细胞内游离钙离子在神经肽Y刺激血管平滑肌细胞增殖中的作用

为探讨细胞内游离钙离子在神经肽Ｙ刺激血管平滑肌细胞增殖过程中的变化，以体外培养的血管平滑肌细胞模型为研究对象，运用激光共聚焦显微镜和免疫荧光组织化学技术，定量和动态观察了神经肽Ｙ对血管平滑肌细胞内游离钙离子浓度与血管平滑肌细胞增殖间的相互关系。结果发现，神经肽Ｙ组中血管平滑肌细胞的增殖活度（ＭＴＴ法）和增殖细胞核抗原的表达较对照组明显增强；与此同时，神经肽Ｙ作用下体外培养的血管平滑肌细胞内游离钙离子浓度也逐渐升高。此结果提示，神经肽Ｙ刺激血管平滑肌细胞增殖的细胞内信号传导机制与神经肽Ｙ提高细胞内游离钙离子浓度有关。     

神经肽Y对血管平滑肌增殖细胞核抗原、血小板源性生长因子和c-myc基因表达的影响

以体外培养的血管平滑肌细胞模型为研究对象，在运用免疫荧光细胞组织化学技术和激光共聚焦显微镜定量研究神经肽Ｙ的作用下，观察血管平滑肌细胞中增殖细胞核抗原、血小板源性生长因子和ｃ－ ｍｙｃ 原癌基因表达的平均荧光值变化，以阐明神经肽Ｙ 参与高血压和动脉粥样硬化等心血管疾病发生的病理机制。结果发现，对照组中增殖细胞核抗原、血小板源性生长因子和ｃ－ ｍｙｃ 原癌基因表达的平均荧光值分别为１５４２．７１ ±２００．０４ 、８１５．２８±１１６．４８ 和１６２０．２６±１７４．５８，神经肽Ｙ则可促进增殖细胞核抗原、血小板源性生长因子和ｃ－ ｍｙｃ 原癌基因在血管平滑肌细胞中的表达，其平均荧光值分别为１６４８．５６±２３２．７１、１２２５ ．４６±１０１ ．８４ 和１７４０ ．３５ ±２０５ ．９１，其中以血小板源性生长因子的表达差异最为明显（ Ｐ＜ ０．０１）。结果提示，神经肽Ｙ可促进血管平滑肌细胞的增殖，并诱导血小板源性生长因子和ｃ－ ｍｙｃ 原癌基因表达增强。     

神经肽Y诱导血管平滑肌细胞凋亡相关基因表达与细胞内液pH变化的关系

为探讨细胞内液pH在神经肽Y诱导血管平滑肌细胞凋亡过程中的变化 ,以体外培养血管平滑肌细胞模型为研究对象 ,运用激光共聚焦显微镜和免疫荧光组织化学技术 ,定量和动态观察研究神经肽Y诱导血管平滑肌细胞凋亡相关基因bcl 2和bax表达与细胞内液pH变化之间的关系。结果发现 ,在神经肽Y作用下 ,体外培养的血管平滑肌细胞凋亡相关基因bcl 2和bax表达的平均荧光值分别为 134 9.6 7± 10 8.2 8和 1397.5 0± 10 4.43,与对照组的 986 .6 4± 91.2 2和 10 6 0 .44± 10 7.5 4相比 ,差异明显 (P <0 .0 1) ,bax与bcl 2两者平均荧光值之比为 1.0 4;神经肽Y还可降低血管平滑肌细胞内液pH的平均荧光值 ,使细胞浆酸化。此结果提示 ,神经肽Y诱导血管平滑肌细胞凋亡相关基因的表达与神经肽Y降低细胞内液酸碱度、细胞浆酸化有关。     

粘着斑激酶在一氧化氮诱导血管平滑肌细胞凋亡中的作用

为研究一氧化氮对血管平滑肌细胞凋亡的影响及粘着斑激酶在一氧化氮诱导血管平滑肌细胞凋亡中的作用 ,应用脂多糖诱导血管平滑肌细胞合成内源性一氧化氮或加入可释放外源性一氧化氮的硝普钠 ,进行流式细胞术、DNA凝胶电泳及Northernblot和Westernblot分析。结果发现 ,无论是血管平滑肌细胞合成和释放的内源性一氧化氮还是体外补充的外源性一氧化氮均可显著诱导血管平滑肌细胞凋亡 ,且其诱导血管平滑肌细胞凋亡的强度与培养基中的NO-2 含量呈正相关 ;证实在一氧化氮诱导血管平滑肌细胞凋亡的同时 ,伴随Bcl 2和粘着斑激酶基因表达活性的明显下降。提示粘着斑激酶可能参与一氧化氮诱导血管平滑肌细胞凋亡的信号转导过程 ,一氧化氮诱导血管平滑肌细胞凋亡可能与抑制Bcl 2和粘着斑激酶基因表达有关     

氧化型低密度脂蛋白诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡

为研究氧化型低密度脂蛋白引起血管平滑肌细胞凋亡及其凋亡的机制,采用细胞形态学ＤＮＡ末标记法,流式细胞仪,Ｗｅｓｔｅｎ ｂｌｔｔｉｎｇ观察氧化型低密度脂蛋白诱导培养的大鼠血管平滑肌细胞凋亡。结果发现,在氧化型低密度脂蛋白作用下,血管平滑肌细胞阻滞在分裂期的中期,并发生凋亡,ＤＮＡ末端标记法和流式细胞仪检测发现氧化型低密度脂蛋白引起细胞凋亡明显高于天然低密度脂蛋白（前者是后者的１０倍）。电镜下凋亡细胞     

凋亡与平滑肌细胞的关系

细胞凋亡与细胞分化，增生共同维持和调节细胞，组织和器官的正常形态和功能。近年来倍受关注的一种发现平滑肌细胞的凋亡参与也多种临床疾病的形成过程。本文简述平滑肌细胞发生凋亡的现象，有关的诱导物质及基因调控，并扼要介绍了受平滑肌细胞发生凋亡的细胞，从而较系统地总结了凋亡与平滑肌细胞的关系。     

钾通道与肺动脉平滑肌细胞凋亡

钾通道与肺动脉平滑肌细胞的生长、增殖和凋亡密切相关.在肺动脉高压的发生、发展中起着重要作用.肺动脉平滑肌细胞膜钾通道活性降低或表达下降不仅导致细胞浆游离Ca2+浓度升高,肺动脉平滑肌细胞收缩、增殖和肺血管重构,而且也与肺动脉平滑肌细胞凋亡减少有关.凋亡性容积减少是细胞凋亡的必要前提和早期标志.钾通道参与凋亡性容积减少调节、细胞色素C释放、Caspase激活和DNA降解等凋亡事件以及抗凋亡蛋白Bcl-2、survivin的调节.因此.钾通道有望成为诱导肺动脉平滑肌细胞凋亡药物的靶点,为未来攻克肺动脉高压带来新希望.     

细胞凋亡与酒精性肝病

细胞凋亡与许多肝病的发生有关，酒精性肝病也不例外。在临床和实验性酒精性肝病中，细胞凋亡常被描述为“嗜酸性小体”。Ｋａｗａｈａｒａ等用Ｔｕｎｅｌ法研究ＬｅｗｉｓＹ抗原的表达，以评估人类酒精性肝病中的细胞凋亡现象。结果发现含Ｍａｌｌｏｒｙ小体的肝细胞呈ＬｅｗｉｓＹ抗原的阳性表达，提示含Ｍａｌｌｏｒｙ小体的肝细胞至少部分以细胞凋亡的方式被清除。在正常大鼠肝脏，肝细胞凋亡仅散在见于中央静脉周围两排的肝细胞，而长期以酒精饲养的大鼠，其肝脏肝细胞凋亡比例显著高于正常大鼠，并且肝细胞凋亡程度与肝损伤的轻重密切…     

Fas Ligand基因转染对大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的 :研究腺病毒介导FasLigand基因转染对大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响。 方法 :常规分子生物学技术构建重组腺病毒Ad FasL、Ad βgal。免疫组化方法检测转染Ad FasL的大鼠血管平滑肌细胞FasLigand蛋白表达。用TUNEL法检测转染腺病毒的血管平滑肌细胞是否发生凋亡。结果 :10 0moiAd FasL转染大鼠血管平滑肌细胞 ,10 0 %细胞表达FasLigand蛋白 ,并发生凋亡。结论 :大鼠对Ad FasL转染诱导的凋亡易感。因此可以推断Ad FasL转染损伤后血管壁将减少血管平滑肌细胞积累。Ad FasL转染可能是有效的再狭窄治疗策略     

血管平滑肌细胞凋亡与动脉粥样硬化及其中药防治

细胞凋亡在动脉粥样硬化形成的发病和治疗中具有重要意义。随着对动脉粥样硬化研究的深入，发现血管平滑肌细胞增生是其中重要因素。本文着重论述血管平滑肌细胞凋亡在动脉粥样硬化疾病中的作用，以及目前应用中药单体及中药复方调节血管平滑肌细胞凋亡的研究进展，同时对中医药防治动脉粥样硬化的前景进行展望。     

神经肽Y对人血管平滑肌细胞脂质代谢的调制作用

为探讨神经肽Y在血管平滑肌细胞中对脂质代谢是否具有调制作用 ,以成人血管平滑肌细胞体外培养模型为研究对象 ,经不同浓度的神经肽Y作用后 ,运用激光扫描共聚焦显微镜和免疫荧光组织化学技术 ,定量观察神经肽Y对人血管平滑肌细胞的低密度脂蛋白受体表达的影响。结果发现 ,对照组人血管平滑肌细胞的低密度脂蛋白受体表达的平均荧光强度为 2 4 4 3± 1 89,而在浓度为 1 0 8mol L、1 0 7mol L、1 0 6mol L和 1 0 5mol L的神经肽Y作用下 ,各组的平均荧光强度分别为 2 0 1 5± 1 64、1 890± 1 4 5、1 841± 1 2 3和 1 786± 1 36 ,与对照组相比分别下降了1 7.49%、2 2 .62 %、2 4 .64 %和 2 6 .92 % (P <0 .0 1 ) ,且各浓度组之间多有显著差异 ,呈现一定的剂量依赖效应。结果提示 ,神经肽Y很可能通过下调人血管平滑肌细胞低密度脂蛋白受体的表达 ,从而影响血管平滑肌细胞的脂质代谢。     

神经肽Y对血管平滑肌增殖细胞核抗原、血小板源性生长因子和c-myc基因表达的影响

以体外培养的血管平滑肌细胞模型为研究对象,在运用免疫荧光细胞组织化学技术和激光共聚焦显微镜定量研究神经肽Y的作用下,观察血管平滑肌细胞中增殖细胞核抗原、血小板源性生长因子和c- myc 原癌基因表达的平均荧光值变化,以阐明神经肽Y 参与高血压和动脉粥样硬化等心血管疾病发生的病理机制。结果发现,对照组中增殖细胞核抗原、血小板源性生长因子和c- myc 原癌基因表达的平均荧光值分别为1542.71 ±200.04 、815.28±116.48 和1620.26±174.58,神经肽Y则可促进增殖细胞核抗原、血小板源性生长因子和c- myc 原癌基因在血管平滑肌细胞中的表达,其平均荧光值分别为1648.56±232.71、1225 .46±101 .84 和1740 .35 ±205 .91,其中以血小板源性生长因子的表达差异最为明显(P< 0.01)。结果提示,神经肽Y可促进血管平滑肌细胞的增殖,并诱导血小板源性生长因子和c- myc 原癌基因表达增强。     

神经肽Y影响人血管平滑肌细胞低密度脂蛋白受体表达

通过观察神经肽Y对人血管平滑肌细胞低密度脂蛋白受体表达的影响 ,以探讨神经体液因素在动脉粥样硬化发生中的重要作用。将体外培养的人血管平滑肌细胞分成对照组和不同浓度神经肽Y组 (浓度分别为 1 0 8mol L、1 0 7mol L、1 0 6 mol L和 1 0 5mol L) ,各组分别培养 6h、1 2h、2 4h和 4 8h ,然后经免疫荧光组织化学染色 ,在激光扫描共聚焦显微镜下定量检测神经肽Y对人血管平滑肌细胞的低密度脂蛋白受体表达的影响。结果发现 ,对照组低密度脂蛋白受体表达的平均荧光值在 2 4 2 8～ 2 5 2 7之间 ,且不同培养时间无显著性差异 (P >0 .0 5 )。而各神经肽Y组低密度脂蛋白受体表达的平均荧光值与对照组之间有显著性差异 (P <0 .0 5或P <0 .0 1 ) ,在不同的培养时间中 ,1 0 8mol L神经肽Y组平均荧光值在 1 798～ 2 4 0 8之间 ;1 0 7mol L神经肽Y组在 1 783～ 2 332之间 ;1 0 6 mol L神经肽Y组在 1 72 2～ 2 2 81之间 ;1 0 5mol L神经肽Y组在 1 5 90～ 2 0 1 0之间。与对照组相比 ,分别平均下降 1 5 .5 9%、1 9.78%、2 1 .91 %和 2 6 .83% ,且不同浓度神经肽Y组之间多有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,神经肽Y对成人血管平滑肌细胞的低密度脂蛋白受体表达的下调作用呈现一定的剂量和时间依赖效应。结果提示 ,     

阿司匹林对血管平滑肌细胞增殖及增殖细胞核抗原表达的影响

目的探讨阿司匹林对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响及相关机制。方法体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞,用不同浓度的阿司匹林处理,并且设置对照组,采用MTT法检测阿司匹林对血管平滑肌细胞增殖活性的影响,用免疫细胞化学和逆转录聚合酶链反应检测阿司匹林作用后血管平滑肌细胞中增殖细胞核抗原的表达。结果较高浓度(5×10-3mol/L)的阿司匹林对血管平滑肌细胞的增殖有明显抑制作用(P<0.05),相对抑制率为31.5%。与对照组相比,该浓度组血管平滑肌细胞中增殖细胞核抗原的蛋白和mRNA表达量均显著降低(P<0.05)。结论阿司匹林可能通过降低增殖细胞核抗原的表达来抑制血管平滑肌的增殖,对心血管系统具有抗血小板聚集之外的保护作用。     

气虚血瘀证大鼠血管平滑肌细胞bcl-2及bax相关凋亡因子的表达

目的 观察气虚血瘀证大鼠血管平滑肌细胞的凋亡及bcl-2、bax相关凋亡因子的表达.方法 采用饥饿、疲劳、寒冷、惊吓等综合因素方法复制气虚血瘀证大鼠模型,观察大鼠胸主动脉血管内膜形态学,检测血管平滑肌细胞的凋亡指数及bcl-2、bax蛋白的表达.结果 气虚血瘀大鼠血管内膜明显增殖,血管平滑肌细胞bcl-2蛋白表达增高(96.15±0.02 vs 21.13±0.05);bax蛋白表达降低(1.05±0.12 vs 68.06±0.06);bcl-2/bax增高(2.92±0.67 vs 0.01±0.01)(P<0.05).结论 气虚血瘀证大鼠存在血管平滑肌细胞增殖和凋亡严重失调等病理生理基础.     

自发性高血压大鼠神经肽Y-Y1受体在脑血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的探讨神经肽Y-Y1受体激动剂[Leu~(31),Pro~(34)]-NPY对体外培养的自发性高血压大鼠(SHR)脑血管平滑肌细胞促增殖作用的影响。方法应用植块法体外培养SHR大脑动脉血管平滑肌细胞,分别用正常细胞外液、10~(-5)或10~(-8)NPY,10~(-6)硝苯地平,10~(-6)硝苯地平 10~(-6)mol/L NPY加入培养液培养细胞。用免疫荧光法检测平滑肌培养细胞中增殖核抗原(PCNA)的表达,用流式细胞仪对平滑肌细胞的S期细胞进行检测分析。结果随着[Leu~(31),Pro~(34)]-NPY浓度的增加,平滑肌细胞PCNA阳性率递增,与对照组相比其阳性率有明显差别(P<0·001)。硝苯地平明显抑制PCNA阳性率。与硝苯地平 10~(-6)mol/L NPY相比,PCNA阳性率有显著差异(5·1±0·5vs17·7±2·5,P=0·009)。随着NPY浓度增加,血管平滑肌细胞S期百分数也是增加的,10~(-5)、10~(-6)mol/L NPY组与对照组相比有差别(P<0·05)。硝苯地平组与硝苯地平 10~(-6)mol/L NPY比较,S期细胞百分数有显著差异(P=0·0023)。结论NPY-Y1受体激动剂对血管平滑肌细胞具有浓度依赖性的PCNA表达增强作用,能够提高血管平滑肌细胞S期比例。L型钙离子拮抗剂能够减弱NPY-Y1受体激动剂的促平滑肌细胞增殖作用。     

舒心胶囊对缺氧诱导人脐静脉内皮细胞凋亡及相关基因表达的影响

观察舒心胶囊对缺氧诱导人脐静脉内皮细胞凋亡及相关基因表达的影响。体外培养人脐静脉内皮细胞 ,建立缺氧模型 ,以透射电子显微镜技术、流式细胞术 (膜联蛋白v/碘化丙啶 )双染色鉴定细胞凋亡 ;流式细胞术检测Fas、bcl 2及p5 3蛋白表达。缺氧培养 12h后 ,电镜显示细胞呈典型凋亡形态 ,双染色流式细胞仪检测凋亡细胞比例 (13.0 3%± 0 .96 % )显著高于正常组 (4 .4 7%± 0 .6 4 % ) (P <0 .0 1) ,而加入 5g/L舒心胶囊原液缺氧培养 12h后 ,凋亡细胞显著减少 (5 .0 3%± 0 .5 4 % ) (P <0 .0 1)。Fas蛋白表达在缺氧损伤过程中未见改变 ,舒心胶囊可使bcl 2蛋白表达升高 ,p5 3蛋白表达降低。舒心胶囊能够抑制缺氧诱导人脐静脉内皮细胞凋亡 ,可能与其升高bcl 2表达、降低p5 3表达有关。     

X-ray induced L02 cells damage rescued by new anti-oxidant NADH

AIM：To explore molecular mechanism of nicotinamide adenine dinucleotide (NADH) antagonization against X-ray induced L02 cells damage.METHODS: L02 liver cells were cultured in RPMI 1640,exposed to X-ray irradiation and continued to culture in the presence or absence of NADH. Cellular viability was analyzed by routine MTT methods. The percent age of apoptotic cells and positive expressions of pS3, bax and bcl-2, fas, fasL proteins were determined by FCM. Level of intracellular ROS was determined by confocal microscope scanning. Morphological change was detected by scanning electron micrograph.RESULTS: The viability of L02 cells was decreased with increasing dose of X-ray irradiation. NADH could not only eliminate the apoptosis induced by X-ray irradiation, but also up-regulate expression of bcl-2 protein and down-regulate expression of p53, bax, fas and fasL proteins (P&lt;0.05). At the same time, NADH could reduce level of intracellular ROS in radiated L02 cells.CONCLUSION: NADH has marked anti-radiation effect, its mechanism may be associated with up-regulation of bcl-2 expression and down-regulation of p53, bax fas and fasL expression, as well as decline of intracellular ROS. However,further investigation of its mechanism is worthwhile.     

糖基化终产物对平滑肌细胞增殖及纤溶酶原激活物抑制剂1基因表达的影响

目的探讨糖基化终产物对大鼠平滑肌细胞增殖以及纤溶酶原激活物抑制剂1基因表达的影响。方法体外分离培养大鼠平滑肌细胞,以不同浓度(50、100、200和400mg/L)糖基化终产物作用于平滑肌细胞不同时间(0、4、8、16、24、48、72和96h),MTT法观察糖基化终产物对平滑肌细胞增殖的影响,逆转录聚合酶链反应测定纤溶酶原激活物抑制剂1基因的表达。结果不同浓度的糖基化终产物作用8h均对平滑肌细胞增殖无影响,以后各时间点不同浓度的糖基化终产物均导致平滑肌细胞增殖,与对照组比较差异有显著性(P<0.05)。糖基化终产物作用不同时间均可使平滑肌细胞表达纤溶酶原激活物抑制剂1基因水平升高,且随着浓度升高而增加(分别为0.85±0.05、0.97±0.05、1.08±0.12和1.41±0.05),与对照组(0.80±0.03)比较差异有显著性(P<0.05)。结论糖基化终产物诱导血管平滑肌细胞增殖并增加纤溶酶原激活物抑制剂1基因表达是糖尿病患者易患动脉粥样硬化的可能原因。