TRAIL及NF-kB在骨肉瘤中的表达及其意义

本文探讨TRAIL及NFkB在骨肉瘤中的表达及其与细胞增殖调控的关系。对16例非化疗骨肉瘤,5例骨巨细胞瘤和6例软骨肉瘤石蜡切片,应用流式细胞术(FCM)定量检测TRAIL及NFkB的表达。结果表明TRAIL和NFkB在骨肉瘤各期间的表达显著高于骨巨细胞瘤和软骨肉瘤(P<0.01);TRAIL和NFkB在骨肉瘤不同分化组间表达无明显差异(P>0.05);TRAIL和NFkB在骨巨细胞瘤和软骨肉瘤间表达无明显差异(P>0.05)。结论是TRAIL在骨肉瘤中高表达,但可能受NFkB高表达的调控,不能诱导细胞凋亡;在骨肉瘤的细胞增殖调控中,NFkB可能通过调控TRAIL诱导的凋亡途径进而抑制细胞凋亡的发生。     

新型骨形态发生蛋白7多肽对骨髓基质干细胞生物学行为的影响

背景:国内外对骨形态发生蛋白7的研究倾向于其在组织工程方面的应用,但是骨形态发生蛋白7除具有很强的骨诱导活性之外,还影响动物生殖系统的生长发育及生理功能,如何在充分发挥其骨诱导活性的同时,避免其他生物学作用,是骨组织工程领域面临的一个难题。目的:观察人工合成的新型骨形态发生蛋白7多肽对骨髓基质干细胞增殖、成骨分化及矿化等生物学行为影响。方法:分离培养大鼠骨髓基质干细胞并用流式细胞仪进行鉴定。将传至第3代的骨髓基质干细胞分为实验组和对照组,实验组在培养基加入终质量浓度为100mg/L的骨形态发生蛋白7多肽,对照组不加多肽。分别在培养的2,4,6,8,10d对各组细胞进行MTT检测,评价其增殖情况;培养7,14d后,通过检测细胞内钙含量和碱性磷酸酶活性评价其成骨分化情况,并进行钙黄绿素染色观察其矿化情况。结果与结论:原代培养大鼠骨髓基质干细胞生长良好,其纯度达到91.5%。细胞增殖实验显示骨髓基质干细胞在实验组和对照组中均增殖良好,差异无显著性意义(P0.05);诱导培养7d和14d后,实验组碱性磷酸酶活性及钙含量显著高于对照组(P0.05),实验组细胞矿化明显强于对照组。实验结果表明新型骨形态发生蛋白7多肽对骨髓基质干细胞增殖没有显著影响,但可以促进其向成骨方向分化及矿化。     

骨巨细胞瘤细胞自噬特征及其对细胞增殖的影响

目的探讨骨巨细胞瘤细胞自噬特征及其对细胞增殖的作用。方法体外培养骨巨细胞瘤细胞(GCT-0404细胞),分别采用血清饥饿、雷帕霉素以及抑制剂氯喹进行处理,Western blot检测自噬相关蛋白LC3、Beclin 1的表达;免疫荧光显示细胞内自噬体的形成;倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化;CCK-8检测细胞的活性。结果血清饥饿、雷帕霉素以及氯喹干预GCT-0404细胞,可使LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转化水平明显增高(P0.05);绿色荧光的斑点增多;而Beclin 1的表达水平无显著变化。同时,干预处理后细胞形态发生了显著变化,并抑制细胞增殖(P0.05)。结论血清饥饿、雷帕霉素以及抑制剂氯喹干预GCT-0404细胞所致自噬的发生及其自噬流的变化可参与对细胞增殖抑制的调控。     

白茅苷抑制AKT 的活化对宫颈癌细胞增殖、凋亡和线粒体膜电位的影响

目的:本文旨在研究白茅苷对宫颈癌细胞增殖、凋亡和线粒体膜电位的影响。方法:采用CCK-8法检测不同剂量白茅苷对宫颈癌SiHa细胞活力的影响,选用无显著毒性的0、25、50、100μmol/L剂量白茅苷将细胞随机分为四组,克隆形成法检测各组细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;逆转录-聚合酶链反应检测Ki67、PCNA、Bcl-2/Bax mRNA水平;流式分选检测细胞线粒体膜电位的变化;蛋白免疫印迹检测AKT磷酸化情况;免疫荧光检测AKT的细胞定位情况。结果:与Imperatorin 0μmol/L组相比较,Imperatorin 50、100μmol/L组细胞增殖率显著降低(P0.05),凋亡率显著升高(P0.05),Ki67、PCNA、Bcl-2/Bax mRNA水平显著降低(P0.05),线粒体膜电位明显降低,p-AKT/AKT比值显著降低(P0.05),荧光表达显著降低(P0.05)。结论:白茅苷通过抑制AKT的活化抑制宫颈癌SiHa细胞增殖,促进细胞凋亡,降低线粒体膜电位。     

布托啡诺抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对卵巢癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的 探讨布托啡诺抑制Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子-κB(NF-κB)信号通路对卵巢癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法 实验分组1:(2.5、5.0、10、20、40、80、160、320)μg/mL布托啡诺处理人卵巢癌细胞A2780,计算细胞半数抑制浓度（IC50）。实验分组2：对照组（正常培养）、布托啡诺组（13.24μg/mL布托啡诺）、布托啡诺+LPS组（13.24μg/mL布托啡诺+1μg/mL LPS）,CCK-8检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Transwell检测细胞侵袭和迁移情况;蛋白质免疫印迹检测细胞中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达情况。结果 细胞IC50为13.24μg/mL。与对照组相比,布托啡诺组细胞OD450水平、迁移和侵袭数量、细胞中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白水平降低（P<0.05）,细胞凋亡率升高（P<0.05）;与布托啡诺组相比,布托啡诺+LPS组细胞OD450水平、迁移和侵袭数量、细胞中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白水平升高（P<0.05）,细胞凋...     

MMS2 和P53 基因对结肠癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨MMS2 siRNA与P53 siRNA对人高分化结肠癌细胞(THC-8307)的增殖与凋亡的相互调控作用。方法:以实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、蛋白印迹法(Western blot)分析检测细胞转染效率,选择沉默效率具有统计学意义的THC-8307细胞作为实验组,同时将未作处理的THC-8307作为空白对照,转染空质粒细胞作为阴性对照。采用qRT-PCR及Western blot分别检测干扰各组目的基因后其两基因相互关系及表达量。采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,以明确其对结肠癌细胞增殖与凋亡的作用。结果:实验组与对照组相比,分别沉默MMS2基因与P53基因的结肠癌细胞内P53与MMS2的mRNA与蛋白水平显著升高(P0.05)。沉默MMS2实验组其早期凋亡与晚期凋亡率增加(P0.05)。结论:MMS2和P53在结肠癌细胞增殖与凋亡方面起反向调控作用。     

右美托咪定对骨巨细胞瘤细胞增殖、侵袭及迁移的影响

目的探究右美托咪定(dexmedetomidine,DEX)对骨巨细胞瘤细胞增殖、侵袭及迁移的影响.方法将细胞分Control、DEX 0.01、0.1及1μmol/L组.BrdU检测细胞增殖,transwell检测细胞侵袭,划痕实验检测细胞迁移,免疫印迹检测Ki67、PCNA、Bcl-2、VEGF、MMP-2、MMP-9、NF-κB p65及其下游蛋白表达水平、p38 MAPK表达及其下游蛋白磷酸化比值.结果与Control组比较,DEX 0.1、1μmol/L组BrdU阳性细胞百分比、侵袭细胞数、划痕闭合率和Ki67、PCNA、Bcl-2、VEGF、MMP-2、MMP-9表达水平显著降低,抑制p38 MAPK、NF-κB信号通路的激活.结论DEX通过调控p38 MAPK及NF-κB表达抑制骨巨细胞瘤细胞增殖、侵袭及迁移.     

乌司他丁对骨水泥颗粒诱导MC3T3-E1鼠前成骨细胞凋亡的干预作用

背景:前期研究发现,乌司他丁对RANKL诱导RAW264.7细胞活化为成熟破骨细胞具有一定的抑制作用,并可降低基质金属蛋白酶9的表达,但其对聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥促成骨细胞凋亡效应是否有干预作用尚不清楚。目的:探讨乌司他丁对骨水泥颗粒诱导MC3T3-E1鼠前成骨细胞凋亡及Ⅰ型胶原、骨钙素、基质金属蛋白酶2 mRNA表达的影响。方法:取第六七代生长状态良好的MC3T3-E1鼠前成骨细胞,分4组培养,骨水泥组加入1 g/L的聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥悬液;高、低剂量乌司他丁组在加入1 g/L的聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥悬液后,再分别加入5 000,500 U/mL的乌司他丁;设置单独培养的细胞为空白对照。MTT法检测细胞增殖活性,茜素红染色检测细胞矿化程度,流式细胞仪检测细胞凋亡率,半定量RT-PCR检测细胞中Ⅰ型胶原、骨钙素、基质金属蛋白酶2 mRNA的表达。结果与结论:与空白对照组比较,骨水泥抑制了MC3T3-E1细胞增殖活性(P0.05),促进了细胞凋亡(P0.05),在加入不同浓度乌司他丁后,细胞增殖活性逐渐增强(P0.05),凋亡率降低(P0.05),且呈剂量时间依赖关系;骨水泥降低了细胞中Ⅰ型胶原、骨钙素表达(P0.05),升高了基质金属蛋白酶2表达(P0.05),在加入5 000 U/mL乌司他丁后,细胞基质金属蛋白酶2表达降低,Ⅰ型胶原、骨钙素表达升高(P0.05)。骨水泥组无矿化结节,其他组均有矿化结节形成。结果表明乌司他丁对骨水泥诱导MC3T3-E1鼠前成骨细胞凋亡具有一定的抑制作用,可促进成骨细胞中Ⅰ型胶原、骨钙素的生成,并降低基质金属蛋白酶2的表达水平。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂罗米地辛对小鼠T细胞表型及功能的影响

目的:通过体外实验观察罗米地辛对效应T细胞和调节性T细胞的作用。方法:取CFSE标记的淋巴细胞、CD4+T细胞和CD8+T细胞作为反应细胞,实验组加入不同浓度梯度(1、3、5μmol/L)的罗米地辛及CD3/CD28单抗进行淋巴细胞培养,以仅加入CD3/CD28单抗作为阳性对照组,另设空白对照组。培养72 h后检测各组细胞的增殖情况。以淋巴细胞作为反应细胞,实验组、阳性对照组及空白对照组设定同上,72 h后检测各组中CD4+Foxp3+T细胞与CD4+T细胞的比例变化。同时采用ELISA检测培养液中相关细胞因子,如TNF-α、IL-10及TGF-β水平的变化。结果:罗米地辛剂量依赖性地抑制CD3/CD28单抗诱导的淋巴细胞、CD4+T细胞和CD8+T细胞的增殖(P0.05)。在CD3/CD28单抗存在的条件下,1μmol/L的罗米地辛不能诱导CD4+Foxp3+T细胞的比例上调(P0.05)。但提高罗米地辛的浓度至3μmol/L和5μmol/L后,CD4+Foxp3+T细胞的比例显著提高(P0.05)。随着罗米地辛浓度的增加,TNF-α和IL-10水平呈剂量依赖性降低,但各实验组明显高于空白对照组而低于阳性对照组(P0.05)。TGF-β在阳性对照组虽稍有升高,但与空白对照组相比无显著差异(P0.05)。而随着罗米地辛浓度的增加,TGF-β水平呈剂量依赖性升高,3实验组间及与空白对照组、阳性对照组间差异显著(P0.05)。结论:体外实验研究显示罗米地辛不仅能够有效抑制效应性T细胞的增殖,而且一定浓度的罗米地辛可上调调节性T细胞的比例,这可能与TGF-β升高有关,而与IL-10变化无关。     

RNA干涉抑制破骨细胞分化因子表达对骨髓基质细胞成骨成脂分化的影响

背景：RNA干涉是目前分子生物学研究领域重要的基因下调技术,护骨素/κB受体活化因子/破骨细胞分化因子偶联系统是目前骨改建平衡研究中的热点。 目的：应用RNA干涉特异性抑制大鼠骨髓基质细胞内破骨细胞分化因子基因的表达,研究破骨细胞分化因子表达下调后对骨髓基质细胞成骨成脂分化的影响。 方法：获取骨髓基质细胞,转染前24 h按5×105/孔接种于6 孔培养板中,分为实验组、阴性对照组和空白对照组,前2组细胞分别转染针对破骨细胞分化因子的siRNA或阴性对照siRNA。观察骨髓基质细胞增殖活性、碱性磷酸酶活性及Real-Time PCR检测成骨成脂基因mRNA的表达。 结果与结论：实验组碱性磷酸酶活性降低,RunX-2,骨形态发生蛋白2,4表达降低,而PPAR-γ和C/EBP-α的表达升高(P < 0.05)。提示,通过RNA干涉使骨髓基质细胞的破骨细胞分化因子表达下调对骨髓基质细胞成骨分化有抑制作用,而对成脂分化有促进作用。     

津力达颗粒预处理对高糖诱导小鼠胰岛微血管内皮细胞和人脐静脉内皮细胞增殖及凋亡的影响

目的:观察中药津力达颗粒预处理对高糖诱导的小鼠胰岛微血管内皮细胞(MS-1)及人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖及凋亡的影响。方法:体外培养MS-1及HUVEC株,均随机分为正常浓度葡萄糖(5.5mmol/L)培养组(正常对照组)、高浓度葡萄糖(33mmol/L)培养组(高糖组)、不同浓度津力达颗粒(12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml、800μg/ml)预处理24h后再高糖培养组(津力达组),各组平行培养48h后收集细胞,MTT法检测细胞增殖水平,流式细胞术检测细胞凋亡,包括总凋亡指数(TAI)和早期凋亡指数(EAI)。结果:与正常对照组比较,高糖组MS-1及HUVEC增殖水平(OD值)下降(P0.01),TAI和EAI升高(P0.01)。与高糖组比较,津力达组MS-1及HUVEC增殖水平随药物浓度增加而升高(P0.01),至津力达浓度800μg/ml时与正常对照组差异无统计学意义(P0.05)。津力达组MS-1和HUVEC的TAI及EAI则随药物浓度增加而降低(P0.01),但尚不能回复至正常对照组水平。结论:中药津力达颗粒升高MS-1及HUVEC增殖水平,降低MS-1及HUVEC的TAI和EAI,从而可能对胰岛功能及血管内皮功能具有一定保护作用。     

异种骨材料浸提液对骨髓间充质干细胞生物学特性的影响

背景：如何在去抗原等处理基础上保留异种骨材料的生物学性能及成骨诱导活性成为研究热点之一。目的：探讨异种骨材料浸提液对骨髓间充质干细胞增殖迁移及成骨分化能力的影响。方法：SD大鼠骨髓间充质干细胞分别用异种骨材料浸提液(实验组)和含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12培养基培养(对照组)。MTT法、Transwell小室法、流式细胞仪检测骨髓间充质干细胞增殖能力、迁移能力、细胞周期变化。取第3代SD大鼠骨髓间充质干细胞,实验组加入成骨诱导分化浸提液,对照组加入成骨诱导分化培养液,培养至第7,14天进行碱性磷酸酶染色,培养第21天进行茜素红染色,观察钙结节形成情况。结果与结论：实验组培养1,3,5,7 d的细胞增殖活性与对照组比较差异无显著性意义(P > 0.05),两组细胞周期差异无显著性意义(P > 0.05)。对照组迁移细胞数显著少于实验组(P < 0.05)。培养第7,14天时实验组碱性磷酸酶水平均显著高于对照组(P < 0.05),成骨诱导第21天进行茜素红染色可见两组均有钙结节形成,实验组钙结节面积更大。结果表明异种骨材料无细胞毒性,具有良好的细胞相容性,可以对骨髓间充质干细胞增殖迁移及定向分化成骨细胞产生有利的促进作用。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

利拉鲁肽联合骨髓间充质干细胞移植对急性肺损伤的保护作用

目的:分析人胰高糖素样肽1类似物利拉鲁肽联合骨髓间充质干细胞移植对急性肺损伤的保护作用。方法:将50只BALB/c小鼠随机分5组,每组10只:正常组尾静脉注射1 ml生理盐水;其余4组均建立急性肺损伤模型,细胞组尾静脉注射1 ml同种异体骨髓间充质干细胞悬液;药物组腹腔注射100μg/kg利拉鲁肽;实验组尾静脉注射1 mL同种异体骨髓间充质干细胞悬液,腹腔注射100μg/kg利拉鲁肽。造模后24 h,获取肺泡灌洗液与双侧肺组织,分别进行炎性细胞因子、肺组织细胞凋亡、肺组织湿干质量比、肺组织病理及肺组织甲状腺转录因子1基因与蛋白检测。结果:同正常组对比,模型组肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6浓度显著升高(P<0.05);细胞组、药物组、实验组肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6浓度均较模型组显著降低(P<0.05),并且实验组上述炎性因子浓度低于细胞组、药物组(P<0.05);正常组凋亡细胞最少,模型组可见大量凋亡细胞,药物组与细胞组凋亡细胞数较模型组明显减少,实验组凋亡细胞较细胞组、药物组进一步减少;模型组肺组织湿干质量比高于正常组(P<0....     

Transwell小室环境下兔成骨样细胞与骨髓基质干细胞的共培养及成骨分化

背景：以往在体外采用地塞米松、生长因子或用成骨样细胞与骨髓间充质干细胞按1∶1混合培养诱导成骨均存在种种局限。 目的：观察在Transwell小室环境下成骨样细胞与骨髓基质干细胞体外共培养及成骨样细胞定向诱导骨髓基质干细胞向成骨细胞分化的可行性。 方法：取第3代乳兔成骨样细胞与第3代兔骨髓基质干细胞接种共培养于Transwell小室内,成骨样细胞接种于培养板底层,骨髓基质干细胞接种于Transwell膜内膜上作为实验组。以骨髓基质干细胞单独接种于Transwell小室内,下层为基础培养液作为对照组。 结果与结论：实验组共培养骨髓基质干细胞明显向成骨细胞分化,细胞碱性磷酸酶活性显著高于对照组(P < 0.05)。实验组骨髓基质干细胞茜素红染色强阳性,可见呈红色结节,经PT-PCR扩增后,可见成骨启动基因核心结合因子α1的表达;对照组未见矿化结节。说明应用Transwell小室可实现成骨样细胞与骨髓基质干细胞体外共培养,并能定向诱导骨髓基质干细胞向成骨细胞分化。关键词：成骨样细胞;Transwell小室;骨髓基质干细胞;共培养;成骨分化;兔 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.19.004     

一氧化氮对鼻咽癌CNE-2细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨外源性NO对CNE-2细胞增殖与凋亡的影响.方法:分别用不同浓度NO供体药物硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)干预CNE-2细胞,观察细胞形态学变化、检测细胞的抑制率及细胞的凋亡和坏死率.结果:SNP以浓度依赖性方式抑制CNE-2细胞增殖,SNP 100,200,400,600,800,1600,3200μmol/L各组细胞抑制率与药物浓度呈正相关;SNP以浓度依赖性方式促进CNE-2细胞凋亡,SNP(1000μmol/L)组细胞凋亡率较SNP(600μmol/L)组显著增高(P<0.05).结论:外源性NO能抑制CNE-2的增殖,促进CNE-2的凋亡,其抑制效应与NO浓度呈正相关.     

厚果崖豆藤提取物抑制NF-κB p65 的活化对三阴性乳腺癌细胞增殖、凋亡和转移的影响

目的:本研究探索厚果崖豆藤提取物MIL对MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖、凋亡和转移的影响。方法:将MDA-MB-231细胞随机分为4组,分别在4组细胞的血清DMEM培养基中加入0、2、4、8μmol/L的MIL继续培养,用CCK8试剂盒检测处理细胞存活率;EDU染色检测细胞增殖状态;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell实验观察细胞侵袭的情况;RT-PCR检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin的表达;免疫印迹法检测NF-κB p65蛋白表达变化;免疫荧光检测p65的细胞核转位情况。结果:MIL对MDA-MB-231细胞有毒性作用,其毒性作用呈一定的剂量关系(P0.05)MIL浓度大于16μmol/L时,细胞存活率显著降低(P0.05);2、4、8μmol/L MIL三个处理组增殖抑制作用较0μmol/L MIL处理组明显(P0.05); 2、4、8μmol/L MIL三个处理组细胞凋亡率较0μmol/L MIL处理组明显升高,但差异无统计学意义;与对照组比较,MIL加药组显著抑制细胞增殖(P0.05);而对细胞凋亡率无显著影响;4μmol/L和8μmol/L两个浓度的MIL对MDA-MB-231细胞侵袭能力有显著的抑制作用(P0.05);与0μmol/L MIL处理组对照组比较,2μmol/L、4μmol/L和8μmol/L MIL处理MIL加药组组Vimentin mRNA的表达均显著降低(P0.05);4μmol/L和8μmol/L MIL两个处理组E-cadherin mRNA的表达均显著升高(P0.05),N-cadherin mRNA的表达均显著降低(P0.05);4μmol/L和8μmol/L MIL两个处理组p65磷酸化水平较0μmol/L MIL处理组显著降低(P0.05)。4μmol/L和8μmol/L两个浓度的MIL明显抑制p65的核转位(P0.05)。结论:MIL通过抑制NF-κB p65的活化有效抑制MDA-MB-231细胞增殖、侵袭能力并促进其发生凋亡,表明MIL对三阴性乳腺癌有缓解作用。     

微小RNA-30d-5p通过葡萄糖调节蛋白78调控骨髓基质细胞成骨分化的机制

目的 探讨微小RNA(miR)-30d-5p对骨髓基质细胞成骨分化和凋亡的影响及其作用机制。方法 将骨髓基质细胞分为miR-30d-5p过表达阴性对照组、miR-30d-5p过表达组、miR-30d-5p抑制阴性对照组和miR-30d-5p抑制组。碱性磷酸酶(ALP)染色鉴定成骨效果，茜素红染色检测钙结节沉淀情况，TUNEL检测凋亡水平。Real-time PCR、Western blotting检测mRNA和蛋白表达水平，生物信息学分析网站Targetscan 7.1预测miR-30d-5p的潜在结合位点。结果 MiR-30d-5p过表达后，细胞成骨分化能力和矿化能力均降低(P<0.05),而细胞凋亡水平升高(P<0.05)。葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和成骨特异性Runt相关转录因子2(RUNX2)蛋白表达均显著降低(P<0.05)。但是，miR-30d-5p抑制剂处理细胞后，细胞成骨分化能力和矿化能力均有提升(P<0.05),细胞凋亡水平降低(P<0.05)。GRP78和RUNX2蛋白水平均升高(P<0.05)。MiR-30d-5p结合位点...     

山慈菇通过PI3K / Akt 信号通路影响乳腺癌MDA-MB-231 细胞的增殖和凋亡

目的:研究山慈菇是否通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路影响乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖和凋亡。方法:将MDA-MB-231细胞分为对照组(C组)、山慈菇组(CAM组)、胰岛素生长因子1组(IGF-1组)、山慈菇+胰岛素生长因子1组(CAM+IGF-1组)。C组不加药物处理,CAM组加入10 mg/ml山慈菇处理,IGF-1组加入100μg/L IGF-1处理,CAM+IGF-1组加入10 mg/ml山慈菇和100μg/L IGF-1共处理。噻唑蓝(MTT)测定细胞增殖,流式细胞仪和Hoechst 33258染色测定细胞凋亡,Western blot法测定细胞活化的半胱天冬氨酸3(Cleaved-Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B-细胞淋巴瘤因子(Bcl-2)、PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、Akt、p-Akt蛋白水平。结果:山慈菇抑制MDA-MB-231细胞增殖呈剂量和时间依赖性。与C组比较,CAM组MDA-MB-231细胞OD值降低(P0.05),细胞凋亡率升高(P0.05),Cleaved-Caspase-3、Bax蛋白水平升高(P0.05),Bcl-2、p-PI3K、p-Akt蛋白水平降低(P0.05);与CAM组比较,CAM+IGF-1组MDA-MB-231细胞OD值升高(P0.05),细胞凋亡率降低(P0.05),Cleaved-Caspase-3、Bax蛋白水平降低(P0.05),Bcl-2、p-PI3K、p-Akt蛋白水平升高(P0.05)。结论:山慈菇抑制乳腺癌细胞增殖、诱导乳腺癌细胞凋亡,其机制可能与山慈菇抑制PI3K/Akt信号通路活化有关。     

荧光染料双染法观察汉防己对胸腺细胞的作用

目的观察防己（Radix Stephaniae Tetrandrae）对小鼠胸腺细胞增殖的影响。方法取昆明种小鼠的胸腺细胞,分为对照组和药物组,药物组用100μg／ml汉防己煎剂对胸腺细胞分别作用1h、6h、12h、24h后,采用DNA荧光染料双染法观察胸腺细胞增殖的影响。结果实验组可见典型凋亡细胞,对照组细胞大小比较均一,无明显形态学变化。随着药物作用时间的延长,凋亡小体的比例显著增加。结论防己可以诱导小鼠胸腺的细胞的凋亡。     

骨膜细胞与髓核细胞共培养向成骨方向的分化

背景：骨膜细胞已被应用于骨缺损及修复,但其可否在成骨诱导环境中与髓核细胞共培养向成骨分化,并应用于椎间隙骨性融合的相关研究报道较少。目的：分离培养髓核细胞与骨膜细胞,观察特定环境下髓核细胞的成骨潜能,以及加入骨膜细胞与其共培养后的成骨能力。方法：Ⅱ型胶原酶消化离心贴壁法分离兔髓核细胞;组织贴壁培养法分离兔骨膜细胞。采用细胞表面抗原CD90、CD105免疫荧光染色法鉴定骨膜细胞,甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组织化学鉴定髓核细胞。实验分为两组：成骨诱导环境单独培养的髓核细胞为对照组,加入骨膜细胞与髓核细胞共培养为实验组。CCK8法检测细胞增殖,分别行碱性磷酸酶、茜素红染色、Ⅰ型胶原免疫组织化学染色进行成骨鉴定,Western blot检测两组细胞成骨诱导后骨桥蛋白的表达。结果与结论：骨膜细胞表面抗原CD90、CD105呈阳性,髓核细胞甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原染色阳性;1,3,5,7,9 d各时间点实验组髓核细胞增殖活性显著高于对照组;诱导2周后2组细胞碱性磷酸酶染色、茜素红染色及Ⅰ型胶原免疫组织化学染色均为阳性,但实验组阳性表达高于对照组(P < 0.05);实验组骨桥蛋白表达强于对照组。髓核细胞具有成骨分化的潜能,但体外的增殖能力较低,加入骨膜细胞后,共培养细胞增殖分化能力提高。成骨诱导下骨膜细胞与髓核细胞共培养具有良好相容性,细胞相互黏附,并具有强于单独诱导髓核细胞的成骨能力。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程