叶酸通过调节p53/p21(waf1/cip1)信号途径促进小鼠神经干细胞增殖和分化

目的:研究叶酸对体外培养小鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖和分化的影响及作用机制。方法:采用无血清悬浮培养方法分离培养新生小鼠脑NSCs,通过MTT法检测叶酸对NSCs增殖的影响;撤除生长因子后,用含10%胎牛血清的培养基诱导分化培养6 d后,采用Tuj1(神经元标记物)和GFAP(胶质细胞标记物)免疫荧光双标记法检测叶酸对NSCs分化的影响;并应用流式细胞术、RT-PCR法检测给予叶酸对NSCs细胞周期、p53和p21(waf1/cip1)mRNA水平的影响。结果:与对照组相比,MTT法测定结果显示,叶酸组NSCs增殖能力明显增强;分化后免疫荧光双标法测定显示,叶酸组Tuj1阳性细胞的比率明显增加,且差异具有显著性(P<0.01);流式细胞仪测定结果显示,叶酸组NSCs在G0/G1期细胞数量明显减少(P<0.01),而G2/M期细胞数量明显增多(P<0.01);RT-PCR结果显示,叶酸组NSCs中p53和p21 mRNA表达量明显降低。结论:叶酸能促进NSCs增殖及向神经元分化;叶酸对NSCs增殖和分化的影响与调节NSCs细胞周期及p53/p21(waf1/cip1)信号转导途径相关。     

cyclinD1、p16、Rb在胸腺瘤中表达及预后意义

目的：探讨ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１、ｐ１６、Ｒｂ蛋白在胸腺瘤中表达及预后意义。方法；应用免疫组化Ｓ－Ｐ法，对５４例胸腺瘤标本进行检测。结果：ｃｙｃｌｉｎＤ１、ｐ１６，Ｒｂ蛋白在髓质型，混合型胸腺瘤中阳性表达率分别为２３．１％（３／１３）、６９．２％（９／１３），５３．９％（７／１３），器官样，普通皮质型胸腺瘤中阳性表达率分别为５０．０％（８／１６）、７５．０％（１２／１６）、７５．０％（１２／１６），高     

全反式维甲酸对人卵巢癌细胞cyclinD1和CDK4表达的影响

目的　探讨全反式维甲酸 (ATRA)对人卵巢癌细胞增殖抑制作用及其与细胞周期调控因子cyclinD1和CDK4之间的关系。方法　选用人卵巢癌细胞株COC1进行体外培养 ,以不同浓度的ATRA处理COC1细胞 ,甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法检测细胞增殖抑制情况 ;流式细胞仪进行细胞周期时相分析 ;免疫细胞化学法测定细胞内cyclinD1和CDK4的表达。结果　A TRA浓度为 (10 -7～ 10 -5)mol/L时 ,均可明显抑制COC1细胞的增殖 (P <0 0 1) ,并具有时间 剂量依赖性。ATRA处理COC1细胞后G0 /G1期细胞增加 ,从 31 34%上升至 5 3 95 % ,S期细胞减少 ,从 5 8 5 0 %下降至 35 4 0 %。结果显示ATRA作用后 ,COC1细胞cyclinD1和CDK4蛋白表达减弱 ,且与细胞增殖指数 (PI)呈现负相关。结论　ATRA对人卵巢癌细胞株COC1具有明显的增殖抑制作用 ,可能是通过使细胞周期调控因子cyclinD1和CDK4蛋白表达减弱 ,将细胞阻滞于G0 /G1期实现的     

下调p21活化蛋白激酶2表达对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响*

 目的： 应用RNA干扰技术下调人乳腺癌MCF-7细胞中p21活化蛋白激酶2（PAK2）的表达,观察其对MCF-7细胞增殖和凋亡的影响。方法: 构建针对PAK2基因的短发卡RNA(shRNA)慢病毒表达载体并包装病毒颗粒,感染MCF-7细胞,筛选获得稳定细胞株。Western blotting检测细胞中PAK2蛋白表达水平的改变;CellTiter 96 AQueous法和软琼脂集落形成实验检测MCF-7细胞体外增殖能力的改变;流式细胞术检测十字孢碱诱导的MCF-7细胞凋亡的变化。结果: MCF-7细胞的PAK2基因被沉默后,PAK2蛋白表达量明显下降（P<0.01）,与阴性对照组相比,sh-PAK2组细胞生长明显减缓（P<0.01）,克隆形成的数目和大小明显下降（P<0.01）,十字孢碱诱导的细胞凋亡率显著增加（P<0.01）。结论：通过RNA干扰技术下调PAK2的表达,可抑制MCF-7细胞的生长和增殖,并增强其对化疗药物诱导的细胞凋亡的敏感性。PAK2可能是潜在的乳腺癌治疗的新靶点。     

p-MAPK、cyclinD1和p53蛋白在大肠癌中的表达及其相关性

目的：检测ｐ－ＭＡＰＫ、ｃｙｃｌｉｎＤ１和ｐ５３蛋白在大肠癌中的表达，并探讨其相关性。方法：免疫组织化学Ｓ－Ｐ法。结果：１４０例大肠癌中ｐ－ＭＡＰＫ、ｃｙｃｌｉｎＤ１和ｐ５３蛋白的阳性表达率分别为９２．９％（１３０／１４０）、８７．１％（１２２／１４０）和６６．４％（９３／１４０）；５０例相应癌旁肠粘膜中阳性表达率分别为４．０％（２／５０）、６．０％（３／５０）和２．０％（１／５０）。三者阳性表达     

星形细胞瘤中cyclinD1、p16表达及相互关系

目的　探讨cyclinD1和 p16在星形细胞瘤恶性转变中表达的变化及其相互关系。 方法　采用免疫组化S P法、原位分子杂交和图像分析检测 13例正常大脑组织和 5 8例星形细胞瘤 (Ⅰ～Ⅳ )cyclinD1和 p16的表达。 结果　cyclinD1mRNA的表达在星形细胞瘤组织与正常脑组织中的差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,随着肿瘤恶性程度增高 ,表达阳性率增高。p16蛋白和p16mRNA的表达随肿瘤恶性程度增加逐渐降低 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。但肿瘤组织中 p16蛋白和p16mRNA两者表达量都高于正常脑组织。结论　癌基因cyclinD1过度表达和抑癌基因 p16表达降低都参与星形细胞瘤恶性进程 ,且发生恶性转变时 ,高表达的cyclinD1刺激了p16的表达。cyclinD1和 p16表达的变化与星形细胞瘤发生发展有关     

宫颈鳞癌中p16、p21WAF1、Rb、cyclinE蛋白的表达

目的通过观察p16、p21WAF1、Rb、cyclinE 4种细胞周期相关蛋白在宫颈鳞状细胞癌中的表达,探讨它们在宫颈癌的细胞周期调控中的作用.方法采用免疫组化Eli Vision二步法对88例宫颈鳞癌组织,16例宫颈上皮内病变(CIN)组织,15例宫颈炎组织进行p16、p21WAF1、Rb、cyclinE 4种蛋白表达的检测.结果p16、p21WAA1、cyclinE在宫颈癌中的表达高于宫颈炎(P＜0.05);Rb在宫颈癌的表达少于宫颈炎(P＜0.05);Rb与p16在宫颈癌中的表达呈负相关(r=-0.675,P＜0.05).结论宫颈癌细胞周期G1期中,由于Rb蛋白的缺失,使cyclinE表达升高,致使癌细胞增生;同时,p16、p21WAF1蛋白在宫颈癌中的表达增高,并失去抑制作用.     

p53对人乳腺癌细胞MCF-7生长及周期相关基因的影响

目的探讨抑癌基因p53对人乳腺癌细胞MCF-7生长以及周期相关基因cyclinD1、cyclinE、CDK2和CDK4表达的影响.方法将正义的p53真核表达载体导人MCF-7细胞,获得稳定表达正义p53的细胞模型,并经PCR和Western blot鉴定.分析了细胞的各种生长特性包括生长曲线、血清依赖、单细胞克隆形成、软琼脂成集落等;利用TdR双阻断法同步化细胞,流式细胞术分析了细胞周期;Western blot检测了其他周期相关基因的表达.结果p53的高表达可以使细胞的生长速度减慢、血清依赖性增加、单细胞克隆成集落能力降低、非锚定依赖性生长能力减弱,S期的进程减缓,一定程度上抑制cyclinD1和CDK2的表达,cyclinE和CDK4的表达未见明显变化.结论抑癌基因p53的表达能够抑制人乳腺癌细胞MCF-7的生长,并可能通过阻抑cyclinD1和CDK2的表达而阻抑细胞周期S期进程,实现其调节功能.     

外源FHIT基因对不同FHIT基因状态肺癌细胞系恶性增殖的影响及其机理的研究

目的研究外源FHIT基因对不同FHIT基因背景肺癌细胞系恶性增殖的影响并探讨抑癌机理.方法用Lipofectamine介导PEGFP-FHIT真核表达质粒转染受体细胞系并建立稳定转染细胞系.RT-PCR、免疫组织化学及Western blot方法鉴定转染细胞中外源FHIT基因和蛋白的表达.细胞集落形成实验研究外源FHIT基因对肺癌细胞恶性增殖的影响,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡.Western blot检测母系及转染细胞系中p21^Waf/cip蛋白的表达.结果3种受体细胞转染外源FHIT基因后均检测到FHIT mRNA和蛋白的表达.集落形成实验801D-FHIT（46.3%）、A2-FHIT（43.7%）、A549-FHIT（32.7%）细胞集落形成率比801D（58.2%）、A2（60.3%）、A549（52.8%）的低,差异有显著性（P〈0.01）.FACS分析细胞周期显示：801D-FHIT、A2-FHIT和A549-FHIT细胞分别出现了G1、S和G2/M期阻滞.转染FHIT基因的801D-FHIT、A2-FHIT和A549-FHIT细胞p21^Waf/cip蛋白表达增加. 结论外源FHIT基因能够抑制不同FHIT基因背景的肺癌细胞的恶性增殖,并引起细胞周期改变,不同FHIT基因背景的细胞产生细胞周期阻滞的时间不同.FHIT基因通过促进p21^Waf/cip蛋白的表达来调节细胞周期.     

Differential expression of cdk inhibitors p16, p21cip1, p27kip1, and cyclin E in cervical cytological smears prepared by the ThinPrep method

Our objective was to correlate p16, p21cip1, p27kip1, and cyclin E protein expression with the degree of dysplasia on ThinPrep Papanicolaou (Pap) smears using a modified immunoperoxidase staining. Smears read as normal, atypical squamous cells of undetermined significance (ASC-US), low-grade squamous intraepithelial lesion (LSIL), or high-grade SIL (HSIL) were identified and tested for high-risk human papillomavirus (HR-HPV). Additional smears were processed for immunoperoxidase for p16, p21cip1, p27kip1, and cyclin E. Thirty-four smears were satisfactory for study. The p16 was positive in all nine HSIL, in four of nine LSIL, and in one of seven ASC-US. The p27kip1 was positive in all nine HSIL, in eight of nine LSIL, and in one of seven ASC-US. The p21cip1 was positive in all nine HSIL, in one of nine LSIL, and in one of seven ASC-US. Cyclin E was positive in seven of nine HSIL and in one of nine LSIL and in none of the ASC-US smears. Normal smears were negative for all the antigens. There was poor correlation of protein expression and HR-HPV infection. We concluded that p16, p21cip1, p27kip1, and cyclin E can be demonstrated on Pap smears and they are expressed differentially in dysplastic cells, with highest expression in HSIL. The p21cip1 and cyclin E showed the greatest correlation with HSIL.     

蛋白激酶C活性的阻抑对人胃癌细胞BGC－823恶性表型的影响

以人胃癌细胞ＢＧＣ－８２３为模型，在佛波酯（ｐｈｏｒｂｏｌ１２－ｍｙｒｉｓｔａｔｅ１３－ａｃｅｔａｔｅ，ＰＭＡ）导致蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）负效应条件下，探讨了ＰＫＣ活性的阻抑与细胞恶性表型变化的相关性及其可能作用机理。ＰＭＡ（１００μｇ／Ｌ）处理ＢＧＣ－８２３细胞７２ｈ，细胞质、膜和核中ＰＫＣ活性分别下降３５．６％和７２．３％。经电泳分析，观察到细胞核蛋白质磷酸化水平也明显下降。在ＰＫＣ活性被阻抑的同时，人胃癌细胞形态发生变化，细胞呈单层生长，出现接触抑制，在软琼脂中不能形成集落。表现出部分恶性表型丢失，并且与人胃癌细胞恶化密切相关的癌基因Ｈａ－ｒａｓ基因表达也明显被阻抑。这可能是ＰＫＣ活性被阻抑引起人胃癌细胞部分恶性表型丢失的分子机理之一。     

p21Cip1基因对V79-8细胞周期的影响

为了探讨缺乏可测出Ｇ１，Ｇ２期Ｖ７９－８细胞株的细胞周期失调的分子机理，构建了人的周期负调控基因ｐ２１Ｃｉｐ１的可表达重组质粒ｐＸＪＳＣ，转染该细胞系，建立了高表达ｐ２１的Ｖ７９８－ＳＣ细胞以＾３ＨＴｄＲ放射为影法，流式细胞光度术，细胞增殖曲线测定及免疫印迹技术，检测及比较了与细胞周期变化和增殖有关基因的表达，发现该细胞对照细胞Ｖ７９－８－ｎｅｏＧ１期明显延长，Ｇ２期也稍有增加。     

PROGNOSTIC SIGNIFICANCE OF THE CO-EXPRESSION OF p53 AND c-erbB-2 PROTEINS IN BREAST CANCER

The immunohistochemical expression of p53 and c-erbB-2 gene proteins was examined in a series of 130 breast adenocarcinomas. This study intended to investigate whether the frequency of the altered expression of the tumour suppressor gene p53 and the overexpression of the oncogene c-erbB-2 in breast cancer tissue cells correlated with other variables known to affect the biological behaviour of these tumours and the overall survival of the patients (median follow-up time: 6 years). The expression of p53 protein and c-erbB-2 gene product was evaluated immunohistochemically. Expression of p53 protein was detected in 30 (23 per cent) of the neoplasms examined, while 26 (20 per cent) out of the 130 cases demonstrated positive c-erbB-2 immunoreactivity. There was a statistically significant association between p53 protein expression and primary tumour size, lymph node involvement, and oestrogen receptor positivity. The incidence of c-erbB-2 positivity was significantly correlated with high tumour grade, axillary node invasion, large tumour size, and the absence of steroid receptors. p53 immuno-expression was clearly associated with c-erbB-2 protein overexpression. Concomitant p53 and c-erbB-2 positive immunolabelling, which emerged in 14 out of the 130 cases (10·7 per cent), was clearly associated with high grade, large size, positive nodal status, ductal infiltrating (NOS) histological type, and low values of progesterone receptors. Overall survival of patients was not significantly related to the immunoreactivity of either p53 or c-erbB-2 considered separately, whereas there was a clearly significant trend to worse overall prognosis in cancers with double p53/c-erbB-2 positive phenotype. The simultaneous immunodetection of p53/c-erbB-2 appears to have greater negative prognostic relevance than their separate expression.     

siRNA抑制SK-BR-3细胞株Her2/neu的表达及细胞增殖

目的研究siRNA（small interfering RNA）对乳腺癌SK-BR-3细胞株Her2／neu基因表达的抑制作用，为RNAi技术在肿瘤生物治疗中的应用提供实验基础。方法体外合成两条针对Her2／neu基因的siRNA，转染SK-BR-3细胞株；分别应用逆转录聚合酶连反应（RT-PCR）法和流式细胞仪测定Her2／neu基因和蛋白的表达，并用MTT比色法测定细胞的增殖活性，AnnexinV检测细胞凋亡。结果两条siRNA分别使Her2／neu基因表达降低了42.88％、49．27％，蛋白表达降低了25．03％、56．59％。同时转染siRNA后细胞生长受到抑制，并发生细胞凋亡，凋亡率分别为28．51％、42．81％。结论siRNA可以有效抑制SK-BR-5细胞株中Her2／neu的表达，从而抑制细胞生长，并导致细胞凋亡。     

小鼠肺发育中细胞增殖与凋亡及相关调控基因的表达

目的 探讨小鼠肺发育过程细胞增殖与凋亡的变化规律及凋亡相关基因ｐ５３、ｂｃｌ－２ｄ在肺发育中的表达意义。方法 不同发育天数的小鼠肺组织,采用免疫组织化学及ＴＵＮＥＬ法,观察细胞增殖与凋亡及相关基因ｐ５３、ｂｃｌ－２的表达。结果 １．胎１４和１６ｄ肺ＰＣＮＡ阳性细胞数达到高峰;之后ＰＣＮＡ阳性率逐渐下降;生后４到１４ｄ,又恢复低水平的细胞增殖,２．小鼠肺发育过程中出现两个细胞凋亡高峰：即胎１４至１６