细胞凋亡与糖尿病肾病

糖尿病肾病 (ＤＮ)是糖尿病全身性微血管合并症之一 ,其早期改变为肾脏肥大、肾小球滤过率升高 ,肾小球及肾小管基底膜增厚 ,逐渐导致肾小球硬化 ,最终发生肾衰竭。其发病机理尚不十分清楚 ,目前研究证实细胞凋亡在其发生发展中起着重要作用。1　细胞凋亡的理化特征及相关基因细胞凋亡 (ａｐｏｐｔｏｓｉｓ)或细胞程序性死亡 (ｐｒｏ ｇｒａｍｍｅｄｃｅｌｌｄｅａｔｈ ,ＰＣＤ)是与细胞坏死截然不同的细胞死亡方式 ,是指在一定的生理或病理条件下 ,细胞遵循自身的规律 ,按步就班地走向死亡的过程。凋亡是维持细胞群体动态平衡的重要因素之…     

芪蛭降糖胶囊对糖尿病肾病大鼠肾组织血管内皮细胞生长因子及细胞外基质的影响

目的：观察芪蛭降糖胶囊对糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）大鼠肾组织血管内皮细胞生长因子（vascu-lar endothelial growth factor,VEGF）及细胞外基质（extracellular matrix,ECM）的影响。方法：清洁级6-7周龄雄性 Wister 大鼠48只,按体重随机取40只,采用切除右肾加腹腔注射链脲佐菌素（strephozotocin,STZ）的方法制备 DN 模型。模型成功后按照血糖高低排序,两头抽取随机分为模型组、缬沙坦对照组（简称对照组）、芪蛭降糖胶囊低剂量组、芪蛭降糖胶囊高剂量组,每组10只大鼠。另取8只正常大鼠行右肾假切除术,腹腔注射等量柠檬酸缓冲液作为假手术组。成模2 d 起各组给予相应浓度和剂量的药物灌胃,分别于4周、8周观察血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、血清胱抑素- C（Cystatin - C）、β2-微球蛋白（β2- MG）、24 h 尿蛋白定量（24 h TP）、尿微量白蛋白（mAlb）、尿微量白蛋白/尿肌酐（UmAlb/ Ucr）。8周后处死动物,肾组织行 HE 染色,光镜下观察肾组织病变,电镜下观察肾组织足细胞的变化。免疫组化检测 VEGF、基质金属蛋白酶9（MMP -9）、基质金属蛋白酶抑制因子-1（TIMP -1）、纤维黏连蛋白（FN）、Ⅳ型胶原蛋白（ColⅣ）的表达。结果：在各个时间点,模型组大鼠血 Scr、BUN、Cystatin - C、β2- MG,尿24 h TP、mAlb、UmAlb/ Ucr 均明显高于假手术组（P ﹤0．05）,对照组明显低于模型组（P ﹤0．05）,中药组显著低于对照组和模型组,且呈剂量依赖关系（P ﹤0．05-0．01）。与模型组和对照组相比,HE 染色显示芪蛭降糖胶囊能减轻 DN 大鼠肾组织及其血管病理损害。电镜观察显示,芪蛭降糖胶囊能明显减轻 DN 大鼠肾组织基底膜增厚、内皮细胞及系膜增生,减轻足细胞足突融合,且呈剂量依赖关系。免疫组化显示 VEGF、TIMP -1、FN、ColⅣ在模型组的表达较假手术组     

糖尿病肾病患者外周血单个核细胞中基质金属蛋白梅的表达

基质金属蛋白酶（ＭＭＰｓ）是一组锌依赖蛋白酶,它主要参与细胞外基质（ＥＣＭ）的降解、转运、组织重塑［１］。ＭＭＰ－９是ＭＭＰｓ家族中最大的成员,主要降解ＩＶ型胶原,在一定的病理条件下,对细胞的迁移、侵袭、活化及动脉硬化的形成、血管重塑等均起重要作用［２］。我们通过对糖尿病肾病患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）ＭＭＰ－９ ｍＲＮＡ表达的研究,探讨ＭＭＰ－９在糖尿病肾病发生、发展过程中的可能作用。 一、材料和方法 １研究对象：（１）正常对照组（ＮＣ）：１８例,男 １０例,女 ８例,年龄 ２５－ ６２岁,均为…     

糖尿病肾病的重要致病因子—转化生长因子β

糖尿病肾病(DN)是糖尿病最常见的并发症之一，细胞培养、动物实验、人体研究均证实转化生长因子β(TGF-β)是其重要的致病因子。糖尿病状态下，血糖水平、糖化终末产物含量、蛋白激酶C和局部肾素-血管紧张素系统活性的增高、血流动力学改变等因素均可上调系统和肾脏局部的TGF-β水平，TGF-β继而发挥其促使肾组织细胞肥大和细胞外基质积聚等效应。从而诱导DN的发生发展；阻断上述途径，降低TGF-β含量，以及利用TG-β反义RNA或中和抗体，抑制其活性。可防止、延缓甚至逆转DN的发生发展。因此，进一步深人了解TG-β在DN发病机制中的作用将有助于DN的防治。     

细胞外基质对肿瘤增殖和侵袭的影响

肿瘤的侵袭与转移已成为治疗恶性肿瘤的最大障碍。近年来研究表明细胞外基质（extra-cellula。matrix,ECM）的合成、分布及降解与恶性肿瘤的增殖、侵袭密切相关,本文就ECM与肿瘤的增殖、侵袭的相关性研究进展作一简单综述。     

糖尿病肾病治疗的重要途径-促进细胞外基质降解

在若干糖尿病肾病发病的可能发病机制中，ECM的积聚被认为是糖尿病肾小球硬化、肾功能衰竭的关键。以往的研究大多关注于阻断基质的生成，近年来关于基质降解的研究也逐渐出现。本文重点就基质降解以及一些相关因素展开讨论。     

细胞外基质在肝细胞性肝癌发生发展过程中的作用

肝细胞性肝癌(HCC)是我国常见的恶性肿瘤性疾病.近年来微环境对癌组织的影响受到重视,其中细胞外基质(ECM)作为HCC组织的重要微环境成分,在肿瘤发生发展过程中扮演着重要的角色,涉及肿瘤的生长、凋亡、耐药、侵袭、转移等.纤连蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)、透明质酸(HA)、胶原蛋白(COL)以及细胞外基质的硬度在H...     

细胞外基质代谢在腹主动脉瘤发病中的作用

腹主动脉瘤的形成是解剖学、遗传学、环境学和生物化学诸因素相互影响和共同作用的结果,其中动脉中膜细胞外基质代谢失衡起主要作用。基质金属蛋白酶活性增加及弹力蛋白和胶原的基因表达不平衡可能是原因。腹主动脉壁的自身免疫反应性炎症和平滑肌细胞凋亡可影响基质金属蛋白酶、弹力蛋白和胶原的合成。     

细胞外基质在移植肾慢性排斥反应中的作用

细胞外基质在移植肾慢性排斥反应中的作用郭颖，郭琳琅移植肾慢性排斥反应是由细胞免疫和体液免疫参与的复杂免疫反应过程，最终导致肾小球和血管硬化，引起移植肾功能严重损害。我们应用免疫组化方法和计算机图象分析系统，旨在通过对慢性排斥反应移植肾细胞外基质中Ⅳ型...     

尿转化生长因子-β1和细胞外基质在慢性肾小球肾病中的变化

目的：探讨尿中转化生长因子-β1（TGF-β1）和细胞外基质（ECM）在各种慢性肾小球肾病患者中的变化及其临床意义。方法：将105例慢性肾小球患者进行临床和病理分组,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）分别检测各组的尿TGF-β1水平,同时采用放射免疫分析法（RIA）检测尿中的各种ECM,所有检测值均用尿肌酐（Cr）浓度进行校正。结果：在不同临床分组中,尿TGF-β1/Cr和LN/Cr、PCⅢ/Cr、Ⅳ-C/Cr水平明显高于对照组（P〈0.05）,尿HA/Cr水平则在Ⅲ、Ⅳ组中出现下降。而在不同的病理分组中,肾小球轻微病变（GML）组尿中TGF-β1、ECM与对照组比较无统计学意义,其他各病理分组则出现不同的变化。相关性分析尿TGF-β1/Cr与LN/Cr、PCⅢ/Cr、Ⅳ-C/Cr正相关,与HA/Cr无相关性。结论：通过尿TGF-β1和ECM在慢性肾小球肾病患者中的联合检测,对评价慢性肾小球肾病的进展和预后判断提供一定的临床价值。     

氧化应激在糖尿病肾病发病中的作用(下)

2.3.2 ROS与细胞外基质降解系统 DM状态下ROS也参与了对细胞外基质降解系统的调节.细胞外基质降解系统包括两个:即纤溶酶原激活剂(PA)/纤溶酶(原)抑制剂(PAI)系统和基质金属蛋白酶(MMP)/MMP组织抑制剂系统.Lee等[32]发现高糖上调了系膜细胞内PAI-1的表达,而下调了PA的表达,从而导致系膜细胞降解细胞外基质的能力降低,并且高糖的这种作用是以ROS为第二信使的.     

糖尿病肾病的重要致病因子-转化生长因子β

糖尿病肾病(DN)是糖尿病最常见的并发症之一,细胞培养、动物实验、人体研究均证实转化生长因子β(TGF-β)是其重要的致病因子.糖尿病状态下,血糖水平、糖化终末产物含量、蛋白激酶C和局部肾素-血管紧张素系统活性的增高、血流动力学改变等因素均可上调系统和肾脏局部的TGF-β水平,TGF-β继而发挥其促使肾组织细胞肥大和细胞外基质积聚等效应,从而诱导DN的发生发展;阻断上述途径,降低TGF-β含量,以及利用TGF-β反义RNA或中和抗体,抑制其活性,可防止、延缓甚至逆转DN的发生发展.因此,进一步深入了解TGF-β在DN发病机制中的作用将有助于DN的防治.     

血管紧张素Ⅱ1A型受体基因对糖尿病嵌合体小鼠肾脏细胞外基质重塑的影响

目的 探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）IA型（AT1A）受体基因对糖尿病嵌合体（chimeric）小鼠肾脏细胞外基质的影响。方法 嵌合体小鼠全身组织包括肾脏由AngⅡ1A型受体（ATl．）野生型细胞（ATl^＋／＋）和AngⅡ受体AT1A基因敲除细胞（AT1A-／-）两组不同克隆来源的细胞组成。在AT1A嵌合体小鼠腹腔内注射链尿佐菌素（STZ，300mg／kg），诱导糖尿病模型12周后，取肾脏组织作连续冰冻切片。β半乳糖苷酶（LacZ）染色区分不同基因型的肾小球。PAS染色检测其细胞外基质的表达。免疫组化方法检测转化生长因子（TGF）β1、纤溶酶原激活物抑制物（PAI）1、终末糖基化产物（AGE）、硝基酪氨酸（nitrotyrosine）的表达。比较两种基因型肾小球细胞外基质和各细胞因子的表达变化。结果 在糖尿病状态下，AT1A＋／＋和AT1A-／-小鼠肾小球细胞外基质均较对照组明显增多（P〈0．05）。两种基因型相比，AT1A-／-基因型肾小球的表达绝对值显著高于AT1A＋／＋基因型肾小球（P〈0．05）。但从正常状态到糖尿病形成过程中，其升高幅度却显著低于AT1A＋／＋基因型肾小球（P〈0．01）。各种细胞因子在糖尿病状态下的表达均显著增加（P〈0．05），AT1A-／-基因型肾小球的绝对数值显著高于AT1A＋／＋基因型肾小球（P〈0．05），但AT1A-／-基因型肾小球细胞因子表达的变化幅度低于AT1A＋／＋基因型肾小球（P〈0．01）。结论 AT1A基因缺失使得部分肾小球代偿性上调TGF-β1、PAI-1、AGE和nitrotyrosine的表达。AT1A受体在一定程度上影响了TGF-β1、PAI-1、AGE和nitrotyrosine的表达而参与了糖尿病小鼠肾脏细胞外基质的重塑，但并非独立决定因素。     

基质金属蛋白酶在糖尿病肾病作用中的研究

目的 探讨2型糖尿病及糖尿病肾病患者血清基质金属蛋白酶水平的变化及其相关影响因素.方法 选取2型糖尿病患者94例,其中2型糖尿病无蛋白尿组患者37例;微量蛋白尿组(尿白蛋白/肌酐为30 ～ 300 mg/g)27例;显著蛋白尿组患者(尿白蛋白/肌酐＞300mg/g)30例.健康体检者32名作为对照组.所有检测对象于清晨空腹抽肘静脉血,应用酶联免疫吸附法测定血清基质金属蛋白酶2及血浆纤溶酶原激活物抑制物1.结果 (1)微量蛋白尿组患者血清基质金属蛋白酶2水平为(4.3±4.1)μg/L,显著蛋白尿组患者为(4.6±4.1)μg/L,与正常对照组[2.8±0.4)μg/L]比较差异有统计学意义(P＜0.05);(2)微量蛋白尿组患者血浆纤溶酶原激活物抑制物1水平为(69±19)μg/L,显著蛋白尿组患者为(69±18)μg/L,与正常对照组[(52±30)μg/L]比较差异有统计学意义(P＜0.05);(3)相关分析结果表明,血清基质金属蛋白酶2与血浆纤溶酶原激活物抑制物1水平无相关(r =0.077,P=0.468);(4)在2型糖尿病患者中血清基质金属蛋白酶2水平与尿素氮、肌酐水平相关(r分别为0.370及0.468,P分别为0.00、0.000),血浆纤溶酶原激活物抑制物1水平与空腹血糖、甘油三酯、高密度脂蛋白、尿酸呈正相关(r分别为0.196、0.342、-0.167、0.203,P分别为0.004、0.000、0.016、0.003).结论 2型糖尿病合并蛋白尿患者血清基质金属蛋白酶2及血浆纤溶酶原激活物抑制物1水平升高,是2型糖尿病患者合并肾病的危险因素.     

羧甲基壳聚糖对体外培养大鼠椎间盘髓核细胞增殖、细胞周期及细胞外基质分泌的影响

目的 观察羧甲基壳聚糖(CMCS)对体外培养大鼠椎间盘髓核细胞细胞周期进程、细胞周期蛋白表达及分泌细胞外基质的影响.方法 使用酶消化法提取大鼠椎间盘髓核细胞并进行体外培养,Ⅱ型胶原免疫组织化学鉴定髓核细胞.将髓核细胞分为:对照组、不同浓度CMCS处理组(100、200、500 mg/L),作用24 h后通过碘化丙锭(PI)染色流式细胞技术检测细胞周期进程.通过荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)及Western blot法检测不同浓度(100、200、500 mg/L) CMCS对髓核细胞内增殖相关蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)及细胞周期蛋白(Cyclin)D表达的影响,并通过FQ-PCR法检测不同浓度(100、200、500 mg/L) CMCS对髓核细胞分泌细胞外基质Ⅱ型胶原的影响.结果 培养的细胞经Ⅱ型胶原免疫组织化学染色鉴定显示其表达阳性,表明为髓核细胞;通过FQ-PCR及Western blot检测增殖相关蛋白PCNA可见通过100、200、500 mg/L CMCS作用后髓核细胞表达PCNA与对照组比较分别增加12.3％、18.2％、54.2％与25.1％、52.7％、66.9％ (P ＜0.05);经流式细胞仪检测发现经100、200、500 mg/L CMCS处理的髓核细胞处于S期细胞比例是对照组的1.58、2.34与2.61倍(P＜0.05);Cyclin D表达分别是对照组的1.26、2.15、2.64倍与1.53、1.69、1.83倍(P ＜0.05);FQ-PCR及Western blot检测结果表明100、200、500 mg/L CMCS分别促进髓核细胞分泌Ⅱ型胶原表达是对照组的1.67、2.24、2.79倍与1.48、1.65、1.77倍(P＜0.05).结论 CMCS对体外培养髓核细胞增殖相关蛋白PCNA表达具有促进作用,可促进细胞周期进程及细胞周期蛋白表达,对髓核细胞分泌细胞外基质具有促进作用.     

NG2蛋白多糖促进肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质积聚

目的 探讨NG2蛋白多糖参与肾小球硬化过程的可能机制。 方法 构建针对NG2的特异性shRNA（Psilencer-NG2）和对照shRNA（Psilencer-NC）。将Psilencer-NG2、Psilencer-NC和全长型NG2真核表达载体pcDNA/NG2以及空质粒pcDNAⅠ分别转染到体外培养的大鼠系膜细胞（RMC）。实时定量PCR和Western印迹检测转染质粒对NG2 的干扰效率和过表达效率;MTT法观察各组细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞周期变化;实时定量PCR检测各组层粘连蛋白（laminin）的表达。 结果 转染pcDNA/NG2后的HBZY-1细胞NG2 mRNA和蛋白表达水平均明显增加（P < 0.05,P < 0.05）,而针对NG2的特异性shRNA干扰导致HBZY-1细胞NG2 mRNA和蛋白表达水平均显著下调（P < 0.01;P < 0.01）,分别表明达到过表达和沉默NG2的效应。过表达NG2后,RMC中laminin β1表达显著增加（1.25±0.04比 1.00±0.09,P < 0.05）;RMC增殖明显,处于S期的细胞数明显增加,而G0/G1期的细胞数减少。而沉默NG2后,laminin β1表达显著减少（0.81±0.02比1.00±0.08,P < 0.05）;RMC增殖缓慢,处于G0/G1期的细胞数明显增加,而S期的细胞数减少。 结论 NG2蛋白多糖可能通过促进系膜细胞增殖和细胞外基质积聚参与肾小球硬化的过程。     

洛伐他汀对多囊肾病肾间质成纤维细胞增殖及细胞外基质表达的影响

目的:探讨洛伐他汀对体外培养的常染色体显性遗传多囊肾病(ADPKD)肾间质成纤维细胞增殖及细胞外基质表达的影响.方法:用不同浓度的洛伐他汀和香叶基香叶基焦磷酸(GGPP)处理培养的ADPKD肾间质成纤维细胞,24 h或48 h后,用MTT法检测细胞增殖,用放免法检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型前胶原和Ⅳ型胶原.结果:与对照组比较,洛伐他汀抑制ADPKD肾间质成纤维细胞增殖(P<0.05);使细胞Ⅰ型、Ⅳ型胶原的表达水平减少(P<0.05),Ⅲ型前胶原分泌无变化;其作用效果呈浓度依赖性.GGPP能明显逆转洛伐他汀的上述作用.结论:洛伐他汀可能通过抑制GGPP的合成,进而抑制某些参与细胞增殖及细胞周期调控蛋白质的异戊二烯化而达到抑制细胞增殖和细胞外基质表达的作用,从而延缓多囊肾病的发生与发展.     

糖尿病肾病的中医研究进展

糖尿病肾病 (ＤＮ)是糖尿病临床常见的微血管合并症之一 ,国内报道约 30 %的 1型糖尿病与2 0 %的 2型糖尿病最终发展为糖尿病肾病。一旦进入大量蛋白尿期临床治疗极为棘手 ,常在数年后发展为肾衰竭 ,ＤＭ 1 0年～ 1 9年后死于糖尿病肾病肾衰竭者占 5 3%。通过对近年来中医药治疗ＤＮ状况的总结 ,治疗ＤＮ使用最多的药物依次为黄芪、丹参、太子参、茯苓、泽泻、益母草、生地、赤芍、山药、枸杞、葛根、白术、山萸肉、猪苓、川芎。本病的早期仅以尿微量白蛋白增多为主要线索 ,此阶段治疗极为重要 ,中西药应用可取得较好疗效。在改善患者临床症…     

微量元素与细胞外基质

目的 论述微量元素对细胞外基质代谢的影响,探讨创伤愈合的生理和相关病理机制。方法 以基础研究结合相关临床资料,分析微量元素与细胞外基质代谢的关系。探讨创伤修复机制。结果 在创伤愈合过程中,微量元素通过参与酶的构成与激活、构成体内重要的载体及蛋白质成份、参与激素和维生素的合成以及调控自由基水平等功能,广泛参与到胶原蛋白和其它细胞外基质的合成、分解、沉积与重建过程中。结论 微量元素对细胞外基质的代谢起着一定的调控作用,在创伤愈合过程中发挥着重要作用。