MHC基因胸腺转移诱导异基因小鼠皮肤移植免疫耐受

目的通过胸腺内注射质粒ＰＸＮ（Ｎ２Ｂ１９Ｈ２Ｋｂ）,表达外源性主要组织相容性抗原复合物（ＭＨＣ）抗原,以小鼠皮肤移植为模型,诱导移植免疫耐受,为免疫耐受提供理论和实验依据。方法应用逆转录病毒载体介导的基因转移技术,通过ＢＡＬＡ／Ｃ胸腺内注射质粒ＰＸＮ（Ｎ２Ｂ１９Ｈ２Ｋｂ）,将外源性ＭＨＣ基因转移到胸腺细胞,１４天后行异基因小鼠皮肤移植。应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）,反转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）,单克隆抗体免疫荧光染色流式细胞仪检测胸腺细胞ＤＮＡ,ｍＲＮＡ和ＭＨＣ蛋白质表达。结果外源性ＭＨＣ基因已整合到靶细胞染色体ＤＮＡ并有效地转录,胸腺细胞表面有外源性ＭＨＣ分子表达,转染效率为５％,胸腺内注射质粒ＰＸＮ（Ｎ２Ｂ１９Ｈ２Ｋｂ）能明显延长异基因小鼠的皮肤移植时间,平均２７天,对照为１０天（Ｐ＜０００１）。受体鼠脾细胞对ＣｏｎＡ的增殖反应在正常范围。结论供体鼠ＭＨＣ基因转移至受体鼠胸腺诱导了对供体皮肤移植的免疫耐受。     

多药耐药基因在泌尿系统肿瘤细胞系中的表达

目的检测泌尿系统肿瘤多药耐药基因及其产物的表达。方法对肾颗粒细胞癌细胞系ＧＲＣ１，肾透明细胞癌细胞系ＲＣＣ９４９，膀胱移行细胞癌细胞系ＢＩＵ８７、Ｔ２４、ＥＪ，前列腺癌细胞系ＰＣ３ｍ和对照的白血病细胞系ＨＬ６０进行免疫细胞化学和逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）检测。结果只有ＧＲＣ１同时表达Ｐ糖蛋白（ＰＧＰ）和ＭＤＲ１基因ｍＲＮＡ，其他肿瘤细胞系均无表达。结论泌尿系肿瘤细胞系多数无ＰＧＰ也没有ＭＤＲ１基因ｍＲＮＡ水平的表达，只有ＧＲＣ１例外     

大肠癌组织中结直肠癌缺失基因mRNA及增殖细胞核抗原的表达

目的 探讨结直肠癌缺失基因（ＤＣＣＧ）及增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）与大肠癌的临床病理特征关系，方法 用逆转录ＰＣＲ及免疫组织化学染色方法，分别检测ＤＣＣＧｍＲＮＡ及ＰＣＮＡ在３３例大肠腺癌及正常粘膜组织中的表达状况。结果 （１）ＤＣＣＧｍＲＮＡ表达缺失率为６１％，ＰＣＮＡ指数为３％～９７％。（２）大肠癌组织ＤＣＣＧｍＲＮＡ表达缺失及及ＰＣＮＡ指数与肿瘤分化程度，浸润深度和转移情况有显著相关性（Ｐ〉     

PCR-SSP及PCR-SSCP在骨髓移植配型中的联合应用

目的 研究ＨＬＡ抗原分型的方法。方法 对２０例已进行ＨＬＡ抗原血清学分型的骨髓移植供、受者采用序列特异引物聚合酶链反应（ＰＣＲ－ＳＳＰ）及单链构象多态性聚合酶链反应（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）进行ＨＬＡ抗原的基因分型。ＤＮＡ的提取采用快速盐析法。结果 基因分型结果与血清学分型一致者有１８对,基因分型能明确判定而血清学分型无法判断者有２对;ＰＣＲ－ＳＳＰ与ＰＣＲ－ＳＳＣＰ结果完全一致者有１９对;１对ＰＣＲ－     

内皮素对肾小球系膜细胞转化生长因子基因表达的影响

观察肾小球系膜细胞（ＭＣ）的转化生长因子（ＴＧＦ－β）的基因表达，以及内皮素（ＥＴ）对ＴＧＦ－β基因表达的影响。方法应用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）及半定量ＲＴ－ＰＣＲ方法对体外培养的大鼠ＭＣ进行了ＴＧＦ－β基因表达的定量检测。结果ＭＣ有ＴＧＦ－β的基因表达，并且ＥＴ对ＴＧＦ－β的基因表达有上调作用。结论ＴＧＦ－β是ＭＣ的又一个自分泌因子，ＥＴ和ＴＧＦ－β可能有协同作用而引起ＭＣ增生和系膜基质（ＭＭ）的增多，在肾小球肾炎和肾小球硬化的病理过程中，具有一定意义     

胆管癌表皮生长因子受体,增殖细胞核抗原的表达

为研究胆管癌组织中表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的表达及其生物学意义，并探讨ＥＧＦＲ表达与血型Ａ抗原的关系，通过应用免疫组织化学方法（ＡＢＣ法）检测３０例肝外胆管癌。结果发现１５例（５０％）为ＥＧＦＲ阳性，ＰＣＮＡ阳性７例（２３．３３％），对照组５例为非肿瘤胆总管，ＥＧＦＲ、ＰＣＮＡ均为阴性。胆管癌与非肿瘤胆总管组ＥＧＦＲ及ＰＣＮＡ表达率有显著差异，细胞分化差、有胆管外转移的胆管癌ＥＧＦＲ的表达率高于细胞分化好、无胆管外转移病例。胆管癌各组间ＰＣＮＡ表达率均无显著性差异。ＥＧＦＲ表达与血型Ａ抗原无关。结果提示：检测ＥＧＦＲ表达是判断胆管癌增生活性的有效手段，而ＰＣＮＡ尚需进一步研究。     

p21^waf1基因真核表达载体的构建和对人胆管癌细胞生长 …

目的 探讨ｐ２１＾ｗａｆ１基因过表达在人胆管癌细胞增殖和凋亡中的作用。方法 包含２．１ｋｂ的ｐ２１＾ｍａｆ１ｃＤＮＡ片段经阳离子脂质体ＤＯＴＡＰ包裹转染人胆管癌细胞ＱＢＣ９３９中，并得到稳定表达，通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）、逆转录－ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）、流式细胞仪及免疫组织化学等方法检测ｐ２１＾ｗａｆ１基因表达、细胞生长和细胞凋亡等情况。结果 ｐ２１＾ｗａｆ１基因转染后，细胞生长明显受抑制，细胞     

逆转录病毒载体介导的外源性主要组织相容性抗原复合体基因转移及其在T细胞的表达

目的 建立一个在胸腺内表达外源性主要组织相容性抗原复合体(MHC)抗原的实验模型,为下一步研究作准备。方法 应用逆转录病毒载体介导的基因转移技术,首次将外源性MHC基因转移到T淋巴表达并应用聚合酶链反应(PCR)及反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染T细胞DNA及mRNA。结果 外源性MHC基因已整合到靶细胞染色体DNA并有效地转录;单克隆抗体免疫荧光染色流式细胞仪检测显示在转染T细胞膜有外源性MHC分子表达;转染效率为46.2％。结论 外源性MHC基因可以转移到T细胞稳定表达,为今后的研究提供了经验。     

共刺激分子B7在泌尿系肿瘤的表达

目的探讨Ｂ７与ＣＤ２８和ＣＴＬＡ４作为共刺激信号在抗肿瘤免疫中的作用。方法应用逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）和免疫组织化学方法，检测４５例泌尿系肿瘤Ｂ７基因在ｍＲＮＡ和蛋白水平的表达情况。结果ＲＴＰＣＲ１１例阳性，免疫组化６例阳性，ＲＴＰＣＲ与免疫组化的检测结果有所不同。病理切片观察Ｂ７阳性肿瘤有明显的淋巴细胞浸润，肿瘤内有坏死。结论某些肿瘤细胞表达Ｂ７基因，肿瘤内有抗肿瘤免疫反应，提示Ｂ７基因表达可能与预后有关     

一例前列腺癌P53基因第6外显子中的移码突变

以ＰＣＲ单链构象多态（ＰＣＲＳＳＣＰ）分析及ＰＣＲ直接测序技术，结合免疫组织化学方法，对１例前列腺癌患者治疗前的前列腺穿刺组织及内分泌治疗后复发的手术切除标本中不同部位随机取材的肿瘤组织进行Ｐ５３基因第５，６外显子及Ｐ５３蛋白表达的检测，发现在第６外显子的第２０８密码子存在碱基插入突变（ＧＡＣ→ＧＡＴ），免疫组织化学检测中未发现Ｐ５３蛋白的过量表达。前列腺癌中尚未见有此种Ｐ５３基因突变的文献报道。     

针对T细胞活化共刺激通路的抗移植排斥研究进展

１概述 Ｔ细胞在移植排斥反应中起着核心作用。Ｔ细胞活化、产生细胞因子及克隆增殖的过程需要两种信号参与：信号１由Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）与抗原递呈细胞（ＡＰＣ）表面的ＭＨＣ－抗原复合物相互作用时产生,具有抗原特异性;信号２即共刺激信号,由可溶性共刺激分子或ＡＰＣ表面的分子配体提供,若缺乏共刺激信号,Ｔ细胞将进入免疫无应答状态。因此,信号１决定了免疫反应的特异性,信号２则决定了免疫反应的程度和转归。自９０年代初较系统地提出上述Ｔ细胞活化双信号模式后,该领域的研究日益受到重视。Ｔ细胞表面ＣＤ２８分子与ＡＰ…     

阿霉素肾病大鼠肾脏血管紧张素Ⅱ-Ⅰ型受体基因表达

阿霉素肾病大鼠肾脏血管紧张素ⅡⅠ型受体基因表达刘娅卢义侠丁洁应用阿霉素肾病大鼠模型，采用逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）技术检测肾脏血管紧张素ⅡⅠ型受体（ＡＴ１Ｒ）ｍＲＮＡ表达情况，同时用放免法测定血浆及肾组织血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）含量，以...     

表达白细胞介素10的系膜细胞基因转移载体的建立

目的为特异性地将病毒性白细胞介素１０（ｖＩＬ１０）基因转移到肾脏提供一种手段。方法应用逆转录病毒载体介导的基因转移技术将外源性基因ｖＩＬ１０转移到大鼠肾脏系膜细胞,应用ＲＴＰＣＲ、ＥＬＩＳＡ方法检测其表达,并通过对混合淋巴细胞反应（ＭＬＲ）的影响对其活性进行分析。结果ｖＩＬ１０在转染的系膜细胞表达２００００ｐｇ·（１０６细胞）－１／２４ｈ,应用３ＨＴｄＲ掺入法检测ｖＩＬ１０对ＭＬＲ的影响,实验组明显低于对照组（Ｐ＜００５）。结论外源性基因在系膜细胞有效地转录和表达,并对ＭＬＲ有抑制作用。     

BCG－PSN、rIFN－r对膀胱癌患者T细胞MHCⅡ类抗原及IL－2R表达的诱导作用

采用鼠单克隆抗体间接免疫荧光技术观察了卡介苗多糖核酸（ＢＣＧ－ＰＳＮ）、重组免疫干扰素（ｒＩＦＮ－ｒ）在体外对膀胱癌患者外周静脉血Ｔ淋巴细胞主要组织相容性复合体（ＭＨＣ）Ⅱ类抗原及白细胞介素－２受体（ＩＬ－２Ｒ）表达的影响。结果表明；两者均能诱导病人Ｔ细胞ＤＲ抗原ＩＬ－２Ｒ的表达（Ｐ＜０．０５），而对正常人Ｔ细胞表达的影响无统计学意义。提示ＢＣＧ和ｒＩＦＮ－ｒ防治膀胱癌的作用可能与其诱导ＤＲ抗原、ＩＬ－２Ｒ的表达有关。     

黑色素瘤抗原-3基因在肝细胞癌中的研究

目的 检测黑色素瘤抗原－３（ｍｅｌａｎｏｍａ ａｎｔｉｎｅｇ－３,ＭＡＧＥ－３）ｍＲＮＡ在肝细胞癌（ＨＣＣ）中的表达,探计用ＭＡＧＥ－３基因编码蛋白作为疫苗对ＨＣＣ患者进行免疫治疗在理论上的可行性。方法 用ＲＴ－ＰＣＲ方法对４５例ＨＣＣ患者癌组织和相应癌旁肝组织以及１６例肝硬化组织和１２例正常肝组织的ＭＡＧＥ－３ ｍＲＮＡ表达情况进行研究,对３例ＲＴ－ＰＣＲ扩增产物中目的基因片段进行ＤＮＡ序列测定     

聚合酶链反应检测糖基化终末产物受体基因并调查其在大鼠各器官的分布

应用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ／ＰＣＲ），首次检测糖基化终末产物受体（ＲＡＧＥ）基因，并调查其在ＳＤ大鼠各主要器官的分布以及糖尿病状态下的改变。结果肯定了ＲＡＧＥ基因的表达，并显示ＲＡＧＥｍＲＮＡ广泛存在于多个组织和器官内，糖尿病模型鼠中，许多组织的ＲＡＧＥｍＲＮＡ表达明显增强，提示ＡＧＥ与体内固有的ＲＡＧＥ的相互作用对介导糖尿病并发症和其他疾病的发展有潜在的相关性。     

鼠转化生长因子-β1基因的克隆及其在成骨细胞中的表达

目的 克隆鼠转化生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）基因并研究其在转染的成骨细胞中表达情况。方法 采用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）可从大鼠淋巴细胞中扩增出１．２ｋｂ特异性片段,经酶切鉴定证实为鼠ＴＧＦ－β１ ｃＤＮＡ。将此片段插入５．４Ｋｂ的ｐｃＤＮＡ表达载体,构建得到６．６Ｋｂ的ｐｃＤＮＡ－ＴＧＦ－β１重组质粒。应用脂质体介导的基因转移技术将ＴＧＦ－β１表达载体导入鼠成骨细胞,４８ｈ后用ＳＡＢ     

gp130在肾癌细胞系RCC-949中的表达缺陷

目的 探讨白细胞介素－６（ＩＬ－６）受体系统在肾癌细胞系ＲＣＣ－９４９中表达的意义。方法 应用免疫细胞化学方法检测肾癌细胞系ＲＣＣ－９４９中ＩＬ－６蛋白的表达,观察ｒｈＩＬ－６对ＲＣＣ－９４９生长的作用,用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测其ＩＬ－６、ＩＬ－６Ｒ和ｇｐ１３０ ｍＲＮＡ的表达。结果 肾癌细胞系ＲＣＣ－９４９可以在转录和翻译水平表达ＩＬ－６,但该细胞系的ｇｐ１３０ ｍＲＮＡ表达     

Alport综合征一家系中新的COL4A5基因突变

目的了解我国Ｘ伴性显性（ＸＤ）遗传Ａｌｐｏｒｔ综合征（ＡＳ）中ＣＯＬ４Ａ５基因突变特点。方法应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）－变性梯度凝胶电泳（ＤＧＧＥ）和直接测序的方法，对来自７个ＸＤ－ＡＳ家系１０个成员和１００个正常人外周血ＤＮＡ标本进行了ＣＯＬ４Ａ５基因４３号外显子的检测。结果在一个家系中发现４１４２Ｃ→Ｔ（Ｐｒｏ１３１４Ｓｅｒ）的转换突变，先证者与其弟、其母均发现有此异常。结论表明该突变为一遗传     

PCR—SSCP法检测大肠肿瘤APC基因MCR区段基因突变

目的：检测ＡＰＣ（ａｄｅｎｏｍａｔｏｕｓ ｐｏｌｙｐｏｓｉｓ ｃｏｌｉ）基因在国人大肠肿瘤中的突变情况，探讨ＡＰＣ基因突变与大肠肿瘤病理学特征的关系。同时探讨单链ＤＮＡ碱基构成与最适ＳＳＣＰ电泳温度的关系。方法：应用聚合酶链反应－单链构象多态（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）技术对６６例散发性大肠癌、１７例大肠腺瘤性息肉、４例家族性腺瘤性息肉病（ｆａｍｉｌｉａｌ ａｄｅｎｏｍａｔｏｕｓ ｐｏｌｙｐｏｓｉｓ，ＦＡＰ）ＡＰＣ基因第１５外显子ＭＣＲ区段的突变进行检测。结果：散发性大肠癌和尕瘤性息肉ＡＰＣ基因突变率分别为２１．２％（１４／６６）和２３．５％（４／１７），两者差异无显著性。散发性大肠癌ＡＰＣ基因突变与肿瘤的位置、浸润深度、组织类型、分化程度、分期以及淋巴结转移无关。ＭＣＲ区段中以密码子１３３７～１４５３区域突变率最高。