液态蛋白芯片技术在抗-HCV、抗-TP检测中的应用

目的建立液态蛋白芯片联合检测丙型肝炎病毒(HCV)抗体和梅毒螺旋体(TP)抗体的方法,并采用已知标准品进行评估。方法 HCV和TP重组抗原分别包被在不同的羧基化珠子上,应用免疫间接法原理建立液态蛋白芯片检测抗-HCV和抗-TP的方法。利用建立的方法检测标准血清盘标本和已知结果的标本,并评估方法的敏感性和特异性。结果液态蛋白芯片法检测抗-HCV灵敏度达到1 NCU/ml,抗-TP灵敏度达到2 NCU/ml。在标准血清盘中,抗-HCV阳性符合率24/24,阴性符合率16/16;抗-TP阳性符合率19/23,有4份IgM阳性标本未检出,阴性符合率17/17。在收集的60份阳性标本、2 000份阴性标本中,抗-HCV阳性符合率100%,阴性符合率分别为99.5%。抗-TP阳性和阴性符合率均为100%。结论建立的液态蛋白芯片方法操作简便、快速,可同时检测抗-HCV和抗-TP。     

不同ELISA试剂HBsAg初复检结果的比较

目的探讨ELISA复检试剂在实际血液筛查HBsAg中的问题。方法使用加样仪和FAME全自动酶免分析仪,分别用不同厂家ELISA试剂对血标本作HBsAg筛查,并用临检中心定值质控血清和HBsAg血清盘检测最低检出量和符合率,部分HBsAg阳性标本用乙型肝炎荧光PCR试剂盒检测。结果219 974份标本中共检出HBsAg阳性1 829份,阳性率为0.83%,其中在1 829份阳性中,国产A的HBsAg阳性为1 439份,检出率78.67%,进口B的HBsAg阳性为1702份,检出率93.05%。进口B共检测15批次,最低检出量为(0.25-0.50)ng/ml,血清盘符合率11批次完全相符,其中血清盘阳性符合率15批次均为15/15,阴性符合率11批次为15/15,4批次为14/15。国产A共检测18批次,2000-2002年最低检出量为(0.50-1.00)ng/ml,2003-2004年为(0.25-0.50)ng/ml,血清盘符合率2批次完全相符,其中血清盘阳性符合率7个批次为14/15,阴性符合率8个批次14/15,1个批次12/15。结论2种不同ELISA试剂的HBsAg检出率存在差异,单独使用都有可能漏检,2次ELISA复检HBsAg在血液筛查中仍有实际应用价值,应重视HBsAg血筛试剂的质量标准和质量控制。     

金标法与时间分辨法检测乙肝表面抗原结果分析

对90例时间分辨检测为阴性的血清标本和2866例时间分辨为检测阳性的血清标本,采用金标法检测HBsAg,以时间分辨为标准,对金标法的灵敏度、特异性进行评价。90份阴性血清中金标法88份阴性,2份假阳性,特异性为97.8%。2866份为检测阳性的血清标本,金标法2700份阳性,假阴性166份。分别为0.2～1.0ng/mlHBsAg的37例阴性,1.0～10.0ng/ml的121例为阴性,10.0～225.0ng/ml的8例,与时间分辨分析法阳性符合率三个浓度段分别为5.1%、30.5%和99.8%。在0.2～10.0ng/ml和10.0～225.0ng/ml两者阳性率有显著性差异(P<0.01)。金标法快速简便,单份检测,无需任何仪器,适合急诊检测,但灵敏度低,特别是在10.0ng/ml以下易造成漏检。TRFIA灵敏度与特异性较优越,给出了HBsAg的量化结果,更容易动态观察乙肝的病情发展,为临床治疗提供可靠依据。     

时间分辨免疫荧光法和电化学发光法检测HBsAg的对比分析

目的用电化学发光法作为标准,探讨时间分辨免疫荧光法在检测HBsAg上的应用。方法对临床348份血清标本、一份HBsAg高值梯度稀释血清及生物制品检定所标准血清分别用电化学发光法和时间分辨免疫荧光法分别检测,比较两种方法检测结果的阴阳性符合率、灵敏性、特异性、准确性、线性范围以及阳性标本的定量相关性等。结果对临床348份血清检测结果阴阳性符合率为98.26%;阳性标本的定量相关性为γ=0.9641(P<0.001);两种方法的线性范围,时间分辨免疫荧光分析法约为1:2～1:2048(0.21～223.07ng/ml),电化学发光约为1:2～1:4096(0.15～223ng/ml)。结论时间分辨免疫荧光法与电化学发光法在HBsAg的定量检测上的灵敏性、准确性和线性范围都基本相当。     

时间分辨免疫荧光法和电化学发光法检测HBsAg的对比分析

目的 用电化学发光法作为标准,探讨时间分辨免疫荧光法在检测HBsAg上的应用.方法 对临床348份血清标本、一份HBsAg高值梯度稀释血清及生物制品检定所标准血清分别用电化学发光法和时问分辨免疫荧光法分别检测,比较两种方法检测结果的阴阳性符合率、灵敏性、特异性、准确性、线性范围以及阳性标本的定量相关性等.结果 对临床348份血清检测结果阴阳性符合率为98.26%;阳性标本的定量相关性为γ=0.9641(P＜0.001);两种方法的线性范围,时间分辨免疫荧光分析法约为1:2～1:2048 (0.21～223.07ng/ml),电化学发光约为1:2～1:4096(0.15～223ng/ml).结论 时间分辨免疫荧光法与电化学发光法在HBsAg的定量检测上的灵敏性、准确性和线性范围都基本相当.     

液相芯片法验证蛋白质免疫印迹试验检测HIV-1结果的敏感性和特异性

目的初步分析采用液相芯片法研制人类免疫缺陷病毒(HIV)-1检测试剂的可行性。方法采用液相芯片技术用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测HIV-1阳性和阴性的标本;用HIV-1的gp120、gp41、p24抗原分别包被不同编号的免疫磁珠,与生物素化二抗、亲和素化荧光染料PE组成液相芯片检测系统,对标本进行检测分析。结果 55份标本经Western Blot法确认阳性样本检测符合率为100%;76份经酶联免疫吸附试验(ELISA)初检和复检阴性的标本检测HIV-1gp120、HIV-1gp41、HIV-1p24抗原均为阴性;86份经ELISA法检测初检和复检为阳性而Western Blot法确认为阴性的样本,其HIV-1gp120、HIV-1gp41、HIV-1p24单片段检测均为阴性。液相芯片法检测HIV-1抗体的敏感度和特异度均为100%。结论采用液相芯片技术组成的HIV-1抗体检测系统,其敏感度和特异度均优于ELISA法检测。     

化学发光法与ELISA法对HBsAg和HBsAb同时阳性标本检测比较

目的比较化学发光法(CLIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)在检测HBsAg和HBsAb同时阳性标本的结果,评价其是否具有一致性。方法用4种不同浓度HBsAg标准品和4种不同浓度HBsAb标准品两两配合成16份样本,用CLIA、ELISA法分别检测,并于24h后再次检测;同时用4种不同浓度HBsAg血清标本和4种不同浓度HBsAb血清标本两两配合成16份样本进行同样检测。结果两种方法HBsAg检测结果均随着HBsAb浓度的增加而呈下降之势,对于1.5ng/mlHBsAg,当加入HBsAb浓度达到400mIU/ml时,CLIA法检测出现阴性结果;低浓度HBsAb受到HBsAg的影响随HBsAg的升高而加大,但随着HBsAb浓度的升高,受到HBsAg的影响呈现下降趋势,随着HBsAb浓度的升高,受到HBsAg的影响呈现下降趋势,当浓度为400mIU/ml时,CLIA法检测基本不受影响,而ELISA法仍然受到150ng/mlHBsAg影响。24h后HBsAg和HBsAb相互间影响更大,出现更多阴性结果。4种不同浓度HBsAg、HBsAb血清标本配成16份样本检测显示类似结果。CLIA法和ELISA法对HBsAg、HBsAb同时阳性标本检测的一致性微弱,标本放置24h后两法一致性加强。结论对于HBsAg和HBsAb同时阳性的标本,最好在当天能用另一种方法进行检测、印证,如果在24h以后进行复查,弱阳性一方可能检测出阴性结果,所以最好重新抽取血液检验。     

献血者乙型肝炎病毒筛查结果分析

目的通过对HBsAg阳性而核酸检测(NAT)结果阴性的血液标本进行HBsAg确认检测,以评估不同检测策略的优劣,以期为降低HBV输血感染风险和建立科学有效的献血者屏蔽归队策略提供科学依据。方法采用2种ELISA试剂进行无偿献血者的HBsAg筛查,同时用TMA技术进行HBV DNA检测,将ELISA法HBsAg阳性但TMA法HBV DNA阴性的血液标本进行HBsAg中和确证实验和乙肝血清学标志物(HBV-M)检测。结果在47 004份标本中,共检出226份HBsAg阳性且HBV DNA阴性的标本。对其中161份标本进行了HBsAg中和确证实验,43份确证阳性,确证阳性中2种ELISA试剂均阳性占37份,ELISA试剂1单阳性标本和ELISA试剂2单阳标本各为3份,其确证阳性率分别为3.7%、9.1%。ELISA法单试剂检测HBsAg阳性结果的比例占到了HBsAg不合格血液标本的70%,但ELISA试剂1和ELISA试剂2的假阳性率分别高达96.3%和90.9%。对血液检测模式进行了筛查效果的评估,"1遍NAT+1遍ELISA"筛查模式检出率为0.094%,"2遍ELISA"筛查模式检出率为0.017%,二者比较有显著性差异。对133份进行了HBsAg中和确证实验的标本实施了乙肝血清学标志物(HBV-M)两对半检测,抗-HBs、抗-HBe、抗-HBc在ELISA结果阳性的不同情况中,其阳性比例呈现不同趋势,抗-HBc阳性率最高。结论 "1遍NAT+1遍ELISA"筛查策略比原有"2遍ELISA"筛查策略更能保障血液安全。由ELISA假阳性导致的献血者被错误屏蔽的问题,需要我们建立献血者归队策略,并制订科学有效的检测步骤和流程。     

两种方法检测乙型肝炎病毒表面抗原的比较

目的对胶体金免疫层析（GICA）法与酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）进行比较。方法采用两种方法检测18～65岁人群血清标本4086份。结果GICA法检测出HBsAg阳性标本327份,阳性率为8．0％;ELISA法检测出阳性标本391份,阳性率为9．6％;GICA法与ELISA法检测标本符合率为98．43％。结论GICA法操作简便、快速,检测的特异度较好,但其灵敏度有限,ELISA法更适合医院、血站的检测应用。     

自建微流控-芯片法检测布鲁氏菌的性能验证及评价

目的 采用自建微流控-芯片法检测系统对本实验室于2021年5月至2022年8月期间收集保存的布鲁氏菌阳性菌株、阳性血清、阴性血清进行检测,验证自建系统检测布鲁氏菌核酸的主要性能是否满足相关标准。方法 依据CNAS-GL039:2019《分子诊断检验程序性能验证指南》、《实验室自建分子诊断项目基本要求专家共识》、《布鲁菌病诊疗专家共识》相关要求,对自建微流控-芯片法检测系统的符合率、重复性、检出限、交叉反应、抗干扰能力、敏感性及特异性进行验证及评价。结果 自建检测系统与经血培养鉴定为布鲁氏菌阳性菌株、体检者阴性标本检测结果的阳性符合率为100%,阴性符合率为100%,总符合率为100%;1.50×10⁸CFU/mL、500 CFU/mL布鲁氏菌阳性标本重复性检出率均为100%;检出限浓度(1000 copies/mL)企业参考品20次重复检测结果均为阳性;七种交叉反应病原体标本检测中,布鲁氏菌核酸结果均为阴性;在混有干扰物质的弱阳性布鲁氏菌标本检测中,布鲁氏菌核酸结果均为阳性;在布鲁氏菌感染检测中的敏感性和特异性分别为89.88%、95.74%。结论 微流控-芯片法...     

单中心两种方法检测280例群体反应性抗体的对比分析

背景：液态芯片技术（Luminex）检测方法是近年来兴起的检测方法,应用液相芯片技术检测抗群体反应抗体,具有灵敏度高,特异性强,检测干扰少,高通量等优点。 目的：比较ELISA和Luminex两种方法对肾脏病患者血清标本中群体反应性抗体的检测差异及灵敏度。方法：选取280例肾脏病患者血清标本,同时应用ELISA和Luminex两种方法检测群体反应性抗体阳性率,并运用配对四格表资料的χ2检验进行统计学分析。 结果与结论：ELISA法检测群体反应性抗体阳性率为18.9%,Luminex法检测群体反应性抗体阳性率为33.6%。ELISA法检出抗HLA-Ⅰ类抗体和抗HLA-Ⅱ类抗体阳性率分别为12.8%和12.5%;Luminex法检出抗HLA-Ⅰ类抗体和抗HLA-Ⅱ类抗体阳性率分别为25.0%和20.7%。Luminex法的阳性检出率明显高于ELlSA法且Luminex法能准确检测到低浓度抗体。配对四格表资料的χ2检验P＜0.01,显示两种方法检测肾脏病患者群体反应性抗体结果差异有显著性意义。结果显示与ELISA法相比,Luminex技术具有更高的灵敏度和准确性,更适合应用于临床检测。     

A new HBsAg screening assay designed for sensitive detection of HBsAg subtypes and variants

The design of a new HBsAg screening assay, the Hepanostika HBsAg Ultra is based on the use of monoclonal antibodies raised against native wild-type HBsAg and reactive with HBsAg in which the common 'a'-determinant is modified by site-directed mutagenesis of four of the cysteine moieties. The design was checked using the same cysteine variants and samples from patients known to be infected with HBsAg variants. The results found were compared with other state-of-the-art commercial screening assays. The design of the Hepanostika HBsAg Ultra enabled detection of all variant HBsAg-positive samples in contrast to the other commercial assays. An additional 980 samples were tested to assess the specificity and sensitivity of the Hepanostika HBsAg Ultra. Screening of presumed negative serum and plasma samples resulted in a specificity of 100%. This makes the Hepanostika HBsAg Ultra the first screening assay with a design able to detect HBsAg variants with high sensitivity and specificity.     

HBsAg弱阳性样本的3种测定方法比较

目的比较胶体金免疫层析试验（GICA）和酶联免疫吸附试验（ELISA）与微粒子化学发光检测技术（MEIA）检测HBsAg弱阳性样本的结果符合率，以了解3种方法的特异性与灵敏度等诊断指标。方法用3种方法平行检测收集的血清标本HBsAg，并相互比较。结果3种方法检测HBsAg的结果符合率为74．3％，其中ELISA与MEIA结果符合率为94．9％；GICA与MEIA结果符合率为76．9％。GICA检测HBsAg弱阳性样本时的各项诊断指标都不甚理想。结论1．GICA的灵敏度和特异性分别为81．3％和81．3％，较ELISA和MEIA低，检测HBsAg弱阳性样本时存在一定程度的漏检率和误诊率，只能起筛查作用，遇到HBsAg弱阳性的血清标本必须与ELISA法并用，实行双检。2．ELISA较MEIA灵敏度和特异性略低，当测定标本的OD值在临界值附近即检测灰区时建议用MEIA复检。     

中和确认试验对低水平HBsAg结果的确认及其应用评价

目的应用中和确认试验对低水平乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的结果进行确认,并对确认结果进行综合评价。方法采用微粒子酶免疫荧光法（MEIA）检测乙型肝炎血清学标志物,对从中筛选出的118例低水平HBsAg阳性标本进行中和确认试验,并对确认结果进行评价。结果118例HBsAg低水平阳性（2〈S／N〈20）标本,经中和确认试验确认阳性111例（94．1％）,阴性1例（0．8％）,不确定6例（5．1％）;受试者工作特征（ROC）曲线分析结果显示,当MEIA检测HBsAg的S／N=4．76时,特异性可达100．0％,敏感性为69．4％。结论MEIA对低水平HBsAg检测的敏感性高,特异性好;当HBsAg的S／N≥5时,一般可以排除假阳性的可能,无需进一步做确认试验。     

ELISA法HBsAg检测试剂盒质量评价

目的比较国产ELISA法HBsAg检测试剂盒的质量差异,优选适宜于献血者HBsAg检测的试剂盒。方法应用HBsAg国家参考品对所购进的试剂盒进行质量评价。结果5个厂家试剂的阴性符合率、阳性符合率、总符合率、灵敏度和精密度存有一定差别,2个厂家试剂有假阳性出现,2个厂家的试剂有最低检出限量参考品未检出。结论不同厂家的试剂质量存在明显差异,因此试剂使用前必须进行质量抽检,综合评价其质量。选择灵敏度高、特异性强的试剂,以提高献血者HBsAg的检测质量。     

HBsAg/TP抗体/HIV抗体胶体金联合检测试剂在献血者筛查中的应用评价

目的 评价乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、梅毒螺旋体抗体(TP抗体)和人类免疫缺陷病毒抗体(HIV抗体)胶体金联合检测试剂的检测灵敏性、特异性和重复性,以及应用于献血筛查的意义.方法 采用胶体金联合检测试剂分别对2 250份正常献血者血液标本、85份HBsAg阳性标本,78份TP抗体阳性标本和62份HIV抗体阳性标本进行检测,并与参比试剂检测结果进行比较.结果 胶体金联合检测试剂与TP抗体参比试剂的总符合率、灵敏度(阳性符合率)和特异性(阴性符合率)分别为99.87%,100%和99.87%;与HBsAg参比试剂的总符合率、灵敏度和特异性分别为99.82%,94.74%和99.87%,与HIV抗体参比试剂的总符合率和特异性为100%,各项检测结果差异均无统计学意义(χ2=0.36,P>0.05;χ2=0.09,P>0.05;χ2=0.08,P>0.05).胶体金联合检测试剂实验重复性阳性符合率为100%.结论 胶体金联合检测试剂具有反应速度快,操作更加简单和快捷、灵敏度高、特异性和重复性好,适用于献血前血液筛查.     

Transfusion safety on the African continent: an international quality control of virus testing in blood banks

BACKGROUND: Following World Health Organization recommendations that a quality control (QC) system be implemented in African blood centers, a pilot study of the performance of human immunodeficiency virus antibody (anti-HIV), hepatitis B surface antigen (HBsAg), and hepatitis C virus antibody (anti-HCV) testing by several Sub-Saharan African blood centers was initiated.
STUDY DESIGN AND METHODS: A reference laboratory sent a panel of 25 samples to six African blood center laboratories. The panel included eight negative samples; four anti-HIV-1–, one anti-HIV-2–, four anti-HCV–, and five HBsAg-positive samples; and three samples consisting of mixtures of two sera to mimic coinfections. Sensitivity, specificity, and overall quality (correct positive or negative status) scores were calculated.
RESULTS: From the 21 sets of results obtained (seven for each virus), eight were from rapid tests (two for HIV, three for HBV, and three for HCV) and 13 were from enzyme immunoassays (EIAs; all HIV EIAs were antigen/antibody combination assays). Overall assay sensitivity was 98% for HIV, 75% for HBV, and 88% for HCV; agreement between blood centers using the same assay was good. Sensitivity of rapid tests was notably poorer than EIAs, with overall sensitivity quality scores of 64.5% for rapid tests (20% for HBsAg rapid tests) compared to 100% for EIAs. The overall specificity quality scores were 98.3 and 94.5% for EIAs and rapid tests, respectively.
CONCLUSIONS: This pilot QC study organized for blood centers of Sub-Saharan Africa showed the feasibility of the approach despite some logistic constraints. Although interlaboratory variability was small, the poor performance of rapid tests, especially for HBsAg, raises policy questions about their use as the only screening assay.     

Evaluation of the highly sensitive chemiluminescent enzyme immunoassay “Lumipulse HBsAg‐HQ” for hepatitis B virus screening

Background

Ongoing efforts in the development of HBsAg detection kits are focused on improving sensitivity and specificity. The purpose of this study was to evaluate an improved, highly sensitive quantitative assay, “Lumipulse HBsAg‐HQ”, a chemiluminescent enzyme immunoassay designed for a fully automated instrument, the “Lumipulse G1200”.

Methods

Serum samples for reproducibility, dilution, correlation, sensitivity, and specificity studies were obtained from patients at the Osaka University Hospital. Seroconversion and sensitivity panels were purchased from a commercial vender. Subtype, sensitivity panels, and HBsAg recombinant proteins with one or two amino acid substitutions were prepared in‐house.

Results

The coefficients of variation for the low, medium, and high concentration samples ranged from 1.93 to 2.55%. The HBsAg‐HQ reagent for dilution testing showed good linearity in the 0.005‐150 HBsAg IU/mL range and no prozone phenomenon. All 102 HBV carrier samples were positive by HBsAg‐HQ, while other commercial reagents showed one or more to be negative. In the seroconversion panel, the 14‐day blood sample was positive. The sensitivity against HBsAg‐HQ “ad” and “ay” subtypes was 0.025 ng/mL. Comparisons among the HBsAg‐HQ, HISCL, and Architect HBsAg reagents were performed using the Bland‐Altman plot. Specificity for 1000 seronegative individuals was 99.7%. HBsAg‐HQ detected 29 positive serum among 12 231 routinely obtained serum samples, which showed concentrations of 0.005‐0.05 HBsAg IU/mL.

Conclusions

According to these results, the Lumipulse HBsAg‐HQ assay, with a highly sensitive limit of detection of 0.005 IU/mL, may facilitate the development of a better management strategy for a considerable proportion of infected patients.

     

HBsAg/TP联合全血金标试纸条在无偿献血筛查中的应用

目的评价乙型肝炎病毒表面抗原／梅毒螺旋体（HBsAg／TP）联合全血金标试纸条在无偿献血筛选中的应用。方法采用卫生部临床检验中心的HBsAg、梅毒抗体临床科研血清盘对联合检测HBsAg／TP的金标试纸条进行灵敏度、特异性的测试。选择本站2001～2005年7月TRUST、TP—ELISA法检测为阳性或可疑反应的107份血样;单-HBsAg阳性和单一梅毒抗体阳性血样进行1：1混合的30份血样,以及100份随机初筛血样,采用试纸条进行测试;再用两种不同厂家生产的TP—EI。ISA和TPPA法试剂对以上血样进行检测,最后对检测结果进行综合评估。结果HBsAg／TP联合检测金标试纸条对梅毒的敏感性为92％,特异性为100％;对HBsAg的敏感性为80％,特异性为100％。结论HBsAg／TP联合全血金标试纸条可用于无偿献血者的筛查,有助于确保血液质量,降低血液报废率,值得推广应用。     

上转发光免疫层析法定量测定HBsAg试剂条在血液筛检中的应用

目的评价上转发光免疫层析法HBsAg定量测定试纸条在无偿献血者献血前血液筛检中的应用效果。方法应用卫生部临床检验中心的HBsAg血清盘对ELISA、上转发光法和胶体金法检测HBsAg的灵敏度、敏感性、特异性和符合性等进行测试;用本站ELISA-HBsAg检测为阳性或可疑的无偿献血者标本27份、医院乙型肝炎患者35份和本市固定无偿献血者的29份,同时进行ELISA、胶体金法和上转发光法检测HBsAg。结果 ELISA检测血液中HBsAg灵敏度为0.2IU/ml,敏感性为88.46%,特异性为100.00%,符合性92.50%;上转发光法检测血液中HBsAg灵敏度为0.5IU/ml,敏感性为76.92%,特异性为100.00%,符合性85.00%;胶体金法检测血液中HBsAg灵敏度为3IU/ml,敏感性为42.31%,特异性为100%,符合性72.50%。结论上转发光法定量测定试纸条检测血液HBsAg的灵敏度是胶体金法检测的6倍,敏感性和符合性均远高于胶体金法,且灵敏度接近ELISA法,所以上转发光法HBsAg定量测定试纸条适合无偿献血者献血前的血液初筛。