血吸虫感染小鼠早期诊断抗原的研究

目的对已知的6种日本血吸虫抗原的早期诊断价值进行评价,为研制用于哨鼠早期诊断的免疫试剂提供候选抗原。方法用日本血吸虫尾蚴感染小鼠,收集感染前及感染后不同时间的小鼠血清。采用重组日本血吸虫中国大陆株23kDa膜蛋白大亲水性肽段与谷胱甘肽的融合表达蛋白（GST-HD）、可溶性虫卵抗原（SEA）、血吸虫四跨膜蛋白第二亲水基团（TSP2HD）、血吸虫虫卵蛋白（IPSE）、日本血吸虫虫卵毛蚴抗原（SjMP-10）及日本血吸虫信号蛋白（Sj14-3-3）作为诊断抗原,采用酶联免疫吸附试验检测感染血吸虫后不同时间小鼠血清中特异性抗体IgM和IgG水平,通过分析感染后不同时间点抗原特异性抗体水平变化及阳性率,筛选具有血吸虫感染早期诊断价值的抗原分子。采用免疫印迹试验进一步验证其对血吸虫急性感染早期诊断的价值。结果感染后第18、21、28天,抗GST-HD抗体IgM阳性率分别为60%、70%、100%,特异性IgG阳性率分别为40%、60%、90%;抗SEA抗体IgM阳性率为50%、60%、90%,特异性IgG阳性率为20%、50%、70%;抗TSP2HD抗体IgM阳性率为30%、40%、50%,特异性IgG阳性率为20%、30%、70%;抗IPSE抗体IgM阳性率为20%、30%、50%,特异性IgG阳性率为20%、30%、60%;抗SjMP-10抗体IgM阳性率为10%、20%、20%,特异性IgG阳性率为10%、20%、30%;抗Sj14-3-3抗体IgM阳性率为0、10%、20%,特异性IgG阳性率为0、10%、30%。以GST-HD融合蛋白和SEA为抗原,检测小鼠早期感染血吸虫的敏感性高于Sj14-3-3、IPSE、TSP、MP-10,检测IgM的敏感性高于IgG。免疫印迹试验结果显示,SEA中分子量在73kDa左右的蛋白条带可被感染后1周小鼠血清所识别,并随着时间推移反应加强。GST-HD最早出现反应的血清是感染后第10天小鼠血清,反应强度在感染后第5周达到最强。结论重组GST-HD融合蛋白与SEA中分子量约73kDa的蛋白分子具有血吸虫感染早期诊断价值,免疫印迹试验的敏感性比酶联免疫吸附试验高。     

日本因吸虫各期虫体的酶联免疫电转移印迹分析及抗原定位研究

本文采用酶联免疫电转移印迹技术（ＥＩＴＢ）分析、比较日本血吸虫不同发育时期虫体特定的组分蛋白分子、雌虫、雄虫和虫卵抗原分别与相应的雌、雄虫和虫卵免疫血清反应呈现１７、２０和８条蛋白带，这三种抗原与其它不同时期虫体免疫血清反应，三者间及彼此间均出现交叉反应，而雌、雄虫和虫卵抗原与其它寄生虫感染血清作用没发现有叉及反应。应用间接荧光抗体试验（ＩＦＡ）和免疫酶染色试验（ＩＥＳ）对日本血吸虫抗的进行定位研     

酶联免疫电转移印迹技术在囊尾蚴病诊断中的应用

目的　应用高度敏感、特异的酶联免疫电转移印迹技术(EITB)诊断囊尾蚴病。　方法　用双向电泳法对囊液抗原进行分离、纯化 ,并通过免疫印迹 ,用囊尾蚴病患者、棘球蚴病患者和其他异源血清筛选高免疫反应性和高特异性抗原组分 ,以此建立EITB诊断方法 ,与传统的ELISA法相比 ,并比较血清和滤纸干血浸出液两种样本的敏感性。　结果　得到了等电点为9.4,相对分子质量为14 000和16 600两组特异性抗原组分 ,以此为诊断抗原建立了EITB诊断方法 ,其敏感度和特异度分别高达92.5%和100% ,显著高于ELISA法。在EITB中血清和滤纸干血浸出液的敏感性相似。　结论　EITB诊断囊尾蚴病较ELISA法敏感性高、特异性强     

中国大陆日本血吸虫品系的研究 XI.酶联免疫电转移印迹的分析

本文报告安徽、湖北、广西、云南和四川5地日本血吸虫成虫抗原与安徽、湖北、云南、四川4地钉螺的抗血清进行酶联免疫电转移印迹(EITB)分析的结果。安徽与湖北两地日本血吸虫EITB图谱基本相似。云南和四川的日本血吸虫EITB图谱虽相近,但在84kDa处云南雌虫呈现明显条带而四川雌虫则无此反应带。广西的日本血吸虫与云南的虫体一样,雌虫在84kDa处亦呈现明显的条带。广西的雄虫在与安徽的钉螺抗血清反应后在>130kDa处有两条主要条带,这与安徽地区雄虫的一致且较之更为浓染致密,而云南、四川两地雄虫的则未见此条带。根据上述结果并结合以前有关大陆各地钉螺对日本血吸虫的易感性结果,进行了初步的分析和讨论。     

日本血吸虫各期虫体的酶联免疫电转移印迹分析及抗原定位研究

本文采用酶联免疫电转移印迹技术（EITB）分析、比较日本血吸虫不同发育时期虫体特定的组分蛋白分子、雌虫、雄虫和虫卵抗原分别与相应的雌、雄虫和虫卵免疫血清反应呈现17、20和8条蛋白带,这三种抗原与其它不同时期虫体免疫血清反应,三者间及彼此间均出现交叉反应,而雌、雄虫和虫卵抗原与其它寄生虫感染血清作用没发现有叉及反应。应用间接荧光抗体试验（IFA）和免疫酶染色试验（IES）对日本血吸虫抗原进行定位研究,其结果相似。血吸虫主要抗原物质来源于成虫表皮、肠上皮和卵内的毛蚴.     

磁微粒分离酶联免疫法在日本血吸虫抗体检测中的应用

目的探讨磁微粒分离酶联免疫法(MPAIA)用于检测日本血吸虫病血清抗体的效果。方法用MPAIA测定日本血吸虫病血清中特异性抗体。结果用MPAIA检测384例非血吸虫病流行区阴性血清,均为阴性;检测61例急性血吸虫病人血清、788例慢性血吸虫病人血清、32例晚期血吸虫病人血清其阳性率分别为100%、94.2%、90.6%;检测14例并殖吸虫病人、13例囊虫病人、9例旋毛虫病人血清,均未发现交叉反应。结论MPAIA检测日本血吸虫血清抗体有较高的灵敏度和特异度,可用于日本血吸虫病的临床诊断和现场疫情监测,该方法具有广阔应用前景。     

日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原的初步分析

采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＥＬＩＢ技术分析了日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ），并与可溶性成熟卵抗原（ＳＥＡ）进行比较，二者主要蛋白区带存在明显差异，同时，ＥＬＩＢ结果表明，ＳＩＥＡ中感染血清和免疫血清所识别的６５ｋＤａ、６２ｋＤａ、５０ｋＤａ、２８ｋＤａ和和２６ｋＤａ等抗原组分不出现于ＳＥＡ，推测其在ＳＩＥＡ诱导宿主产生抗雌虫生殖及抗卵胚发育免疫应答方面起作用。     

弓形虫感染小鼠腹水中虫体分泌排泄抗原（E／SA）的免疫印迹分析

本文应用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）、免疫印迹以及ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ方法对弓形虫３种可溶性抗原进行了比较分析。ＷＡ为全虫熔解抗原，Ｅ／ＳＡ采自感染小鼠腹水。免疫印迹显示Ｅ／ＳＡ被兔ＩｇＧ抗体识别出至少１３条抗原区带，分子量范围为１０８～１２ＫＤａ。上清液抗原（ＳＡ）所含组分较少。Ｅ／ＳＡ与ＷＡ具有１００、５８～５１．５、４０、３８、３５、３０、２０及１２ＫＤａ等共同抗原组分。２７     

不同地区日本血吸虫成虫可溶性抗原免疫反应性的比较

应用酶联免疫印迹技术检测我国不同地区日本血吸虫雌、主雌雄合抑虫体中溶性抗原，结果上述三者与相应感染动物血清及慢性日本血吸虫病人血清反应，分别显示出４－２０、６－３４和３－２９条反应带；一地日本血吸虫ＡＷＡ与各地感染鼠血清反应呈明显相似，而不同地区虫体ＡＷＡ应各感染鼠血清反应性之间则显示出很大的差异性。与不同感染宿主血清的反应带及其分子量互不相同；各地雌、雄虫之间也不同，一般雄虫较雌虫反应带多且强；     

旋毛虫肌幼虫三种抗原的免疫印迹分析

应用酶联免疫印迹分析旋毛虫肌幼虫的表面抗原、S_3 抗原和虫体粗抗原,结果显示上述三种抗原的多肽组成存在一定的差异。与同源感染兔血清反应,显示表面抗原有4个免疫反应区带,分子量范围在 102～44KD之间。S_3 抗原和虫体粗抗原分别有 8和10个主要区带,分子量范围在 73～16 KD之间。与异源感染兔血清反应,显示上述抗原的低分子量多肽有较强的特异性。家兔感染旋毛虫后,血清抗体对表面抗原的识别,在不同感染时期具有相同的反应图谱,而对其他两种抗原的识别则具有阶段性的改变。     

吡喹酮治疗前后感染日本血吸虫兔循环29／43KD分子的水平和意义

本文获得两株抗日本血吸虫２９／４３ＫＤ循环抗原的单克隆抗体，并用该抗体建立了一种检测该循环抗原的双抗体夹心法。我们应用该法研究了感染日本血吸虫兔在吡喹酮治疗前后，血清中２９／４３ＫＤ分子的水平变化。结果表明，２９／４３ＫＤ分子于感染后３～４周内开始出现于外周血循环中，于吡喹酮治疗后３～５周内即从血清中逐渐消逝。此提示该分子可能是早期诊断日本血吸虫病和评价化疗效果的一种有价值的血清标志物。     

SjR12和SjR47组分抗原对日本血吸虫感染小鼠肝内虫卵肉芽肿形成的影响

本项研究将从日本血吸虫感染家兔红细胞上分离、纯化的12kDa和47kDa蛋白分子,分别称为SjR12（虫源性）和SjR47（卵源性）组分抗原,加福氏完全佐剂免疫小鼠,攻击感染后35d、39d和42d时,各组分三批在相同条件下剖杀小鼠的观察结果：获得31．27～31．33％的减虫率和54．95～72．36％的减卵率;SjR12和SjR47组分抗原均能显著地抑制感染小鼠肝内虫卵肉芽肿形成,特别是SjR47组分抗原具有更显著的免疫抑制作用。本项研究尚未见有类似报道,具有理论意义和应用前景。     

抗日本血吸虫未成熟虫卵单克隆抗体的制备和鉴定

采用日本血吸虫来成熟卵抗原（SIEA）免疫BALB／c小鼠，制备抗SIEA单克隆抗体。获得一株强阳性、高特异的抗未成熟虫卵的单抗（2B2），免疫球蛋白为IgG1类。免疫印迹分析表明该单抗单一识到日本血吸虫未成熟虫卵抗原中的50kDa分子。免疫荧光染色表明，与雌虫子宫内虫卵呈现强阳性反应，而不与成虫抗原交叉。     

抗日本血吸虫SEA鸡卵黄抗体的制备与鉴定

目的 制备特异性抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA）的鸡卵黄免疫球蛋白（IgY）并检测其特异性、敏感性。 方法 用日本血吸虫SEA经翅膀下静脉和皮下免疫25周龄海兰母鸡4次（首次剂量为60 μg/只，加强剂量为30 μg/只），每次间隔10 d。取免疫前和首次免疫后35 d的鸡蛋卵黄，分别用水稀释法提取IgY，BCA法测定蛋白含量，并进行十二烷基磺酸钠?鄄聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质印迹（Western blotting）分析，ELISA检测纯化后IgY特异性和敏感性。分别提取免疫后不同时间的卵黄抗体，观察抗体效价的变化。 结果 海兰母鸡经SEA首次免疫后35 d，每枚蛋经提纯后可得到约61 mg抗体，经SDS-PAGE和Western blotting分析，纯化的IgY有1条主要蛋白带，相对分子质量（Mr）为130 000，并可被SEA识别。母鸡初次免疫后第10天，经SDS-PAGE和ELISA分析，鸡蛋卵黄内即有抗体产生，初次免疫后31 d效价可达1∶1 600。双抗体夹心ELISA结果显示纯化后的IgY有较高的敏感性，可检测到的SEA达2.4 ng/ml。 结论 制备的抗SEA鸡卵黄抗体的特异性和敏感性均较高。     

压电免疫传感器检测日本血吸虫循环抗原的研究

通过葡萄球菌蛋白A(SPA)将从感染兔血清 (InRS)或免疫兔血清 (ImRS)中纯化的IgG抗体固定于镀金的石英晶片上 ,制成一种新型的液相压电免疫传感器 ,用于检测感染兔血清中的日本血吸虫循环抗原 (SjCAg)。分别比较了提纯前血清、部分纯化抗体和完全纯化抗体 ,以及感染和免疫兔血清纯化IgG的固定效率和检测效果。结果表明 ,以完全纯化抗体的效果最好 ,免疫兔血清纯化IgG优于感染兔血清纯化IgG。同时 ,还研究了SPA的固定浓度、检测时间、血清最适稀释度及晶体的再生性等。用该法检测了不同感染度的兔血清 ,发现频移值变化在一定范围内与感染度成正比     

应用环节动物抗原进行日本血吸虫病免疫诊断

目的 通过制备水蛭可溶性抗原，找到与日本血吸虫的共同抗原成分，从而应用水蛭动物抗原进行日本血吸虫病的免疫诊断。方法 ①冻存虫体研磨，考马斯亮蓝染色测定蛋白浓度；②SDS-聚丙酰胺凝胶电泳分析蛋白成分；③WESTERN印迹法和间接ELISA试验观察抗原抗体反应。结果 水蛭动物蛋白至少含有20种以上的蛋白组分，其中有8种组分含量较高；水蛭蛋白同血吸虫患者的血清反映明显，其敏感度和特异性较高。结论 水蛭与日本血吸虫具有相同的抗原成分，以此用于日本血吸虫病的免疫学诊断。     

杂交瘤细胞凝集试验诊断血吸虫病的实验研究

目的用杂交瘤细胞凝集试验(hybridomacellsagglutinationtest,HCAT)诊断实验日本血吸虫病,并探讨杂交瘤细胞在特异性血清中凝集的机制。方法分泌抗血吸虫31/32kDa抗原单抗的杂交瘤细胞H226经特定处理后分别与感染日本血吸虫尾蚴10、30和50条的小鼠血清孵育,动态观察感染后不同时间的凝集反应。上述杂交瘤细胞涂片后与日本血吸虫感染兔血清进行间接免疫荧光试验(IFT),以探讨凝集机制。结果杂交瘤细胞在感染鼠血清中呈现凝集反应:感染后2wk时,50条尾蚴感染组中70％HCAT阳性,至第5周,全部感染小鼠均出现阳性反应。抗原滴度在感染后逐步升高,感染后6wk时达到最高。重度感染鼠的抗原滴度明显高于中、轻度感染鼠。IFT显示,在杂交瘤细胞膜表面呈现特异性的黄绿色荧光,而细胞内未见显色。结论HCAT是一种血吸虫病诊断新方法。     

日本血吸虫成虫组分抗原的分离及小鼠免疫试验

目的 分离日本血吸虫可溶性成虫抗原(AWA)中的组分抗原，分析其诱导的抗血吸虫的免疫保护性。方法 电泳层析法分离日本血吸虫AWA中的组分抗原，计算各组分抗原的分子量，并分析其免疫学活性。将各组分抗原分别免疫小鼠，攻击感染日本血吸虫尾蚴，感染后45d剖杀，观察各组分抗原的免疫保护效果。结果 采用电泳层析法分离获得多个组分抗原，选择收集其中4个较纯的组分抗原，分子量分别为52kD、63kD、67kD和74kD；其中63kD和67kD抗原与感染血清有强的反应，而52kD和74kD抗原则反应弱；4种组分抗原均与AWA的免疫血清反应。63kD抗原诱导的免疫保护力水平较52kD、67kD和74kD抗原好。结论 电泳层析法分离的4个血吸虫组分抗原有良好的免疫原性，且63kD抗原有一定的免疫保护性。     

日本血吸虫三类循环抗原和循环抗体对感染家兔疗效考核价值的研究

采用三株分别定位于日本血吸虫表皮膜、肠道上皮和虫卵的单克隆抗体A6,SJ31／32和SE9作为捕获抗体建立检测三类循环抗原的斑点酶联免疫吸附实验（DOT－ELISA）方法,并利用该方法和普通ELISA分别观察了日本血吸虫感染家兔血清中三类循环抗原和IgG抗体的动态变化情况。结果表明：感染日本血吸虫家免在经砒喹酮治疗之后的第8周,睦相关抗原,可溶性虫卵抗原和肠相关抗原的转阴率分别为80％,70％和20％,而减后第18周全部转阴;IgG抗体一直维持较高水平。因此,MAA和SEA具有改好的疗效考核价值,GAA的疗效考核效果较差,IgG抗体不具有疗效考核作用。