BDNF对脊神经根结扎大鼠脊髓背角星形胶质细胞活化的影响

目的观测脊神经根结扎(SNL)大鼠脊髓背角中脑源性神经营养因子(BDNF)与星形胶质细胞活化标记蛋白胶质细胞纤丝酸性蛋白(GFAP)表达的变化,以及BDNF清除剂TrkB/Fc对GFAP表达和疼痛的影响。方法取18只SD大鼠,随机分为空白对照组、假手术组和SNL组(n=6)。分别于术前、术后第1～6天测定大鼠50%机械缩爪阈值(50%PWT),末次测定后取腰膨大处脊髓背角经Western blotting检测GFAP和BDNF的表达。另取18只SD大鼠,随机分为对照组、SNL+安慰剂组和SNL+TrkB/Fc组(n=6),其中对照组仅行鞘内置管术;SNL+安慰剂组和SNL+TrkB/Fc组分别在行SNL术前,予鞘内注入PBS或TrkB/Fc 10μL,术后1次/d×6 d,每次注药前1 h测定50%PWT,末次给药后1 h取大鼠腰膨大处脊髓背角经Western blotting检测GFAP的表达。结果术后第1～6天,SNL组手术同侧后肢50%PWT均较术前基础值显著下降(P<0.01);术后第6天,SNL组手术同侧脊髓背角BDNF和GFAP表达均较空白对照组显著升高(P<0.01);SNL+TrkB/Fc组大鼠手术同侧50%PWT与基础值比较无明显变化(P>0.05),手术同侧脊髓背角GFAP表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 BDNF活化的脊髓星形胶质细胞对SNL诱发的神经病理性疼痛具有调控作用。     

大鼠鞘内阿米洛利及混合可乐定对神经病理性疼痛的作用

 【目的】 探讨大鼠鞘内阿米洛利及混合可乐定对神经病理性疼痛的治疗效能?【方法】 102只SD大鼠,体质量(250～300 g),随机分成17组(n=6):对照组?阿米洛利组?可乐定组?混合药物组?拮抗组等?鞘内置管后7 d制作大鼠神经病理性疼痛模型(SNL模型)?建立疼痛模型前(基础值)?建立疼痛模型后1,3,5,7 d及鞘内给药后测定大鼠机械性缩足反应阈值?计算各药物的半数有效剂量(ED50)及95%的可信区间?使用Isobolographic评价药物的相互作用?【结果】 鞘内单独注射阿米洛利(12.5 ～ 100 μg)或可乐定(0.5 ～ 10 μg)可产生时间?剂量依赖性的抗神经病理性疼痛的作用(P < 0.05);鞘内阿米洛利和可乐定混合,可以产生明显的协同效应;鞘内育亨宾(20 μg)预处理可以拮抗鞘内阿米洛利?可乐定及阿米洛利混合可乐定的抗神经病理性疼痛的作用(P < 0.05)?【结论】 鞘内单独注射阿米洛利?可乐定可以产生明显的时间?剂量依赖性的抗神经病理性疼痛的作用;鞘内注射阿米洛利可以增强可乐定的抗神经病理性疼痛的作用?     

米诺环素和TrkB/Fc对神经病理性疼痛发生期大鼠脊髓背角脑源性神经营养因子表达的影响

目的 观察鞘内注射小胶质细胞抑制剂米诺环素、脑源性神经营养因子(BDNF)拮抗剂TrkB/Fc对大鼠神经病理性疼痛发生期脊髓背角BDNF表达的影响,探讨BDNF在神经病理性疼痛发生中的作用机制.方法 成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠42只,行鞘内置管,建立L5神经根结扎(SNL)致神经病理性疼痛模型,仅切开皮肤及皮下组织暴露L5神经根者为假手术.根据手术类型及注射药物的不同分为7组,每组6只:I组,对照基础值组,鞘内置管成功大鼠,不用任何药物;Ⅱ组,鞘内注射1 g/L TrkB/Fc 10μL+SNL组,观察TrkB/Fc对SNL大鼠的作用;Ⅲ组,鞘内注射l g/L TrkB/Fc 10μL+假手术组,观察TrkB/Fc对假手术大鼠的作用;Ⅳ组,鞘内注射磷酸盐缓冲液(PBS)10μL+SNL组,使用溶剂PBS作为对照组,观察溶剂对SNL大鼠的作用;V组,鞘内注射PBS 10 rμL+假手术组,观察溶剂对假手术大鼠的作用;Ⅵ组,鞘内注射8 g/L米诺环素10μL+SNL组,观察米诺环素对SNL大鼠的作用;Ⅶ组,鞘内注射8 g/L米诺环素10 pL+假手术组,观察米诺环素对假手术大鼠的作用.分别于术前1 h、末次给药前1 h用von Frey纤维丝以up-down法测大鼠的50%机械缩爪阈值(50%PWT).末次给药后3 h取手术侧腰膨大段脊髓背角,采用Western印迹法测定BDNF.结果 末次给药前1 h,Ⅳ组的50%PWT较术前1 h明显降低(P＜0.01),其余各组的差异均无统计学意义(P值均＞0.05).末次给药后3 h,Ⅳ组术侧脊髓背角BDNF的表达显著高于其余各组(P值均＜0.01),而其余各组间的差异均无统计学意义(P值均＞0.05).结论 小胶质细胞抑制剂米诺环素、BDNF拮抗剂TrkB/Fc均能有效抑制神经病理性疼痛大鼠痛觉过敏的发生,疼痛发生期脊髓背角BDNF的表达增高可能与小胶质细胞的活化相关.     

大鼠鞘内阿米洛利及混合可乐定对神经病理性疼痛的作用

【目的】探讨大鼠鞘内阿米洛利及混合可乐定对神经病理性疼痛的治疗效能。【方法】102只SD大鼠，体质量（250—300g），随机分成17组（n=6）：对照组、阿米洛利组、可乐定组、混合药物组、拮抗组等。鞘内置管后7d制作大鼠神经病理性疼痛模型（SNL模型）。建立疼痛模型前（基础值）、建立疼痛模型后1，3，5，7d及鞘内给药后测定大鼠机械性缩足反应阈值。计算各药物的半数有效剂量（ED50）及95％的可信区间。使用Isobolographic评价药物的相互作用。【结果】鞘内单独注射阿米洛利（12．5～100μg）或可乐定（0．5～10μg）可产生时间、剂量依赖性的抗神经病理性疼痛的作用（P〈0．05）；鞘内阿米洛利和可乐定混合，可以产生明显的协同效应；鞘内育亨宾（20μg）预处理可以拮抗鞘内阿米洛利、可乐定及阿米洛利混合可乐定的抗神经病理性疼痛的作用（P〈0．05）。【结论】鞘内单独注射阿米洛利、可乐定可以产生明显的时间、剂量依赖性的抗神经病理性疼痛的作用：鞘内注射阿米洛利可以增强可乐定的抗神经病理性疼痛的作用。     

鞘内七叶皂苷钠和可乐定治疗神经病理性疼痛

目的 观察大鼠鞘内分别注射七叶皂甘钠和可乐定抗神经病理性疼痛作用及两者混合使用的作用效果,探讨其可能的作用机制.方法 健康雄性SD大鼠,体质量250～300g,鞘内留置PE-10导管,置管1周后制作大鼠脊神经结扎神经病理性疼痛(SNL)模型.将96只SNL大鼠随机分成16组(n=6):对照组、七叶皂苷钠组、可乐定组、复合组、拮抗组.测定各组鞘内给药前、给药后5、10、20、30、40、50、60min各时点的大鼠机械撤足阈值,计算对应时点的最大效应百分比(MPE),评价抗神经病理性疼痛效果.用回归方法计算药物的半数有效剂量(ED50)及95%的可信区间(C1),使用Isobologram评价药物之间的相互作用.结果 七叶皂苷钠组和可乐定组MPE随实验药物剂量的增加而增大,七叶皂苷钠20、40μg组,可乐定2、5、10 μg组,1/4、1/2(七叶皂苷钠ED50+可乐定ED50)组MPE均明显高于生理盐水组(P<0.05).七叶皂苷钠和可乐定混合产生了明显的协同效应.育亨宾(20μg)预处理拮抗可乐定(10μg)的作用(P<0.01),减弱1/2(七叶皂苷钠ED50+可乐定ED50)的作用(P<0.05).结论 大鼠鞘内单独注射七叶皂昔钠或可乐定可产生剂量依赖性抗SNL作用:鞘内七叶皂苷钠混合可乐定可产生协同效应的抗SNL作用,其作用可能与两药共同作用于α2受体和Ca2+通道有关.     

大鼠脊髓小胶质细胞细胞外信号调节蛋白激酶5/核因子κB信号通路在神经病理性疼痛中的作用

目的探讨脊髓细胞外信号调节蛋白激酶5(ERK5)信号通路在炎性痛中的作用。方法 24只Sprague-Dawley大鼠随机分入两组,脊神经结扎(SNL)组大鼠行L5SNL建立神经病理性疼痛模型,假手术(Sham)组大鼠仅暴露脊神经不结扎,观察两组大鼠脊髓磷酸化ERK5(p-ERK5)的表达情况。另取大鼠随机分别鞘内注射ERK5反义寡核苷酸(AS组)、ERK5错义寡核苷酸(MM组)和0.9%氯化钠溶液(NS组),观察对SNL术后大鼠机械缩足反射阈值(PWMT)、热缩足反射潜伏期(PWTL)及核因子κB(NF-κB)的影响。结果术后1、3d,SNL组的p-ERK5阳性细胞数量均显著高于术前(P值均<0.05),Sham组的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。术前AS组、MM组、NS组间大鼠脊髓NF-κB含量、PWTL、PWMT的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。SNL术后1dAS组大鼠脊髓NF-κB含量显著低于NS组、MM组(P值均<0.05),但3组均显著高于同组术前(P值均<0.05)。SNL术后1、3d3组的PWTL和PWMT均显著低于同组术前(P值均<0.05),AS组均显著高于MM组同时间点(P值均<0.05)。结论脊髓小胶质细胞ERK5参与了神经病理性疼痛的信号转导过程,其部分作用是通过激活转录因子NF-κB实现的。     

米诺环素、氟代柠檬酸和B型酪氨酸激酶受体/Fc对维持期神经病理性疼痛大鼠脊髓背角脑源性神经营养因子表达的影响

目的:研究鞘内注射小胶质细胞抑制剂米诺环素、星形胶质细胞抑制剂氟代柠檬酸及脑源性神经营养因子(BDNF)清除剂B型酪氨酸激酶受体(TrkB)/Fc对神经病理性疼痛维持期大鼠的脊髓背角BDNF表达的影响,探讨BDNF在神经病理性疼痛维持期中的作用.方法:取36只成功鞘内置管大鼠,随机分为6组,每组6只:Ⅰ组为对照组,未行神经根结扎(SNL)术,未给药;Ⅱ组为SNL组;Ⅲ组为SNL+磷酸盐缓冲液组;Ⅳ组为SNL+米诺环素组,Ⅴ组为SNL+氟代柠檬酸组;Ⅵ组为SNL+TrkB/ Fc组.各组均于SNL术后7d鞘内给药,每日1次,连续5d.分别于SNL术前1h、首次给药前1h及末次给药前1h测定大鼠的50%机械缩爪阈值(50%PWT),并于末次给药后3h采用Western印迹法测定手术同侧脊髓背角的BDNF表达水平.结果:除Ⅰ组外,其他各组大鼠在SNL术后第7天的50%PWT均较术前1h显著降低(P值均<0.01).连续用药5d后,Ⅴ、Ⅵ组的50%PWT均较术后第7天显著升高(P值均<0.01),Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组维持期给药后脊髓背角BDNF表达水平显著高于Ⅰ组(P值均<0.01),Ⅴ、Ⅵ组显著低于Ⅱ组(P值均<0.01),结论:星形胶质细胞抑制剂氟代柠檬酸能显著抑制神经病理性疼痛维持期大鼠脊髓背角BDNF的过表达,进而缓解神经病理性疼痛,而小胶质细胞抑制剂米诺环素对维持期神经病理性疼痛大鼠的作用甚小.BDNF对神经病理性疼痛大鼠机械痛觉过敏的维持起重要作用,其机制可能与星形胶质细胞的活化有关.     

神经病理性疼痛大鼠脊髓中N-甲基-D-天门冬氨酸受体1亚基与γ-氨基丁酸B受体2亚基表达的变化

目的 通过半定量检测L5神经根结扎(SNL)大鼠脊髓N-甲基-D-天门冬氨酸受体1亚基(NMDAR1)与γ-氨基丁酸B受体2亚基(GABABRz)表达的变化,探讨NMDAR1与GABABR2在神经病理性疼痛发生机制中的作用.方法 结扎L5神经根建立大鼠神经病理性疼痛模型.24只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组和SNL组.分别于术前及术后不同时间点采用yon Frey纤毛测定两组大鼠的机械刺激缩足阈值(PwT值),并在阈值最低点取脊髓腰膨大部,采用Western印记法半定量检测NMDAR,与GABABR2的表达.结果 与假手术组比较,SNL组在术后各时间点的PwT值均显著下降(P值分别<0.01、0.05),并在术后8 d降至最低点.术后8 d,假手术组术侧与健侧脊髓NMDAR1和GABABR2蛋白表达的差异均无统计学意义(P值均>0.05);SNL组术侧NMDAR1的表达较健侧及假手术组术侧均显著增高(P值均<0.01),而GABABRz的表达则较健侧及假手术组术侧显著下降(P值均<0.01).结论 SNL 诱导大鼠机械痛敏行为的发生,SNL大鼠脊髓中NMDAR1与GABABR:表达的变化可能与神经病理性疼痛的形成有关.     

鞘内注射盐酸奈福泮和可乐定对福尔马林致痛大鼠的镇痛作用研究

目的：观察鞘内注射奈福泮及可乐定对福尔马林致痛大鼠的镇痛效应及对脊髓背角c—fos表达的影响。方法：选择鞘内成功置管的雄性SD大鼠32只,随机分为4组（n=8）：对照组（S）鞘内注射生理盐水20μL,奈福泮（Nfp）组鞘内注射20μg奈福泮,可乐定（c）组鞘内注射20μg可乐定,奈福泮和可乐定联合用药（Nfp＋C）组鞘内注射奈福泮10μg和可乐定10μg。在大鼠足底部注射5％福尔马林后立即记录1h内每5rain的缩腿、舔爪时间。足底注射福尔马林后2h将所有动物处死取脊髓膨大处,采用免疫组织化学方法观察脊髓背角c-fos的表达。结果：各组大鼠第二相缩腿、舔爪累计时间进行比较,联合注射组的缩腿、舔爪累计时间显著短于其他组（P〈0．01）;联合注射组大鼠的脊髓背角FLI—N（c—fos免疫阳性反应神经元）数目明显低于单独用药组（P〈0．01）。结论：奈福泮与可乐定鞘内联合应用可能具有协同镇痛作用。     

低频电针对SNL大鼠早期神经痛DRG p-TRPV1、CGRP的抑制作用

[目的]探讨低频电针干预早期神经痛对背根神经节（dorsal root ganglion,DRG）辣椒素受体（Transient receptor potential vanilloid type 1,TRPV1）磷酸化与痛敏相关神经肽降钙素基因相关肽（calcitonin gene-related peptide,CGRP）与P物质（substance P,SP）的抑制作用。[方法]SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组与电针组,每组8只。模型组采用脊神经结扎（spinal nerve ligation,SNL）的方法制作大鼠神经痛模型。电针组采用2 Hz电针治疗,选取患侧＂足三里＂、＂昆仑＂穴,连续3d。检测D1、D3大鼠术侧后足缩腿阈（Paw withdrawal threshold,PWT）,D3 L5 DRG p-TRPV1、CGRP、SP水平。[结果]SNL模型大鼠早期即出现自发性疼痛,PWT显著下降（P〈0.001）,L5 DRG p-TRPV1水平升高（P〈0.001）,CGRP水平升高（P〈0.05）,SP水平下降（P〈0.05）。SNL假手术组大鼠PWT没有显著变化。2 Hz电针能提高SNL模型大鼠的PWT（P〈0.001）,降低L5 DRG p-TRPV1水平（P〈0.05）与CGRP水平（P〈0.01）,对SP水平没有显著影响。[结论]早期神经痛与DRG p-TRPV1、CGRP水平升高有关。低频电针能下调DRG p-TRPV1与CGRP水平,改善早期神经痛。     

鞘内注射舒芬太尼和PKC抑制剂对神经病理痛大鼠痛阈及脊髓背角N-甲基-D-天冬氨受体和降钙素基因相关肽表达的影响

目的:观察鞘内注射舒芬太尼和PKC抑制剂对神经病理痛大鼠痛阈及脊髓背角N-甲基-D-天冬氨受体(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR)、降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)表达的影响。方法:将54只健康雄性SD大鼠随机分为6组(n=9):舒芬太尼组[S+保留神经损伤(spared nerve injury model,SNI)组]、舒芬太尼+PKC抑制剂组(SP+SNI组)和PKC抑制剂组(P+SNI组)在SNI模型制作后14 d内每天分别鞘内注射舒芬太尼1μg、舒芬太尼1μg+PKC抑制剂11μg、PKC抑制剂11μg,注射药物容量均为20μL。对照组(C组)、假手术组(S组)和神经病理痛模型组(SNI组)则在上述相同时间点分别注入0.9%的生理盐水20μL。在模型制作前1 d和模型制作后14 d内,对各组大鼠进行疼痛行为学观察,并用免疫组织化学法观察各组大鼠L5节段水平脊髓背角NMDAR和CGRP的表达。结果:与C组和S组比较,SNI组在SNI术后均出现机械刺激痛阈降低(P<0.01),且脊髓背角NMDAR和CGRP免疫阳性产物数量和表达增加(P<0.01)。与SNI组比较,S+SNI组、P+SNI组和SP+SNI组注药后机械刺激痛阈提高(P<0.01),脊髓背角NMDAR和CGRP免疫阳性产物表达降低(P<0.05或0.01),且3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:鞘内注射舒芬太尼和PKC抑制剂对神经病理痛大鼠具有明显的抗伤害效应,同时可显著抑制大鼠脊髓背角NMDAR和CGRP表达。     

代谢型谷氨酸受体4通过Rab5抑制神经病理性痛

目的探讨代谢型谷氨酸受体4（mGluR4）激活后抑制神经病理性痛的机制。方法首先取24只SD大鼠,鞘内置管后随机分为空白对照组（n=6）、假手术组（n=6）和脊神经根结扎（SNL）组（n=12）。空白对照组只行鞘内置管术,其余大鼠均于术前和术后第1～6日测量50％机械缩足阈值（50％PWT）;其次,将SNL组大鼠于术后第7日起,随机分为SNL＋生理盐水组（n=6）和SNL＋VU0155041组（n=6）,分别予以鞘内注射生理盐水和VU0155041（500nm01）10μL,2次／d×7d,注药前和注药后30min测量其50％PWT。最后,末次给药后1h取空白对照组、SNL＋生理盐水组和SNL＋VU0155041组大鼠左侧脊髓腰膨大处送检基因芯片并利用Western blotting检测mGluR4及Rab5各亚型的表达变化。结果SNL大鼠术后1～6d其手术同侧后肢50％PwT较空白对照组及假手术组明显降低（P〈0．01）;SNL＋VU0155041组大鼠手术同侧后肢50％PwT与SNL＋生理盐水组相比自给药第4日起逐渐升高（P〈0．01）;Agilent表达谱基因芯片结果显示：SNL＋生理盐水组的Rab5含量高于空白对照组,而空白对照组和SNL＋VU0t55041组相比无明显差异;Western blotting结果显示：SNL＋生理盐水组的mGluR4表达明显低于空白对照组和SNL＋VU0155041组（P〈0．05）,而Rab5A和Rab5C的表达明显高于空白对照组和SNL＋VU0155041组（P〈0．05）,Rab5B在3组中的表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论mGluR4激活后可能是通过Rab5A和Rab5C调控突触囊泡递质释放从而影响神经病理性痛。     

坐骨神经周围注射可乐定对CCI大鼠痛域的影响

目的 观察损伤坐骨神经周围注射可乐定对慢性坐骨神经结扎模型(chronic constriction injury ,CCI)大鼠痛域影响,探讨α2-肾上腺素受体激动剂是否对已经形成的神经病理性疼痛疼痛产生作用。方法 雄性SD大鼠32只,随机分为4组,每组8只。分别为:Sham组：只分离皮肤、肌肉,不结扎坐骨神经; Sal组：形成CCI后注射生理盐水组; Clo组：形成CCI后注射可乐定组; Clo+Yo组：形成CCI后注射可乐定和育亨宾组。采用热辐射法和von Frey细丝法分别测定大鼠热刺激缩足反射潜伏期(thermal withdrawal latency ,TWL)和机械刺激缩足反射痛阈值(mechanical withdrawal threshold ,MWT)。结果 CCI大鼠在术后从7 d开始表现出明显的热痛敏和机械痛敏,损伤坐骨神经周围注射可乐定能明显减轻热痛敏和机械痛敏（р<0.01）。结论 外周神经周围注射α2－肾上腺素受体激动剂可以减轻已经形成的神经病理性疼痛痛域,α2－肾上腺素受体可能参与神经病理性疼痛的发展和转归。 【关键词】 可乐定 外周注射 CCI大鼠 神经病理性疼痛 热痛敏 机械痛敏     

鞘内注射p38 MAPK抑制剂对神经病理性疼痛大鼠脊髓背角脑源性神经营养因子表达的影响

目的 观察鞘内注射p38 MAPK抑制剂SB203580对坐骨神经压缩性损伤(CCI)神经病理性疼痛大鼠的镇痛效果及脊髓背角p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、脑源性神经营养因子(BDNF)的表达,探讨大鼠神经病理性疼痛可能的发生机制。 方法 30只SD雄性大鼠随机分为3组(n=10):假手术组、对照组(CCI组)、SB203580组(CCI术前30 min及术后第1~3天鞘内注射SB203580,剂量为0.1 ml/kg)。于CCI术前2 h以及术后第4~14天测定大鼠右足机械痛阈值;术后第14天取损伤侧腰段脊髓,采用免疫组化方法观察脊髓背角p38 MAPK及BDNF的表达。结果 与术前相比,假手术组术后机械痛阈值差异无统计学意义,对照组、SB203580组在CCI术后机械痛阈值明显降低(P<0.05);与假手术组相比,CCI术后,对照组、SB203580组机械痛阈值明显降低(P<0.05);与对照组相比,CCI术后第4~14天SB203580组机械痛阈值明显升高(P<0.05)。与假手术组相比,对照组、SB203580组脊髓背角p38 MAPK表达及BDNF释放明显增加(P<0.05);与对照组相比,SB203580组损伤侧脊髓背角p38 MAPK表达及BDNF释放明显降低(P<0.05)。结论 鞘内注射p38 MAPK抑制剂可能通过降低损伤侧脊髓背角p38 MAPK表达,抑制BDNF释放,从而缓解CCI大鼠慢性神经病理性疼痛。     

γ-氨基丁酸及其受体在慢性神经病理痛大鼠背根神经节中的表达及意义

目的:探讨大鼠脊髓背根神经节(DRG)γ-氨基丁酸(GABA)及其受体在慢性神经病理痛中的表达及意义。方法:20只SD大鼠行L5脊神经结扎(SNL)制备慢性神经病理疼痛模型,SABC法检测脊髓背根神经节GABA及其受体GABAAα1的表达,另取10只行假手术对照。结果:SNL组背根神经节大中神经元GABA及受体GABAA表达水平均明显下降(P<0.05)。结论:神经痛发生可能与DRG上GABA能神经元减少、GABAA受体表达下调致GABA能传递减弱有关。     

CX3CR1参与NF-κB在脊髓水平调控大鼠炎性痛的研究

目的：观察鞘内注射核因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC) 对单关节炎（monoarthritis,MA）模型大鼠痛阈值和脊髓中CX3C趋化因子受体-1（CX3C chemokine receptor 1,CX3CR1)表达的影响。方法：48只成年雄性Sprague-Dawley大鼠鞘内置管成功后,随机分为4组,即sham组（假手术组）、MA组（单关节炎组）、PDTC预处理组及PDTC后处理组,每组大鼠均为12只。鞘内置管5 d后制作MA模型。Sham组：左侧踝关节腔内注射50 μL生理盐水,鞘内注射10 μL生理盐水;MA组：左侧踝关节腔内注射50 μL完全弗氏佐剂（complete Freund’s adjuvant,CFA）,鞘内注射10 μL生理盐水;PDTC预处理组：鞘内注射10 μL PDTC (100 μmol/L),30 min后左侧踝关节腔内注射50 μL CFA;PDTC后处理组：左侧踝关节腔内注射50 μL CFA,30 min后鞘内注射10 μL PDTC (100 μmol/L)。于术前及术后不同时间点测定痛阈值,用免疫组织化学法观察L5脊髓节段小胶质细胞的表达情况,并在鞘内注射后第1,3,5,7天取L4-L5脊髓膨大节段检测NF-κB mRNA和CX3CR1 mRNA的表达。结果：与MA组相比,sham组、PDTC预处理组及PDTC后处理组的大鼠同侧后肢各时间点痛阈值明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与MA组相比,PDTC预处理组及PDTC后处理组大鼠的L5脊髓节段的小胶质细胞数量明显减少,脊髓中CX3CR1 mRNA和NF-κB mRNA的表达均明显减少,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论：鞘内注射NF-κB抑制剂PDTC可以缓解CFA所致MA模型大鼠的痛觉异常。其机制可能与NF-κB信号通路通过调节CX3CR1的表达而参与炎性痛的发生、发展有关。     

慢病毒介导GDNF过表达对CCI大鼠神经病理性疼痛的影响

目的 观察鞘内注射过表达胶质细胞源性神经生长因子（GDNF）慢病毒载体对慢性缩窄性神经损伤（CCI）大鼠神经病理性疼痛的影响.方法 采用结扎大鼠坐骨神经制备CCI模型.CCI造模成功后第7天鞘内注射GDNF过表达慢病毒载体.CCI造模前及造模后第3、5、7、14、21天测定大鼠机械痛阈,并于术后第21天采用Western免疫印迹法测定脊髓GDNF表达.结果 Western免疫印迹显示CCI组GDNF表达较假手术组减少（P＜0.05）;鞘内注射GDNF过表达慢病毒载体后,脊髓GDNF表达上调,且CCI大鼠机械痛敏显著降低（P＜0.05）.结论 上调脊髓GDNF表达可减轻CCI大鼠神经病理性疼痛.     

鞘内联合给予T10与MK-801对神经病理性痛模型大鼠脊髓背角NR1与CREB蛋白磷酸化的影响

目的 研究鞘内联合给予雷公藤内酯醇(triptolide,T10)与MK-801对神经病理性痛模型大鼠痛行为及脊髓背角N-甲基-D-门冬氨酸(N-methyl-D-aspartic acid,NMDA)受体NR2B亚单位与环磷腺苷效应原件结合蛋白(cAMP-response element binding protein,CREB)磷酸化水平的影响。方法 选取健康雄性SD大鼠36只,随机分为6组:正常对照组(normal),假手术-生理盐水组(sham-saline),L₅脊神经结扎(spinal nerve ligation;SNL)-生理盐水组(SNL-saline),SNL-T10单纯给药组(SNL-T10),SNL-MK-801单纯给药组(SNL-MK-801),SNL-T10+MK-801联合给药组(SNL-T10+MK-801)。模型组和给药组均采用L5SNL构建慢性神经病理性痛模型,生理盐水、T10(10 μg/kg)和MK-801(30 μg/kg)从术后第1 d连续鞘内注射至第7 d,1次/d。利用Von-Frey丝刺激法连续观察造模后大鼠的机械性缩足阈值(paw withdrawl threshold,PWT);应用免疫荧光组织化学染色方法观察腰膨大节段脊髓背角内pCREB蛋白的表达;Western blot方法定量检测NR2B和CREB的磷酸化水平。结果 术后第1 d起,SNL组大鼠术侧后爪PWT明显下降(P＜0.01),且在3 d后基本保持平稳;鞘内单独给予T10或MK-801干预后第7 d术侧后爪的MWT明显提高,与给药前相比有显著性差异(P＜0.05);SNL-T10+MK-801联合给药组大鼠第7 d术侧后爪的PWT提高幅度较SNL-T10和MK-801组明显,与给药前相比差异更加显著(P＜0.01);停止给药后,SNL-T10+MK-801联合给药组镇痛疗效较SNL-T10以及MK-801组持续时间长。免疫荧光组织化学染色显示:pCREB主要表达于神经元内。Western blot检测结果显示:与对照组相比,SNL后第7d脊髓背角内pCREB蛋白的表达明显上调,SNL-T10+MK-801联合给药组大鼠脊髓背角内pNR2B和pCREB蛋白的表达水平要依次低于单独SNL-T10、SNL-MK-801给药组和SNL-saline组。结论 鞘内联合给予T10和MK-801能够有效缓解神经病理性痛模型大鼠的机械性痛行为,并且降低了二者的给药剂量,其机制可能与抑制脊髓背角神经元NR2B/CREB的磷酸化水平密切相关。     

2型大麻素受体通过抑制脊髓小胶质细胞活化减轻神经病理性疼痛小鼠痛觉过敏

目的 探讨脊髓大麻素受体2（CB2R）与小胶质细胞激活对小鼠神经病理性疼痛中痛觉过敏的影响。方法 采用脊神经结扎（SNL）创建神经病理性疼痛模型,C57/BL小鼠60只随机分为六组：假手术组（Sham）、模型组（SNL）、模型+ CB2R激动剂组（SNL+AM1241）、模型+小胶质细胞抑制剂组（SNL+Min）、模型+CB2R小干扰RNA组（SNL+siRNA）、模型+CB2R小干扰RNA+小胶质细胞抑制剂组（SNL+siRNA+Min）。Western blot测定小鼠脊髓CB2R蛋白表达,Von Frey测定各组小鼠机械性痛阈变化,免疫荧光观察脊髓背角小胶质细胞激活情况,PCR测定小鼠脊髓内炎症因子释放,电生理技术观察CB2R激动剂对脊髓背角抑制性突触后电流（sIPSC）的影响。结果 同Sham组相比,SNL小鼠脊髓CB2R表达明显减少,痛阈降低,小胶质细胞激活明显增强,且炎症因子释放增加;鞘内注射CB2R激动剂或小胶质细胞抑制剂后,同SNL相比SNL+AM1241、SNL+Min组痛阈增加,小胶质细胞激活减弱且炎症因子有所减少;而siRNA干扰CB2R表达后同SNL相比,SNL+siRNA小鼠痛阈降低,小胶质细胞激活明显增强,且炎症因子释放增加,同时鞘内注射Min逆转siRAN介导的变化。电生理结果显示AM1241显著增强脊髓背角sIPSC频率和振幅,而Min持续灌流抑制AM1241的效应。结论 CB2R通过抑制脊髓小胶质细胞活化减轻神经炎性反应并增强抑制性电活动,从而减轻神经病理性疼痛的痛觉过敏。