吗啡备用根大鼠脊髓组织神经营养活性物质的分离纯化和生物活性测定

目的　分离纯化吗啡备用根大鼠脊髓组织提取液 ,以期获得某些神经营养活性物质。　方法　应用SephacrylS 2 0 0HR凝胶层析、高效液相色谱 (HPLC)和组织培养等技术分离和检测神经营养活性物质。　结果　备用根大鼠脊髓组织提取液能够促进体外培养的鸡胚背根节 (DRG)神经突起的生长 ;吗啡作用的大鼠脊髓组织提取液也具有同样的作用 ,但备用根大鼠和吗啡作用的大鼠脊髓组织提取液在促神经突起生长作用方面并没有明显的差异。吗啡备用根大鼠脊髓组织提取液具有明显的神经营养活性作用。吗啡备用根大鼠脊髓组织提取液的SephacrylS 2 0 0HR凝胶层析Ⅱ峰洗脱液和Ⅳ峰洗脱液能够促进DRG神经突起的生长。经SDS PAGE分析 ,Ⅱ峰洗脱液呈现 1条分子量约为 6 5kD的蛋白质主带 ,Ⅳ峰洗脱液的蛋白质成分较为复杂。应用HPLC对凝胶层析Ⅳ峰洗脱液作进一步的分离 ,发现HPLCA峰洗脱液能够促进DRG神经突起的生长。经SDS PAGE显示 ,A峰洗脱液的两条蛋白质主带分子量分别为 30kD和 18kD。　结论　吗啡备用根大鼠脊髓组织提取液中具有神经营养活性作用的物质可能是分子量约为 6 5kD、30kD和 18kD蛋白质     

备用根大鼠脊髓后角组织神经营养活性物质的分离纯化和生物活性测定

<正> 我室新近的研究发现,部分去传入纤维支配的脊髓后角组织提取液含有神经营养活性组份,其分子量约在40KD～78KD之间,但不清楚是那种分子量的蛋白质具有神经营养活性作用.为了寻找这种物质,本研究应用Superdex G-75prep grad凝胶层析、高效液相色谱(HPLC)层析和细胞培养等技术和方法,进一步分离纯化备用根大鼠部分去传入纤维支配(手术侧)的脊髓后角组织提取液,以期获得某种神经营养活性物质.用SD雄性大鼠100只,切除其一侧L_1-L_3、L_5和L_6背根,仅保留L_4背根(此动物为备用根模型大鼠),术后5天处死动物.分别切取L1_～L_6节段的手术侧和非手术侧脊髓后角组织,制备成提取液、凝胶层析洗脱液和PHLC层拆洗脱液.结果发现,手术侧脊髓后角组织提取液具有神经营养活性作用,将该提取液经Superdex G-75prep grade凝胶层析和PHLC层析后,得到的A峰洗脱液具有促进体外培养鸡胚背根节(DRG)分离神经元存活及其神经突起生长的神经营养活性作用.经SDS-聚丙烯酸胺凝胶电泳(PAGE)显示,A峰洗脱液呈现一条分子量约为60kD的蛋白质主带.结合生物活性检测结果,我们推测分子     

备用根大鼠脊髓后角组织神经营养活性物质的分离纯化和生物活性测定

我室新近的研究发现 ,部分去传入纤维支配的脊髓后角组织提取液含有神经营养活性组份 ,其分子量约在 40 k D～78k D之间 ,但尚不清楚是哪种分子量的蛋白质具有神经营养活性作用。为了寻找这种物质 ,本研究用 Superdex G- 75prep grade凝胶层析、高效液相色谱 (HPL C)层析和细胞培养等技术和方法 ,进一步分离纯化备用根大鼠部分去传入纤维支配 (手术侧 )的脊髓后角组织提取液 ,以期获得某种神经营养活性物质。用 SD雄性大鼠 10 0只 ,切除其一侧 L 1～ L 3、L 5和 L 6背根 ,仅保留 L 4背根 (此动物为备用根模型大鼠 ) ,术后 5 d处死动物…     

备用根大鼠脊髓后角组织神经营养活性物质的分离纯化和生物活性测定

目的　进一步分离纯化备用根大鼠部分去传入纤维支配 (手术侧 )的脊髓后角组织提取液 ,以获得某种神经营养活性物质。　方法　用 Superdex G- 75 prep grade凝胶层析、高效液相色谱 (HPL C)层析和细胞培养等技术分离和检测神经营养活性物质。　结果　手术侧脊髓后角组织提取液经 Superdex G- 75 prep grade凝胶层析和 HPL C层析后 ,得到的 A峰洗脱液具有促进体外培养鸡胚背根节 (DRG)分离神经元存活及其神经突起生长的神经营养活性作用。经 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)显示 ,A峰洗脱液呈现一条分子量约为 6 0 k D的蛋白质主带。　结论　结合生物活性检测结果 ,分子量约 6 0 k D的蛋白质可能是手术侧脊髓后角组织的神经营养活性物质     

备用根大鼠脊髓后角组织神经营养活性物质的分离纯化和生物活性鉴定

<正> 本实验采用凝胶过滤层析法和高效液相色谱技术,分离纯化备用根大鼠部分去传入侧的脊髓后角组织中的神经营养活性物质.1.生物活性检测方法的建立:切除大鼠一侧背根和背根节(DRG),仅保留L-4背根为备用根.术后动物存活5天.分别切取L1-L6节段手术侧和非手术侧脊髓后角组织,制备含手术侧和非手术侧提取液的培养液.用此液分别培养鸡胚DRG,48小时后手术侧组DRG神经突起密度明显大于对照组和非手术侧组,提示去传入纤维支配的脊髓后角组织存在着促神经突起生长的神经营养活性物质.又采用改良的悬滴培养法,发现手术侧脊髓后角组织能支持鸡胚DRG神经元的存活,而且具有促进神经突起生长的作用.2.备用根大鼠脊髓后角组织神经营养活性物质的分离与纯化,部分背根切除术后5天处死动物,切取手术侧脊髓L1-L6节段后角组织,匀浆、离心后,取上清液经Superdex prep grade G-75凝胶过滤层析,呈现Ⅰ、Ⅱ二个洗脱峰,将各洗脱峰浪加入培养基,Ⅰ峰洗脱液表现有神经营养作用.将Ⅰ洗脱峰进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,银染后呈现多条明显的蛋白区带,去传入脊髓后角组织呈现神经营养活性的物质是在40-78KD之间.将Ⅰ峰洗脱液浓缩,进行高效液相色谱(HPLC)分析,得到4个不同的洗脱峰(a、b、c、d峰).将各洗脱峰液配制成不同浓度的     

备用根大鼠脊髓后角组织神经营养活性物质的分离纯化和生 …

目的 进一步分离纯化备用根大鼠部分去传入纤维支配（手术侧）的脊髓后角组织提取液，以获得某种营养活性物质。方法 用Ｓｕｐｅｒｄｅｘ Ｇ－７５ ｐｒｅｐ ｇｒａｄｅ凝胶层析、高效液相色谱（ＨＰＬＣ）层析和细胞培养等技术分离和检测神经营养活性物质。结果 手术侧脊髓后角组织提取液经Ｓｕｐｅｒｄｅｘ Ｇ－７５ ｐｒｅｐ ｇｒａｄｅ凝胶层析和ＨＰＬＣ层析后，得到的Ａ峰洗脱液具有促进体外培养鸡胚背根节（ＤＲＧ     

备用根大鼠脊髓后角提取液中神经营养活性组分的分离及生物活性测定

制作备用根大鼠脊髓后角提取液，取其分子量大于10kD的组分进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，发现手术侧和非手术侧的电泳区带数目大致相同，但手术侧样品的第四条蛋白质区带扫描的吸收峰面积百分比大于非手术侧样品的第四条区带，两者在量上可能有差别。将手术侧样品经交联葡聚精G-75凝胶层析，得到两个洗脱峰．第一峰洗脱液有促进体外培养的背根节神经元存活及其突起生长的作用，其电泳分析显示4条主带，分子量在40～80kD之间．实验结果提示部分去传入纤维支配的脊髓后角组织含有神经营养活性物质，该物质的分子量约在40～78kD之间．     

备用根大鼠脊髓后角提取液中神经营养活性组分的分离及生物生测定

制作备用根大鼠脊髓后角提取液，取其分子量大于１０ｋＤ的组分进行ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，发现手术侧和非手术侧的电泳区带数目 大致相同，但手术侧样品的第四条蛋白质区带扫描的吸收峰面积发比大于非手术侧样品的第四条区带，两者在量上可能有差别。     

吗啡备用根大鼠脊髓后角提取液两种分子量组分的生物活性测定及其电泳分析

目的　探讨备用根大鼠手术侧和非手术侧脊髓后角组织 >10 k D和 <10 k D两种分子量组分提取液 ,对鸡胚背根节 (DRG)神经突起的促生长作用 ,以及应用吗啡后对此作用的影响。　方法　应用超滤器制备提取液、组织培养和 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳等技术 ,分离和检测神经营养活性物质。　结果　备用根大鼠手术侧脊髓后角提取液 >10 k D组分作用的 DRG神经突起的生长密度 ,比非手术侧 >10 k D组分 ,非手术侧 <10 k D组分和手术侧 <10 k D组分的生长密度明显增大。应用吗啡的备用根大鼠手术侧脊髓后角组织 >10 k D组分提取液作用的 DRG神经突起生长密度 ,又比备用根大鼠手术侧 >10 k D组分的大。经 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析发现 ,两组动物手术侧和非手术侧 >10 k D组分样品的电泳图谱区带数目大致相同 ,但两组动物手术侧分子量约 6 7k D、31k D和 16 k D的 3条区带吸收峰面积百分比 ,较非手术侧的高。　结论　吗啡具有进一步增强去传入纤维支配的脊髓后角组织 >10 k D组分提取液促进 DRG神经突起的生长效应。两组动物手术侧 >10 k D组分提取液分子量约 6 7k D、31k D和16 k D3种蛋白质含量有增高的趋势 ,尤其是吗啡组动物手术侧约 6 7k D蛋白质含量增高的趋势更为明显     

吗啡对备用根大鼠脊髓后角组织提取液促进神经突起生长的影响

为探讨吗啡促进备用根大鼠背根节神经元发出的初级传入纤维在脊髓内侧支出芽和突触重建的机制,将成年的大鼠分为吗啡备用根组(6只)和备用根对照组(6只)。前组动物在施行备用根模型手术的前、后给予吗啡注射,后组动物除没有使用吗啡外,其余处理与前组相同。切除两组动物脊髓左侧L_1～L_3、L_5、L-6背根和背根节,保留L_4背根(作为备用根)。于手术后第5d分别取出两组动物腰段手术侧和非手术侧脊髓后角组织块,按     

吗啡备用根大鼠脊髓后角提液两种分子量组分的生物活性测定及其电泳分析

目的 探讨备用根大鼠手术侧和非手术侧脊髓后角组织〉１０ｋＤ和〈１０ｋＤ两种分子量组分提取液,对鸡胚背根节（ＤＲＧ）神经突起的促生长作用,以及应用吗啡后对此作用的影响。方法 应用超滤器制备提取液、组织培养和ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳等技术,分离和检测神经营养活性物质。结果 备用根大鼠手术侧脊髓后角提取液〉１０ｋＤ组分作用的ＤＲＧ神经突起的生长密度,比非手术侧〉１０ｋＤ组分,非手术侧〈１０ｋＤ组分和手术侧〈１０ｋＤ组分的生长密度明显增大。应用吗啡的备用根大鼠手术侧脊髓后角组织〉１０ｋＤ组分提取液作用的ＤＲＧ神经突起生长密度,又比备用根大鼠手术侧〉１０ｋＤ组分的大。经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳分析发现,两组动物手术侧和非手术侧〉１０ｋＤ组分样品的电泳图谱区带数目大致相同,但两组动物手术侧分子量约６７ｋＤ、３１ｋＤ和１     

人胎脊髓内源性神经营养质的分离纯化

人胎脊髓存在神经营养物质，在以往的研究已发现它们对脊髓神经元的存活，生长及分化有营养作用。本文采用Ｓｕｐｅｒｄｅｘ－３０、反相Ｃ１８ＨＰＬＣ以及毛细管电泳对４月龄和８月龄人胎脊髓的神经营养进行了分离纯化了分离纯，活性检测采用体外培养脊髓神经元－ＭＴＴ方法。     

吗啡增强备用根大鼠脊髓后角组织提取液对培养鸡胚背根节的促神经突起生长的作用

用组织培养方法，探讨备用很大鼠手术侧和非手术侧脊髓后角组织提取液对鸡胚背根节（ＤＲＧ）神经突起的促生长作用，以及应用吗啡对此作用的影响。结果显示：备用根大鼠手术侧脊髓后角组织提取液作用的ＤＲＧ神经突起密度（３６．４２±４．６９），比非手术侧的（２３．９６±３．４７）明显增大。提示去初级传入纤维的脊髓后角组织具有促进ＤＲＧ神经突起生长的神经营养活性作用。应用吗啡的备用根大鼠手术侧脊髓后角组织提取液作用的ＤＲＧ神经突起密度（６４．１９±９．２４），又比备用根大鼠手术侧的大。这表明，吗啡具有进一步增强去初级传入纤维支配的脊髓后角组织提取液促进培养的ＤＲＧ神经突起生长的效应。     

巨噬细胞条件培养基神经营养活性成分的分离,纯化和鉴定

用快速自动比色微量分析法检测巨噬细胞条件培养基(MΦCM)对体外培养的生后7d SD大鼠小脑皮质神经元的作用。结果表明,MΦCM内分子量大于30kD的组分(加入量40μl/孔)对神经元(细胞密度1×10~5/孔)具有明显的神经营养活性,与对照组相比有显著性差异(P<0.01)。盖片培养法证明,此组分还具有促神经元突起生长的作用。另外,把MΦCM进行Sephadex G-100凝胶层析及生物活性鉴定,获得具有神经营养活性的第一峰洗脱液。降此洗脱液及上述MΦCM分子量大于30kD的组分经SDS-聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳分析,证明MΦCM中含有支持神经元生存和增强其活性作用的成分,是一种分子量为97.9kD的蛋白质。     

备用根手术对背角组织促神经突起生长活性的影响

将5只单侧只肢备用根术后5天猫的背角组织提取液用于培养鸡胚背根节及电泳分析，手术组（手术侧）提取液大于50KD组份培养的背根节的神经突起明显长于非手术组（非手术侧）者，提示手术组此组份的促神经突起生长活性显著增强；该组份各电泳带的吸收光谱显示，手术组迁移率为0．1的蛋白带的吸收峰面积百分比明显增大，而迁移率为0．5的蛋白，吸收峰面积百分比则明显减小，表明手术组提取液大于50KD组份中此两带的蛋白质含量分别有所增减，推测可能系备用根手术导致提取液大于50KD组份中某一促神经突起生长活性物质含量增加，而另一抑制神经突起生长物质含量减少，从而导致背角组织促神经突起生长活性的增强。     

31 巨噬细胞条件培养基的神经营养活性组分的分离、纯化和鉴定

<正>我们实验室先前的工作曾发现巨噬细胞条件培养基(M(?)CM)有支持中枢神经元生存和生长的作用,并初步证明其活性组分是M(?)CM中分子量大于10KD的部分.本文对该活性部分再进一步分离、纯化和鉴定.一方面,把该分子量大于10KD组分的M(?)CM经Centrio-30微浓缩器(microconcentrator)离心,分离出分子量10～30KD和>30KD两个组分.用快速自动比色微量分析法(MTT比色微量分析法)检测它们对体外培养的生后7天SD大鼠小脑皮质神经元的作用.结果表明:M(?)CM分子量>30KD的组分(加入量40μl/孔)对神经元具有明显的生物活性,与对照组相比有显著性差异(P<0.01).将此组分经SDS-聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳,呈现一条明显的主带,分子量在95KD左右.另方面,把分子量大于10KD组分的M(?)CM进行SePhadexG-100层析,得到三个主峰的洗脱液.用MTT比色微量分析法检测它们对小脑皮质神经元作用,证明第一峰洗脱液具有神经营养活性,经SDS-聚丙烯酸胺梯度凝胶电泳,同样呈现一条明显的主带,在95KD左右.以上两方面实验的结果相吻合,提示M(?)CM的神经营养活性组分为95KD左右的蛋白质分子.