醛固酮促进血管紧张素Ⅱ诱导大鼠心脏成纤维细胞合成胶原

为探讨醛固酮对大鼠心脏成纤维细胞血管紧张素Ⅱ 1型受体表达的影响及醛固酮对血管紧张素Ⅱ促进心脏成纤维细胞胶原代谢效应的影响 ,采用3 H 脯氨酸掺入法对体外分离培养的心脏成纤维细胞分别检测醛固酮、血管紧张素Ⅱ以及二者共同作用后对心脏成纤维细胞胶原合成量的影响 ;分别利用放射配体结合实验和半定量逆转录—聚合酶链反应测定经醛固酮处理后细胞血管紧张素Ⅱ 1型受体及其mRNA的表达水平 ,并比较其与对照组间的差异。结果发现血管紧张素Ⅱ (10 -7mol/L)可使心脏成纤维细胞胶原合成量显著增加 (P <0 .0 1) ,醛固酮对心脏成纤维细胞的胶原合成无影响 ,但醛固酮可明显地增强血管紧张素Ⅱ促进心脏成纤维细胞胶原合成的效应 ;经醛固酮 (10 -7mol/L)处理的心脏成纤维细胞血管紧张素Ⅱ 1型受体的表达与对照组比较明显升高 (2倍 ) ,细胞血管紧张素Ⅱ 1型受体mRNA的水平也较对照组显著增加 (1.5倍 )。结果说明醛固酮虽然不能通过直接作用影响心脏成纤维细胞的胶原代谢 ,但它可以通过上调心脏成纤维细胞血管紧张素Ⅱ 1型受体的表达来增强血管紧张素Ⅱ致心脏成纤维细胞胶原合成增多的效应     

松弛素对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠血管外膜成纤维细胞胶原水平的影响

目的:探讨松弛素(RLX)对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的大鼠血管外膜成纤维细胞胶原水平的影响及机制。方法:体外培养大鼠主动脉外膜成纤维细胞,随机分为对照组、AngⅡ组(10-6 mmol/L),RLX组(100μg/L)及AngⅡ+RLX组。采用波形蛋白染色法鉴定血管外膜成纤维细胞,用RT-PCR检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA表达,用Western blot印迹法检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9及转化生长因子(TGF)-β1蛋白的表达。结果:AngⅡ可显著增加培养液上清中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白含量及TGF-β1蛋白表达,而RLX明显抑制AngⅡ的上述作用;AngⅡ可显著下调细胞内MMP-2和MMP-9的蛋白表达,而RLX明显抑制AngⅡ的上述作用(均P<0.05)。结论:AngⅡ可刺激血管外膜成纤维细胞胶原合成增加,而RLX通过上调MMP-2、MMP-9表达和下调TGF-β1表达,抑制AngⅡ刺激的Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白生成,从而发挥抗血管纤维化作用。     

槲皮素对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞的影响

目的研究槲皮素(Que)对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞(CFB)增殖和胶原合成的影响及其作用机制。方法采用酶消化法和差速贴壁法获得纯化的CFB,应用MTT法测定CFB增殖,羟脯氨酸法测定胶原蛋白含量,化学比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)活力含量,实时聚合酶链反应(RT-PCR)检测CFB的Ⅰ型胶原(ColⅠ)、转化生长因子(TGF)-β1基因的mRNA表达。结果槲皮素在10⁴0μmol/L浓度范围内可明显抑制AngⅡ诱导的CFB增殖和胶原蛋白合成增加,同时可升高SOD含量、降低MDA活力,可以降低ColⅠ、TGF-β1蛋白的mRNA表达。结论槲皮素可抑制AngⅡ诱导的CFB增殖和胶原蛋白合成的作用,从而延缓心肌纤维化的发展。     

漆黄素对血管紧张素Ⅱ诱导心肌成纤维细胞活性的影响

目的 探讨漆黄素对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌成纤维细胞活性及白细胞介素33(IL-33)/白细胞介素1受体样分子1(ST2)信号通路的影响.方法 体外培养人心肌成纤维细胞,并将细胞分为对照组、AngⅡ组、漆黄素1组(1.25 μmol/L)、漆黄素2组(2.5 μmol/L)、漆黄素3组(5.0 μmol/L)....     

血管紧张素Ⅱ对大鼠血管外膜成纤维细胞骨桥蛋白表达的影响

目的研究血管紧张素Ⅱ对培养的大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞骨桥蛋白表达的影响。方法大鼠外膜成纤维细胞被随机分为对照组、血管紧张素Ⅱ不同浓度(10-8、10-7、10-6和10-5mol/L)和时间(6h、12h和24h)干预组及血管紧张素Ⅱ加AT1受体拮抗剂氯沙坦和/或AT2受体拮抗剂PD123319干预组,用RT-PCR及Western blotting技术结合光密度扫描分析,观察血管紧张素Ⅱ对培养的大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞骨桥蛋白表达的影响。结果血管紧张素Ⅱ10-6mol/L明显刺激外膜成纤维细胞骨桥蛋白的表达,6h、12h和24h桥蛋白较对照组分别升高65.43%、97.03%和105.11%(P<0.05);而24h阴性对照无明显变化。不同浓度的血管紧张素Ⅱ均可诱导骨桥蛋白表达,10-8、10-7、10-6和10-5mol/L管紧张素Ⅱ孵育后分别升高了70.46%、97.37%、123.10%和147.59%(P<0.01)。在血管紧张素Ⅱ刺激前1h分别加入氯沙坦(10-5mol/L)、PD123319(10mmol/L)、氯沙坦(10-5mol/L) PD123319(10mmol/L),共同孵育12h后,其抑制率分别为58.9%、0.92%和59.7%。Western blotting分析,12h不同剂量血管紧张素Ⅱ干预组(10-8、10-7、10-6和10-5mol/L)骨桥蛋白量较对照组分别提高了50.68%、63.03%和69.86%(P<0.05),氯沙坦明显抑制血管紧张素Ⅱ刺激的骨桥蛋白表达,抑制率达到61.7%(P<0.05),而PD123319作用后抑制作用不明显,抑制率仅为0.85%(P>0.05)。结论血管紧张素Ⅱ能在基因和蛋白水平上刺激大鼠外膜成纤维细胞骨桥蛋白的表达,此作用可能是通过AT1受体介导。     

心肌成纤维细胞在血管紧张素Ⅱ致心脏间质纤维化中的作用

在心脏纤维化过程中，心肌成纤维细胞扮演着重要角色。血管紧张素Ⅱ可增加心肌成纤维细胞合成，分泌整合素、骨桥素等粘附分子，从而诱导细胞外基质蛋白合成，促进间质纤维化。     

血管紧张素Ⅱ对心脏成纤维细胞PTEN基因表达及增殖的影响

目的以AngⅡ刺激乳鼠心脏成纤维细胞（CFC）,观察CFC的增殖情况以及第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因（PTEN）及转化生长因子-β1（TGF-β1）基因表达。方法以AngⅡ（1×10-7mmol/L）刺激分离培养的CFC,以MTT法检测成纤维细胞的增殖情况,以RT-PCR的方法检测PTEN及TGF-β1基因表达。结果MTT测定的结果:32 h后AngⅡ刺激组的吸光值（A）显著高于该时间点对照组（P<0.05）,与正常对照组相比,AngⅡ作用组PTEN基因表达显著下降（P<0.05）,TGF-β1基因显著上调（P<0.05）。结论在AngⅡ的刺激下,CFC的TGF-β1表达上调,抑制PTEN基因表达,并引起细胞增殖。     

心肌梗死大鼠心肌成纤维细胞对血管紧张素Ⅱ的反应性

为了研究梗死心肌成纤维细胞对血管紧张素Ⅱ的反应性 ,应用酶法分离、培养经卡托普利和洛沙坦干预后的成年大鼠梗死心肌成纤维细胞 ,检测在不同处理因素下 ,血管紧张素Ⅱ对培养的成纤维细胞的3H 胸腺嘧啶脱氧核苷、1 4C 尿嘧啶核苷和3H 脯氨酸掺入率的影响。结果发现 ,在相同浓度血管紧张素Ⅱ (10 7mol L)的作用下 ,对照组的成纤维细胞对上述三种底物的掺入率均显著高于假手术组 (P <0 .0 5 ) ;而卡托普利和洛沙坦两干预组分别与假手术组相比 ,均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。血管紧张素Ⅱ的上述作用均不能被血管紧张素Ⅱ 1型受体阻滞剂洛沙坦完全阻断 ,但能被血管紧张素Ⅱ特异性拮抗剂 (1.8血管紧张素Ⅱ和血管紧张素抗肽 )完全阻断。结果提示 ,血管紧张素Ⅱ可直接作用于非梗死区心肌的成纤维细胞 ,促进成纤维细胞的DNA、RNA和蛋白质合成 ;介导血管紧张素Ⅱ对成纤维细胞作用除血管紧张素Ⅱ 1型受体外 ,还有其他因素参与。长期应用卡托普利可显著降低心肌梗死后心肌成纤维细胞对血管紧张素Ⅱ的反应性 ,而洛沙坦只能部分降低成纤维细胞的反应性     

川芎嗪对血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大的影响

目的研究川芎嗪对血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大的影响。方法利用血管紧张素Ⅱ刺激心肌细胞造成细胞肥大,给予不同浓度的川芎嗪进行干预。检测心肌细胞大小、3H-亮氨酸掺入率和β-肌球蛋白重链mR-NA的表达。结果经血管紧张素Ⅱ刺激后在相差显微镜下可见心肌细胞面积变大,3H-亮氨酸掺入率和β-肌球蛋白重链mRNA水平增高。给予不同浓度的川芎嗪后,上述指标随着川芎嗪浓度增加而逐渐下降。结论血管紧张素Ⅱ能够诱导心肌细胞肥大;川芎嗪能够部分抑制血管紧张素Ⅱ所诱导的心肌细胞肥大。     

血管紧张素Ⅱ诱导血管外膜成纤维细胞产生结缔组织生长因子

目的 研究血管外膜成纤维细胞(AF)能否产生结缔组织生长因子(CTGF)，以及血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对CTGF的影响。方法 组织贴片法培养WKY大鼠主动脉AF，经AngⅡ(10^-7～10^-9mol／L)处理，应用免疫细胞化学和Western blot的方法，观察CTGF的表达，及AT1受体阻断剂氯沙坦和AT2型受体阻断剂PD123319干预后的CTGF表达。结果 免疫细胞化学显示AF表达CTGF，AngⅡ可以诱导AF以及其上清液中CTGF表达增加。Western blot显示AngⅡ诱导CTGF表达呈剂量和时间依赖性。10^-7mol／L AngⅡ刺激24h诱导AF产生CTGF作用最强。AngⅡ诱导CTGF表达增加作用可以被氯沙坦阻断，而不受PD123319影响。结论 AngⅡ通过AT1受体诱导CTGF合成。     

血管紧张素Ⅱ诱导血管外膜成纤维细胞产生结缔组织生长因子

目的研究血管外膜成纤维细胞(AF)能否产生结缔组织生长因子(CTGF),以及血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对CTGF的影响.方法组织贴片法培养WKY大鼠主动脉AF,经AngⅡ(10-7～10-9mol/L)处理,应用免疫细胞化学和Western blot的方法,观察CTGF的表达,及AT1受体阻断剂氯沙坦和AT2型受体阻断剂PD123319干预后的CTGF表达.结果免疫细胞化学显示AF表达CTGF,AngⅡ可以诱导AF以及其上清液中CTGF表达增加.Western blot显示AngⅡ诱导CTGF表达呈剂量和时间依赖性.10-7mol/LAngⅡ刺激24 h诱导AF产生CTGF作用最强.AngⅡ诱导CTGF表达增加作用可以被氯沙坦阻断,而不受PDl23319影响.结论AngⅡ通过AT1受体诱导CTGF合成.     

血管紧张素Ⅱ对人肾成纤维细胞的影响

目的：观察血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）对人肾成纤维细胞（ＫＦＢ）的影响。方法：采用ＥＬＩＳＡ法,四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＴ）法、流式细胞仪、免疫组织化学法分别检测ＡｎｇⅡ对ＫＦＢ分泌的胶原酶活性、ＫＦＢ增生、凋亡、Ⅰ型胶原表达的影响。结果;ＡｎｇⅡ能提高ＫＦＢ分泌的总胶原活性、促进味道一、抑制ＫＦＢ凋亡、促进ＫＦＢⅠ型胶原的表达。结论：ＡｎｇⅡ能通过促进ＫＦＢ增生、抑制ＫＦＢ凋亡、促进ＫＦＢⅠ型胶原的表达     

血管紧张素Ⅱ对高血压大鼠心肌成纤维细胞作用研究

目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对自发性高血压大鼠左心室心肌成纤维细胞促生长作用以及可能存在的信号传导途径.方法体外培养心肌成纤维细胞(CFB),分别加入不同浓度Ang Ⅱ、AT1R拮抗剂洛沙坦、酪氨酸蛋白激酶抑制剂(Genistein),测定细胞3H-TdR和3H-Leu掺入率.结果 Ang Ⅱ浓度依赖性促进CFB的3H-TdR和3H-Leu掺入率,洛沙坦可完全抑制该效应,Genistein部分抑制该效应.结论外源性AngⅡ通过CFB的AT1R 对该细胞产生增殖反应,作用的信号传导途径部分是由酪氨酸蛋白激酶系统介导.     

血管紧张素Ⅱ对高血压大鼠心肌成纤维细胞作用研究

目的 研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对自发性高血压大鼠左心室心肌成纤维细胞促生长作用以及可能存在的信号传导途径。方法 体外培养心肌成纤维细胞(CFB)，分别加入不同浓度AngⅡ、AT1R拮抗剂洛沙坦、酪氨酸蛋白激酶抑制剂(Genistein)，测定细胞^3H—TdR和^3H—Leu掺入率。结果 AngⅡ浓度依赖性促进CFB的^3H—TdR和^3H—Leu掺入率，洛沙坦可完全抑制该效应．Genistein部分抑制该效应。结论 外源性AngⅡ通过CFB的AT1R对该细胞产生增殖反应，作用的信号传导途径部分是由酪氨酸蛋白激酶系统介导。     

血管紧张素Ⅱ通过抑制人心房成纤维细胞BKCa通道诱导心房纤维化

目的 探讨在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心房纤维化的过程中,大电导钙激活钾通道(BKCa通道)的作用机制。方法 通过组织块贴壁法获取原代人心房成纤维细胞,使用免疫荧光染色进行鉴定。用浓度为500 nmol/L的AngⅡ处理人心房成纤维细胞24 h,实时荧光定量PCR与蛋白质印迹法用于检测处理前后纤维化标志基因α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原蛋白Ⅰ(collagenⅠ)和胶原蛋白Ⅲ(collagenⅢ),以及BKCa通道的α与β亚基的mRNA和蛋白表达水平,全细胞膜片钳技术检测AngⅡ处理前后的BKCa通道的电流变化。结果 (1)人心房成纤维细胞经AngⅡ处理后,α-SMA、collagenⅠ和collagenⅢ的mRNA和蛋白表达水平升高;(2)经过AngⅡ处理后,BKCa通道α及β亚基mRNA和蛋白表达水平降低;(3)人心房成纤维细胞存在功能正常的BKCa通道,具有电压依赖性;(4)人心房成纤维细胞BKCa通道的宏观电流幅度在经AngⅡ处理后降低;(5)在人心房成纤维细胞上过表达BKCa通道α亚基后,纤维化标志物α-SMA、collagenⅠ和collagenⅢ的表达受到了明显...     

血管紧张素Ⅱ对肾间质成纤维细胞的作用

目的：探讨血管紧张素Ⅱ（Ａｎｇ Ⅱ）在肾间质纤维化过程中的作用机制。　方法：应用ＭＴＴ 比色法检测Ａｎｇ Ⅱ对成纤维细胞的增生,ＲＴＰＣＲ 检测纤溶酶原激活物抑制物（ＰＡＩ１）ｍＲＮＡ 的表达。　结果：Ａｎｇ Ⅱ可促进肾间质成纤维细胞增生及ＰＡＩ１ ｍＲＮＡ 的表达,且氯沙坦（１０ －４ｇ／Ｌ） 可抑制Ａｎｇ Ⅱ的促增生作用。　结论：Ａｎｇ Ⅱ可能通过直接作用于肾间质成纤维细胞,促进其增生,同时抑制细胞外基质的降解而参与肾间质纤维化的过程,而Ａｎｇ Ⅱ受体拮抗剂拮抗Ａｎｇ Ⅱ促细胞增生作用。     

上调PTEN表达对血管紧张素Ⅱ诱导心肌成纤维化细胞增殖迁移的影响

目的探讨上调PTEN表达对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌成纤维化细胞增殖迁移的影响。方法将心肌成纤维化细胞随机分为空白对照组(未处理)、AngⅡ组(加AngⅡ处理)、AngⅡ+NC组(转染pcDNA3.1后,给予AngⅡ处理)和AngⅡ+PTEN组(转染pcDNA3,1-PTEN后,给予AngⅡ处理),采用脂质体2000转染细胞,并经AngⅡ处理后,Western blot检测各组细胞中PTEN蛋白的表达,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞的周期变化,Transwell小室实验检测细胞的迁移能力;ELISA检测胶原蛋白Ⅰ和Ⅲ含量。结果与空白对照组相比,AngⅡ组、AngⅡ+NC组和AngⅡ+PTEN组细胞中PTEN蛋白表达和G0/G1期细胞比例降低,而S期和G2/M期细胞比例、细胞增殖和迁移能力以及胶原蛋白Ⅰ和Ⅲ含量升高;与AngⅡ组相比,AngⅡ+PTEN组细胞中PTEN蛋白表达和G0/G1期细胞比例升高,而S期和G2/M期细胞比例、细胞增殖和迁移能力以及胶原蛋白Ⅰ和Ⅲ含量均降低;AngⅡ组与AngⅡ+NC组间差异无统计学意义。结论 PTEN在AngⅡ诱导心肌成纤维化细胞中表达下降,上调其表达可抑制AngⅡ诱导心肌成纤维化细胞增殖迁移和胶原蛋白的合成。     

心肌成纤维细胞在血管紧张素II致心脏间质纤维化中的作用

在心脏纤维化过程中 ,心肌成纤维细胞扮演着重要角色。血管紧张素 可增加心肌成纤维细胞合成 ,分泌整合素、骨桥素等粘附分子 ,从而诱导细胞外基质蛋白合成 ,促进间质纤维化     

血管紧张素Ⅱ对培养的心脏成纤维细胞胶原代谢和分裂增殖的影响

目的 :探讨血管紧张素 ( Ang )对心脏成纤维细胞 ( cfbs)胶原代谢和分裂增殖的直接影响。方法 :培养 SD大鼠乳鼠 cfbs,测定其胶原合成总量、 型胶原含量及胶原酶活力 ;检测细胞增殖核抗原 ( PCNA)及与增殖相关的 c- m yc基因的表达。结果 :在一定浓度和作用时间下 ,Ang 能显著增加培养细胞胶原合成总量及 型胶原合成量 ;10 - 9～ 10 - 7m ol/ L Ang 均可在 2 4 h后使培养细胞分泌的前胶原酶活性受到抑制 ,Ang 的此种作用可被 saralasin拮抗 ;10 - 8m ol/ L 的 Ang 不促进 PCNA蛋白及 c- m yc基因的表达。结论 :一定浓度和时间作用下 ,Ang 能不同程度地促进胶原合成 ,抑制胶原酶活力 ,使胶原沉积的净效应增加 ,从而加速心肌纤维化。但是Ang 在体外不能促进 cfbs进行有丝分裂