实验性口腔癌发生过程中增殖细胞核抗原表达的研究

目的：利用金黄地鼠颊癌模型,探讨口腔癌发生过程中增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）表达变化及其规律。方法：０．５％二甲基苯并蒽（ＤＭＢＡ）丙酮液处理地鼠颊粘膜,每周３次,３、６、９和１２周分批处死动物;对照组不处理。利用抗ＰＣＮＡ单克隆抗体,免疫组化方法（ＬＳＡＢ）检测ＰＣＮＡ的表达情况。结果：正常地鼠颊粘膜ＰＣＮＡ表达主要位于基底层和少数棘层细胞,３周单纯增生类似正常,６～９周上皮呈不同程度异常增生,ＰＣＮＡ表达扩展至棘层,甚至全层,与异常增生程度呈正相关;１２周鳞癌形成时,ＰＣＮＡ表达明显增加,且见明显异质性。结论：ＤＭＢＡ诱导地鼠颊癌发生过程中存在ＰＣＮＡ异常表达,且与癌变进展有关,提示ＰＣＮＡ表达可作为口腔癌变监测的生物学标志之一。     

地鼠颊粘膜癌变过程中增殖细胞核抗原及核仁组成区表达变化实验研究

目的：探讨癌变过程中增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）、核仁组成区（ＮＯＲ）的表达变化。方法：利用地鼠颊粘膜癌模型采用免疫组化ＬＳＡＢ法检测ＰＣＮＡ,阳性对照为人类炎性增生淋巴结标本,阴性对照为ＰＢＳ代替单抗。采用硝酸银染色法检测ＮＯＲ。结果：①正常粘膜ＡｇＮＯＲ颗粒主要见于基底层细胞,以单一型为主。重度异常增生以聚集型为主。浸润癌以混合型为主。②随恶变进展,ＰＣＮＡ表达逐渐增强,重度异常增生阳性细胞见于上皮全层。结论：ＰＣＮＡ与ＡｇＮＯＲ表达有相关性（ｒ＝０．６３５,Ｐ〈０．００１）,但ＰＣＮＡ更为直观、清晰,实用价值更大。     

DMBA诱导的金黄地鼠颊囊癌变粘膜中增殖细胞核抗原表达

实验采用抗增殖细胞核抗原单克隆抗体对１０９例金黄地鼠颊囊粘膜标本作免疫组化染色及网格计数和形态学观察，发现正常的金黄地鼠颊囊粘膜基底层有少量增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）阳性细胞，而上皮异常增生以及癌变时，随着病变程度的加重，ＰＣＮＡ阳性细胞率也相应增加。统计学分析显示：正常粘膜各级上皮异常增生以及癌变各组间ＰＣＮＡ阳性细胞率有显著差异（Ｐ＜０．０５），轻度上皮异常增生组中涂ＤＭＢＡ６周与７周的ＰＣＮＡ阳性分级有显著性差异（Ｐ＜０．０５）；涂ＤＭＢＡ７周，８周，９周之间，其ＰＣＮＡ阳性分级无差异（Ｐ＞０．０５），提示ＰＣＮＡ可作为动态观察癌前病变过程中细胞增殖程度的一种检测指标，它的敏感性强于光镜形态学观察。     

二甲基苯并蒽诱导地鼠颊癌过程中Rb基因产物表达的研究

目的探讨实验性吕必生过程中Ｒｂ基因编码产物（ｐＲｂ）的表达变化。方法 用０．５％的二甲基苏醒 并蒽（ｄｉｍｅｔｈｙｌ－ｂｅｎｚａｎｔｈｒａｃｅｎｅ,ＤＭＢＡ）丙酮液涂技法 鼠石侧颊粘膜３次／周,对病变组织用ＬＳＡＢ法进行免疫组化染色（ｐＲｂ染色最强,３周（单纯增生）尖似正常;６、９周异常增生损害时染色减弱,与异常增生程度有关;１２周 形成时染色进一步减弱。ｐＲｂ染色降低与恶变进展有关。结论 ＤＭＢ     

增殖细胞核抗原及P53在舌癌中的表达

目的：研究ＰＣＮＡ、Ｐ５３在舌癌中表达的相关性及与肿瘤病理分级、淋巴结转移、预后的关系。方法：应用免疫组化ＳＰ法，观察４６例病理确诊的舌癌石蜡标本中ＰＣＮＡ指数及Ｐ５３阳性率的表达。结果：ＰＣＮＡ在所有病例均有不同程度表达，４６例中２８例呈Ｐ５３阳性表达（６０．９％）。Ｐ５３阳性组中ＰＣＮＡ指数明显高于Ｐ５３阴性组（Ｐ＜０．００１）。ＰＣＮＡ指数随舌癌病理分级的升高而增加（Ｐ＜０．０２５）。Ｐ５３阳性率在Ⅱ、Ⅲ级舌癌明显高于Ⅰ级舌癌（Ｐ＜０．０５）。在有淋巴结转移及术后生存小于３年组中ＰＣＮＡ指数及Ｐ５３阳性率均明显高于无淋巴结转移及术后生存３年以上组（Ｐ＜０．００１，Ｐ＜０．０５）。结论：联合检测ＰＣＮＡ及Ｐ５３对判断舌癌恶性度，预测淋巴结转移趋势和预后及指导临床治疗有重要价值。     

口腔粘膜癌前病变增殖细胞核抗原表达分布

采用免疫组化染色和图像分析技术，检测了正常口腔粘膜，轻中重度粘膜上皮异常增生和鳞状细胞癌共７４例石蜡包埋组织中增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的表达分布．结果显示，正常口腔上皮中，ＰＣＮＡ染色仅见于基层，而所有异常增生和鳞癌标本中，ＰＣＮＡ阳性反应出现在基层以上部位．从轻、中、重度异常增生到鳞癌，ＰＣＮＡ阳性细胞的比率不断增加，每个标记细胞中ＰＣＮＡ染色程度亦显著增强．表明ＰＣＮＡ表达和口腔上皮的增殖潜能及分化程度密切相关，可作为监测口腔粘膜上皮癌变风险的重要生物学标记     

肝素在DMBA诱导地鼠颊囊粘膜癌变过程中的作用的初步研究

作者在ＤＭＢＡ诱导地鼠夹囊癌第７周起，于每次涂布ＤＭＢＡ前一小时用肝素加低分子右旋糖酐（５ｕ／ｍｌ）混合液给实验组地鼠腹腔内注射（０．４ｍｌ／１００ｇ），至第１８周，其过程中记录每只地鼠颊鼠癌时间（以粘膜出现三向平均直径为３ｍｍ肿瘤块的时间为准），并与对照组（单纯诱癌而不给抗凝处理）比较，结果实验组地鼠颊囊癌变时间平均比对照组延长３２．６天（Ｐ〈０．０１）。经血液流变和微循环检测证实，两组间有差异     

口腔鳞癌增殖细胞核抗原表达及其临床意义

目的：检测口腔鳞状细胞癌中增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的表达，探讨与鳞癌预后相关的因素。方法：采用免疫组化的方法，利用ＰＣＮＡ的单克隆抗体检测４４例口腔鳞癌组织中ＰＣＮＡ的表达。结果：低分化鳞癌较高分化鳞癌ＰＣＮＡ的表达明显增强（Ｐ＜０．０５）；晚期鳞癌中ＰＣＮＡ阳性细胞百分率比早期鳞癌显著增高（Ｐ＜０．０５）；ＰＣ－ＮＡ高表达者的淋巴结转移倾向大于ＰＣＮＡ低表达者。结论：ＰＣＮＡ标记可以作为判断鳞癌预后的参考指标。     

颊癌中肿瘤转移抑制基因nm23mRNA的表达 Ⅱ.定量逆转录多聚酶链反应检测

采用定量逆转录多聚酶链反应（Ｑ－ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测ｎｍ２３－Ｈ１和ｎｍ２３－Ｈ２ｍＲＮＡ在４７例组织标本中的表达情况，发现ｎｍ２３－Ｈ１和ｎｍ２３－Ｈ２ｍＲＮＡ在颊癌原发灶、癌旁粘膜、正常颊粘膜、颌下腺、白斑、正常淋巴结和有转移的淋巴结中均有不同程度的表达。ｎｍ２３－Ｈ１在肿瘤转移组颊癌原发灶中的表达低于无转移组（Ｐ＜０．０５），ｎｍ２３－Ｈ２在颊癌有、无转移中的表达无差异（Ｐ＞０．０５）；ｎｍ２３－Ｈ１和ｎｍ２３－Ｈ２表达与临床病理参数间均无关（Ｐ＞０．０５）。结果提示：ｎｍ２３－Ｈ１ｍＲＮＡ表达下降与颊癌转移关系密切，而ｎｍ２３－Ｈ２ｍＲＮＡ表达与颊癌转移无关；通过Ｑ－ＲＴ－ＰＣＲ检测ｎｍ２３－Ｈ１ｍＲＮＡ的表达水平可为临床预测颊癌的转移提供有价值的指标。Ｑ－ＲＴ－ＰＣＲ技术的主要优点在于通过少量组织提取的总ＲＮＡ即可检测ｎｍ２３ｍＲＮＡ的表达。     

口腔粘膜上皮癌前及癌变中PCNA和P53的表达

目的：检测口腔粘膜上皮癌前及癌变组织中ＰＣＮＡ和ｐ５３的表达，探讨口腔癌变的机理。方法：采用免疫组化的方法检测８０例口腔粘膜病变组织中ＰＣＮＡ和ｐ５３的表达。结果：正常口腔粘膜基底层有少数ＰＣＮＡ阳性细胞，随着粘膜异常增生程度的加重到鳞癌，ＰＣＡＮ表达的阳性分级升高，ＰＣＮＡ的相对含量也升高。Ｐ５３的阳性表达仅见于重度异常增生及鳞癌组织中。结论：对ＰＣＮＡ和ｐ５３的研究有助于探讨口腔粘膜癌变多阶段发生过程的机理，并可为监测癌变提供生物学指标。     

槟榔提取液诱发大鼠口腔粘膜下纤维性变的实验研究 Ⅰ.组织形态学观察

采用粘膜下注射及表面涂布水溶性槟榔提取液（ＡＡＮＥ）相结合方法，诱发ＳＤ大鼠颊部口腔粘膜下纤维性变（ＯＳＦ）。在实验第１２，１６，２２及２８周分别进行颊粘膜显微及超微结构观察。结果发现：模型组动物在各个时期均出现了不同程度的ＯＳＦ样改变，即：上皮萎缩，钉突变平或消失；固有层大量炎症细胞浸润，胶原纤维堆积，排列紊乱并玻璃样变；病变进一步发展可波及深部肌层。停止使用ＡＡＮＥ６周后，病变未见明显逆转。对照组未见明显的组织形态学改变。采用粘膜下注射及表面涂布ＡＡＮＥ相结合方法可快速诱发出大鼠颊部比较典型、稳定的ＯＳＦ模型。     

口腔鳞状细胞癌增殖细胞核抗原的研究

作者采用抗增殖细胞核抗原单克隆抗体，对５２例标本进行了免疫组化染色。结果显示：正常口腔粘膜基底细胞具有少量的ＰＣＮＡ阳性细胞，其阳性分级为１级；而Ｉ级鳞癌ＰＣＮＡ阳性分级为３级为主，随着鳞癌组织学分级的升高，ＰＣＮＡ阳性分级有增高趋势，ＩＩＩ级鳞癌的ＰＣＮＡ阳性分级以４级为主，经统计学分析：除鳞癌Ｉ级与ＩＩ级间无显著差异外（Ｐ＞０．０５），其余各组间均有显著差异（Ｐ＜０．０５）。提示：ＰＣＮＡ表达     

烟草特异性亚硝胺对地鼠颊囊粘膜及前胃的作用

目的 研究烟草特异性亚硝胺对地鼠颊囊粘膜的作用。方法 以烟草特异性亚硝胺及尼古丁涂抹地鼠颊粘膜,每周３次,共６个月。结果 颊粘膜几科１００％产生改变,主要为上皮增生及过角化,并有上皮异常增生产生。结论 烟草特异性亚硝胺对地鼠颊粘膜有较大危害,可引起粘膜癌前病变。     

颊癌中肿瘤转移抑制基因nm23mRNA的表达 Ⅰ.Northern斑点杂交研究

通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ斑点杂交技术研究５２例颊癌及相关组织中肿瘤转移抑制基因ｎｍ２３－Ｈ１和ｎｍ２３－Ｈ２ｍＲＮＡ的表达。结果发现：颊癌组织中ｎｍ２３－Ｈ１和ｎｍ２３－Ｈ２ｍＲＮＡ表达比正常颊粘膜、白斑、癌旁粘膜均有不同程度增高。颊癌有转移组中ｎｍ２３－Ｈ１ｍＲＮＡ表达比无转移组明显降低，转移灶中ｎｍ２３－Ｈ１ｍＲＮＡ的表达更低（Ｐ＜０．０５）。１１例有转移颊癌患者中有９例（８１．８％）为ｎｍ２３－Ｈ１低表达；而１９例无转移颊癌，有１５例（７８．９％）为高表达（Ｐ＜０．０５）。ｎｍ２３－Ｈ２ｍＲＮＡ表达在有无转移组患者中无明显差异（Ｐ＞０．０５）。结果提示，在颊癌的转移过程中，ｎｍ２３－Ｈ１比ｎｍ２３－Ｈ２起着更重要的作用。ｎｍ２３－Ｈ１ｍＲＮＡ表达可作为预测有无颊癌淋巴结转移的一个有价值的指标。     

口腔鳞癌中HPV感染及其对p5 3改变影响的研究

目的：探讨高危型人乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）在口腔鳞癌中的感染情况及其对Ｐ５３蛋白表达和ｐ５３突变的影响。方法：采用免疫组化和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法，分别检测４０例来癌中高危型ＨＰＶＥ６蛋白表达、Ｐ５３蛋白表达和ｐ５３基因突变的情况。结果：９例ＨＰＶＥ６蛋白染色阳性，阳性率２２．５％（９／４０），与正常粘膜对照组有显著差异（Ｐ＝０．０２１）。ＨＰＶ阳性组中Ｐ５３蛋白表达率１１．１％（１／９），ＨＰＶ阴性     

增殖细胞核抗原和抑癌基因P53在粘液表皮样癌中的表达

为对粘液表皮样癌中增殖细胞核抗原（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇｃｅｌｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｇｅｎ，ＰＣＮＡ）和Ｐ５３蛋白的表达及分布特点进行分析，作者采用免疫组织化学过氧化物酶法对４１例粘液表皮样癌进行了研究。所有病例均有ＰＣＮＡ阳性表达，ＰＣＮＡ表达指数和染色强度与肿瘤组织学分级呈正相关。根据ＰＣＮＡ阳性细胞分布情况可分为３种类型，分布类型与肿瘤组织学分级相一致。Ｐ５３蛋白总阳性率为４１．５％，除外偶见Ｐ５３阳性细胞９例，阳性率为１９．５％。结果提示：Ｐ５３蛋白在粘液表皮样癌中表达率较低。ＰＣＮＡ表达指数和染色强度可作为评价粘液表皮样癌分化程度的生物学指标。ＰＣＮＡ阳性细胞分布类型有助于粘液表皮样癌的病理学分级诊断     

金黄地鼠颊囊癌前病变癌变的综合监测研究

目的评价ＤＮＡ含量（ＤＩ）、倍体、Ｓ期细胞比例（ＳＰＰ）、银染核仁形成区（ＡｇＮＯＲ）、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）及细胞凋亡指数（ＡＰＯ）在口腔粘膜癌前病变癌变监测中的价值及临床应用意义。方法 应用流工细胞仪（ＦＣＭ）、免疫组化等方法对ＤＭＢＡ致地鼠颊囊粘膜癌前病变及癌变过程中的ＤＮＡ含量、倍体、ＳＰＦ、ＡｇＮＯＲ及ＡＰＯ进行定量检测。结果 在Ⅰ－Ⅳ组间（Ⅰ组为正常颊囊粘膜、Ⅱ组为上皮单纯增生、Ⅲ     

金黄地鼠颊囊癌前病变癌变的综合监测研究--DNA、SPF、AgNOR、PCNA及APO的研究

目的评价ＤＮＡ含量（ＤＩ）、倍体、Ｓ期细胞比例（ＳＰＦ）、银染核仁形成区（ＡｇＮＯＲ）、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）及细胞凋亡指数（ＡＰＯ）在口腔粘膜癌前病变癌变监测中的价值及临床应用意义。方法应用流式细胞仪（ＦＣＭ）、免疫组化等方法对ＤＭＢＡ致地鼠颊囊粘膜癌前病变及癌变过程中的ＤＮＡ含量、倍体、ＳＰＦ、ＡｇＮＯＲ及ＡＰＯ进行定量检测。结果在Ⅰ—Ⅳ组间（Ⅰ组为正常颊囊粘膜、Ⅱ组为上皮单纯增生、Ⅲ组为上皮异常增生、Ⅳ组为癌肿组）ＤＮＡ含量、异倍体出现率、ＳＰＦ、ＡｇＮＯＲ计数及ＰＣＮＡ表达依次递增；ＡＰＯ指数随Ⅰ—Ⅲ组依次升高，Ⅳ组时下降。多元逐步判别分析，建立判别函数方程，回代判别准确率为９０％。结论本实验结果提示综合监测为口腔粘膜癌前病变癌变的细胞动力学的动态规律的观察提供有益的资料，并对进一步从分子生物学水平研究癌前病变及其癌变将具有重要价值。     

口腔粘膜白斑增殖细胞核抗原的研究

采用抗增殖细胞核抗原（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇｃｅｌｌｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｇｅｎ，ＰＣＮＡ）单克隆抗体免疫组织化学方法，对１７例正常口腔粘膜和５０例口腔粘膜白斑及鳞癌进行了观察，结果表明，单纯增生性白斑ＰＣＮＡ阳性分级与正常口腔粘膜差异无显著性（Ｐ〉０．０５）；随着病变程度的加重，异常增生性白斑及鳞癌的ＰＣＮＡ阳必分级相应提高，统计学分析显示各组间差异显著性（Ｐ〈０．０５）。本研究提示，增殖细     

金地鼠颊囊致癌模型P53及其对细胞增殖作用的观察

有效地早期诊断是阻断癌前病变,预防癌变发生的必要条件,本实验建立ＤＭＢＡ（二甲基苯并蒽）诱导的金地鼠颊囊致癌模型,采用Ｐ５３增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）等免疫组化方法及ＶＩＤＡＳ图像分析,发现Ｐ５３表达能敏感,准确地反映口腔癌前病变的粘膜病变程度,并观察了Ｐ５３阳性细胞在不同程度年皮异常增生间具有不同的分布形态,实验还发现Ｐ５３与ＰＣＮＡ从不同检测角度揭示了细胞动力学变化的同一本质,初步证实了“Ｐ５