催化信号放大系统的制备及其在免疫组化和原位杂交中的应用

目的：应用本实验室制备的催化信号放大（ｃａｔａｌｙｚｅｄ　ｓｉｇｎａｌ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ,ＣＳＡ）试剂,提高免疫组化（ＩＨＣ）和原位杂交（ＩＳＨ）的敏感性。方法：ＣＳＡ法应用于ＩＨＣ检测５０例１０种不同类型的肿瘤切片中４０种不同的抗原和ＩＳＨ检测６种不同的ＲＮＡ成分,并与相应的常规方法进行敏感性比较。同时分析了存在的问题。结果：ＣＳＡ－ＩＨＣ法较传统的ＰＡＰ法、ＡＢＣ法和 ＬＳＡＢ法敏感 ５００～１０００倍,较 ＥｎＶｉｓｉｏｎ法敏感 ２０～１００倍。 ＣＳＡ－ＩＳＨ法可使探针浓度从 ３ μｇ／ｍｌ降到 ０． ５～１μｐ／ｍｌ,杂交时间从 ２ ｄ缩短到 １ｄ,杂交阳性率明显提高。结论：本实验室制备的 ＣＳＡ系统与常规方法相比具有较高的敏感性、稳定性和低背景等优点,完全可取代进口试剂,非常适合于一抗昂贵、抗原性弱的ＩＨＣ检测,还可作为常规ＩＳＨ染色方法。     

催化信号放大法的改进

目的:探讨酪胺与过氧化物酶发生酶促反应后,用热缓冲液洗以进一步提高和改善催化信号放大法(CSA)的敏感性和特异性.方法:应用7种不同类型的一抗,2张不同肿瘤的组织芯片,同时进行EnVision法、LsAB法、标准CSA法和改进CSA法染色,比较敏感性和特异性.结果:改进CSA法最为敏感,其次是标准CSA法、EnVision法和LsAB法,改进CSA法的敏感性较标准CSA法高2～3倍.4种方法背景染色基本一致,细胞定位准确.结论:改进后的CSA法的稳定性、敏感性好于标准CSA法.     

端粒酶催化亚单位在细胞学诊断肺癌中的表达

目的:检测支气管镜涂片中端粒酶催化亚单位(hTERT)的表达,探讨其与肺癌发生的关系,探索细胞学诊断肺癌的新途径。方法:应用免疫组化和原位杂交的方法检测137例支气管镜涂片中hTERT和hTERTmRNA的表达,并与临床病理资料及细胞学诊断进行相关性分析研究。结果:137例病例中,hTERT和hTERTmRNA表达阳性率在细胞学诊断为癌细胞组分别为67.86%(57/84)和79.76%(67/84);疑癌或异型细胞组分别为46.67%(7/15)和60.00%(9/15);未见癌细胞组分别为5.26%(2/38)和39.47%(15/38)。二者的表达在癌细胞组明显高于其他2组(P<0.05)。其中有组织学对照的105例,hTERT和hTERTmRNA阳性表达率与细胞学诊断阳性率相一致。hTERT和hTERTmRNA的阳性表达率呈正相关性(r=0.994,P<0.05),但这二者的表达率与组织病理类型及其他临床特征差异均无显著性(P>0.05)。结论:端粒酶在支气管涂片中的阳性表达与肺癌的发生密切相关。hTERT和hTERTmRNA在癌组织中均存在高表达,且比传统形态学诊断更敏感。而hTERT蛋白的表达在细胞学涂片中更可靠(假阳性率低)。因此检测这二者的表达有助于提高肺癌的细胞学检出率,对早期发现、诊断肺癌有重要意义。     

瘦素及其受体系统在女性生殖器官的表达

目的　研究瘦素 (leptin)及其受体 (Ob R)、瘦素信号传导相关蛋白质在女性生殖器官的表达 ,探讨瘦素对女性生殖系统的影响。方法　分别用免疫组织化学和原位杂交技术检测瘦素、具有信号传导功能的瘦素长受体 (Ob Rb)、磷酸化的细胞因子信号传导转录活化因子STAT3(p STAT3)、细胞因子信号传导抑制剂 3(SOCS3)、活化的STAT3蛋白质抑制剂 (PIAS3)在正常妇女子宫内膜 ( 39例 ,增殖期 2 4例 ,分泌期 15例 )、子宫颈和阴道及输卵管 ( 3例 )的表达。结果　 ( 1)瘦素、Ob RbmRNA及其蛋白质在子宫内膜的腺体及间质均呈阳性表达。 ( 2 )Ob Rb蛋白质在分泌期子宫内膜的表达 3例弱阳性 ,3例阳性 ,9例强阳性 ;在增殖期子宫内膜的表达为 2例阴性 ,19例弱阳性 ,3例阳性 ,两者比较差异有显著意义 (P <0 .0 1)。瘦素蛋白质在不同期子宫内膜的表达差异无显著意义。 ( 3)瘦素及受体蛋白质在子宫颈、阴道、输卵管的上皮 (包括腺体 )均有表达。 ( 4)信号传导相关蛋白质SOCS3、PIAS3在子宫内膜和子宫颈的腺上皮、输卵管的纤毛上皮呈阳性表达 ,p STAT3表达极弱或不表达。结论　瘦素可能通过受体系统 ,与生殖器官间有广泛联系 ,影响女性的生殖功能。     

一种新酶放大系统及其应用

建立了一种能广泛用于酶标免疫吸附分析的新酶放大系统。该系统采用Ｌ－乳酸脱氢酶、乳酸氧化酶、辣根过氧化物酶、ＮＡＤＨ和３,３＇,５,５＇－四甲基联苯胺组成一个循环体系,用以放大碱性磷酸酶产生的信号。与其它酶放大系统相比,具有灵敏度高和成本低的特点。     

红斑狼疮皮损Ig和C3的原位免疫组化观察

有关红斑狼疮皮损内免疫球蛋白(Ig)和补体C_3的研究,文献甚多,但主要是以免疫荧光法为主,应用免疫酶组织化学的研究则较少。鉴于此,我们对红斑狼疮皮损进行了5种Ig和C_3的原位免疫组化观察,现报告如下。 1 材料与方法 1.1 材料:为我院既往住院或门诊病人活检病理组织存档蜡块,其中SLE12例、DLE12例。另自我院门诊手术室取非狼疮患者正常皮肤组织10例,标本均为10％福尔马林固定,石蜡包埋切片,免疫组化采用SP法,链霉菌亲生物素蛋白(SP)简化免疫组化试剂盒,由美国ZYMED公司生产,第一抗体见附表。     

大鼠胃促黄体生成素及其受体的免疫组化及原位杂交研究

目的:探讨大鼠胃组织中是否表达促黄体生成素(LH)及其受体(LHR),为进一步研究LH对胃的功能调节提供理论依据.方法:采用免疫组织化学SABC和原位杂交的方法进行研究.结果:在大鼠胃底腺的壁细胞和主细胞呈LH和LHR免疫反应阳性.阳性物质分布于细胞质和细胞膜上.细胞核呈阴性反应.上述细胞同样含有LH和LHR mRNA杂交信号,信号物质亦分布于细胞质内,细胞核呈阴性反应.结论:大鼠胃壁细胞和胃主细胞既能产生LH,又能表达LHR,说明LH对胃壁细胞和胃主细胞功能作用可能是通过旁分泌或自分泌的作用来实现的.     

β-catenin和survivin在大肠癌的表达及其相互作用

目的研究β-catenin和survivin在大肠癌的表达及其意义。方法应用原位杂交和免疫组织化学SP法检测β-catenin和survivin在正常黏膜、非瘤性息肉、腺瘤和大肠癌等4组不同大肠病变组织中的表达情况，分析其间的相互作用关系。结果β-cateninmRNA和蛋白以及survivin蛋白在大肠癌的发生过程中均有异常表达，β-cateninmRNA阳性强度高表达和β-catenin蛋白异位表达正相关，β-catenin蛋白的异位表达与survivin蛋白阳性表达正相关。结论β-catenin和survivin在腺瘤和大肠癌均有高表达，在大肠癌的发病过程中，它们相互作用，最终导致大肠癌的发生和发展。     

GAP—43免疫组化和AChE染色在大鼠坐骨神经损伤和再生实验中的…

采用ＰＡＰ免疫组化和ＡＣｈＥ染色技术对２５只大鼠坐骨神经损伤后不同时间的近段和远段神经的生长相关蛋白（ＧＡＰ－４３）表达和再生情况作了观察，结果显示：（１）坐骨神经切断损伤后产生免疫反应阳性，近段神经以７ｄ组染色最强，远段神经以１４ｄ组最强；（２）神经切断处和近切口处的远段神经ＡＣｈＥ染色有逐渐增强趋势，单位面积阳性纤维数从７ｄ后逐渐增加。根据结果，本对ＧＡＰ－４３的表达规律和ＡＣｈＥ染色的应用     

瘦素及其受体系统在子宫内膜的表达

目的　研究瘦素 (Leptin)及其受体 (Obgenereceptor ,Ob -R)在子宫内膜的表达 ,探讨Leptin对女性生殖的影响。方法　分别用免疫组织化学和原位杂交技术检测Leptin、具信号传导功能的Leptin长受体 (Ob -Rb)在子宫内膜 (39例 ,增殖期 2 4例 ,分泌期 15例 )的表达。结果　 (1)Leptin、Ob -RbmRNA及其蛋白在人的子宫内膜的腺体及间质均呈阳性表达。 (2 )Ob -Rb蛋白在分泌期子宫内膜的表达明显高于增殖期 ,差异有极显著性P <0 0 1)。Leptin蛋白在不同期子宫内膜的表达差异无显著性。 结论　瘦素和瘦素受体系统在孕卵着床和种植过程中可能发挥重要作用。     

抗hAR—N段McAb的制备及其在免疫组化检测中的应用

目的：自行研制抗人雄激素受体（ａｎｄｒｏｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ,ＡＲ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）,以期达到可替代国外ＡＲ多克隆抗体。方法：采用人雄激素受体合成肽（ｈＡＲ－Ｎ）交联钥孔戚血蓝素（ＫＬＨ）为抗原,免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,经用Ｄｏｈｌｅｒ和Ｍｉｌｓｔｅｉｎ杂交瘤技术成功地获得４株能稳定分泌抗ｈＡＲ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株５５,１４１,２０７,２５７。结果：对４５例前列腺癌组织石蜡切     

慢性乙型肝炎肝组织HBsAg和HBcAg的免疫组化检测及其意义

应用PAP和ABC法分别对54例慢性乙肝肝组织中HBaAg和HBcAg进行检测,分析了两种抗原在肝组织中的存在状态与肝脏病理变化及血清HBV复制指标间的关系。发现肝组织中HBV抗原检出率与肝炎病变程度呈负相关(P<0.05)。三种病理类型肝组织中,HBsAg均以胞浆型为主;膜型HBsAg主要见于CAH.ASH和CPH时,HBcAg以核型表达为主,面CAH时以浆膜型为主。膜型HBsAg和浆膜型HBcAg表达区易见到肝细胞坏死及炎性细胞浸润。还发现肝组织中HBcAg的检出与血清HBcAg和HBV-DNA密切相关(P<0.005)。上述结果提示:①肝细胞损伤可能并非HBV直接作用,而是机体针对HBV的免疫反应所致;膜型HBsAg和浆膜型HBcAg可能是肝细胞免疫损伤的靶抗原。②肝组织内HBcAg的存在是HBV复制标志。     

人肾癌组织EGFR和TGF—α的分布及其意义

对肾癌组织的表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）和转化生长因子α（ＴＧＦ－α）的表达及ＥＧＦＲ基因的转录进行研究,方法采用ＬＳＡＢ免疫组化和Ｄｉｇｏｘｉｎ标记原位杂交法,结果显示：４６例肾癌组织ＥＧＦＲ和ＴＧＦ－α的表在阳性率明显高于３８例癌旁对照正常肾脏组织,ＥＧＦＲ为５４．３％和２１．０％,ＴＧＦ－α为３９．１％和１３．２％,差异有显著性（Ｐ〈０．０５）;部分癌组织ＥＧＦＲ和ＴＧＦ－α同时表达;ＥＧＦ     

食管鳞癌中转录信号传导子与激活子3活化及其表达的意义

目的探讨转录信号传导子与激活子3(STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)及STAT3 mRNA表达在食管鳞癌中的可能作用。方法采用免疫组化和原位杂交方法检测60例食管鳞癌组织中STAT3、p-STAT3在蛋白及mRNA水平的表达情况,并与正常食管黏膜组40例进行比较。结果食管鳞癌组组织中STAT3、p-STAT3蛋白和STAT3 mRNA的表达均明显高于正常食管黏膜组(P<0.01);随着细胞的不断活化STAT3呈高表达,STAT3蛋白与p-STAT3蛋白表达具有一致性(r=0.735,P<0.05);STAT3蛋白与STAT3 mRNA的表达存在一致性(r=0.564,P<0.05)。结论 STAT3的持续性活化可能在食管鳞癌发生过程中起一定的作用。     

人雌激素受体BCD区段在大肠杆菌的高效表达及其抗体于乳腺癌？…

目的：获取人雌激素受体（ＥＲ）及其抗体。方法：扩增编码ＥＲＢＣＤ区的基因，在大肠杆菌中表达ＭＳ２－ＥＲ融合蛋白。免疫动物，是抗ＥＲ血清，以此检测５０余例乳腺良、恶生肿瘤的ＥＲ表达，并怀经典检测Ｅ折ＤＣＣ法及进口抗ＥＲ单克隆抗体Ｃ－３１４结果相比较。结果：ＭＳ２－ＥＲ融合蛋白有天然ＥＲ。结构，其抗血清特异针对野生ＥＲ，其ＩＨＣ结果与ＤＣＣ及Ｃ－３１４抗ＥＲ单克隆抗体有高符合率，既具备了ＩＨＣ方法的特     

抗L-HCA单克隆抗体的制备、定性和免疫组化

L-HCA属含硫氨基酸，近几年电生理、药理和化学分析等实验表明，L-HCA可能是中抠神经系统中的兴奋性神经递质或调制物。免疫组织化学等形态学的研究系重要手段之一，但L-HCA系小分子物质，且无种族特异性，不能作为免疫抗原刺激机体产生抗体，本实验将讨论抗L-HCA单克隆抗体的制备、定性和它的免疫组织化学。     

大鼠脾悬液和原位树状突细胞的免疫组化观察

采用 ABC 免疫酶标技术,观察了大鼠脾悬液和原位树状突细胞的 S-100蛋白免疫反应性。结果表明,脾悬液标本中的淋巴树状突细胞(LDC)和脾石蜡切片标本中的交错突细胞(IDC)、滤泡树状突细胞(FDC)均为显示棕黄色反应的 S-100蛋白阳性细胞。结合扫描电镜和透射电镜观察的结果,支持了 LDC 在体内的等同细胞是 IDC 的观点。