广东省河源地区献血人群隐匿性乙型肝炎病毒感染的血清学及分子生物学特征分析

目的 了解河源地区献血人群隐匿性乙型肝炎病毒感染（occult hepatitis B virus infection ,OBI）的情况,分析其血清学及分子生物学特征。方法 采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA) 和核酸检测（nucleicacid testing,NAT）方法筛查河源地区2016 年1 月～ 2018 年5 月44 596 人份无偿献血标本。对HBsAg-/HBV DNA+ 标本进一步采用电化学发光法进行乙肝病毒血清标志物定性,HBsAg 及抗-HBs 定量检测;大容量提取HBsAg-/HBVDNA+ 血浆标本病毒核酸,采用巢式PCR 扩增BCP 和S 区基因序列,对S 片段阳性产物进行基因分型,同时应用实时荧光定量PCR（quantitative PCR,qPCR）测定病毒载量。结果 共确认69 例HBsAg-/HBV DNA+ 标本,其中OBI 68 例,OBI 检出率为0.15%（1∶656）。OBI 检出率男性高于女性,高年龄组高于低年龄组,初次献血者高于重复献血者,河源籍高于非河源籍,差异均具有统计学意义（χ2=4.371, 28.403, 5.157 和7.378,P=0.037, 0.000, 0.023 和0.007）。病毒载量测定10 例不可定量,其余58 例病毒载量范围为1.08~1 383.93 IU/ml( 中位数34.38 IU/ml);不同血清学模式病毒载量分布差异有统计学意义(U=333.000, P=0.008)。43 例可分型的OBI 标本中,B基因型41 例（95.3%）,C基因型2 例（4.7%）。结论 河源地区献血人群OBI 检出率相对较高,以B 基因型为主。应选用灵敏度更高的单人份核酸检测系统以进一步提高OBI 标本的检出率,降低经输血传播HBV 风险。     

中国献血人群感染乙型肝炎病毒PreC/BCP区的新变异

目的 了解中国献血人群感染乙型肝炎病毒(HBV)基因组的PreC/BCP区变异特征.方法 从参加REDS-Ⅱ中国项目的5家血液中心(或中心血站)收集的HBsAg阳性标本中选取245份,提取HBV DNA,根据HBVDNA PreC/BCP区保守序列设计引物,采用巢式PCR法扩增HBV DNA的PreC/BCP区,双向测序后用Clustal X软件将其序列与标准株序列比对,分析其变异特征,用SPSS 11.0统计软件分析其变异与献血者人口地理特征和血清学特征的关系.结果 245份献血者标本中有228份成功扩增了HBV PreC/BCP区,其中16例(7.02％)发现了1825～1 826位核苷酸之间的片段缺失或插入,突变标本中仅1例HBeAg阳性,其余均为阴性,突变标本的病毒载量明显高于未突变标本.结论 在中国献血人群中发现感染HBVPreC/BCP区的1种新交异,它可能与抑制HBeAg的表达和促进病毒复制有关.     

献血者HBV DNA存在的确认与S蛋白变异特征分析

目的对HBsAg阴性和阳性献血者血样HBV DNA存在的确认并分析隐匿性乙型肝炎病毒S区变异特征。方法使用EIA/NAT方法筛查深圳地区19 397份无偿献血者血样,把109例乙肝不合格样品分成3类(HBs Ag+/NAT+、HBs Ag+/NAT-、HBs Ag-/NAT+),通过跟踪检测,确认为OBI毒株10例、HBV窗口期感染期3例和5例缺失追踪的HBs Ag-/HBV DNA+样品,采用荧光定量聚合酶链反应(QPCR)测定HBV病毒载量,应用NestedPCR技术扩增S基因片段并测定序列,与B/C基因型HBs Ag+/HBV DNA+阳性野毒株序列比对。结果深圳市无偿献血者经乙肝表面抗原胶体金快速试纸筛查后的HBs Ag阳性检出率为0.34%(66/19 397);隐匿性乙型肝炎病毒感染(OBI)的流行率范围为1∶1 939-1∶1 293,HBV窗口期感染流行率范围为1∶6 465-1∶2 424;10例OBI样品其病毒载量介于不能定量至112.0 IU/m L(中位数98.5 IU/m L)。10例OBI样本在S蛋白区(nt215-710)出现随机变异,OBI样品S区氨基酸置换率显著高于野毒株(P0.000 1),有4、2、3个OBI样品分别在CTL表位21-29、86-96、172-180出现L21S(2)、K/R24E(1)、I25M(1)、L88P(2)、S172F/L(2)、V178T(1)变异;OBI非CTL表位免疫区的氨基酸置换率亦显著高于野毒株(P0.05);其中1个OBI样品在nt636发生缺失变异。结论深圳献血者OBI流行率有增高趋势,OBI发生机制与乙型肝炎病毒的S蛋白区变异,特别是免疫活性区的变异密切相关。     

四川地区供血浆人群隐匿性乙型肝炎病毒感染的研究

目的了解四川地区供血浆人群隐匿性乙型肝炎病毒感染(OBI)情况,分析现行标准下原料血浆的HBV残余风险。方法采用实时荧光PCR和ELISA法,对四川地区10个单采血浆站2007年7月～2009年7月筛查合格的56 620名次供浆者的135 542份原料血浆标本作HBV NAT和HBsAg同步筛查,对筛查阳性的标本以进口试剂复核、作中和试验及HBV DNA定量测定,并对阳性血浆的供血浆者追踪分析,确认OBI标本。结果共检出HBV DNA阳性12份(9人),四川地区原料血浆HBV DNA检出率为0.008 9%(12/135 542);HBV DNA载量均<1 000 IU/ml;采用国产ELISA试剂检测该12份标本HBsAg均为阴性,而用进口试剂检测并经中和试验确认了其中5份(3人)为HBsAg阳性,其余7份(6人)为OBI血浆,血清学模式均为HBsAg-/HBeAg-/HBcAb+;对供血浆者2～9个月的追踪分析显示ELISA和NAT检测结果无变化,与筛查结果一致。结论 HBsAg阴性供血浆人群中存在OBI感染者,四川供浆人群中OBI感染率为0.010 6%(6/56 620),低于现有报道的我国无偿献血者的OBI感染率;按照现行要求采用ELISA法检测原料血浆,灵敏度较低的国产试剂检测HBsAg的残余风险(0.0089%)高于进口试剂(0.005 2%)。增加HBV NAT能有效降低原料血浆OBI的漏检风险。     

韶关市无偿献血人群隐匿性乙型肝炎病毒感染状况分析

目的调查和分析韶关地区无偿献血人群中隐匿性乙型肝炎病毒感染(occult hepatitis B virus infection,OBI)情况。方法应用酶联免疫吸附法(ELISA)和核酸检测(NAT)法筛查无偿献血者血液标本,对HBsAg(–)/HBV DNA(+)样本进行BCP/PC、S区以及全基因序列巢式PCR扩增及病毒载量测定,对检测的病毒序列进行基因分型分析。结果在18 030份无偿献血者血液标本中,检测出19例HBsAg(–)/HBV DNA(+)样本,阳性率为1∶949,所有样本ALT的检验结果均正常(40 U),其中OBI 16例,检出率为1∶1126,11例为基因型B,2例为基因型C,5例未能确定基因型。结论血液NAT检测可提高输血安全性。     

深圳市无偿献血者隐匿性HBV感染发展预后以及性传播的研究

目的研究本地区无偿献血者隐匿性HBV感染(OBI)发展预后以及性传播的可能。方法追踪随访25名来自2010-2012年确认为OBI的无偿献血者及其配偶,采用化学发光方法检测HBs Ag,常规核酸检测方法(NAT)及Nested-PCR方法扩增BCP/PC、S基因确认HBV DNA的存在;实时荧光定量检测方法(QPCR)定量乙肝病毒载量。结果从25名OBI献血者,成功追踪回访15名及6/15名献血者配偶,15名OBI献血者男女比例为8∶7,病毒载量范围在(10-121.8)IU/m L(中位数14.3 IU/m L),9/15例为抗-HBc阳性。在2-4年后的随访结果,15名OBI献血者有4名(26.7%)转为显性HBV感染(HBs Ag+/HBV DNA+),7名(46.6%)献血者HBV转阴(HBs Ag-/HBV DNA-),4名(26.7%)仍呈OBI持续感染状态(HBs Ag-/HBV DNA+)。OBI转为HBV的献血者的病毒载量显著高于原来OBI感染状态(P0.05),而仍维持OBI感染献血者的病毒载量与2-4年前相比没有统计学差异(P0.05)。6名OBI献血者的配偶,均为没有感染HBV(HBs Ag-/HBV DNA-)。结论感染OBI献血者存在自然清除病毒及转为显性HBV感染的发展预后,HBV感染者的起源是否与OBI有关,有待进一步探索。     

无偿献血人群中HCV/OBI共感染者的分子流行病学特征

目的了解无偿献血人群丙型肝炎病毒(HCV)感染者中隐匿性乙肝感染(OBI)率,为进一步阐明HCV/OBI的作用机制提供科学依据。方法采用盖立复PROCLEIX TIGRIS、罗氏cobas s 201和罗氏E601等仪器对2011年1月—2015年7月广州无偿献血者中的933(人)份HCV感染者标本做HBV DNA和抗-HBc检测,比较HCV单纯感染者和HCV/OBI共感染者之间性别、年龄、民族和转氨酶的差异;巢式PCR扩增HCV/OBI共感染者HCV C区和S区,并构建进化树和基因分型,荧光定量PCR检测HCV和HBV的病毒载量;另外,随机选取同期本地HCV 6a基因型的44名单纯HCV感染者和16名HCV/HBV共感染者最为对照组,通过巢式PCR扩增各组HCV C区,并对3组对象的HCV核心蛋白氨基酸序列做比对分析。结果本组HCV感染的献血者标本中,有6(人)份HBV DNA和抗-HBc阳性,亦即OBI感染率为6.43‰(6/933);该6份HCV/OBI共感染标本的HCV基因型中6a占83.3%(5/6)、1b占16.7%(1/6),HCV病毒载量(log_(10)IU/mL)为3.8—5.7(5.0±0.69)。HCV单纯感染者和HCV/OBI共感染者的性别、年龄、民族、籍贯和ALT均无明显差异(P>0.05)。HCV单纯感染者、HCV/HBV共感染者和HCV/OBI共感染者HCV核心蛋白序列氨基酸变异数分别为0.8±1.3 vs 0.7±1.5 vs 0.4±0.5(P>0.05),没有在HCV/OBI共感染者中发现一致性的结构或突变规律。结论广州地区无偿献血人群HCV感染者中的OBI阳性率较高。     

联检反应性鉴别非反应性献血者血浆标本乙型肝炎病毒感染情况的研究

目的 分析常规血筛中核酸单检系统联检结果反应性而初次鉴别结果非反应(NRR)献血者标本中HBV的感染情况,以期为NRR标本后续相关研究提供建议及数据支持。方法 对60份常规血筛中酶免结果阴性,核酸单检系统检测结果为NRR的献血者血浆标本进行HCV RNA和HIV RNA重复鉴别检测、HBV DNA病毒载量检测、HBV pgRNA病毒拷贝量检测,并对HBV DNA病毒载量和HBV pgRNA病毒拷贝量检测结果为阳性的NRR标本进行HBsAg、HBsAb、HBcAb、HBeAg、HBeAb的血清学检测,分析其中血清学感染状态和隐匿性乙型肝炎(OBI)的感染情况。结果 60份NRR标本HCV RNA及HIV RNA重复鉴别结果均为阴性。60份NRR标本中HBV DNA定量检测结果为阳性的有9份(15%),HBV DNA浓度均<10 IU/mL;HBV pgRNA定量检测结果为阳性的有9份(15%),其病毒拷贝量■为289±58.25(copies/mL);HBV DNA阳性且HBV pgRNA阳性NRR标本有2份(3.33%)。9份HBV DNA阳性标本中HBcAb阳性率最高为66.6...     

嘉兴地区献血人群隐匿性乙肝病毒感染血清学及病毒学特征研究

目的研究分析嘉兴地区献血人群隐匿性乙肝病毒(OBI)感染血清学及病毒学特征。方法采用常规的ELISA(HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP)和核酸扩增技术(NAT)对本中心52 698份无偿献血者标本进行联合筛查,对NAT+标本做进一步鉴别检测病毒类型;收集HBs Ag-/HBV-DNA+的标本再另选3种不同的HBs Ag酶免试剂盒定性检测,并选用化学发光对HBsAg和抗-HBs定量检测,同时采用实时荧光PCR(QPCR)进行HBV核酸病毒载量测定;再结合血清学乙肝三系标志物、追踪检测和一般流行病统计学资料(性别、献血次数和年龄)来进一步分析研究OBI的血清学及病毒学相关分布情况。结果共确认47例OBI感染者,OBI流行率为0.89‰(1∶1 121),窗口期(WP)2例(1∶26 349);HBsAg、HBeAg检测结果均为阴性,发现6种OBI血清学模式,抗-HBs定量100 m IU/m L的标本占27.66%(13/47),抗-HBc+占91.49%(43/47),HBV-DNA核酸定量范围(4.10-1.82)×10~3(IU/m L)(中位数15.83),5例阳性对照HBsAg+/HBV-DNA+病毒载量范围(61.47-1.28)×104(IU/m L)(中位数538.15),两组结果比较,其差异有统计学意义(P0.05);40岁以上的男性献血者OBI感染率高(P0.05),多次献血者与首次献血者OBI感染率差异有统计学意义(0.01P0.05)。结论 OBI感染者病毒载量低,以抗-HBc+为主要血清学表现形式;NAT可以检出OBI,缩短窗口期,有利于保障临床血液安全。     

无偿献血者隐匿性乙型肝炎病毒Pre-S/S区变异的研究

目的调查无偿献血人群的隐匿性乙型肝炎病毒感染(OB I)流行率情况与分析Pre-S/S区变异特征。方法使用EIA/NAT方法筛查深圳地区15 338人份无偿献血者血标本,经跟踪检测,获得1例HBV窗口期感染毒株和5例OB I毒株,采用荧光定量聚合酶链反应(QPCR)测定OB I病毒载量,应用巢式聚合酶链反应(Nested-PCR)技术从5例OB I样品中获得3例Pre-S/S基因片段并测定序列,进行基因分型,与对应基因型HBsAg阳性野毒株序列比对。结果深圳市无偿献血者隐匿性乙型肝炎病毒感染(OB I)的流行率为1∶3 068。5例OB I样品其病毒载量为<1 IU/m l(不能定量)~121.8 IU/m l(中位数为54.6 IU/m l)。3例OB I样本为基因C型,在Pre-S/S蛋白区出现随机变异,OB I样品Pre-S/S区氨基酸置换率显著高于对应基因型野毒株(P<0.01),其中在Pre-S/S区的免疫表位区氨基酸置换率亦显著高于野毒株(P<0.01),但在高频变异的主要亲水区(MHR)却是高度保守,只有1例OB I出现改变基因亚型的I126S变异。结论乙肝病毒的Pre-S/S蛋白区变异,特别是Pre-S/S蛋白免疫表位区的变异,可能是OB I发生机制之一。     

青岛地区无偿献血者乙型肝炎病毒感染血清学和病毒特征分析

目的 分析青岛地区无偿献血者乙型肝炎病毒感染的血清学及病毒学特征.方法 采用常规的血清学试验和核酸扩增技术对本地区315 520份无偿献血者标本进行联合筛查,对HBsAg-/HBV DNA+标本进行高精度病毒载量检测和补充乙肝5项检测,采用PCR直接测序法获得标本中HBsAg编码基因即S基因序列,分析病毒基因型别及氨基...     

Occult hepatitis B — the result of the host immune response interaction with different genomic expressions of the virus

With over 40 years of history, occult hepatitis B infection (OBI) continues to remain an important and challenging public health problem. Defined as the presence of replication-competent hepatitis B virus (HBV) DNA (i.e., episomal HBV covalently closed circular DNA) in the liver and/or HBV DNA in the blood of people who test negative for hepatitis B surface antigen (HBsAg) in currently available assays, OBI is currently diagnosed using polymerase chain reaction (PCR) and real-time PCR assays. However, all efforts should be made to exclude a false negative HBsAg in order to completely follow the definition of OBI. In recent years, significant advances have been made in understanding the HBV lifecycle and the molecular mechanisms that lead to the persistence of the virus in the occult form. These factors are mainly related to the host immune system and, to a smaller proportion, to the virus. Both innate and adaptive immune responses are important in HBV infection management, and epigenetic changes driven by host mechanisms (acetylation, methylation, and microRNA implication) are added to such actions. Although greater genetic variability in the S gene of HBV isolated from OBIs was found compared with overt infection, the mechanisms of OBI are not mainly viral mutations.     

HBsAg阴性、HBV DNA阳性献血者病毒感染特征研究

目的了解上海地区献血人群中血清HBsAg阴性、HBV DNA阳性感染的流行率、病毒血清学和分子生物学特点。方法选取HBsAg阴性、核酸筛查确认为HBV DNA阳性的献血者血清标本,采用酶联免疫法（ELISA）检测病毒血清标志物抗-HBc和抗-HBs;PCR扩增HBV S区基因片段,对扩增后的产物进行测序分析后,将产物序列与Genbank中HBV序列进行Blast比对,获得标本HBV毒株的基因型;采用DNAMAN软件进行蛋白表达分析,确定标本毒株的血清型,并与Genbank中野生型HBV序列进行比较,获得S区基因编码蛋白突变情况。结果上海地区HBsAg阴性献血人群HBV DNA阳性感染率约为0.045%。18例HBsAg阴性、HBV DNA阳性标本血清病毒载量均低于200IU/ml,且大部分低于20IU/ml;其中14例（77.8%）病毒血清标志物为抗-HBc和/或抗-HBs阳性。18例样本全部为B和C基因型,主要为adw和adr血清型。14例血清抗-HBc和/或抗-HBs阳性样本中,13例样本发生了S蛋白氨基酸突变,其中8例B基因型较多发生Q101K/H、M103T/I、F134L、D144A突变,5例C基因型较多发生S114T/A、T118K/R、K141T、S143T突变;4例血清阴性样本中,均未发生S区蛋白位点突变。结论上海地区献血者存在HBsAg阴性、HBV DNA阳性感染者,其血清病毒载量低,感染病毒全部为B和C基因型,主要为adw和adr血清型;其中大部分为隐匿性HBV感染,少数可能为窗口期感染;隐匿性HBV感染病毒多发生S蛋白氨基酸位点突变。     

不同核酸检测方法对献血者隐匿性乙肝病毒感染的研究

目的了解无偿献血者中隐匿性乙肝病毒感染情况,并比较不同核酸检测方法对隐匿性乙肝病毒感染检测能力的差异。方法分别采用nested-PCR和Procleix Ultrio全自动核酸检测系统对无偿献血者血浆标本进行HBV核酸检测,对核酸阳性标本进行HBV DNA序列分析。结果在总计9 209例次标本的检测中,共有9 159例为HBsAg(-);HBsAg(-)标本中nested-PCR方法检出18例HBV DNA阳性(0.19%,18/9 159),而Procleix Ultrio检出7例(0.076%,7/9 159),两者间差异有统计学意义(P<0.05);测序结果显示隐匿性HBV感染者中C基因型所占的比例(64.7%,11/17)明显高于HBsAg阳性的HBV感染者(23.1%,6/23,P<0.01)。结论闽南地区无偿献血者中存在较高比例的隐匿性乙肝病毒感染;不同核酸检测方法对献血者隐匿性乙肝病毒感染的检测能力存在差异。     

Efficacy of hepatitis B virus (HBV) DNA screening and characterization of acute and occult HBV infections among blood donors from Madrid, Spain

BACKGROUND: Screening of blood units for hepatitis B virus (HBV) DNA identifies donations collected during the window period (WP) of the acute infection and may improve viral safety of the blood supply. It also leads to the detection of occult hepatitis B infection (OBI).
STUDY DESIGN AND METHODS: From January 2005 to December 2006, a total of 383,267 blood units were screened for hepatitis B surface antigen (HBsAg) and HBV DNA in two transfusion centers in Madrid, using either individual-donation nucleic acid testing (ID-NAT) or minipool (MP-NAT) of eight donations (MP8). Samples positive for HBV DNA and negative for HBsAg were confirmed by a second molecular test, the viral DNA was quantified, and a genome fragment including the region encoding the major hydrophilic region (MHR) of HBsAg was sequenced.
RESULTS: The overall yield of HBV DNA–positive, HBsAg-negative units was 1 in 21,282 (18 cases), higher when using ID-NAT than MP8-NAT (1:9862 vs. 1:51,011; p < 0.01). Four donations (1/95,817) were collected during the infectious pre-HBsAg WP, one during an early recovery stage, and the remaining 13 (1/29,482) were OBIs, six of whom had no detectable antibody to HBsAg. Low-level Genotype D HBV DNA was detected in all OBI cases; the frequencies of this genotype and MHR amino acid substitutions were significantly higher than reported from unselected Spanish HBsAg carriers. Donors with OBI had normal aminotransferase levels and were significantly older than donors carrying HBsAg.
CONCLUSIONS: Blood donors in the WP and with OBI are not uncommon in Madrid and are detected at a higher frequency with ID-NAT than MP-NAT.     

深圳献血人群隐匿性乙型肝炎病毒全基因序列系统进化树分析

目的了解深圳献血人群隐匿性乙型肝炎B和C基因型及亚型的分布规律,研究不同毒株全基因序列进化关系。方法对30例HBsAg(-)/HBV DNA(+)标本进行基本核心启动子/前C区(BCP/PC,295 bp)、HBV全基因(3 162 bp)巢式PCR扩增,PCR产物克隆后测序。2者均为阳性的5份标本合成3 215 bp长的全基因序列,与GenBank中已发表的HBV A～H基因型23株的全序列进行系统进化树分析确定基因型,将所属基因型B和C亚型再作系统进化树分析,以确定基因亚型。结果获得5例全基因序列,4例为C型,1例为B型。分属于C2,C2,C2,C1和B2亚型。3例C2亚型与日本、马来西亚基因亚型的进化距离最近,C1株与马来西亚和泰国2例携带者的病毒株进化距离最近。B2株与印度尼西亚华裔基因亚型的病毒株进化距离最近。结论深圳献血人群隐匿性乙型肝炎感染病毒基因亚型有C2,C1,B2,以C2亚型为主。     

江苏地区献血者隐匿性HBV感染情况调查

目的调查无偿献血人群中隐匿性乙型肝炎病毒的携带率,病毒载量与血清学标志物检出的关系。方法对无偿献血者血液进行ELISA检测后,再行HBV、HCV、HIV核酸检测(NAT)。ELISA阴性、NAT阳性样品再进行HBVDNA、HCV RNA、HIV RNA定量检测及HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb化学发光法检测。结果共检测51 248份献血者血液样品,检出41例隐匿性HBV感染者,其携带率为0.80‰;血浆HBV病毒载量均小于66IU/ml;HBcAb阳性者23例,占56.1%;HBcAb伴HBsAb阳性者14例,占34.1%;HBsAb阳性4例,占9.7%。HBsAb或伴HBcAb阳性组与单一HBcAb阳性组相比,HBV DNA含量的差异无统计学意义(P<0.05)。结论江苏地区无偿献血者中隐匿性HBV感染率约为0.80‰;其HBV病毒载量均较低,且血清学标志物的检出模式与病毒载量无相关性。