．587和1．074,正常组织中分别为0．704和0．098;肿瘤组织中,区域淋巴结转移组的CD44拷贝数／GAPDH拷贝数的中位数为1．650,未转移组相应的均值为1．431;区域淋巴结转移组的RHAMM拷贝数／GAPDH拷贝数的中位数为1．301,未转移组的中位数为1．064。区域淋巴结转移样本其CD44和RHAMM表达同步增高,肿瘤组织中CD44和RHAMM之间的相关系数（r）为0．96。结论胃肠肿瘤中的CD44和RHAMM表达高于正常组织,且两者表达具相关性。CD44和RHAMM的表达量增加的多少不足以判断肿瘤是否有区域淋巴转移,CD44和RHAMM同时增高可能预示肿瘤的淋巴转移。     

硫酸乙酰肝素蛋白聚糖与增殖诱导配体在肺癌中的相关性研究

目的 探讨硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG syndecan-1)表达水平与肺癌分型的相关性,以及HSPG syndecan-1 蛋白和增殖诱导配体(APRIL)蛋白在肺癌细胞中的相互作用.方法 回顾性分析上海市普陀区人民医院67例肺癌组织标本,实时荧光定量PCR,Western blot和流式细胞术检测HSPG syndecan-1在肺癌组织的表达情况,激光共聚焦技术检测HSPG syndecan-1和APRIL的相互作用情况.结果 HSPG syndecan-1基因的mRNA、蛋白在肺癌中较正常肺组织高表达;在各种类型的肺癌组织中,HSPG Syndecan-1基因在高分化肺癌的表达高于低分化肺癌.HSPG Syndecan-1蛋白和APRIL蛋白在肺癌细胞中存在相互作用.结论 HSPG Syndecan-1蛋白在肺癌中的表达和肺癌细胞的分化程度相关,与APRIL蛋白存在相互作用.     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血APRIL基因表达水平初探

目的 建立检测人增殖诱导配体（APRIL）mRNA的实时荧光定量PCR方法,探讨外周血单个核细胞APRIL mRNA表达水平与原发性胆汁性肝硬化（PBC）的相关性。方法 采用实时荧光定量PCR法检测30例正常人和40例PBC患者外周血单个核细胞（PBMC）APRIL基因的相对表达量,以Ct值比较法计算APRIL基因相对表达水平。结果 PBC患者外周血单个核细胞APRIL mRNA的△Ct值为9．3±2.0,与正常对照组比较．差异显著（P〈0．05）。采用2^-△△Ct法进行数据分析后,PBC组APRIL mRNA相对表达量比正常对照组高3．5倍。PBC患者中抗核抗体（ANA）阳性占80％,其中荧光模式为核膜型19例。其他型13例（着丝点型10例,混合型3例）,其APRIL基因相对表达量比正常对照组高6.5和1．7倍。结论 PBC患者外周血单个核细胞APRIL mRNA表达水平显著升高,且与ANA荧光模式相关。     

survivin在胃癌组织中的表达及临床意义

目的探讨survivin在胃癌诊断、预后等方面的意义。方法利用RT-PCR技术检测38例胃癌组织标本和38例相应癌旁组织标本中survivin mRNA表达情况。结果38例胃癌组织标本中有20例survivin基因表达阳性，高、中、低分化胃腺癌的阳性表达率分别为0％、45．5％和60％；发生淋巴结及远处转移的胃癌组织标本中72％表达survivin，明显高于无转移组。38例癌旁组织标本均无该基因的阳性表达。结论survivin在胃癌组织中有较高的表达率。且表达具有高度肿瘤特异性；survivin的表达与胃癌的侵袭性和预后有关。     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血TRAIL基因表达水平初探

目的建立检测人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）mRNA的实时荧光相对定量方法,探讨其基因表达与原发性胆汁性肝硬化（PBC）的相关性。方法基于TaqMan—MGB探针技术,以B—actin基因为内参照,通过目的基因与内参基因荧光强度达到一定阈值时的循环数之差,即△Ct值定量原始模板浓度,建立实时荧光逆转录聚合酶链反应（FQ—RT—PCR）相对定量方法,检测30例PBC患者、25例乙型肝炎（简称乙肝）后肝硬化患者及30名正常人外周血单个核细胞（PBMC）TRAIL基因的表达,同时检测血浆γ－谷氨酰转肽酶（GGT）和碱性磷酸酶（ALP）浓度,并作相关性分析：结果PBC患者PBMCTRAIL基因检测的△Ct值为2．4±1．2,其相对表达量是正常对照组的6．96倍,差异有统计学意义（P〈0．05）,乙肝后肝硬化患者TRAIL基因△Ct值为3．3±1．7,其相对表达量是正常对照组的3．73倍,差异有统计学意义（P〈0．05）,而PBC组与乙肝后肝硬化组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。PBC患者TRAIL的△Ct值与GGT浓度的对数值呈显著相关（r=－0．396,P〈0．05）。结论PBC患者及乙肝后肝硬化患者PBMC TRAIL基因表达水平明显升高,提示TRAIL在自身免疫性肝病及肝脏病毒损伤中均具有重要作用。     

抑癌基因PTEN mRNA在白血病细胞中的表达及意义

目的了解白血病细胞中PTEN基因的表达情况及其与临床的关系。方法采用RT-PCR法检测5个白血病细胞系,31例慢性粒细胞白血病(CML),87例初诊急性白血病(AL)[包括59例急性髓系白血病(AML),26例急性淋巴细胞白血病(ALL),2例急性混合细胞白血病],21例完全缓解期急性白血病(AL-CR)患者骨髓标本中PTEN mRNA表达情况,并分析了与临床指标的相关性。结果PTEN基因在K562细胞中有表达,而在Kasum i-1、HL-60、U937、Nalm-1细胞中均无表达。CML组阳性率(61.29%)与正常对照组(78.57%)相比,差异无统计学意义(P>0.05),AL组和AL-CR组阳性率(分别为18.29%和42.86%)均低于正常水平(P<0.01和P<0.05),AL组阳性率又低于AL-CR组(P<0.05)。PTEN基因的阴性表达与外周血高白细胞计数(≥20×109/L)、染色体异常呈显著的正相关。结论AL患者存在PTEN基因的表达缺失,PTEN基因在AL的发病中可能起一定作用。     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血TRAIL基因表达水平初探

目的建立检测人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)mRNA的实时荧光相对定量方法,探讨其基因表达与原发性胆汁性肝硬化(PBC)的相关性。方法基于TaqMan-MGB探针技术,以β-actin基因为内参照,通过目的基因与内参基因荧光强度达到一定阈值时的循环数之差,即△Ct值定量原始模板浓度,建立实时荧光逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)相对定量方法,检测30例PBC患者、25例乙型肝炎(简称乙肝)后肝硬化患者及30名正常人外周血单个核细胞(PBMC)TRAIL基因的表达,同时检测血浆γ-谷氨酰转肽酶(GGT)和碱性磷酸酶(ALP)浓度,并作相关性分析。结果PBC患者PBMC TRAIL基因检测的△Ct值为2.4±1.2,其相对表达量是正常对照组的6.96倍,差异有统计学意义(P<0.05),乙肝后肝硬化患者TRAIL基因△Ct值为3.3±1.7,其相对表达量是正常对照组的3.73倍,差异有统计学意义(P<0.05),而PBC组与乙肝后肝硬化组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。PBC患者TRAIL的△Ct值与GGT浓度的对数值呈显著相关(r=-0.396,P<0.05)。结论PBC患者及乙肝后肝...     

miRNA－23a在扩张型心肌病中表达的意义

目的观察miR-23a在扩张型心肌病(DCM)外周血中的表达差异,评估其临床意义。 方法收集26例DCM患者作为病例组,收集30例健康者作为对照组。比较两组的临床资料和心脏超声结果,检测脑尿钠肽(BNP)等生化指标,用Real-time PCR检测和比较两组的miR-23a表达水平的差异,并通过ROC曲线分析评估miR-23a对DCM患者的识别能力。 结果DCM组的BNP(605.00±231.71,26.29±17.88,t＝218.61,P<0.05)、左室舒张末直径(LVEDD)高于对照组(64.73±5.74,45.58±2.17,t＝6.09,P<0.05),左室射血分数(LVEF)低于对照组(35.33±4.31,58.72±3.35,t＝－13.54,P<0.05)。miR-23a在DCM组中的表达量高于对照组(3.56±2.56,1.18±0.86,t＝2.85,P<0.01),差异有统计学意义。ROC曲线分析发现,miR-23a对DCM患者具有一定的临床识别能力[AUC＝0.781,95% CI(0.651,0.911),P<0.01]。 结论miR-23a在DCM患者外周血中的表达明显升高,miR-23a可能在DCM患者中具有一定的临床诊断价值。     

急性髓细胞白血病中婆罗双树样基因4的表达及其临床意义

目的 探讨婆罗双树样基因4(SALL4)在急性髓细胞白血病(AML)中的表达及其临床监测意义.方法 采用逆转录PCR、实时荧光定量PCR、细胞培养、流式细胞术、骨髓涂片及血细胞分析仪等技术检测了68例AML患者(急性期36例、缓解期32例)、30名健康对照者、AML细胞系Kasumi-1和THP-1中SALL4的表达水平,评价其与骨髓原始细胞数、外周血WBC、未染色大细胞(LUC)计数及骨髓白血病免疫表型CD34表达率的关系.动态观察5例AML患者化疗前后3个时间点(化疗前急性期、治疗中第2～3周、化疗后缓解期)SALL4的表达水平.结果 急性期AML患者SALLA表达水平[69.01(17.20～120.28)]是缓解期AML患者SALL4表达水平[2.64(1.35～5.41)]的26倍,是健康对照组SALL4表达水平[1.14(0.50～1.62)]的61倍(Z=-6.48、-6.83,P均<0.01);缓解期AML患者SALL4表达水平是健康对照组的2.3倍(Z=-3.61,P<0.01).动态观察5例AML患者,SALL4基因表达水平随着治疗和病情缓解呈下降趋势,化疗前急性期、化疗中第2～3周和化疗后缓解期SALLA基因表达水平分别为79.74(33.76～89.09)、7.19(5.97～20.21)和3.40(1.44～15.53).骨髓原始细胞数增高组、LUC计数增高组及CD34表达率增高组中SALL4表达水平分别为33.82(16.00～144.01)、30.70(23.75～72.50)、56.25(23.79～153.81),高于相应正常组的2.74(1.59～5.13)、5.71(2.52～22.40)、20.82(14.03～55.12),差异有统计学意义(Z=-4.64、-2.18、-3.66,P<0.01或<0.05);外周血WBC计数增高组SALL4表达水平为89.26(23.75～154.34),高于相应的WBC计数正常组的3.86(2.03～6.01)和WBC计数减低组的6.66(2.51～17.06),差异有统计学意义(Z=-4.91、-4.21,P均<0.01);SALL4表达率与骨髓原始细胞数以及外周血WBC计数呈正相关(r=0.45、0.40,P均<0.01).结论 成功建立了人SALL4基因表达水平的实时荧光定量PCR方法,SALL4表达有望成为监测AML病情和判断预后的新指标.