扇贝糖胺聚糖对氧自由基损伤血管内皮细胞的保护作用

目的 研究扇贝裙边提取物一糖胺聚糖(SS-GAG)体外培养应用对氧自由基所致的血管内皮细胞损伤的保护作用，探讨SS-GAG抗动脉粥样硬化(AS)的机理。方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)，建立氧自由基诱导的HUVEC损伤模型，用MTT比色法观察SS-GAG对HUVEC增殖活性抑制的影响，用比色法观察SS-GAG对HUVEC损伤后乳酸脱氢酶(LDH)的漏出量的影响，应用放射免疫方法．观察SS-GAG对Fenton体系所引发的HUVEC损伤后内皮素(ET)及血管紧张素Ⅱ(AⅡ)分泌改变的影响。结果 与对照组比较，Fenton体系损伤组血管内皮细胞(VEC)的增殖活性、培养液中LDH释放、ET及AⅡ的分泌差异明显．而细胞经不同浓度的SS-GAG预先处理后，细胞增殖活性的损伤减轻，LDH释放以及ET、AⅡ的分泌均明显减少。结论 本研究结果证实，SS-GAG可减轻氧自由基对血管内皮细胞的损伤，抑制内皮细胞LDH的释放以及ET和AⅡ分泌，具有保护血管内皮细胞作用，此作用可能与其抗AS的机理有关。     

扇贝裙边糖胺聚糖对过氧化氢损伤的内皮细胞释放血管活性物质的影响

目的:观察扇贝裙边糖胺聚糖(SS-GAG)对过氧化氢(H2O2)损伤的血管内皮细胞产生血管活性物质的影响。方法:用体外培养的人脐静脉内皮细胞株ECV304建立H2O2诱导的内皮细胞损伤模型组、不同浓度的SS-GAG组以及正常对照组,用放射免疫法测定培养液中6-酮-前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)、血栓素B2(TXB2)、内皮素(ET)的含量;用硝酸还原酶法测定一氧化氮(NO)的含量。结果:与模型组比较,不同浓度的SS-GAG组均可使血管舒张因子6-keto-PGF1a、NO含量明显增加;缩血管因子TXB2、ET含量明显减少(P<0.05,P<0.01)。结论:SS-GAG可能通过增加舒血管因子、降低缩血管因子的分泌来减轻H2O2对内皮细胞的氧化损伤。     

扇贝糖胺聚糖对OX-LDL诱导血管内皮细胞氧化应激损伤的抑制作用机制研究

目的:研究扇贝糖胺聚糖(SS-GAG)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)损伤的抑制作用机制。方法:试验分为阴性对照组、模型组与SS-GAG高、中、低浓度(质量浓度分别为200、100、50 mg/L)组,后3组以不同质量浓度SS-GAG培养细胞12 h后,以50μmol/L氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)培养细胞24 h。以MTT法检测细胞活力;测定乳酸脱氢酶(LDH)活性;流式细胞仪测定活性氧(ROS)水平;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)测定氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)m RNA表达;Western blot测定NOX4蛋白表达。结果:与阴性对照组比较,模型组细胞活力减弱,LDH活性增强,ROS水平升高,LOX-1 m RNA表达增强,NOX4蛋白表达增强,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,SS-GAG高、中、低浓度组细胞活力增强,LDH活性减弱,ROS水平降低,LOX-1 m RNA表达减弱,NOX4蛋白表达减弱,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:SS-GAG有一定的保护血管内皮细胞作用,其机制可能与经LOX-1/NOX4途径抑制ROS产生、减轻氧化应激损伤有关。     

扇贝裙边糖胺聚糖对血管内皮细胞的抗氧化活性

目的：探讨扇贝裙边糖胺聚糖（SS-GAG）的抗氧化活性。方法：用体外培养的人脐静脉内皮细胞株，建立过氧化氢（H2O2）诱导的血管内皮细胞损伤模型，用硫代巴比妥酸反应物法测定血管内皮细胞内氧化损伤产物丙二醛（MDA）的含量，用黄嘌呤氧化酶法测定细胞内的超氧化物歧化酶（SOD）的活性。结果：SS-GAG可明显减少MDA的生成，对细胞内的SOD活性有明显增强的作用。结论：SSGAG通过拮抗H2O2对血管内皮细胞的过氧化损伤，发挥其抗氧化活性。     

扇贝裙边糖胺聚糖对HSV-Ⅰ感染小鼠保护作用的研究

目的：研究扇贝裙边糖胺聚糖（Glycosaminoglycan from Scallop Skirt,SS-GAG）对感染单纯疱疹病毒Ⅰ型（Herpes simplex virus typeⅠ,HSV-Ⅰ）小鼠的保护作用。方法通过在无菌条件下给予小鼠注射 SS-GAG,连续11d,并在给药第三天给小鼠腹腔注射 HSV-Ⅰ病毒悬液建立小鼠感染模型,观察SS-GAG对HSV-Ⅰ感染小鼠存活时间及死亡率及体重的影响,并计算其生命延长率。观察SS-GAG对对HSV-Ⅰ感染小鼠脾脏指数、胸腺指数等免疫指标的影响。结果与病毒对照组相比,SS-GAG（10mg· kg －1、20mg· kg －1、40mg· kg －1）能明显延长 HSV-Ⅰ感染小鼠的平均存活时间,降低小鼠的死亡率（P＜0.01）,提高小鼠体重（P＜0.01）,并且能显著提高HSV-Ⅰ感染小鼠的脾脏指数和胸腺指数（P＜0.01）。结论扇贝裙边糖胺聚糖对HSV-Ⅰ感染小鼠有一定的保护作用。其作用值得进一步研究。     

扇贝裙边糖胺聚糖的体外抗肿瘤活性及对荷瘤小鼠抗氧化作用的研究

目的:研究扇贝裙边糖胺聚糖(SS-GAG)的体外抗肿瘤活性及对荷瘤小鼠的抗氧化功能的影响。方法:用MTT法观察不同浓度的SS-GAG对体外培养的宫颈癌HeLa、人大肠癌LOVO、肺癌A549、神经胶质瘤U251等肿瘤细胞株增殖活性的影响;观察SS-GAG对小鼠接种S180后30d内的存活时间;通过黄嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸显色法等多种生化方法观察SS-GAG对荷瘤小鼠血清总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物岐化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的影响,并与对照比较。结果:与对照比较,SS-GAG可明显抑制HeLa、U251细胞生长,对LOVO、A549细胞生长也有一定的抑制作用;SS-GAG能显著延长S180腹水瘤小鼠的生存时间,提高荷瘤小鼠的T-AOC、SOD水平,降低MDA含量(P<0.01或P<0.05)。结论:SS-GAG可抑制肿瘤生长,并有一定的抗氧化作用。     

栉孔扇贝裙边糖胺聚糖对血管平滑肌增殖及TNFαmRNA表达的影响

目的观察栉孔扇贝裙边糖胺聚糖(SS-GAG)对体外培养的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖作用及对肿瘤坏死因子(TNF)mRNA表达的影响,并探讨SS-GAG对抗动脉粥样硬化(AS)的可能机制。方法建立碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导的平滑肌细胞增殖模型,分别用MTT法和原位杂交方法观察SS-GAG对血管平滑肌增殖活性及对(bFGF)诱导增殖的VSMC内(TNF)mRNA表达的影响。结果不同浓度的SS-GAG组细胞增殖活性明显低于模型组细胞,差别有统计学意义(P<0.05,P<0.01);低、高剂量SS-GAG组TNFmRNA基因表达明显低于模型组(P<0.01),表达强度和阳性细胞数量均减少。结论SS-GAG对VSMC增殖和由bFGF诱导增殖的VSMC内TNFmRNA表达均有抑制作用,且随着SS-GAG浓度的升高抑制作用增强。     

扇贝裙边糖胺聚糖体外抗I型单纯疱疹病毒实验研究

目的研究扇贝裙边糖胺聚糖(glycosaminoglycan from Scallop Skirt,SS-GAG)体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)的作用。方法运用单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-ⅠSM44株),并以非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)为宿主细胞,通过观察病毒感染后的细胞变性反应(cytopathic effect,CPE)和运用MTT比色法,检测不同浓度药物SS-GAG对Ⅰ型单纯疱疹病毒是否有直接的灭活作用、对HSV-Ⅰ感染复制的抑制活性以及对HSV-Ⅰ感染细胞的综合作用等,并观察药物对Vero细胞的毒性作用。结果与病毒对照组相比,SS-GAG各浓度组(100、50、25mg.L-1)能有效地保护经HSV-Ⅰ感染的Vero细胞,使细胞活性增强(P<0.01);并减弱HSV-Ⅰ导致的病变效应,抑制病毒的复制。此作用随着药物浓度的增加而增强。但是SS-GAG对HSV-Ⅰ没有直接的灭活作用;SS-GAG在50~1600mg.L-1浓度范围内对Vero细胞无明显的细胞毒性。结论SS-GAG在体外实验系统中显示出明显的保护宿主细胞抵抗HSV-Ⅰ病毒感染的活性作用。     

扇贝裙边糖胺聚糖对U937泡沫细胞形成过程中抗氧化酶、NO和细胞内Ca~(2+)的影响

目的:研究扇贝裙边糖胺聚糖(SS-GAG)抗动脉粥样硬化作用机制。方法:将培养的U937细胞分为正常组、模型组和SS-GAG不同浓度组,除正常组外,其余组加入氧化低密度脂蛋白造模后给予相应浓度药物进行处理,分别采用不同方法测定各组细胞超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和一氧化氮(NO)含量及Ca2+水平。结果:各组中SOD含量无显著性差别;SS-GAG组中GSH-Px活性和NO含量与模型组比较明显升高,而细胞内Ca2+水平则明显降低。结论:SS-GAG可能通过增强GSH-Px活性和NO释放,同时降低细胞内Ca2+水平而发挥抗动脉粥样硬化作用。     

罗仙子提取物对单核细胞与血管内皮细胞黏附的影响

目的：考察罗仙子提取物对单核细胞与血管内皮细胞黏附的影响。方法：制备相对分子质量30000以下罗仙子提取物;考察罗仙子提取物对血管内皮细胞EA．hy926活力的影响;肿瘤坏死因子（TNF-α）诱导建立单核细胞THP-1和EA．hy926黏附模型,采用虎红染色,考察不同浓度罗仙子提取物对EA．hy926与THP-1黏附性的影响;采用ELISA考察罗仙子提取物对TNF-α诱导的EA．hy926分泌单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）和血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）的影响。结果：罗仙子提取物（浓度≤4×102μg／mL时）对EA．hy926未见明显的增殖或抑制作用（P〉0．05）;罗仙子提取物（浓度≥6．25μg／mL时）可浓度依赖性降低两细胞之间的黏附作用;罗仙子提取物各浓度均能显著地降低TNF-α诱导的MCP-1表达（P〈0．01）,罗仙子提取物（浓度≥50μg／mL时）可显著地降低TNF-α诱导的VcAM-1的表达（P〈0．01）。结论：罗仙子提取物可通过抑制TNF-α诱导的内皮细胞分泌MCP-1和VCAM-1,阻滞单核细胞与血管内皮细胞之间的黏附作用,从而发挥抗动脉粥样硬化作用。     

金属硫蛋白对同型半胱氨酸损伤血管内皮细胞的拮抗作用

目的　观察金属硫蛋白 (metallothionein ,MT)对同型半胱氨酸损伤血管内皮细胞的拮抗作用。方法　人血管内皮细胞培养 ;自动生化分析仪测乳酸脱氢酶 (LDH)漏出量 ;10 9Cd 血红素饱和法测细胞MT含量 ;台盼蓝排除法计算细胞存活率。结果　同型半胱氨酰 (Hcy) (0 1～ 1 0mmol·L-1)呈浓度依赖性地增加细胞LDH漏出和降低细胞存活率。外源给予MT 5× 10 -8μmol·L-1可呈剂量依赖性的抑制Hcy引起的血管内皮细胞损伤 ,5× 10 -8mol·L-1MT与1 0mmol·L-1Hcy共同孵育组较单纯Hcy孵育组血管内皮细胞LDH漏出降低 2 7 1% (P <0 0 5 ) ,细胞存活增加 6 %(P <0 0 5 )。凝血酶预孵育可诱导培养的血管内皮细胞MT生成 ,其含量较对照组增加 32 5 % (P <0 0 1)。凝血酶诱导内源性MT生成亦明显抑制Hcy引起的血管内皮细胞损伤 ,10 0 0U·L-1凝血酶与Hcy共同孵育组较单纯Hcy孵育组血管内皮细胞LDH漏出降低 46 % (P <0 0 1) ;细胞存活率升高 8% (P <0 0 5 )。结论　无论外源给予MT或内源性诱导MT生成均可降低Hcy引起的血管内皮细胞损伤作用     

Protective effects of diltiazem against vascular endothelial cell injury induced by angiotensin‐II and hypoxia

To provide pharmacological data for future clinical studies, this study investigated the protective effects of diltiazem on vascular endothelial cell (VEC) injury induced by angiotensin‐II (AngII), hypoxia, and a combination of both treatments. The concentration of intracellular free calcium and the mitochondrial membrane potential in VEC were assessed as indicators of cell injury. An in vivo hypoxic animal model was used to test the protective effect of diltiazem on vascular endothelial tissues. Our study showed that AngII and hypoxia decreased the mitochondrial membrane potential in VEC, which was significantly inhibited by diltiazem. Diltiazem protected against VEC injury induced by the increased concentration of intracellular free calcium, which was associated with AngII and hypoxia. Diltiazem reduced the apoptosis of rat VEC under a sustained hypoxic condition. In addition, it reduced AngII and endothelin I levels in rat vascular endothelial tissues. Our study confirmed that AngII and hypoxia induced VEC injury by regulating the levels of mitochondrial membrane potential and intracellular free calcium. Diltiazem, a calcium channel blocker, protected VEC from AngII‐ and hypoxia‐induced injury.     

2种海参胶原蛋白多肽对血管内皮细胞保护作用的比较研究

目的 观察革皮氏海参和北极刺参胶原蛋白多肽对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)损伤的血管内皮细胞的保护作用,探讨其保护内皮细胞的作用机制。方法 采用ox-LDL处理血管内皮细胞(ECV304)建立氧化应激损伤模型,以MTT法测定ECV304的增殖活性,硫代巴比妥酸法测定细胞内的丙二醛(MDA)含量,比色法测定一氧化氮合酶(NOS)活力和一氧化氮(NO)释放量,Hoechst33258染色法检测细胞的凋亡,Western blotting法检测caspase-3蛋白的表达。结果 经2种海参胶原蛋白多肽预处理后,ECV304细胞的增殖率显著升高 (P<0.05,P<0.01),细胞凋亡比率和MDA含量显著降低(P<0.05,P<0.01),细胞NOS活力和NO释放量均显著提高 (P<0.05,P<0.01),凋亡蛋白caspase-3的表达量显著降低。结论 2种海参胶原蛋白多肽均能有效保护脂质过氧化物损伤的血管内皮细胞,其中北极刺参胶原蛋白多肽在抑制细胞凋亡和提高NOS活性方面效果更突出,可能与其氨基酸组成有关。     

异丙酚对重症脓毒症患者血管内皮细胞损伤的保护作用

目的 观察异丙酚对重症脓毒症患者血管内皮细胞损伤的影响。方法 构建重症脓毒症患者血清攻击脐静脉模型,监测异丙酚对重症脓毒症患者培养上清血循环血管内皮细胞(CEC)的数量、血管性假血友病因子(von willebrand factor,vWF)和可溶性血栓调节素(soluble thrombomodulin,sTM)水平的影响。结果 重症脓毒症患者血清CEC数量、vWF和sTM水平明显高于健康对照组(P<0.05)。进一步体外实验发现重症脓毒症患者血清可损伤脐静脉内皮,造成培养上清CEC数量、vWF和sTM水平显著升高(P<0.05)。异丙酚可明显减少CEC数量(P<0.05),同时下调vWF和sTM水平(P<0.05)。体外实验也发现异丙酚对重症脓毒症患者血清引起的脐静脉内皮损伤具有保护作用,其培养上清的CEC数量明显减少,同时vWF和sTM水平显著下降(P<0.05)。结论 重症脓毒症患者存在严重内皮细胞损伤,异丙酚对重症脓毒症患者内皮细胞损伤具有保护作用。     

川芎嗪对缺氧后血管内皮细胞功能保护作用的实验研究

目的 观察缺氧条件下内皮细胞培养上清液中ET和NO含量变化及川芎嗪对它们的影响。方法 采用新生儿脐静脉血管内此细胞体外原代培养方法,用放免法和化学法检测培养注中ET和NO的含量。结果 在缺氧环境中,血管内皮细胞培养上清液中ET和NO含量明显下降（P＜0.001）,加入不同浓度川花芎嗪后可使ET和NO含量明显升高,尤以NO明显。结论 川芎嗪具有保护血管内皮细胞合成、分泌ET和NO作用,对缺氧致细胞内皮的损伤具有保护作用。     

藻酸双酯钠对血管内皮细胞的生长及其与中性粒细胞黏附功能的影响

目的 探讨藻酸双酯钠（polysaccharide sulfate，PSS）对体外培养血管内皮细胞生长以及对血管内皮细胞与中性粒细胞（polymorphonuclear neutrophils，PMN）黏附功能的影响。方法 体外培养人类脐静脉血管内皮细胞（细胞株ECV-304），分别经50，100，150，200，250μg·mL^-1不同终浓度处理或不经处理后，采用MTT法观察各组ECV-304生长情况。建立血管内皮细胞缺氧／复氧（Hypoxia／Reoxygenation，H／R）模型，检测经或不经H／R及PSS处理条件下培养的ECV-304与脑梗死病人外周血PMN的黏附率。结果 PSS浓度≤200μg·mL^-1各组ECV-304活力高于未经PSS处理的对照组，差异有统计学意义（P〈0．01），其中PSS浓度为100μg·mL^-1组最明显。PMN与非H／R处理的体外培养的ECV-304的黏附率在脑梗死组较健康组明显增高；ECV-304经H／R处理后与脑梗死病人PMN黏附率增高。体外培养的ECV-304无论是否经H／R处理，培养液中加入PSS（PSS终浓度100μg·mL^-1）组与不加PSS组比较，ECV-304与脑梗死病人PMN的黏附率明显降低，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论 适当浓度的PSS能促进体外培养正常血管内皮细胞的生长，降低H／R血管内皮细胞与中性粒细胞的黏附能力。     

雷帕霉素抑制血管紧张素Ⅱ诱导的血管内皮细胞增生

目的研究阻断PI3K-p70S6K和Ras-p42／p44MAPK信号通路对血管紧张素Ⅱ(ANGⅡ)诱导的脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖及细胞周期进程的影响。方法ANGⅡ联合不同浓度雷帕霉素刺激体外培养的HUVEC,3H-胸腺嘧啶核苷掺入法和3H-亮氨酸掺入法测定细胞DNA和蛋白质合成,流式细胞术检测细胞周期变化,免疫印迹(Western blot)检测细胞信号蛋白p70S6K (p70 ribosomal protein S6 kinase),ERK2(extracellular signal regulated kinase)及细胞周期蛋白CyclinD1、CyclinA、和CyclinBt表达的变化。结果雷帕霉素抑制ANGⅡ诱导的血管内皮细胞蛋白质和DNA的合成,并呈剂量依赖性,雷帕霉素抑制ANGⅡ诱导的p70S6K和CyclinD1的表达,阻滞细胞于G1期(P<0．01),而不影响ERK2、CyclinA和CyclinBt的表达。结论PI3K-p70S6K信号通路在ANGⅡ诱导的HUVEC增殖及细胞周期进程中起关键作用,雷帕霉素免疫抑制靶点p70S6K可应用于干预血管内皮细胞的增殖。