C57BL/6小鼠心肺复苏后心肌细胞线粒体自噬及细胞凋亡的相互作用与调节机制的研究

目的:探讨在心搏骤停心肺复苏系统性缺血再灌注损伤过程中,C57BL/6小鼠心室肌细胞线粒体自噬与细胞凋亡之间的相互作用和调控机制。方法:80只健康雄性C57BL/6小鼠应用高钾合并窒息法制备心搏骤停心肺复苏模型。其中6只复苏前组,74只小鼠造模。造模小鼠中有50只自主循环恢复(ROSC),将其随机分为复苏后2、12、24、48h组。应用透射电镜检测心肌细胞线粒体形态;应用Western blot检测线粒体自噬蛋白表达和蛋白磷酸化表达,检测与线粒体相关的细胞凋亡信号通路的蛋白表达和蛋白磷酸化表达。结果:C57BL/6高钾心搏骤停心肺复苏小鼠模型在复苏后48h内线粒体自噬特异性信号蛋白LC3-II表达持续显著增加,启动线粒体自噬的蛋白ULK1表达也持续增加。在复苏后12、24、48hC57BL/6小鼠通过mTOR磷酸化ULK1抑制线粒体自噬过度增加。C57BL/6小鼠在复苏后2、12h凋亡信号caspase-9蛋白活化增加,复苏后24、48h caspase-9蛋白激活逐步减少。心肺复苏后抑制凋亡因子Bcl-2未被明显激活。蛋白细胞色素C(Cyt c)和Smac/Diablo是线粒体释放的促进细胞凋亡的信号。C57BL/6小鼠在复苏后48h内线粒体释放的Smac/Diablo未见显著增加,线粒体释放的Cyt c在复苏后12h达到峰值。结论:免疫功能正常的C57BL/6小鼠心肌细胞在心搏骤停心肺复苏系统性缺血再灌注损伤过程中,激活线粒体自噬,清除受损的线粒体。在复苏后24h抑制线粒体自噬的信号通路也被激活,提示体内的调控机制发挥作用,防止线粒体过度自噬。线粒体释放促进细胞凋亡的信号蛋白Cyt c在复苏后12h达到峰值。Cyt c与procaspase-9/Apaf 1交联,促使caspase-9活化。     

窒息法与室颤法心肺复苏动物模型的比较研究

目的 对比窒息法与室颤法心搏骤停动物模型在心肺复苏过程中生理指标的变化特点及其在顶测自主循环恢复(restoration of spontaneous circulation,ROSC)率、24 h生存率中的作用.方法 60只SD大鼠随机(随机数字法)制作窒息法与室颤法心肺复苏大鼠动物(n=30)模型,持续监测呼气末二氧化碳(PETCO2)、主动脉压、左室压、肢体Ⅱ导联心电图,对比分析这两种模型中以上监测指标在复苏前、按压10 s、按压1 min、按压3 min、ROSC 1 h、ROSC 2 h的变化及其与ROSC率及24 h存活率的关系.结果 PETCO2、主动脉压、左室压及心电图在两种复苏动物模型各有其变化规律.室颤组ROSC大鼠在复苏前、按压1 min与按压3 min时的PETCO2高于Non-ROSC大鼠(P＜0.05),24 h存活大鼠在ROSC 1 h与ROSC 2 h的PETCO2高于24 h死亡大鼠(P＜0.05).而窒息组ROSC及24 h存活大鼠在各时间点的PETCO2与Non-ROSC及24 h死亡大鼠比较差异无统计学意义.室颤组在ROSC 1 h,ROSC2h的dp/dt40与-dp/dt40均低于窒息组(P＜0.05).结论 窒息法与室颤法复苏动物模型各有特点,PETCO2在室颤法心搏骤停模型有助于预判ROSC及24 h生存率.研究者应根据自身的实验目的 以及模拟的不同临床状况对所需的动物模型作出选择.

Abstract：

Objective To compare the changes of physiological parameters after cardiac arrest caused by asphyxia with that of cardiac arrest induced by ventricular fibrillation in rats and assess the values of the parameters on predicting ROSC and 24 h survival rate. Method Two groups of Sprague-Dwaley rats, which randomly (ramdom number) included 30 animals in each group, were investigated. Cardiac arrest were induced by asphyxia (AS group) or ventricular fibrillation(VF group). PETCO2, aortic pressure, left ventricular pressure and ECG of limb lead Ⅱ were recorded continuously, dP/dt4o was calculated with the windaq software. The parameters were compared between the two groups at baseline, precordial compression(PC) 10 s, PC 1 min, PC 3 min, ROSC 1 h and ROSC 2 h. The relations were explored between the parameters and ROSC/24 h survival rate. Results PETCO2,aortic pressure, left ventricular pressure and ECG have distinctive changes in the two groups. In group VF, PETCO2 of ROSC rats at BL, PC 1 min and PC 3 min were higher than those of Non-ROSC rats (P ＜ 0.05); PETCO2of 24 h survival rats at ROSC 1 h and ROSC 2 h were higher than those of 24 h death rats (P ＜ 0.05), which were not observed in the group AS. dP/dt40 and - dP/dt40 at ROSC 1 h and ROSC 2 h in group VF were higher than those in group AS (P ＜ 0.05). Conclusions Physiological parameters after cardiac arrest caused by asphyxia or that of cardiac arrest induced by ventricular fibrillation in rats have unique features respectively. PETCO2 in cardiac arrest caused by ventricular fibrillation may predict ROSC and 24 h survival rate. Researchers have to select the appropriate cardiac arrest model according their research purposes and clinical requirments.     

亚甲蓝在兔窒息性心搏骤停中的治疗探讨

目的 研究亚甲蓝在兔窒息性心搏骤停中的治疗效果.方法 采用兔窒息心肺复苏模型,实验动物分为对照(A)组、亚甲蓝(B)组(复苏时应用亚甲蓝),观察复苏前后肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-8、一氧化氮(NO)、乳酸(LA)的变化,观察动物血压的变化、自主循环恢复率和2 h存活率.结果 窒息动物心肺复苏后,血浆TNF-α、IL-6、IL-8、NO、LA水平明显高于窒息前(P<0.01);复苏后,B组动物血浆中上述物质水平明显低于A组(P<0.01);复苏后,B组动物血压明显高于A组(P<0.01),B组动物的自主循环恢复率、存活率也明显高于A组(P<0.05).结论 亚甲蓝能提高心搏骤停动物自主循环恢复率和存活率,在心搏骤停的抢救治疗中有一定的价值.     

心跳骤停复苏后大鼠肺部炎症因子的变化

目的:建立室颤心脏骤停大鼠模型,探究心肺复苏后大鼠肺部炎症因子的变化。方法:通过右心室交流电致颤法建立未处理8分钟室颤大鼠模型,随机将24只大鼠分为假手术组(Sham组)、复苏后1 h组(ROSC 1h组)、复苏后3 h组(ROSC 3h组)和复苏后6h组(ROSC 6h组)。Sham组不经历心脏骤停和复苏直接取材,另外3组的动物均经历8分钟未处理室颤和6分钟CPR,复苏后分别监测1 h、3 h和6 h后取材。检测4组动物的IL-1α、IL-6和TNF-α。结果:对比于Sham,ROSC 1h的IL-1α、IL-6和TNF-α均显著增高;ROSC 3h组IL-1α、IL-6和TNF-α均显著增高;ROSC 6h的IL-6显著增高。结论:复苏后1h和3h大鼠肺部的炎症因子IL-1α、IL-6和TNF-α均显著增高,复苏后6小时肺部炎症因子IL-1α和TNF-α均回落接近正常水平,而IL-6仍显著增高。     

窒息法致心搏骤停家兔心肺复苏后多器官功能障碍模型的建立方法与评价指标

目的 探讨心搏骤停(CA)复苏后多器官功能障碍综合征(PR-MODS)家兔模型的建立方法和相关评价指标,为CA复苏后综合治疗研究提供具有实用价值的动物模型及评价方法.方法 将35只家兔按随机数字表法分成假手术组(5只)、窒息7 min组(15只)和窒息8min组(15只).以夹闭气管法复制CA模型,心肺复苏(CPR)后观察两个窒息组家兔自主循环恢复(ROSC)率、不同时间点死亡率和全身炎症反应综合征(SIRS)发生率;同时检测两个窒息组家兔复苏前和ROSC后12、24、48血中肌酸激酶同工酶(CK-MB)、丙氨酸转氨酶(ALT)、肌酐(Cr)、血糖(Glu)及动脉血氧分压(PaO2)水平;在ROSC后48 h处死存活家兔,光镜下观察心、脑、肺、肾、肝、小肠等器官的病理学变化;并根据主要器官功能及形态学变化判定是否发生CA后PR-MODS.结果 ①窒息7 min组和8 min组家兔ROSC率分别为100.0％和86.7％(P＞0.05).窒息8 min组家兔6h死亡率明显高于窒息7min组(46.7％比6.7％,P＜0.05),而12 ～ 48 h死亡率仅有升高趋势(均P＞0.05).②ROSC后存活家兔可出现球结膜水肿、呼吸窘迫、血压下降、腹胀和肠鸣音减弱或消失,以及少尿等不同程度器官功能受损的表现.③假手术组家兔未发生SIRS和主要器官功能受损相关指标的变化.两个窒息组家兔在ROSC后12～ 24 h均发生SIRS反应;存活家兔在ROSC后12 h CK-MB(U/L)即较窒息前明显升高(窒息7 min组:786.88±211.84比468.20±149.45,窒息8min组:894.88±248.80比462.11±115.15,均P＜0.05),24 h ALT(U/L)、Cr(,mol/L)、Glu(mmol/L)即明显升高(窒息7 min组ALT:174.25±36.28比50.27±9.37,Cr:144.25±41.64比67.71±16.47,Glu:11.21±1.14比5.59±1.10;窒息8 min组ALT:205.50±10.61比51.13±10.37,Cr:230.50±88.39比65.93±13.81,Glu:11.55±0.35比6.41±1.23,均P＜0.05),48 h PaO2(kPa)即明显下降(窒息7 min组:5.03±0.73比9.07±1.03,P＜ 0.05).④ROSC后存活48 h的家兔(仅窒息7 min组存活4只)主要器官发生明显的病理改变,多表现为炎性细胞浸润、部分细胞变性水肿及坏死、组织出血等病理特征.结论 CA家兔在ROSC后如若出现SIRS和2个或2个以上器官功能障碍的体征、生化指标和非特异性病理改变,可作为评价PR-MODS动物模型的参考指标.     

白细胞介素-1受体拮抗剂对大鼠心肺复苏后脑水肿及MMP-9 mRNA表达的影响

目的 观察重组人白细胞介素-1受体拮抗剂(recombinant human interleukin-1 receptor antagonist,rhIL-1ra)对大鼠心肺复苏后脑水肿及腩组织MMP-9 mRNA表达的影响,探讨心肺复苏后rhIL-1ra的脑保护作用及其机制.方法 健康雄性SD大鼠72只,随机分为假手术组(A组)、生理盐水对照组(B组)和药物干预组(C组),每组各24只.各组均行左侧股动静脉置管及气管捕管,B组和C组用窒息法建立心搏骤停模型并进行心肺复苏,C组复苏即刻及ROSC后4、8、12及18 h给予rhIL-1ra干预,B组以等量生理盐水对照,A组于术后3、6、12及24 h处死留取标本,B组和C组于ROSC后3、6、12及24 h处死.利用干-湿质量法测定脑组织含水量,免疫组织化学染色法检测脑海马区白细胞介素1β(IL-1β)表达水平,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测脑组织基质金属蛋白酶9(MMP-9)mRNA的表达.结果 B组大鼠于ROSC后各观察时间点均出现脑组织IL-1β显著表达,以海马区明显,与A组相比差异具有统计学意义(P＜0.01),且于ROSC后12 h达高峰;各观察时间点脑组织含水量呈上升趋势,于24 h达高峰;MMP-9 mRNA表达较A组显著升高(ROSC 3 h,P＜0.05;ROSC 6、12、24 h,P＜0.01),24 h达高峰,相关性分析显示MMP-9 mRNA表达与IL-1β表达及脑组织含水量变化呈显著正相关(r=0.867,P＜0.01;r=0.800,P＜0.01).与B组相比,C组经药物干预后于ROSC 6、12、24 h各时间点脑组织含水量均较B组显著降低(P＜0.01),MMP-9 mRNA表达水平下降,(ROSC 6 h,P＜0.05;ROSC 12、24 h,P＜0.01).结论 rhIL-1ra能降低心肺复苏后早期脑水肿程度及脑组织MMP-9 mRNA的表达.     

窒息法与室颤法复苏模型心脏损伤的比较研究

目的 对比大鼠窒息法和室颤法心搏骤停模型在复苏后不同时期心脏的损伤及恢复情况.方法 动物模型在中山大学心肺脑复苏研究所病理生理实验室完成;35只SD雄性大鼠随机(随机数字法)分组制作窒息法与室颤法诱导8 min心搏骤停的心肺复苏模型及假手术组,于复苏成功后4、24、72 h行心肌HE染色、心肌线粒体呼吸控制率(RCR)、心脏彩超的比较.计量资料用均数±标准差(-x±s)表示,两组均数比较采用t检验,多组比较采用单因素方差分析,以P＜0.05为差异具有统计学意义.结果 HE染色4h室颤组肌溶解较窒息组明显,72 h二组肌纤维排列紊乱;RCR4h室颤组低于窒息组,24 h恢复且两组间差异无统计学意义;心脏彩超示左室射血分数(LVEF)室颤组4h低于窒息组(29.68％ vs.42.16％,P=0.031),24 h室颤组与假手术组无异,而窒息组72 h方与假手术组间差异无统计学意义,72 h两组左室前壁厚度均较假手术组增加(2.41 mm vs.1.72 mm,P=0.013; 2.61 mmvs.1.72 mm,P=0.007),组间差异无统计学意义.结论 室颤模型在复苏后早期心肌损伤较窒息模型严重;中间期两种模型均有所恢复,且室颤组较窒息组更早恢复;复苏后后期两组均出现代偿性心肌肥厚,心功能差异无统计学意义.     

窒息法致大鼠心脏骤停模型复苏的影响因素

目的 观察心肺复苏（CPR）效果,并探讨窒息时间及CPR时间对大鼠自主循环恢复（ROSC）率和6 h生存率的影响.方法 采用呼气末夹闭气管窒息法,建立大鼠心脏停搏（A）模型.30只Sprague Dawley（SD）大鼠随机分2组,窒息7 min组（n=15）,窒息9min组（n=15）.观察大鼠窒息及心肺复苏期间平均动脉压（MAP）、心电图（ECG）、心率（HR）和动脉血pH值的变化,比较各组的ROSC率和6 h生存率.结果 窒息7 min组ROSC率和6h存活率与窒息9 min组比较,差异无显著性（P＞0.05）;CPR时间＜5 min者6 h生存率显著高于CPR时间＞5 min者（P＜0.05）;存活时间大于6 h者CPR时间与存活时间小于6 h者CPR时间比较有显著性差别（P＜0.05）.结论 该复苏模型制作简单,重复性好,可观察多个指标,能满足心肺复苏实验研究的需要;窒息时间选择应控制在7～9 min以内;CPR时间是预测CPR成功率的重要指标.     

心肺复苏后大鼠肾小管上皮细胞凋亡的实验研究

目的研究心肺复苏后大鼠肾小管上皮细胞的凋亡情况及其可能机制。方法Sprague Dawley雄性大鼠48只,随机分为6组:对照组(假手术组)以及复苏后3、6、12、24、48h组,每组各8只。采用窒息合并冰氯化钾(0·5mol/L)停跳液致大鼠心搏骤停-心肺复苏模型,心搏骤停5min后开始心肺复苏。采用TUNEL法观察复苏后肾小管上皮细胞的凋亡情况,采用免疫组化的方法观察大鼠肾小管上皮细胞Bcl-2、Fas蛋白的表达情况。结果复苏后3h大鼠肾小管上皮细胞就有明显凋亡,之后表达持续增加,至24h达高峰,平均灰度值为(19·75±4·04)%。复苏后3h肾小管上皮细胞Bcl-2有少量表达,其后表达呈上升趋势,48h达到高峰。而Fas复苏后3h呈高表达,与对照组比较(P<0·01),平均灰度值为(47·78±2·18)%,随后持续高表达,至24h达高峰。结论心肺复苏后大鼠存在肾小管上皮细胞凋亡,其中Fas的高表达介导了肾小管上皮细胞凋亡。     

NF-κB信号通路对心肺复苏后大鼠脑AQP-4mRNA表达的调控作用

目的 观察心肺复苏后大鼠脑NF-κB 活性变化对水通道蛋白-4(AQP-4) mRNA表达的影响,探讨心肺复苏后大鼠脑AQP-4 mRNA表达调控的可能机制.方法 雄性Sprague-Dawley大鼠54只,随机分为假手术组(A组,6只)、复苏加生理盐水组(B组,24只)和复苏加吡咯烷二硫代氨基甲酸盐 (pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC) 组(C组,24只),B组和C组又分为自主循环恢复(restoration of spontaneous circulation,ROSC)3、6、12、24 h四个亚组,每个亚组各6只.各组均进行呼吸频率、心率、动脉血压等生命体征监测,应用免疫组织化学染色检测NF-κB活性改变,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测定AQP-4 mRNA的表达变化.结果 B组和C组各亚组的NF-κB 活性和AQP-4 mRNA表达与A组相比均明显增加(P<0.01),B、C两组NF-κB 活性从ROSC后3 h开始便持续升高,至ROSC 24 h达高峰,而AQP-4 mRNA的表达表现为先升高,于ROSC后12 h达顶峰,24 h出现下降.C组各时间点NF-κB 活性和AQP-4 mRNA表达与B组同时间点相比明显下降(P<0.05),且ROSC后的前12 h内的 NF-κB 活性变化与AQP-4 mRNA表达变化呈正相关(r>0.775,P<0.01).结论 心肺复苏后早期大鼠脑NF-κB 活性增加,AQP-4 mRNA表达增强,NF-κB 活化抑制剂PDTC能明显降低AQP-4 mRNA的表达,NF-κB 信号通路的激活在心肺复苏后早期大鼠脑AQP-4 mRNA表达中可能起了重要的调控作用.     

腹部提压法对窒息性心搏骤停猪复苏效果的实验研究

目的 比较胸外按压心肺复苏(CC-CPR)与腹部提压心肺复苏(ALC-CPR)对窒息性心搏骤停猪复苏时血流动力学指标和呼吸指标的影响,初步评价腹部提压法对窒息性心搏骤停猪的复苏效果.方法 健康家猪30只,按随机数字表法分为两组,每组15只.建立窒息性心搏骤停模型,分别实施CC-CPR和ALC-CPR.窒息前10 min开始连续记录心电图(ECG)、脉搏血氧饱和度(SpO2)、呼气末二氧化碳分压(PEICO2)、主动脉收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、中心静脉压(CVP)和潮气量(VT)直至实验结束;计算主动脉平均动脉压(MAP)、冠状动脉灌注压(CPP)和分钟通气量(MV);分别在窒息前10 min、窒息后10 min及复苏后5、10、20 min抽取动脉血查血气.观察两组动物的自主循环恢复(ROSC)率、24 h存活率和24 h后神经功能缺损评分.结果 两组窒息前10 min和窒息后10 min各项指标均无明显差异.复苏后2min,CC-CPR组MAP( mm Hg,1 mm Hg=0.133 kPa)和CPP(mm Hg)高于ALC-CPR组(MAP:43.60±12.91比33.40±6.59,P＜0.05;CPP:21.67±11.28比11.80±4.16,P＜0.01);ALC-CPR组VT(ml)和MV( L/min)高于CC-CPR组(VT:111.67±18.12比56.60±7.76; MV:11.17±1.81比5.54±0.79,均P＜0.01).在复苏后5、10、20 min,ALC-CPR组pH值、动脉血氧分压(PaO2,mm Hg)和动脉血氧饱和度(SaO2)均升高,HCO3-(mmol/L)、剩余碱(BE,mmol/L)均降低,且均高于CC-CPR组(复苏20 min时pH值:7.16±0.16比7.01±0.14; PaO2:82.73±13.20比58.33±17.77;HCO3-:27.71±3.11比21.04±3.62; BE:-4.78±4.30比-10.23±2.12;SaO2:0.893±0.088比0.764±0.122),动脉血二氧化碳分压(PaCO2,mm Hg)、K+(mmol/L)和乳酸(Lac,mmol/L)均明显低于CC-CPR组(复苏20 min时PaCO2:49.40±15.60比79.80±15.35;K+:7.18±1.76比8.55±1.02;Lac:8.17±1.46比10.39±1.92),差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).ALC-CPR组ROSC率、24 h存活率明显高于CC-CPR组(ROSC率:80.0％比26.7％,P＜0.01;24h存活率:60.0％比13.3％,P＜0.05),24 h神经功能评分(分)低于CC-CPR组(1.11±0.33比3.50±0.70,P＜0.01).结论 在窒息性心搏骤停猪的复苏早期,ALC-CPR较CC-CPR更具优势.     

心肺复苏后大鼠脑红蛋白变化及氯化血红素的作用

目的 观察心肺复苏(CPR)后大鼠脑皮质脑红蛋白(NGB)表达、神经功能评分(NDS)、大脑皮质病理的变化及氯化血红素(Hemin)干预的影响.方法 成年雄性SD大鼠120只,随机(随机数字法)分为3组(n=40):对照组(A)、复苏组(B)、药物组(C),建立窒息致大鼠心搏骤停CPR模型,观测大鼠自主循环恢复(ROSC)后各时间点(0.5 h,3 h,6 h,12 h,24 h)NGB表达、NDS及大脑皮质病理改变.实验数据作单因素方差分析,组间比较用Tukey检验.结果 与A组同时间点比较,B组ROSC后12 h,24 h NGB表达显著升高(P＜0.05或P＜0.01),ROSC后各时间点NDS显著降低(P＜0.01)、脑组织形态学明显异常;C组ROSC后6 h,12 h,24 h NGB表达显著升高(P＜0.05或P＜0.01),ROSC后3 h,6 h,12 h NDS显著降低(P＜0.01).与B组同时间点比较,C组ROSC后12 h,24 hNGB表达和NDS均显著升高(P＜0.01),ROSC后脑组织形态学异常明显减轻.结论 大鼠CPR后大脑皮质区NGB表达增加、NDS降低、脑组织形态学明显异常,Hemin能增加大脑皮层NGB表达、提高NDS、减轻皮层病理损伤,具有一定的脑保护作用.     

心肺复苏后猪各主要脏器组织和超微结构的变化及对血流动力学的影响

目的 通过建立心搏骤停室颤-心肺复苏模型,观察心肺复苏后猪心肌、大脑、肺脏、肝脏及肾脏组织普通病理和超微结构的变化及对血流动力学的影响.方法 16头北京长白猪(29～35kg)随机(随机数字法)分为正常组(n=8)与复苏组(n=8).前组动物仅进行麻醉及气管插管,不予致室颤及心肺复苏.后组动物在建立心搏骤停室颤模型4 min后给予标准心肺复苏术,恢复自主循环(ROSC)10 min后以0.5 mL/(h·kg)的速度持续静脉泵入生理盐水直至复苏后6 h,并分别于致颤前,ROSC后0.5 h,2 h,4 h,6 h监测心排血量(CO)、左心室收缩期压力最大上升速率(+dp/dtmax)、左心室舒张期最大下降速率(-dp/dtmax)、心率(HR)、平均动脉压(MAP),两组动物均于复苏6 h后静脉麻醉下处死,速取其左心室心尖、大脑顶叶皮层、左肺、肝右叶、右肾上极组织行普通病理学及透射电镜检查.对实验数据用t检验的方法进行统计学分析.结果 复苏组在ROSC后各时间点,左心室收缩期压力最大上升速率、左心室舒张期最大下降速率、心排血量与致颤前相比均明显降低,差异具有统计学意义(P＜0.05),复苏组ROSC后各时间点HR较致颤前明显增加(P＜0.05),各时间点MAP之间比较差异无统计学意义(P＞0.05);通过对苏木精-伊红(HE)染色切片及透射电镜切片的观察,进行正常组与复苏组动物各主要脏器组织病理学比较,心搏骤停室颤-心肺复苏模型中猪的心肌、大脑、肺脏、肝脏及肾脏组织均存在不同程度的病理损伤,以心肌、大脑、肺脏的损伤更为严重.结论 心搏骤停-心肺复苏对机体各主要脏器均可以造成不同程度的形态学损伤及血流动力学影响,在ROSC成功6 h的模型中,以心肌、大脑及肺的损伤较重,肝、肾的损伤较轻.     

心肺复苏仪对心搏骤停患者心脑缺血性损伤的影响分析

目的:探讨徒手复苏和心肺复苏仪对心搏骤停患者心脑缺血性损伤的影响。方法 :以广东省佛山市第一人民医院急诊科2012年1月至2016年1月收治的心搏骤停患者90例为研究对象,并将其随机分为对照组和研究组各45例,在常规对症治疗基础上,对照组按标准徒手心肺复苏方法进行心肺复苏,研究组采用心肺复苏仪进行心肺复苏,比较两组自主循环恢复(ROSC)后及ROSC24h后血液的神经元特异性烯醇化酶(NSE)、血清S100蛋白质、血清肌钙蛋白I(cTnI)、血清心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)指标。结果:两组患者ROSC后的NSE、S100、cTnI及H-FABP水平均显著高于同期健康组(P0.01),研究组ROSC后24h的NSE、S100、cTnI及H-FABP水平均明显低于对照组(P0.05)。结论 :心肺复苏仪能够确保持续、有力和迅速按压,从而有效减轻和缓解患者的心脑缺血性损伤,有助于促进患者康复。     

全脑缺血-再灌注后大鼠脑神经元中NF-κB的表达

目的 探讨全脑缺血．再灌注后大鼠脑神经细胞中NF-κB的表达。方法 SpragueDawley大鼠28只，雌雄各半，随机分为5组：对照组(假手术组)以及实验组4组(复苏后3、6、12、24h各为一组)，对照组4只，实验组4组每组6只。采用窒息合并冰氯化钾停跳液制作大鼠心跳骤停．心肺复苏模型，停跳5min后开始心肺复苏，采用免疫组织细胞化学方法观察复苏后神经细胞中NF-κB的表达。结果 复苏后6h海马区开始有NF-κB表达，持续至24h，且海马区周围的胶质细胞也有NF-κB表达。结论 NF-κB在大鼠全脑缺血．再灌注后神经细胞中可能具有保护和损伤双重作用。     

大鼠心肺复苏后神经细胞线粒体通透性转换孔的变化

目的 研究大鼠心肺复苏后神经细胞线粒体通透性转换孔(MPTP)的变化规律.方法 建立窒息联合冰氯化钾致大鼠心搏骤停、心肺复苏(CA/CPR)的动物模型,断头后提纯大脑皮层组织内线粒体,采用分光光度法测定线粒体MPTP在不同时相的开放程度.结果 心肺复苏后大鼠神经细胞线粒体功能明显受损,恢复自主循环(ROSC)后神经细胞MPTP持续处于开放状态,开放程度具有时间依赖性,具体表现为在ROSC后6 h以内开放程度保持低水平,6 h以后开始迅速大量开放,直至12 h开放程度达到最大,但并没有一直维持这一水平,而是在ROSC后24 h开放程度略有缩小,表明线粒体开始收缩,至48 h开放程度再次加大,72 h MPTP明显缩小,但未达到正常水平.结论 CA/CPR后大鼠线粒体MPTP出现明显规律性改变,复苏后12 h以内可能是改善复苏后脑功能的最佳治疗窗.     

窒息法和室颤法致猪心脏骤停后肺损伤的研究

目的 通过窒息和室颤的心脏骤停动物模型,对心肺复苏后肺损伤进行对照研究.方法 将近交系五指山小型猪随机(随机数字法)分为窒息组(AS)和室颤组(VF),每组各24只,分别采用阻塞气管插管和程控电刺激诱导方法制模,制模成功后给予标准的心肺复苏至ROSC,分别测量基础状态、ROSC即刻、15 min、30 min、1h、2h、4h和6h的氧合指数(OI)、呼吸指数(RI)、氧输送(DO2)、血乳酸,并监测同一时刻动物的肺顺应性(Cdyn)、气道阻力(Raw)、血管外肺水指数(EVLWI)和肺血管通透性指数(PVPI);于基础状态时和ROSC 4 h时进行肺核素灌注扫描和PET-CT扫描;ROSC后6h将动物处死后取肺组织进行病理及电镜检查,检测组织中Na+-K+-ATP酶、Ca2-ATP酶、SOD、MDA、Bcl-2、Bax及Caspase3蛋白水平及凋亡指数(AI％)等.结果 窒息组的ROSC率和6h生存率均显著低于室颤组(P＜0.01);在肺组织有关酶学及蛋白(Na+-K+-ATPase、Ca2-ATPase、SOD、MDA、AI％、Bax、Bcl-2和Caspase3)检测方面,窒息组重于室颤组,且凋亡现象更严重(P＜0.01);在呼吸力学各个时间点相关指标(OI、RI、DO2、血乳酸、Cdyn、Raw、EVLWI、PVPI)的监测中,窒息组的各项指标的变化较室颤组更明显,在6h后仍未能恢复至基础状态.窒息组和室颤组在肺灌注核素扫描上,无明显的充盈缺损;而在PET-CT扫描上则可见较明显的充盈缺损区.结论 心脏骤停后肺损伤的发生与导致心脏骤停的病因密切相关,窒息明显重于室颤,而心外按压不是导致此类肺损伤的主要原因.     

乌司他丁对改善猪心肺复苏后炎症反应和心肺组织损伤的作用

目的 评价乌司他丁(UTI)对猪心肺复苏(CPR)后炎症反应和心肺组织损伤的保护作用.方法 雌性家猪20只,通过程控刺激法复制心室纤颤(室颤)动物模型,室颤8 min后开始CPR,自主循环恢复(ROSC)的家猪按随机数字表法分为两组,UTI组复苏后即刻给予UTI 100 kU溶于生理盐水5 ml,缓慢注射,3h1次,直到复苏后24 h;对照组复苏后应用生理盐水5 ml作为对照.分别于室颤前基础状态及ROSC后即刻、3、12、24 h抽取家猪静脉血,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1 β (IL-1 β)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)的水平.ROSC后24h处死家猪,留取心、肺组织进行病理及超微结构观察.结果 20只家猪经过8 min室颤后复苏成功15只.UTI组8只和对照组7只存活24 h.复苏后两组炎症因子均逐渐回升,两组间室颤前和ROSC后即刻TNF-α、IL-1 β、ICAM-1和VCAM-1比较差异无统计学意义;UTI组3h起TNF-α (ng/L)、IL-1 β (ng/L)水平明显低于对照组(TNF-α:28.79±9.49比44.01±17.01,IL-1β:153.50±67.47比252.09±80.41,均P＜0.05),12h起ICAM-1(μg/L)、VCAM-1(μg/L)水平明显低于对照组(ICAM-1:11.05±5.11比17.09±5.69,VCAM-1:11.17±4.75比16.62±4.63,均P＜ 0.05).ROSC后24 h时UTI组心、肺组织损伤程度明显轻于对照组.结论 复苏后应用UTI可以明显减轻炎症反应和心肺组织损伤程度.     

心肺复苏后大鼠血清神经元特异性烯醇化酶、S100β蛋白对脑损伤诊断的价值

目的观察大鼠心肺复苏后血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)和S100β蛋白水平变化,确立CPR后脑损伤具有早期诊断价值的生化指标。方法选择成年雄性Sprague-Dawley大鼠50只,采用窒息合并冰氯化钾停跳液制备大鼠心跳骤停-心肺复苏模型。随机分为5组:对照组即假手术组10只,自主循环恢复(ROSC)后6、12、24、48h组各10只。停跳5min后开始心肺复苏,采用双抗体夹心酶联免疫分析法为对照组及ROSC后6、12、24、48h组进行动态观测血清中NSE、S100β蛋白水平变化。结果在ROSC后6、12、24、48h组的血液中NSE、S100β蛋白水平与对照组比较都有显著升高(P<0.05),但指标升高的时间和幅度并不一致。与对照组比较,血清NSE在24h时点、S100β蛋白在6h时点升高水平差异有极其显著性(P<0.01)。结论血清NSE、S100β蛋白水平可作为评价CPR后脑损伤具有早期诊断价值的指标。     

不同窒息时间对心搏骤停家兔心肺复苏后多器官功能障碍发生的影响

目的 探讨不同窒息时间对心搏骤停家兔心肺复苏(CPR)后多器官功能障碍形成的影响,为后续研究建立一种CPR后多器官功能障碍综合征(CPR-MODS)的动物模型提供可行性依据.方法 采用窒息法致家兔心搏骤停,将30只家兔按随机数字表法分成窒息7 min组和窒息8 min组,每组15只.在CPR自主循环恢复(ROSC)后,观察两组家兔ROSC率、不同时间点死亡率和全身炎症反应综合征(SIRS)发生率;同时检测两组家兔复苏前及ROSC后12、24、48 h血清肿瘤坏死因子-a(TNF-a)、心肌肌酸激酶同工酶(CK-MB)、丙氨酸转氨酶(ALT)、肌酐(Cr)、血糖(Glu)水平及动脉血氧分压(PaO2);并计算CPR-MODS的发生率.结果 窒息7 min组CPR时间(s)明显短于窒息8 min组(147.60±22.09比193.08±23.07,P<0.01).窒息7 min组和窒息8 min组ROSC率分别为100.00%和86.67%,差异无统计学意义;两组家兔ROSC后存活24 h以上MODS发生率均为100.00%.窒息7 min组ROSC后6 h死亡率明显低于窒息8 min组(6.67%比46.67%,P<0.05);至48 h时窒息8 min组动物全部死亡.两组家兔ROSC后SIRS发生率均为100.00%.与窒息前比较,两组家兔ROSC后12 h即有TNF-a(ng/L)、CK-MB(U/L)明显升高(TNF-a:窒息7 min组100.71±20.43比49.13±8.64,窒息8 min组118.09±21.90比48.48±6.70;CK-MB:窒息7 min组786.88±211.84比468.20±149.45,窒息8 min组894.88±248.80比462.11±115.15,均P<0.05);ROSC后24 h ALT(U/L)、Glu(mmol/L)明显升高(ALT:窒息7 min组174.25±36.28比50.27±9.37,窒息8 min组205.50±10.61比51.13±10.37;Glu:窒息7 min组11.21±1.14比5.59±1.10,窒息8 min组11.55±0.35比6.41±1.23,均P<0.05);Cr(μmol/L)在窒息8 min组于ROSC 12 h即明显升高(98.83±16.70比65.93±13.81),窒息7 min组于ROSC 24 h明显升高(144.25±41.64比67.71±16.47,均P<0.05);两组PaO2均于ROSC 12 h明显升高,于24 h明显下降.结论 选择窒息7 min更适合建立家兔心搏骤停模型,为后续进一步建立CPR-MODS模型提供了可能性和可行性.

Abstract：

Objective To explore the effects of different asphyxia time on the reproduction of multiply organ dysfunction syndrome in rabbit after cardiopulmonary resuscitation (CPR-MODS) for cardiac arrest,in order to provide a method to reproduce an animal model of CPR-MODS for further research of cardiopulmonary resuscitation (CPR).Methods The rabbit cardiac arrest was caused by asphyxia as a result of clamping the trachea.Thirty rabbits were divided into 7-minute asphyxia group and 8-minute asphyxia group by means of random number table with 15 rabbits in each group.The rate of resumption of spontaneous circulation(ROSC),the mortality at different time points and the occurrence incidence of systemic inflammatory response syndrome (SIRS) of two groups were observed after CPR and the ROSC.The levels of serum tumor necrosis factor-a (TNF-a),myocardial MB-isoenzyme of creatine kinase (CK-MB),alanine aminotransferase (ALT),creatinine (Cr),glucose (Glu) and arterial partial pressure of oxygen (PaO2) before resuscitation and 12,24 and 48 hours after ROSC were measured simultaneously in the two groups.The incidence of CPR-MODS was calculated.Results The CPR time (seconds) in 7-minute asphyxia group was significantly shorter than that in 8-minute asphyxia group(147.60±22.09 vs.193.08±23.07,P<0.01).The ROSC rate of 7-minute asphyxia group and 8-minute asphyxia group was 100.00% and 86.67%,respectively,and there was no significant difference.The incidence of MODS in the rabbits surviving more than 24 hours after ROSC was 1 00% in both groups.The mortality at 6 hours after ROSC in 7-minute asphyxia group was remarkably lower than that of 8-minute asphyxia group(6.67% vs.46.67%,P<0.05).All the rabbits in 8-minute asphyxia group died at 48 hours.The incidence of SIRS after ROSC was 100% in both groups.Compared with that before asphyxiation,the 1evel of serum TNF-a(ng/L)as well as CK-MB(U/L) increased significantly at 12 hours after ROSC in both groups(TNF-a in 7-minute asphyxia group:100.71±20.43 vs.49.13±8.64,in 8-minute asphyxia group:118.09±21.90 vs.48.48±6.70;CK-MB in 7-minute asphyxia group:786.88±211.84 vs.468.20±149.45,in 8-minute asphyxia group:894.88±248.80 vs.462.11±115.15,all P<0.05).There was a significant elevation of ALT (U/L) and Glu (mmol/L) at 24 hours after ROSC (ALT in 7-minute asphyxia group:174.25±36.28 vs.50.27±9.37,in 8-minute asphyxia group:205.50±10.61 vs.51.13±10.37;Glu in 7-minute asphyxia group:11.21±1.14 vs.5.59±1.10,in 8-minute asphyxia group:11.55±0.35 vs.6.41±1.23,all P<0.05).Cr(μmol/L) was significantly higher at 12 hours after ROSC in 8-minute asphyxia group(98.83±16.70 vs.65.93±13.81),while it was elevated at 24 hours in 7-minute asphyxia group (144.25±41.64 vs.67.71±16.47,both P<0.05).PaO2 in both groups was significantly higher at 12 hours after ROSC and significantly decreased at 24 hours.Conclusion The model of cardiac arrest caused by 7 minutes asphyxia provided more possibility and feasibility for the subsequent study of reproducing CPR-MODS model.