人参皂苷Rh2对白血病HL-60细胞凋亡的诱导作用

目的探讨人参皂苷Rh2对人白血病HL-60细胞增殖和凋亡的影响。方法应用MTT法检测人参皂苷Rh2对HL-60细胞增殖的影响，采用DNA的片段化实验，观察人参皂苷Rh2对HL-60细胞凋亡的影响。结果G—Rh2能明显抑制HL-60细胞增殖，呈浓度依赖性关系；人参皂苷Rh2能明显诱导HL-60细胞凋亡，呈浓度和时间依赖效应，DNA的琼脂糖凝胶电泳分析可见凋亡特征性的DNA梯状图谱。结论G—Rh2主要通过有效抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡从而发挥其抗白血病效应。     

人参皂苷Rg3对急性髓细胞性白血病THP-1、HL-60细胞的干预作用

目的:探讨人参皂苷Rg3对急性髓细胞性白血病的干预机制。方法:体外培养急性单核细胞性白血病细胞系(THP-1)、急髓白血病M3细胞系(HL-60),采用人参皂苷Rg3对细胞系进行干预,采用MTS法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot法分析相关蛋白表达。结果:人参皂苷Rg3对THP-1、HL-60细胞均有不同程度的抑制生长效果,IC50分别为3.5、3.02 g·L~(-1)。人参皂苷Rg3作用24 h、48 h均可抑制急性髓细胞性白血病细胞增殖,且抑制作用与药物剂量呈依赖关系;人参皂苷Rg3对THP-1以及HL-60细胞的凋亡可起到诱导作用,细胞凋亡会随药物浓度升高而增加,且干预时间延长同样会增加细胞凋亡率,细胞凋亡率呈现时间、剂量依赖性。在作用48 h后,凋亡相关因子PARP出现了降解分裂条带,THP-1出现了Caspase-8条带轻度减弱,HL-60细胞出现了p-Akt明显减弱。结论:人参皂苷Rg3可以对Caspase-8及PARP相关蛋白的表达以及凋亡过程起到激活作用,使p-Akt表达水平降低,从而对肿瘤细胞的增殖以及凋亡起到抑制以及诱导作用。     

穿山甲煎液诱导HL—60细胞凋亡的研究

目的：探讨中药穿山甲对急性髓细胞性白血病细胞株HL-60的作用。方法：以人白血病细胞株HL-60为研究对象。采用形态学观察。流式细胞仪、Caspase-3酶活性测定、免疫组化等方法。结果：穿山甲浓度在2.5-10mg/ml范围内可抑制HL-60细胞生长,并诱导其发生凋亡;并激活Caspase-3酶活性。下降bcl-2基因表达。结论：穿山甲对HL-60细胞有诱导凋亡作用。     

三七皂苷R1诱导HL-60细胞凋亡中survivin、bcl-2的表达

[目的]探讨三七皂苷R1对人白血病细胞株HL-60细胞凋亡作用及其机制。[方法]光镜下观察三七皂苷R1作用下HL-60细胞形态,采用MTT比色法观察三七皂苷R1对人白血病细胞株HL-60细胞增殖的抑制作用。采用流式细胞术检测细胞凋亡改变,并以RT-PCR检测凋亡调节基因survivin、bcl-2mRNA的表达。[结果]三七皂苷R175-1200μg.ml-1可抑制人白血病细胞株HL-60细胞的生长,且呈时间和浓度依赖性。三七皂苷R1作用后人白血病细胞株HL-60细胞呈现凋亡特征,流式细胞术显示凋亡细胞比例升高,凋亡率随作用剂量的增高而升高。RT-PCR检测可见三七皂苷R1150μg/ml作用下survivin、bcl-2mRNA表达减少。[结论]三七皂苷R1能诱导人白血病细胞株HL-60细胞凋亡,其作用可能与凋亡调节基因survivin、bcl-2的下调有关。     

虫草多糖增强雷公藤内酯醇诱导的HL-60细胞凋亡作用及其机制

目的:探讨虫草多糖增强雷公藤内酯醇诱导白血病细胞HL-60的凋亡作用及其可能的分子机制.方法:将HL-60细胞分为对照组,雷公藤内酯醇对照组(5 ng/ml)和虫草多糖预处理+雷公藤内酯醇作用组.选用二种不同虫草多糖浓度(100 μg/ml,200 μg/ml)的药物处理HL-60细胞18 h,通过MTT法测定各组细胞的存活率,并用流式细胞仪通过Annexin V/PI双染法检测各组细胞的凋亡百分比.用Western blot方法检测各组细胞中凋亡相关蛋白Caspase-3、6、7、9和NF-κB的表达.结果:不同浓度的虫草多糖能抑制雷公藤内酯诱导的HL-60细胞的存活率,而且虫草多糖可协同增加雷公藤内酯诱导的HL-60细胞的凋亡百分比,呈现出明显的剂量依赖关系;Western blot检测显示,虫草多糖降低Caspase-3、6、7、9和NF-κB的蛋白表达,且随着浓度的升高,蛋白的表达量表现出逐渐减少的趋势.结论:虫草多糖对雷公藤内酯诱导的HL-60细胞凋亡有不同程度的抑制作用,其机制可能与抑制细胞中凋亡相关蛋白Caspase-3、6、7、9和NF-κB信号传导通路的激活有关.     

鲎素诱导HL-60细胞凋亡的机制探讨

目的 研究鲎素诱导HL-60细胞凋亡时,半胱氨酸蛋白酶(Caspases)活性的变化,探讨鲎素诱导HL-60细胞凋亡的可能机制.方法 以鲎素20 μg/ml处理HL-60细胞0～24 h.流式细胞仪检测线粒体膜电位.Western blot法和发色底物法检测Caspase-3、Caspase-6、Caspase-8和Caspase-9活性变化.Western blot法检测胞质中细胞色素C的变化.结果 鲎素处理HL-60细胞后,线粒体膜电位下降.Caspase-3、Caspase-6、Caspase-8和Caspase-9被激活,呈时间依赖性改变.鲎素处理HL-60细胞6 h Caspase-8活性最高,而Caspase-9在12 h活性最高,Caspase-6活性在18 h达峰值,Caspase-3活性峰值时间在24 h后.胞质中细胞色素C含量呈时间依赖性增加.结论 鲎素诱导HL-60细胞凋亡可能是多途径的,至少与线粒体途径和死亡受体途径相关.     

As2O3诱导NB4、HL-60细胞凋亡的机制研究

目的探讨三氧化二砷(As₂O₃)在体外抑制急性早幼粒白血病(acute promyelocyticleukemia, APL)细胞NB4、HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡的分子机制。方法 通过WST-8法检测上述两个细胞株的增殖抑制曲线;用AnnexinV/PI流式细胞术检测细胞的凋亡;用Real time PCR检测凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bcl-2、Bax、p53、C-myc、Survivin在As₂O₃处理前后的表达变化,同时用Westernblot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bcl-2、Bax、P53在As₂O₃处理前后的表达变化。结果 As₂O₃能够显著抑制两种细胞增殖, Westernblot检测及Realtime PCR结果显示,As₂O₃处理引起了两种细胞中Bax、Caspase-3、Caspase-8 、Caspase-9基因表达水平增加,且蛋白表达水平上都出现了活性形式的Caspases。NB4细胞中Survivin、C-myc、Bcl-2的基因表达水平都显著降低,突变型p53蛋白在细胞内的量同样显著下降;HL-60细胞的C-myc表达水平显著降低,但Survivin、Bcl-2表达水平无明显变化。结论 As₂O₃能在药物临床浓度范围内有效抑制急性早幼粒白血病细胞HL-60、NB4的细胞增殖, 但方式不同;1.5μmol/L浓度的As₂O₃对NB4细胞生长的抑制体现在诱导细胞分化并诱导细胞凋亡,对HL-60细胞生长的抑制只体现在诱导细胞分化。HL-60细胞中高表达的Survivin、Bcl-2抑制了细胞的凋亡。NB4、HL-60细胞株中P53基因的细胞遗传学变异的不同可能是As₂O₃对这两种细胞增殖抑制机制差异的主要原因之一。     

菱角提取物诱导 HL-60 细胞凋亡的机制探讨

目的 探讨菱角提取物对人早幼粒细胞性白血病细胞株 HL-60 细胞增殖和凋亡的影响及凋亡的分子机制。方法 采用 MTT 法检测菱角提取物对 HL-60 细胞的增殖抑制作用;吖啶橙染色和 DNA 琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞凋亡率及线粒体膜电位的变化;比色法测定 Caspase-3、9 蛋白活性。结果 菱角提取物能抑制 HL-60 细胞的增殖,其作用呈明显的时间和剂量依赖性。菱角提取物可诱导 HL-60 细胞凋亡并显示一定的剂量依赖关系。与对照组比较,菱角提取物可明显降低 HL-60 细胞线粒体膜电位,上调 Caspase-3、9 蛋白活性。结论 菱角提取物可抑制 HL-60 细胞的增殖,其机制与降低线粒体膜电位、激活 Caspase-3、9 蛋白继而诱导 HL-60 细胞凋亡有关。     

人参皂苷代谢产物衍生物对HepG2细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的 探讨人参皂苷代谢产物衍生物对HepG2细胞凋亡的影响及机制.方法 MTT法检测不同浓度人参皂苷代谢产物衍生物对HepG2细胞增殖的作用;流式细胞仪分析肿瘤细胞凋亡周期及细胞凋亡率;Western Blot法测定药物对HepG2细胞凋亡相关蛋白表达的影响.结果 人参皂苷代谢产物衍生物抑制肝癌HepG2细胞生长,呈浓度依赖关系.用50mg/L和100mg/L人参皂苷代谢产物衍生物处理细胞24h后,凋亡率与对照组比明显升高.流式细胞术分析显示S期和G2/M期细胞周期阻滞.Western Blot结果显示,人参皂苷代谢产物衍生物使细胞中Bax、Caspase-3蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达降低.结论 人参皂苷代谢产物衍生物促进肝癌HepG2细胞凋亡,可能与下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax、Caspase-3蛋白表达有关.     

延龄草总皂苷诱导结肠癌细胞HT-29凋亡的作用及机制研究

目的探讨延龄草总皂苷对人结肠癌HT-29细胞凋亡的影响及其机制。方法采用流式细胞术研究延龄草总皂苷对HT-29细胞线粒体膜电位以及凋亡的作用;Western blotting法检测给予HT-29细胞不同浓度延龄草总皂苷后凋亡相关蛋白Caspase-3,8,9,Bax和Bcl-2表达的变化。结果延龄草总皂苷能诱导HT-29细胞的凋亡;延龄草总皂苷可促进HT-29细胞Caspase-3,9及Bax的表达,降低Bc1-2的表达,且均呈剂量依赖性。结论延龄草总皂苷可以通过线粒体途径诱导HT-29细胞凋亡。     

吲哚美辛诱导的HL-60白血病细胞凋亡与JNK信号转导途径活化

目的 :观察吲哚美辛对HL 6 0白血病细胞增殖的抑制作用及细胞凋亡的诱导作用 ,了解C JunN 末端激酶 (JNK)信号转导途径在介导吲哚美辛诱导的HL 6 0细胞凋亡中的活化状态 ,揭示吲哚美辛诱导HL 6 0细胞凋亡的分子机制。方法 :以台盼蓝染色检测药物干预后的HL 6 0细胞活力 ;分析HL 6 0细胞的增殖能力 ;DNA梯状胶电泳及吖啶橙 /溴化乙锭染色形态学分析鉴定细胞凋亡 ;Western印迹检测凋亡信号蛋白caspase 9, 3和PARP的裂解激活以及JNK信号途径蛋白质MEK4 ,JNK ,P JNK ,P C Jun的表达及活化状态。结果 :2 0 0～ 4 0 0 μmol的吲哚美辛能够显著抑制HL 6 0细胞增殖和诱导HL 6 0白血病细胞凋亡 ,并呈浓度和时间依赖性 ;HL 6 0细胞凋亡伴有caspase 9,3和PARP的表达上调及裂解激活 ;MEK4蛋白表达呈浓度依赖性上调 ;磷酸化JNK和磷酸化C Jun呈浓度依赖性上调。结论 :吲哚美辛可抑制HL 6 0细胞增殖和诱导细胞凋亡 ;JNK信号途径活化介导了吲哚美辛诱导的凋亡。JNK途径的活化导致了下游caspase途径的活化。     

吲哚美辛诱导的HL-60白血病细胞凋亡与JNK信号转导途径活化

目的：观察吲哚美辛对HL-60白血病细胞增殖的抑制作用及细胞凋亡的诱导作用，了解c-Jun N-末端激酶(JNK)信号转导途径在介导吲哚美辛诱导的HL-60细胞凋亡中的活化状态，揭示吲哚美辛诱导HL-60细胞凋亡的分子机制。方法：以台盼蓝染色检测药物干预后的HL-60细胞活力；分析HL-60细胞的增殖能力；DNA梯状胶电泳及吖啶橙／溴化乙锭染色形态学分析鉴定细胞凋亡；Western印迹检测凋亡信号蛋白caspase-9，-3和PARP的裂解激活以及JNK信号途径蛋白质MEK4，JNK，P-JNK，P-C-Jun的表达及活化状态。结果：200～400txmol的吲哚美辛能够显著抑制HL-60细胞增殖和诱导HL-60白血病细胞凋亡，并呈浓度和时间依赖性；HL-60细胞凋亡伴有easpase-9，3和PARP的表达上调及裂解激活；MEK4蛋白表达呈浓度依赖性上调；磷酸化JNK和磷酸化C-Jun呈浓度依赖性上调。结论：吲哚美辛可抑制HL-60细胞增殖和诱导细胞凋亡；JNK信号途径活化介导了吲哚美辛诱导的凋亡。JNK途径的活化导致了下游caspase途径的活化。     

瑞香狼毒诱导HL—60细胞凋亡和调节SGC—7901细胞bcl—2蛋白表达

目的：探索瑞香狼素（SC）抗肿瘤机制。方法：以HL－60和SGC－7901为靶细胞,用MTT比色法测定细胞增殖抑制,荧光显微镜观察凋亡细胞的形态学改变,DNA电泳和流式细胞仪检测DNA断裂,免疫组化检测bcl-2蛋白表达。结果：含SC药物血清处理细胞48h后,HL－60细胞增殖呈剂量依赖性抑制,并表现出典型的凋亡细胞形态学改变及DNA断裂;即染色体聚集,核固缩,断裂及阶梯状DNA电泳条带,G1期前细胞从11．7％增到57．4％;而SGC－7901细胞bcl-2蛋白表达率从78．3％下降到32．9％。结论：SC可诱导肿瘤细胞凋亡,降低bcl-2蛋白表达。     

C-myc小干扰RNA对HL-60细胞凋亡的影响

目的:研究c-myc小干扰RNA对白血病细胞凋亡的影响,探寻白血病基因治疗的新方法。方法:应用针对c-myc的小干扰RNA转染HL-60细胞48 h后,倒置显微镜下观察细胞形态学变化,琼脂糖凝胶电泳法检测DNA梯形带和流式细胞仪Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡。结果:c-myc小干扰RNA作用后,HL-60细胞生长受抑,可见细胞核固缩,胞桨内出现凋亡小体。阴性对照组和空白对照组没有明显变化。DNA电泳干扰组出现典型的梯状条形带,对照组未出现明显凋亡梯形带。流式细胞仪分析干扰组细胞凋亡率可达26.21±0.75%,明显高于阴性对照组的4.58±0.48%和空白对照组的3.76±0.30%。结论:c-myc小干扰RNA对HL-60细胞有明显的抑制作用,可抑制细胞增殖,导致细胞凋亡,有望成为白血病靶向基因治疗的新工具。     

Generation of bcl-2 antisense RNA promotes apoptosis of human promyelocytic leukemia cell line HL-60

SupportedbytheNationaINaturalScienceFoundationofChina,No.3957o79ONotonlydoesapoptosisplayakeyroleinhomeostasis,butalsohascloserelationshipwithtumorigenesisandtumorregression,aswellaswiththechemotherapeuticandradiotherapeuticef-fectsontumors[lJ.Justasthecellproliferation,thecellapoptosisisalsomodulatedbymanygenes,includingsomeoncogenesandtumorsup-pressorgenes(p53,bcl-2,c-my,etc.)[2].Forex-ample,thehighexpressionofbcl-2inleukemiacellscanobviouslyinhibittheapoptosisinducedbytheremovalofgrowth…     

氟伐他汀对HL-60细胞凋亡的诱导作用及其机制

目的：研究氟伐他汀（Flu）对人早幼粒细胞白血病HL-60细胞（HL-60细胞）凋亡的诱导作用及可能的机制,为其临床应用提供理论依据。方法：体外培养的HL-60细胞分为空白对照组、阳性对照组［全反式维甲酸（ATRA）,10  μmol·L^-1］、Flu组（20  μmol·L^-1）和Flu（20  μmol·L^-1）加［甲羟戊酸（Mev）,100  μmol·L^-1］组。HL-60细胞被处理后,应用ACETM分析系统检测caspase-3活性以确定细胞凋亡,Annexin V-FITC/PI双染后流式细胞仪分析细胞凋亡,DNA凝胶电泳评价DNA碎片阶梯状条带及透射电镜观察细胞的超微改变。结果：处理24 h后,Flu组HL-60细胞caspase-3活性（A405,30.68±1.57）显著高于对照组（12.05±2.15,P<0.01）,Flu加Mev组HL-60细胞caspase-3活性明显降低（14.62±1.36）,接近对照组细胞的水平（P>0.05）。Annexin V-FITC/PI双染后流式细胞仪检测
,与对照组比较,Flu组HL-60细胞凋亡率明显增加（4.24%  vs  10.76%,P<0.01）,Flu加Mev组HL-60细胞凋亡率降低到5.11%,与对照组细胞凋亡率(4.24%)比较差异无显著性（P>0.05）。处理72 h后Flu组HL-60细胞在琼脂糖凝胶电泳图上可观察到DNA碎片梯状条带。透射电镜观察显示：Flu组HL-60细胞胞体缩小,胞质浓缩,核染色质凝聚,呈块状聚集于核膜内侧,胞膜及细胞器完好。结论：Flu能诱导HL-60细胞凋亡,这种作用是Mev途径依赖的,提示抑制Mev途径可能是Flu诱导HL-60细胞凋亡的分子机制之一。     

HSP70抑制H2O2所致C2C12肌原细胞Smac从线粒体的释放及细胞凋亡

目的：阐明HSP70对H2O2所致C2C12肌原细胞凋亡的影响及其作用机制。方法：采用基因瞬间转染技术使细胞HSP70或/和Smac高表达，采用Hoechst 33258染色观察H2O2 (0.5mmol/L)处理转基因C2C12肌原细胞不同时间后细胞核形态学改变并计算凋亡核百分率。DNA抽提及琼脂糖电泳观察凋亡特征性梯带。采用caspase活性定量检测试剂盒及蛋白质印迹分析caspase-9和caspase-3的活化。利用免疫荧光分析HSP70对H2O2所致Smac从线粒体释放的影响。结果：HSP70对H2O2及Smac所致C2C12肌原细胞凋亡具有明显的抑制作用,凋亡核百分率明显降低, DNA电泳未出现明显“梯状”条带;caspase-9和caspase-3的活化明显受到抑制;并进一步发现HSP70可抑制H2O2所致C2C12肌原细胞Smac从线粒体释放。结论：HSP70可通过抑制Smac从线粒体释放来抑制H2O2所致C2C12肌原细胞凋亡。     

邻苯二甲酸正丁酯对白血病细胞增殖与凋亡的影响

应用细胞培养、形态学观察、ＤＮＡ断裂百分率测定及ＤＮＡ片段凝胶电泳，观察了邻苯二甲酸正丁酯对ＨＬ－６０与Ｋ５６２细胞增殖与凋亡的影响。结果表明，邻苯二甲酸正丁酯在抑制白血病细胞增殖的同时，也诱导其凋亡，但对Ｋ５６２细胞作用相对较弱。     

DAPK过表达对HL-60 细胞生物学功能及caspase-3 表达的影响

目的探讨死亡相关蛋白激酶（DAPK）过表达对HL-60细胞生物学功能及对caspase-3表达的影响。方法采用RT-PCR技 术检测白血病细胞株DAPK基因mRNA的表达。运用真核表达载体pReceiver-M29-DAPK,用脂质体LipofectamineTM 2000介 导转染HL-60细胞,研究其过表达对白血病细胞凋亡、细胞周期及分化的影响,并对caspase-3表达的影响。结果DAPK基因在 K562、Molt4、U937细胞表达阳性,而HL-60细胞则表达阴性。转染pReceiver-M29-DAPK后,应用流式细胞术和Hoechst33342 染色可观察到转染后HL-60细胞出现凋亡,凋亡细胞百分率显著增高。PI单染和瑞氏染色法分析观察转染前后的HL-60细胞, 各细胞周期及形态均无改变。转染后caspase-3的表达水平显著增高。结论DAPK基因过表达的HL-60细胞凋亡增强,但对 HL-60细胞周期和细胞分化无影响。Caspase-3可能参与了凋亡调控。     

榄香烯体外诱导急性白血病细胞凋亡的研究

目的 探讨榄香烯诱导白血病细胞凋亡的作用及其机制。方法 采用MTT法、荧光显微镜、透射电镜、流式细胞术（FCM）、DNA电泳方法观察榄香烯对HL．60白血病细胞株的促凋亡作用，并进行细胞周期分析和采用RT-PCR、FCM检测bcl-2基因表达的变化。结果 榄香烯在体外诱导HL-60细胞凋亡，呈细胞凋亡典型的形态和生化特征，可见凋亡小体和梯形条带，并具有时间剂量依赖性，凋亡率最高达51．8％，在凋亡过程中细胞阻滞于S期，并检测到bcl-2基因表达下调。结论 榄香烯具有诱导细胞凋亡的作用，其机制可能与bcl-2基因表达下调有关。