细胞间粘附分子对肾小球系膜细胞增殖的影响

近年来免疫病理学研究已证实细胞间粘附分子-1(ICAM-1)作为细胞粘附分子中免疫球蛋白超家族成员之一,通过与炎性细胞表面同族型配体之间相互作用形成粘附,在免疫监督、炎症反应和动脉粥样硬化等过程中起着重要的作用。因此,有关ICAM-1与肾小球系膜细胞增殖的相关研究对进一步阐明肾小球炎性疾病的发病机理及治疗的进展具有重大意义。 一、材料与方法 1.按经典方法培养、鉴定C57BL/6小鼠肾小球系膜细胞及巨噬细胞,选取第4～6代细胞用于本实验。 2.取系膜细胞,胰酶消化后,将制成的浓度为1.0×10~4/L细胞悬液加入24孔培养板内,正常对照组和     

地塞米松对肾小球系膜细胞表达细胞间粘附分子的影响

细胞粘附分子是近年免疫学研究最有活力的领域之一,其介导的细胞与细胞、细胞与基质粘附作用在免疫炎症反应等多种病理过程中起着关键性作用。目前知道,肾小球系膜细胞(MC)表面低表达细胞间粘附     

肾小球系膜细胞内皮素受体的研究

内皮素(endothelin,ET)是一种生物学作用广泛而强烈的缩血管物质,除心血管系统外,肾脏也是重要的效应器官。肾小球系膜细胞(MC)是最活跃的固有细胞,已经证明ET对MC有明显的致收缩和促增殖作用。根据一般规律,MC可能有ET受体(ET-R)。为了证实这一点,我们用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)及Northern印迹杂交法,检测ET-R在MC的表达。 一、材料和方法 1.动物:6～8周龄,体重150～200g SD雄性大鼠。2.MC培养与鉴定:按本实验室已     

凝血酶介导肾小球系膜细胞细胞间粘附分子1表达上调及水蛭素的阻断作用

目的为了阐明凝血酶对肾小球系膜细胞细胞间粘附分子１（ＩＣＡＭ－１）表达的影响。方法利用体外培养的人肾小球系膜细胞，分别采用噻唑蓝掺入法、流式细胞术、间接免疫荧光、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交等方法分别观察了凝血酶对系膜细胞增殖和表达ＩＣＡＭ－１蛋白和ｍＲＮＡ的影响，并同时进行了人工重组水蛭素的阻断实验。结果凝血酶可以显著促进系膜细胞增殖以及系膜细胞ＩＣＡＭ－１蛋白和ｍＲＮＡ的表达，水蛭素可以特异地阻断凝血酶的这些作用。结论凝血酶不仅是肾小球内凝血过程的关键酶，而且具有促进系膜增殖和促进系膜细胞表达ＩＣＡＭ－１的作用。     

内皮素在大鼠系膜增生性肾小球肾炎中的表达

目的 研究内皮素－１（ＥＴ－１）在系膜增生性肾小球肾炎（ＭｓＰＧＮ）模型中的表达。方法 以小鼠抗大鼠Ｔｈｙ１．１单克隆抗体单次尾静脉注射诱导的大鼠ＭｓＰＧＮ模型,,病理观察分析该模型的系膜细胞和系膜基质增生;Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析肾小有内此素（ｐｐＥＴ－１）ｍＲＮＡ表达水平;放射免疫分析（ＲＩＡ）测定肾小球ＥＴ－１蛋白水平。结果 在大鼠ＭｓＰＧＮ模型中,第２ｄ系膜细胞溶解消失,第４ｄ系膜细胞增生     

肿瘤坏死因子介导内皮素所致人肾小球系膜细胞增殖的研究

内皮素（endothelin，ET）不但是强烈缩血管多肽，而且还是一个强有力促有丝分裂因子，能够刺激肾小球系膜细胞增殖[1]，但机理仍欠清楚。为探讨内皮素致系膜细胞由肿瘤坏死因子α（TNFα）介导的可能性，我们利用细胞培养、放射免疫及分子杂交等技术进行了本实验。一、材料和方法1．实验对象：第2－3代亚培养人肾小球系膜细胞（humanmesangialbell，HMC）。2．TNFu测定：分试验组和对照组，试验组加10－’mol／L人ET－l，孵育8。12和24h后收集上清，放射免疫法测定’FNFa蛋白浓度。3Northern杂交：实验分5组，第1组仅加含2．5％FC…     

转化生长因子β1对大鼠原代肾小球系膜细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的：探讨原代培养的大鼠肾小球系膜细胞血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的表达及转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）对其表达的影响。方法：采用RT-PCR和Westernblot方法检测大鼠原代培养的肾小球系膜细胞VEGF表达及不同浓度、不同时间的TGF-β1刺激对VEGF表达的作用。结果：原代培养的大鼠肾小球系膜细胞表达VEGF164、120mRNA，TGF-β1呈时间依赖性增加其表达，在12h表达最高，分别为刺激前3．17、2．925倍，有统计学差异（P〈0．001）。在剂量反应曲线上，2ng／ml TGF-β1刺激作用最强，VEGF164、120mRNA表达分别为未刺激组的2．82、2．45倍，有统计学差异（P〈0．001）。与VEGF mRNA表达一致，大鼠原代肾小球系膜细胞仅见VEGF164蛋白表达，2ng／ml TGF-β1呈时间依赖性的增加VEGF 164蛋白表达，24h达高峰，为刺激前的2．37倍。结论：促进肾小球系膜细胞VEGF表达可能是TGF-β1介导肾脏损害发生、发展的机制之一。     

凝血酶介导肾小球系膜细胞细胞间粘附分子1表达上调及水蛭素？…

为了阐明凝血酶对肾小球系膜细胞细胞间粘附分子表达的影响。方法 利用体外培养的人肾小球系膜细胞，分别采用噻唑蓝掺入法，流式细胞术。间接免疫荧光，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交等方法分别观察了凝血酶对系膜细胞增殖和表达ＩＣＡＭ－１蛋白和ｍＲＮＡ的影响，并同时进行了人工重组水蛭素的阻断实验。     

内皮素对肾小球系膜细胞转化生长因子基因表达的影响

观察肾小球系膜细胞（ＭＣ）的转化生长因子（ＴＧＦ－β）的基因表达，以及内皮素（ＥＴ）对ＴＧＦ－β基因表达的影响。方法应用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）及半定量ＲＴ－ＰＣＲ方法对体外培养的大鼠ＭＣ进行了ＴＧＦ－β基因表达的定量检测。结果ＭＣ有ＴＧＦ－β的基因表达，并且ＥＴ对ＴＧＦ－β的基因表达有上调作用。结论ＴＧＦ－β是ＭＣ的又一个自分泌因子，ＥＴ和ＴＧＦ－β可能有协同作用而引起ＭＣ增生和系膜基质（ＭＭ）的增多，在肾小球肾炎和肾小球硬化的病理过程中，具有一定意义     

基质金属蛋白酶1组织抑制剂短发夹式RNA对肾小球系膜细胞凋亡及细胞外基质的影响

目的 构建靶向基质金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1)的短发夹RNA(shRNA)表达载体，并观察其对大鼠肾小球系膜细胞的凋亡和细胞外基质分泌的影响。方法 构建携带绿色荧光蛋白(EGFP)基因的RNA干扰真核表达载体pEGFP-1/TIMP-1 shRNA， 利用该载体介导两个TIMP-1 shRNA，分别为TIMP-1 shRNA1和TIMP-1 shRNA2。用荧光显微镜观察EGFP的表达。采用 RT-PCR和Western 印迹测定宿主细胞TIMP-1在基因和蛋白水平的沉默效果。用 ELISA检测细胞外基质成份的表达。以流式细胞仪检测细胞的凋亡情况。 结果 (1)测序证实成功构建了针对TIMP-1的shRNA表达载体pEGFP-1/TIMP-1 shRNA；(2)荧光显微镜下，转染组细胞内均见绿色荧光；未转染组未见绿色荧光；(3)基因和蛋白水平的检测显示，与阴性对照组相比，TIMP-1 shRNA1组的TIMP-1明显受抑制(P < 0.05)，TIMP-1 shRNA2组抑制效果不明显；(4)ELISA结果显示， 正常对照组FN、Ⅳ型胶原蛋白和 LN的表达不随时间的延长而变化；未转染组和阴性对照组在高糖诱导下， FN、Ⅳ型胶原蛋白和 LN的表达随时间的延长而增加；48、72 h的shRNA1组、抗体组和反义组对 FN、Ⅳ型胶原蛋白、LN表达明显低于阴性对照组，以shRNA1组最明显；(5)流式细胞仪结果显示，高糖诱导的各组细胞凋亡率随时间的延长而升高。在同一时间点shRNA1组细胞的凋亡率最高，反义组细胞的凋亡率次之，48 h和72 h的shRNA1组细胞的凋亡率与其他各组比较， 差异有统计学意义(P < 0.05)。 结论 pEGFP-1介导的TIMP-1 shRNA1能更加有效的抑制大鼠肾小球系膜细胞中TIMP-1的表达，促进肾小球系膜细胞的凋亡并使细胞外基质的成份表达下降。     

内皮素1对大肠癌HCT-116细胞增殖的影响

目的 探讨内皮素1对大肠癌HCT-116细胞增殖的影响.方法 应用RT-PCR及免疫组织化学法检测大肠癌HCT-116细胞内皮素1,内皮素受体A、B表达情况;应用MTY法检测不同浓度和作用时间的内皮素1对体外培养大肠癌HCT-116细胞增殖的影响,多组比较采用方差分析.结果 HCT-116细胞存在内皮素1及内皮素受体A、B的基因和蛋白表达;内皮素1能明显促进大肠癌HCT-116细胞的增殖,在干预48 h且浓度为1×10-7mol/L时达到最强.结论 内皮素1通过细胞膜上受体的介导,促进HCT-116细胞的增殖,呈药物浓度依赖性.     

The interaction of glomerular mesangial cells and epithelial cells

The interaction of cells within the glomerulus plays an important role in the development and progression of glomerular disease. To investigate the interaction of glomerular mesangial cells (GMC) and epithelial cells (GEC), and mediator(s) of this interaction, we investigated the effect of Adriamycin (doxorubicin hydrochloride)-induced (ADR) rat GMC-conditioned medium (GMC-CM) on the incorporation of ³⁵S, ³H-leucine, and ³H-thymidine in normal rat GEC, as well as ³H-thymidine uptake by normal rat GMC in response to ADR-rat GEC-CM. In addition, changes in the responsiveness to interleukin-6 (IL-6) and the products of IL-6 were assessed in ADR-rat GMC. The results showed that: (1) GMC-CM of ADR-rat with heavy proteinuria stimulated GEC proliferation and the synthesis of sulfated compounds and protein, while the GEC-CM of ADR-rat from the same nephrotic period increased GMC proliferation; (2) the ADR-rat GMC had altered responsiveness to IL-6 and its products. The stimulation index results demonstrated the interaction of GMC and GEC in the ADR-induced rat model, and that this interaction related closely to the degree of proteinuria and was mediated by soluble products of the damaged glomerular cell. Received March 29, 1996; received in revised form July 1, 1997; accepted July 2, 1997     

Expression of cellular adhesion molecules on human prostate tumor cell lines

By flow cytometric analysis we have examined the expression of cellular adhesion molecules (CAMs) on the surface of four different human prostate tumor cell lines: DU 145, from a brain metastasis; PC 3, from a bone metastasis; LNCaP.FGC, from a lymph node metastasis; and a primary tumor cell line, ND 1. The corresponding ligands for the expressed CAMs were, by and large, extracellular matrix proteins. We detected high-level expression of ICAM-1 on three of the four prostate cell lines, whereas LNCaP cells were negative. We observed unstable, heterogeneous expression of E-cadherin in the cell lines DU 145, PC 3, and ND 1. Flow cytometric cell sorting enabled us to divide PC 3 cells into negative and bright positive subpopulations but, after several cell divisions in culture, sorted cells returned to the original heterogeneous phenotype. The laminin-specific α₆β₄ integrin was not expressed by LNCaP, and was expressed at a low level and heterogeneously on DU 145 and PC 3 cell lines. In contrast, ND 1 cells, derived from a primary tumor, showed homogeneous and high-level expression of the α₆β₄ integrin. All of the prostate cell lines expressed the RGD-dependent binding of α₃β₁ and α₅β₁ integrins and did not reveal non-RGD-dependent α₄β₁ integrin expression. This finding provides a stimulus to investigate the inhibition capacity of RGD-containing peptides on the metastatic behavior of prostate tumor cells.     

脂蛋白（a）对肾小球系膜细胞的作用

目的探讨脂蛋白（ａ）［Ｌｐ（ａ）］对肾小球系膜细胞（ＧＭＣ）的作用。方法将体外培养的系膜细胞，加脂蛋白（ａ）刺激后，测定细胞生长率和细胞上清中血小板活化因子（ＰＡＦ）、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）及纤维连结蛋白（ＦＮ）水平，并以未经刺激者作对照。结果经脂蛋白（ａ）刺激４８小时，在终浓度５～２０ｍｇ／Ｌ时细胞生长率轻度增加，而在５０～４００ｍｇ／Ｌ时细胞生长率明显下降。刺激１８小时，细胞上清中ＰＡＦ的水平明显高于对照，且与脂蛋白（ａ）浓度呈明显正相关（ｒ＝０．９３７，Ｐ＜０．０１）；Ｌ９２９细胞的杀伤率有所增加，但未达５０％；ＬＤＨ的水平在脂蛋白（ａ）１００ｍｇ／Ｌ以下时有所增加；刺激１８、４８、７２小时后的细胞上清纤维连结蛋白均为阴性。结论脂蛋白（ａ）对系膜细胞体外增殖有低浓度轻度促进、高浓度抑制的双向作用，对细胞ＰＡＦ的产生具有浓度依赖的促进作用，并能增加细胞上清中ＬＤＨ及ＴＮＦ水平，因而可通过多种途径介导肾小球损伤。     

雷帕霉素对炎性反应状态下肾小球系膜细胞内脂质稳态的影响

Objective To investigate the effect of rapamycin on cholesterol homeostasis of glomerular mesangial cells and the underlying mechanism. Methods Glomerular mesangial cell line (HMCL) cells were cultured and divided into control group, IL-1β group and different concentration rapamycin groups. Intracellular cholesterol accumulation was observed and measured by oil O staining and HPLC. Real-time quantitative PCR and Western blot were used to detect the mRNA and protein expression of LDLR, PPARγ, LXRα, ABCA1 in HMCL after the treatment with IL-1β and rapamycin. Results Rapamycin had no significant influence on intracellular cholesterol concentration under normal condition. IL-1β significantly increased the intracellular cholesterol concentration by 143％ of control (P<0.05), and 10, 50, 100 ?滋g/L rapamycin could significantly inhibit the effect of IL-1β (87％, 116％, 96％ of control respectively, all P<0.05). Rapamycin could suppress the increased expression of LDLR caused by IL-1β on both mRNA and protein level in a dose-dependent manner（P<0.01）. Rapamycin dose-dependently up-regulated the reduced mRNA and protein expression of ABCA1, the decreased mRNA expression of PPARγ and LXRα induced by IL-1β as well (P<0.01）. Conclusion Rapamycin may contribute to the maintenance of intracellular cholesterol homeostasis in glomerular mesangial cells under inflammatory state by both reducing cholesterol uptake and promoting cholesterol efflux.     

TRPC1通道参与调节肾小球系膜细胞的收缩

目的探讨离体和在体情况下TRPC1通道是否参与肾小球系膜细胞的收缩。方法通过计算细胞表面积来观察肾小球系膜细胞的收缩情况。分别利用荧光标记的菊粉和对氨基马尿酸（PAH）的血浆清除率计算大鼠肾小球滤过率（GFR）和肾血浆流量。结果在肾小球系膜细胞的培养液中加入血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）10min后，细胞表面积减少（37．2％±4．0％），系膜细胞的收缩反应可因TRPC1基因敲除而受到显著抑制（20．1％±3．0％）。给大鼠注射AngⅡ（1．7ng·min^-1·100g^-1BW）可引起GFR下降，注射TRPC1抗体（300μg／L）显著抑制AngⅡ引起GFR下降（P〈0．05）。但与TRPC1抗体相同浓度的免疫球蛋白，不能抑制AngⅡ引起的GFR下降。另外，TRPC1抗体不影响AngⅡ引起的血压改变和肾血流量的下降。结论本实验表明TRPC1通道在调节肾小球系膜细胞收缩功能方面发挥了重要的作用。     

缺氧条件下中介素和系膜细胞对内皮细胞血管生成的影响

目的探讨缺氧条件下,中介素(IMD)和肾小球系膜细胞(HMC)对内皮细胞的影响。方法内皮细胞分为4组:(1)内皮细胞与系膜细胞共培养,加IMD处理作为HEMI组;(2)内皮细胞与系膜细胞共培养,无处理作为HEM组;(3)内皮细胞加IMD处理作为HEI组;(4)内皮细胞无处理作为HE组;将各组细胞在1%O2、94%N2、5%CO2条件下缺氧培养12 h后,蛋白质印迹法(Western blot)、免疫细胞化学技术检测相关蛋白表达,实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测相关基因mRNA相对表达量,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血管内皮生长因子A(VEGFA)含量,体外血管形成实验检测内皮细胞的成管分支数。实验结果两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果上皮型钙黏分子(VE-cadherin)表达量HEMI(1.629±0.197、1.557±0.066、10.552±0.523)高于HEM(1.116±0.118、1.340±0.161、8.128±0.542)、HEI(1.278±0.096、1.078±0.088、7.523±1.211)、HE组(1.000±0.000,F=0.734、1.244、6.134,P<0.05),差异有统计学意义;血小板内皮细胞黏附分子(PECAM-1/CD31)表达量HEMI(1.309±0.234、1.203±0.105、1.654±0.462)高于HEM(1.067±0.379、1.038±0.035、1.601±0.397)、HEI(1.225±0.091、1.101±0.038、1.605±0.207)、HE组(1.000±0.000),差异无统计学意义(F=5.083、5.434、6.428,P>0.05);VEGF表达量HEMI(0.904±0.005、1.922±0.457)高于HEM组(0.690±0.071、1.000±0.000,F=8.307、10.896,P<0.01),ELISA中加入IMD组(1.018±0.319)VEGFA浓度比值高于对照组(0.921±0.294,F=0.132,P<0.05),差异有统计学意义;体外血管形成中HEMI(22.289±0.131)、HEM(21.318±0.594)、HEI(21.533±0.867)、HE(20.755±1.798)高于NE组(18.731±0.525,F=5.926、0.030、1.033,P<0.05;F=6.753,P>0.05)。结论缺氧条件下,IMD可以直接或通过系膜细胞间接双重影响内皮细胞,促进血管形成。