HPLC-ELSD法测定黄芪中黄芪皂苷Ⅲ、黄芪皂苷Ⅳ的含量

目的建立HPLC-ELSD法测定黄芪中黄芪皂苷Ⅲ和黄芪皂苷Ⅳ的含量。方法采用Dimonsil C18(150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,乙腈—水为流动相梯度洗脱,流速为1 mL·min-1,柱温为30℃;ELSD参数:漂移管温度为100℃,空气流速为2.5 L·min-1,撞击器关闭。结果黄芪皂苷Ⅲ在进样量范围为0.016~1.150μg时,进样量的自然对数与峰面积积分值的自然对数成良好线性关系(r=0.999 2),平均回收率为98.09%,RSD为1.02%(n=6)。黄芪皂苷Ⅳ在进样量范围为0.093~0.816μg时,进样量的自然对数与峰面积积分值的自然对数成良好线性关系(r=0.999 3),平均回收率为97.39%,RSD为1.13%(n=6)。结论本方法简便、准确,可用于黄芪的质量控制。     

黄芪饮片中黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅲ和黄芪甲苷的含量测定分析

目的:探讨黄芪饮片中黄芪皂苷Ⅰ 、黄芪皂苷Ⅲ和黄芪甲苷的含量测定方法和结果.方法:本次医学研究对黄芪饮片中黄芪皂苷Ⅰ 、黄芪皂苷Ⅲ和黄芪甲苷的含量进行了测定 ,并对各类成分对于黄芪饮片药效峰面积的影响进行了分析.结果:黄芪饮片药物治疗效果的发挥 ,会直接受到黄芪皂苷Ⅰ 、黄芪皂苷Ⅲ和黄芪甲苷等含量的影响.结论:对黄芪饮片中黄芪皂苷Ⅰ 、黄芪皂苷Ⅲ和黄芪甲苷的含量进行分析 ,有助于提高药物治疗效果.     

黄芪总皂苷提取方法的优化

目的：通过正交实验选择黄芪总皂苷最佳提取工艺。方法：单因素水平实验考察回流与超声两种提取方法对黄芪总皂苷提取量的影响;采用正交实验设计,考察乙醇浓度、溶剂用量、提取时间三因素分别于三水平时对黄芪甲苷提取率的影响,以黄芪甲苷为指标,采用比色法进行含量测定。结果：超声提取高效、省时、节能,是较好提取方法,因此对超声提取方法进行优化。正交实验最终确定最佳提取工艺为A2B3C1,即溶剂用量为15倍量,提取时间为超声40min,乙醇浓度为70％,为最佳提取方法。结论：所选择工艺提取效率高,方法的稳定性和精密度均符合实验要求,具有简便、易操作、提取用时短及成本低廉的优点。     

黄芪皂甙对实验性心力衰竭的作用

本实验用血流动力学方法，在戊巴比妥钠所致的实验性心力衰竭动物模型上，研究了不同剂量的黄芪皂甙对衰竭心脏作用。通过与对照组对比观察发现，低剂量黄芪皂甙（２ｍｇ）可加重心衰，而中等剂量（４ｍｇ）和高剂量黄芪（８ｍｇ）有抗心力衰竭的作用。     

龙胆苦苷对博来霉素诱导肺泡上皮细胞凋亡的抑制作用

目的研究龙胆苦苷(gentiopicroside,GPS)对博来霉素(bleomycin,BLM)诱导肺泡上皮细胞A549凋亡的影响。方法体外培养A549细胞,流式细胞术检测龙胆苦苷对BLM诱导A549细胞凋亡的影响,免疫细胞化学方法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达。结果 BLM能诱导肺泡上皮细胞A549凋亡,龙胆苦苷能抑制BLM诱导的肺泡上皮细胞凋亡(P<0.05)。龙胆苦苷能明显下调博来霉素诱导的肺泡上皮细胞A549的促凋亡基因Bax蛋白表达,上调抗凋亡基因Bcl-2表达(P<0.05)。结论龙胆苦苷能抑制BLM诱导肺泡上皮细胞凋亡,其机制与下调促凋亡基因Bax蛋白表达,上调抗凋亡基因Bcl-2表达有关。     

脂多糖诱导大鼠肺泡II型上皮细胞凋亡的机制研究

目的研究脂多糖诱导大鼠肺泡II型上皮细胞(AT-II)凋亡的机制。方法体外原代培养的AT-II分为对照组和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)损伤组(LPS浓度10μg/mL),培养24h后分别进行两组细胞的Fas蛋白免疫组织化学检测和Annexin V/PI双染法流式细胞仪细胞凋亡检测。结果LPS组Fas阳性率(35.16±2.37)%明显高于对照组(9.01±1.62)%(P<0.05);LPS组的细胞凋亡率(24.98±1.41)%明显高于对照组(6.16±1.03)%(P<0.05);坏死率(14.85±0.99)%亦明显高于对照组(4.00±0.72)%(P<0.05)。结论Fas/FasL途径可能是LPS诱导AT-II细胞凋亡的重要途径。     

脂多糖诱导大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的机制研究

目的 研究脂多糖诱导大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AT-Ⅱ)凋亡的机制.方法 体外原代培养的AT-Ⅱ分为对照组和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)损伤组(LPS浓度10μg/mL),培养24 h后分别进行两组细胞的Fas蛋白免疫组织化学检测和Annexin V/PI双染法流式细胞仪细胞凋亡检测.结果 LPS组Fas阳性率(35.16±2.37)%明显高于对照组(9.01±1.62)%(P《0.05);LPS组的细胞凋亡率(24.98±1.41)%明显高于对照组(6.16±1.03)%(P《0.05);坏死率(14.85±0.99)%亦明显高于对照组(4.00±0.72)%(P《0.0s).结论 Fas/FasL途径可能是LPS诱导AT-Ⅱ细胞凋亡的重要途径.     

黄芪培养系统的建立及皂苷合成的研究进展

概述国内外运用生物工程技术生产黄芪的次生代谢物黄芪皂苷和黄芪培养系统的一些基础研究及今后的展望。     

刺五加叶皂苷B对过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡的抑制作用

目的：探讨刺五加叶皂苷B（C-B）对过氧化氢（H₂O₂）诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的影响,阐明其对氧化应激损伤所致的心肌细胞凋亡的抑制作用。方法：乳鼠心肌细胞行原代培养,取自主搏动良好的心肌细胞随机分为正常对照组、H2O2 损伤组(200 μmol•L^-1H2O2诱导心肌细胞凋亡)、100 mg•L^-1C-B 组和200 mg•L^-1 C-B 组,倒置相差显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞存活率,AnnexinⅤ-FITC 流式细胞术检测凋亡率,分光光度法检测Caspase-3活性,免疫印迹法检测细胞Caspase-3、PARP、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果：与正常对照组比较,200 μmol•L^-1H₂O₂组心肌细胞有损伤性改变,细胞
存活率明显降低（P<0.001）,凋亡率升高（P<0.001）,Caspase-3活性增加（P<0.01）,细胞Bcl-2蛋白表达减少,Caspase-3及Bax蛋白表达增多,PARP蛋白降解增多。与H2O2损伤组比较,100及200 mg•L^-1C-B组心肌细胞损伤性改变均减轻,细胞存活率增加（P<0.05或P<0.01）,凋亡率降低（P<0.001）,Caspase-3活性降低（P<0.05或P<0.01）,细胞Bcl-2蛋白表达增加,Bax蛋白表达和Caspase-3蛋白表达减少,PARP蛋白降解减少（依据电泳条带的宽窄及明暗度判断蛋白表达程度）,且200 mg•L^-1C-B组的作用更明显。结论：C-B对H₂O₂诱导的心肌细胞凋亡有一定的抑制作用,可能与其调节细胞内凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax的表达有关。     

HPLC-ELSD法测定黄芪药材中黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ

目的 研究以HPLC-ELSD法测定不同产地的黄芪、红芪及梭果黄芪药材中黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ（黄芪甲苷）的量。方法 色谱柱为Alltima C₁₈柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm),流动相为乙腈和0.3%甲酸溶液,梯度洗脱,体积流量：0.8 mL/min,柱温：25 ℃,蒸发光散射检测器,ELSD参数：漂移管温度110 ℃,氮气流速3.0 L/min。结果 黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的平均回收率分别为102.2%、99.5%、101.4%、99.7%,RSD分别为1.8%、2.1%、1.8%、1.9%。结论 本法简单易行,方法学验证符合要求,可作为黄芪药材中皂苷类成分定量的方法,也可作为区别黄芪与红芪、梭果黄芪的依据。     

苦参碱对免疫性肝损伤小鼠肝组织Fas、FasL表达的影响

目的观察苦参碱对豆蛋白A（Concanavalin A,ConA）所致免疫性肝损伤小鼠肝组织Fas、FasL表达的影响,探讨其抗肝损伤的作用机制。方法70只NIH小鼠随机分为5组,分别为正常对照组,模型组、苦参碱高剂量组、低剂量组和联苯双酯治疗组。除正常对照组外,其他组于实验首日静脉注射ConA20mg／kg后,苦参碱高剂量组、低剂量组均采用尾静脉注射给药,联苯双酯灌胃口服,1次/d,连续5d,末次给药后4h,再次尾静脉注射Con A20mg／kg。8h后检测血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）活性,观察肝组织病理学变化和Fas、FasL的表达。结果苦参碱高、低剂量组小鼠血清ALT、AST活性均明显低于模型组,差异有显著性意义（P〈0．01）,苦参碱各剂量组肝脏病理改变明显减轻,肝组织Fas、FasL的表达明显减弱,与模型组比较,差异均有显著性意义（P〈0．01）。结论苦参碱对ConA所致小鼠免疫性肝损伤具有较好的保护作用,抑制肝组织中Fas、FasL的表达,从而减轻Fas／FasL系统介导的肝细胞凋亡,是其抗肝损伤的作用机制之一。     

FAS/FASL基因单核苷酸多态与肿瘤易感性的关系研究进展

肿瘤坏死因子受体超家族6基因(TNFRSF6,又称FAS)及其配体(FASL)在细胞凋亡中具有重要的调节作用.FAS/FASL基因启动子区突变,会导致凋亡通道调节异常,可能促进肿瘤的发生.本文综述FAS/FASL基因单核苷酸多态(SNPs)的分布、功能及其与肿瘤易感性的关系,发现FAS-1377G等位基因在亚洲人群中分布频率低于欧美人群;FAS-670A等位基因在不同人群中的分布频率没有明显差异;而FASL-844C等位基因在不同人群中分布频率有一定差异但没有明显的地区规律性;FAS-1377G/A、FAS-670A/G和FAS-844T/C对不同人群、不同肿瘤易感性结果不一致.这些结果为不同人群和个体之间对肿瘤易感性不同提供了生物学依据.     

阿托伐他汀对对比剂肾病大鼠肾脏细胞凋亡及FAS/FASL表达的影响

目的研究阿托伐他汀对对比剂肾病大鼠肾脏细胞凋亡及FAS/FASL表达的影响。方法清洁级雄性SD大鼠32只随机分为A(正常组)、B(实验对照组)、C(造模组)、D(他汀组)4组,每组8只。他汀组于造模前3 d至造模后3 d给予阿托伐他汀30 mg/(kg.d)灌胃,其余组给予等体积的生理盐水灌胃。建立对比剂肾病大鼠模型,其中C、D组注射吲哚美辛、N-硝基-L-精氨酸甲酯、泛影葡胺,B组以生理盐水代替泛影葡胺,A组只注射等体积的生理盐水。采集各组大鼠造模前、造模后48 h的血液,用全自动生化分析仪检测血肌酐(SCr)值;造模72 h后处死大鼠摘取右肾,采用原位末端标记法(TUNEL)检测肾脏细胞凋亡情况;免疫组化法检测肾脏FAS、FASL表达变化。结果①C组造模前血SCr较造模后升高>25%(P<0.05),且造模后C组血SCr较A、B、D各组有所升高(P<0.05);②C组较A、B组肾脏凋亡细胞数明显增多,FAS和FASL的表达亦显著增强(P<0.05),D组较C组凋亡细胞数减少,FAS和FASL的表达减弱(P<0.05)。结论阿托伐他汀可能通过减弱凋亡相关蛋白FAS和FASL的表达而抑制肾脏细胞凋亡,从而发挥其预防保护作用。     

黄芪、丹参注射液对早期糖尿病肾病的影响

目的 探讨黄芪、丹参注射液对早期糖尿病肾病的疗效及影响.方法 90例早期糖尿病肾病(DN)患者分成3组:黄芪注射液治疗组、丹参注射液治疗组和对照组,分别检测治疗前后24 h尿微量白蛋白(m-ALb)、转化生长因子β1(TGF-β1)和Ⅳ型胶原(Ⅳ-C),并观察疗效.结果 与治疗前相比,黄芪注射液和丹参注射液治疗组治疗后24 h尿m-ALb、TGF-β1和Ⅳ-C显著下降;对照组治疗前后无明显改变.相关分析表明,尿TGF-β1和Ⅳ-C均与尿m-ALb呈正相关.结论 黄芪、丹参注射液治疗早期糖尿病肾病可以减少TGF-β1、Ⅳ-C的产生,降低非酶糖化,同时可能存在对糖尿病肾病患者黏附分子有拮抗作用,从而保护肾脏功能、延缓DN的发展.     

过氧化氢对人肝癌细胞株HepG2增殖的促进作用

目的:探讨低剂量过氧化氢(H2O2)对人肝癌细胞株HepG2的促增殖作用及该作用与NF-κB和细胞周期的关系. 方法: 不同剂量H2O2直接作用于培养的HepG2细胞;20 μmol/L NF-κB抑制剂(PDTC)预处理细胞2 h, 50 μmol/L的H2O2作用HepG2细胞;50 μmol/L H2O2分别作用于G1, G2/M, S期细胞,MTT法测定细胞增殖活性. 结果: 50 μmol/L的H2O2具有明显的促进HepG2细胞生长的作用,此作用可以被PDTC抑制;50 μmol/L的H2O2可以明显的促进G1期HepG2细胞生长. 结论: 低剂量H2O2可诱导HepG2细胞增殖,该过程可能包含依赖NF-κB的信号途径的参与;H2O2诱导HepG2细胞增殖在细胞周期的不同时相效应敏感性不同,主要诱导G1期细胞增殖.     

盐酸右美托咪定对H2O2诱导的肺泡巨噬细胞氧化应激的影响

目的：观察n2肾上腺素受体激动剂盐酸右美托咪定是否能够对抗过氧化氢（H2O2）诱导的肺泡巨噬细胞氧化损伤。方法：选择合适浓度H2O2和作用时间建立细胞氧化损伤模型,应用0．01,0．10,1．00umol／L浓度盐酸右美托咪定分别处理24h后,再应用MT比色法检测H2O2诱导的损伤细胞的存活率;用相应试剂盒测定细胞乳酸脱氢酶（1actate dehydrogenase,LDH）和肿瘤坏死因子-α（TNF—α）释放量。结果：50～300Fmol／LH2O2浓度依赖性地引起肺泡巨噬细胞氧化损伤,降低细胞存活率,增加LDH和TNF-a释放。0．01～1．00Fmol／L盐酸右美托咪定可以浓度依赖性地对抗H2O2诱导的细胞氧化损伤,使细胞存活率明显增加,减少LDH和TNF-α释放,这种作用具有剂量依赖性。α2受体拈抗剂育亨宾能够完全拈抗盐酸右美托咪定的这种保护作用,并且育亨宾本身对细胞的氧化损伤没有影响。结论：盐酸右美托咪定能保护肺泡巨噬细胞对抗H2O2诱导的氧化应激损伤,此作用可能通过α2肾上腺素受体发挥作用。     

葛根中药复方对妊娠期糖尿病大鼠治疗的实验研究

目的:研究葛根中药复方对妊娠期糖尿病大鼠的治疗作用.方法:采用四氧嘧啶建立糖尿病大鼠动物模型.A组:葛根中药复方治疗组(13例)予中药复方1mL/100 g体重灌胃;B组:糖尿病妊娠大鼠未治疗组(12例);C组:正常妊娠大鼠10例作为对照.观察各组妊娠10,15,20 d血糖、和胰岛庀父胞直径.结果:中药复方治疗组与糖尿病未治疗组相比,妊娠10,15,20d空腹血糖均有明显降低.葛根中药复方治疗组孕鼠β细胞团平均直径较糖尿病未治疗组明显增加。结论:葛根中药复方对妊娠期糖尿病大鼠有良好的治疗作用,对妊娠糖尿病有潜在的应用前景.     

双歧杆菌粘附素对脂多糖和H2O2调节肠上皮细胞增殖和凋亡的影响

目的研究双歧杆菌分泌型粘附素对脂多糖(LPS)和H2O2体外调节肠上皮细胞增殖和凋亡的影响。方法用3H-TdR掺入法、流式细胞仪和荧光染色等方法观察肠上皮细胞增殖和凋亡的情况。结果100 μg/L LPS对细胞增殖和凋亡均有促进作用,200 μmol/L H2O2可抑制肠上皮细胞增殖,促进凋亡。丫啶橙荧光染色见细胞核染色质致密浓染或裂解成碎片。预先经双歧杆菌分泌型粘附素处理后,LPS组细胞增殖和凋亡率均显著下降,H2O2组细胞凋亡明显减少。结论在体外,双歧杆菌分泌型粘附素能抑制LPS和H2O2对肠上皮细胞的损害作用,维持肠上皮细胞增殖与凋亡的平衡。     

急性肝衰竭患者血清sFas/sFasL水平探讨

目的:探讨急性肝衰竭患者血清可溶性Fas(sFas)和可溶性Fas配体(sFasL)的水平及其意义.方法:用ELISA法检测39例各种病因急性肝衰竭患者sFas、sFasL的含量,并与30例健康献血者比较.结果:急性肝衰竭患者血清sFas明显高于正常对照组(P＜0.01),血清sFasL水平明显高于正常对照组(P＜0.05),血清sFas与凝血酶原活动度(PTA)呈显著负相关(P＜0.05).结论:急性肝衰竭患者血清sFas、sFasL水平明显升高,且与肝衰竭轻重程度相关,监测两者水平变化有助于判断病情发展及预后.由Fas/FasL系统介导的肝细胞调亡可能在急性肝衰竭疾病发生与发展中起重要作用.     

EGF受体在H2O2诱导的大鼠胸主动脉血管收缩中的作用

目的 研究表皮生长因子受体（EGFR）是否参与了H2O2诱导的大鼠胸主动脉收缩过程。方法 用EGFR阻断剂肝素、酪氨酸激酶抑制剂（AG1478）分别从受体外和受体内阻断EGFR，测定H2O2诱导的去内皮大鼠胸主动脉血管收缩张力。结果 300μMH2O2诱导的缩血管作用可以被3μ的AG1478所拮抗（P＜0．05），100mg／L肝素对30μMH2O2引起的血管环收缩阻断作用不明显（P＞0．05）。结论 H2O2的缩血管作用可部分介导EGFR。