一种体外扩增γδT细胞的新方法

目的:建立一种新的γδT细胞扩增方法。方法:从健康人外周血中分离外周血单个核细胞(PBMCs),与用唑来膦酸预处理过的未成熟DCs按10:1混合,在含IL-2 400 U/ml和10%小牛血清的RPMI1640培养基中培养,用MTT法测定细胞增殖倍数。用流式细胞仪对γδT细胞进行表型分析并检测其细胞内的颗粒酶B、穿孔素和CD107a含量。用乳酸脱氢酶释放法(LDH)检测细胞杀伤活性。结果:经唑来膦酸预处理的树突状细胞与自身外周血单个核细胞共培养,到11天时γδT细胞增殖倍数达到(120±15)倍,第8天和11天γδT细胞百分率分别达到70.26%±3.56%、90.11%±4.67%。γδT细胞细胞内颗粒酶B、穿孔素及CD107a在第8天时分别为81.66%±4.32%、86.62%±5.21%和80.12%±3.78%,均高于对照组。培养的γδT细胞对SGC-7901、SW-1990、SW-480肿瘤细胞株杀伤活性至第8天时达到峰值。结论:此法能有效诱导γδT细胞体外扩增,培养的γδT细胞颗粒酶B、穿孔素及CD107a均显著高于对照组,并有较强的抗肿瘤活性。     

唑来膦酸对骨肉瘤患者PBMCs来源γδT细胞抗骨肉瘤作用的影响

目的 探讨唑来膦酸对骨肉瘤患者外周血单个核细胞(PBMCs)来源γδ T细胞杀伤骨肉瘤作用的影响.方法 使用唑来膦酸联合IL-2体外扩增原发性、复发性和转移性骨肉瘤患者PBMCs来源γδ T细胞,LDH法检测γδ T细胞的杀伤活性,ELISA法检测γδ T细胞分泌IFN-γ情况,并应用不同的抗体确定γδ T细胞识别、杀伤骨肉瘤细胞的途径.建立裸鼠HOS骨肉瘤移植瘤模型,尾静脉分别注射生理盐水、唑来膦酸、γδ T细胞及唑来膦酸联合γδ T细胞,观察并比较不同方法对裸鼠肿瘤生长的抑制作用.结果 骨肉瘤患者PBMCs体外经过唑来膦酸联合IL-2刺激可高度选择性扩增γδ T细胞,并且扩增后的γδ T细胞具有杀伤骨肉瘤细胞的能力.唑来膦酸预处理骨肉瘤细胞后可显著增强γδ T细胞的杀伤活性,γδ T细胞识别、杀伤唑来膦酸预处理骨肉瘤细胞主要通过TCR途径和穿孔素-纤溶酶途径,NKG2D途径和TRAIL途径发挥作用较小.体内实验表明,唑来膦酸联合γδ T细胞治疗对肿瘤生长的抑制作用强烈而持久,显著优于单独唑来膦酸治疗组和单独γδ T细胞治疗组.结论 唑来膦酸能够促进骨肉瘤患者PBMCs来源γδ T细胞的增殖,并能够增强γδ T细胞的抗骨肉瘤作用.     

Gardiquimod增强人γδT细胞杀伤肿瘤细胞的研究

目的研究Toll样受体7激动剂(Gardiquimod)对人γδT细胞杀伤肿瘤作用的影响。方法以异戊烯焦磷酸法扩增人外周血γδT细胞。用不同浓度的Gardiquimod处理γδT细胞和肺癌细胞A549,MTT法检测细胞增殖情况。LDH法检测Gardiquimod处理后γδT细胞对A549的杀伤活性;流式细胞术检测处理前后γδT细胞上CD107a、穿孔素和颗粒酶的表达情况。结果 Gardiquimod在5.0~0.31μg/ml浓度可明显促进γδT细胞增殖,同时抑制A549增殖。Gardiquimod处理γδT细胞后,杀伤A549能力明显增强,且CD107a、颗粒酶及穿孔素的表达显著升高,与对照组相比,有统计学差异(P<0.05)。结论 Gardiquimod通过增高γδT细胞上的CD107a、颗粒酶及穿孔素的表达来增强其杀伤肿瘤作用。     

白桦酯酸对人CIK细胞杀伤胃癌细胞株SGC-7901的功能影响及机制研究

目的 观察白桦酯酸作用前后对人CIK细胞增殖及对胃癌SGC-7901细胞杀伤活性的影响,探讨其发生的机制.方法 分离健康者外周血单个核细胞( PBMC)在体外经多种细胞因子诱导为CIK细胞,收集培养第10天的CIK细胞,给予不同浓度白桦酯酸诱导48 h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测人CIK细胞增殖率;流式细胞术(FCM)检测白桦酯酸作用前后CIK细胞穿孔素(PFP)、颗粒酶B(GrB)、CD107a的表达变化;乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定白桦酯酸对CIK细胞杀伤胃癌细胞株SGC-7901的活性影响;Western blot检测药物诱导前后CIK细胞胞外信号调节激酶(ERK1/2)和接头蛋白76KD含有SH2结构域的白细胞特异性磷酸蛋白(SLP-76)、T细胞活化连接分子(LAT)的表达变化.结果 白桦酯酸浓度在0.08 ～ 10μg/ml时能促进CIK细胞生长;经白桦酯酸诱导后的CIK细胞PFP、GrB、CD107a的表达显著高于对照组(P＜0.05),对胃癌SGC-7901细胞的杀伤活性亦显著高于对照组(P＜0.05);经白桦酯酸作用的CIK细胞,其SLP-76、LAT、ERK1/2的表达不同程度增加,显著高于对照组(P＜0.05).结论 白桦酯酸在一定浓度范围内能够促进CIK细胞增殖,并增强其对胃癌SGC-7901细胞的杀伤活性,其机制可能与活化SLP-76、LAT、ERK1/2,上调CIK细胞表面PFP、GrB、CD107a的表达有关.     

γδT细胞经唑来膦酸刺激后对骨肉瘤细胞的杀伤作用

目的:探讨外周血γδT细胞经唑来膦酸刺激后对骨肉瘤细胞株HOS的体内外杀伤作用及相关机制。方法:取健康人外周血5 mL,经唑来膦酸刺激后,在含IL-2的培养液中,培养14 d。用流式细胞仪测定γδT细胞所占的比例,用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测其对骨肉瘤细胞株HOS的体外杀伤作用,并用抗人γδTCR抗体、抗人NKG2D抗体和穿孔素/颗粒酶阻滞剂CMA分别预处理γδT细胞,观察杀伤作用的变化。另用骨肉瘤细胞株HOS注入BALB/c裸鼠皮下建立骨肉瘤裸鼠种植瘤模型。随机将裸鼠分为2组,分别为未治疗组、γδT细胞治疗组。观察裸鼠瘤体大小及称量瘤重。结果:PBMCs经唑来膦酸刺激14 d后γδT细胞阳性率达到(95±3)%。当效靶细胞比为6∶1、12∶1、25∶1、50∶1时,对HOS细胞的杀伤率分别为26.8%、31.5%、37.8%、40.9%。用Anti-γδTCR抗体、Anti-NKG2D抗体及CMA预处理γδT细胞后,当效靶细胞比为25∶1时,对HOS的杀伤率分别为32.3%、4.7%、16.7%。体内抑瘤实验中,γδT细胞治疗组的肿瘤生长抑制率为42.78%。结论:PBMCs经唑来膦酸刺激后,可获得高纯度的γδT细胞,在体内外其对骨肉瘤细胞株HOS有较强的杀伤作用。     

白藜芦醇对γδT细胞杀伤结肠癌SW-1116细胞的影响及机制研究

目的 观察白藜芦醇作用前后γδT细胞对结肠癌SW-1116细胞杀伤活性的变化,并探讨其发生的机制。方法 异戊烯焦磷酸法体外扩增人外周血γδT细胞,不同浓度的白藜芦醇作用于γδT细胞和结肠癌SW-1116细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测白藜芦醇对γδT细胞及结肠癌细胞的生长的影响;流式细胞术(FCM)检测白藜芦醇作用前后γδT细胞穿孔素、颗粒酶B、CD107a的表达;乳酸脱氢酶( LDH)释放法检测白藜芦醇对γδT细胞杀伤结肠癌SW-1l16细胞活性的影响。Western blot检测药物作用前后γδT细胞细胞外信号调节激酶(ERK1/2)蛋白的活性的变化。结果 白藜芦醇在0.39 ～3.125μmol/L时对γδT细胞的生长具有促进作用,对结肠癌SW-1116细胞作用不明显;经白藜芦醇诱导后γδT细胞的穿孔素、颗粒酶B、CD107a的表达显著高于对照组(P＜0.05);对结肠癌SW-1116细胞的杀伤活性也显著高于未诱导组(P＜0.05);经浓度为0.1～10 μmol/L白藜芦醇作用的γδT细胞的p-ERK1/2表达较对照组增加(P＜0.05)。结论 白藜芦醇能够促进γδT细胞的增殖,并增强其对结肠癌SW-1116细胞的杀伤能力,其机制可能与上调γδT细胞表面的穿孔素、颗粒酶B、CD107a的表达及活化细胞外信号调节激酶等有关。     

唑来膦酸刺激健康人和骨肉瘤PBMCs体外扩增γδT细胞

目的:探讨唑来膦酸(Zol)联合IL-2对健康人和骨肉瘤患者末梢血γδT细胞的扩增和细胞毒性作用的影响。方法:取健康人和骨肉瘤患者外周血来源的单个核细胞,分别使用IL-2和Zol联合IL-2刺激体外扩增,流式细胞技术检测γδT细胞的纯度,并计算其扩增倍数。以Daudi细胞作为阳性对照、Raji细胞为阴性对照,并以人成骨细胞系hFOB细胞作为正常对照,用LDH法检测扩增后γδT细胞的细胞毒活性的变化。结果:健康人和骨肉瘤患者外周血单核细胞经过体外14 d的培养,Zol联合IL-2组可高度选择性扩增γδT细胞,并且扩增后γδT细胞具有杀伤活性,而对正常细胞无杀伤活性。结论:健康人和骨肉瘤患者PBMCs经唑来膦酸联合IL-2刺激后,可获得高纯度具有较强的杀伤作用的γδT细胞。     

水飞蓟宾对γδT细胞杀伤胃癌细胞SGC-7901的影响及其机制初探

探讨水飞蓟宾对人γδT细胞杀伤胃癌细胞SGC-7901的影响及其作用机制。分离健康志愿者外周血单个核细胞,体外经多种细胞因子诱导培养为γδT细胞;收集培养、扩增7d后的γδT细胞,将其用不同浓度的水飞蓟宾诱导24h、48h及72h,CCK-8法检测γδT细胞增殖情况;流式细胞术(FCM)检测γδT穿孔素(perforin,PFP)、细胞颗粒酶B(Granzyme B,Gran B)及CDl07a的表达;western-blot法检测γδT细胞P-ERK1/2、Bcl-2、P-AKT、β-catenin的表达;乳酸脱氢酶(LDH)法检测γδT细胞对胃癌细胞SGC-7901的杀伤活性。结果发现浓度在1.6~100μg/ml的水飞蓟宾作用γδT细胞72h后,γδT细胞增殖率较对照组显著增加(P0.05),且在25μg/ml时达到最高峰;将6.25~100μg/ml水飞蓟宾诱导γδT细胞72h后,γδT细胞的PFP、Gran B及CDl07a的表达以及P-ERK1/2、Bcl-2、P-AKT、β-catenin的表达与对照组比较均不同程度增加(P0.05),且对胃癌细胞SGC-7901的杀伤活性显著增强(P0.05)。以上实验结果提示一定浓度的水飞蓟宾对γδT细胞具有促进增殖作用,其机制可能与激活P-ERK1/2、Bcl-2、P-AKT及β-catenin信号通路有关。一定浓度的水飞蓟宾能够增加γδT细胞对胃癌细胞的杀伤活性,其作用机制可能与水飞蓟宾能够增加γδT细胞的穿孔素、Gran B及CDl07a的表达有关。     

根皮素对人γδT细胞杀伤胃癌SGC-7901细胞的影响及机制探讨

目的:探讨根皮素对人γδT细胞杀伤胃癌SGC-7901细胞的影响及其机制。方法:IPP法扩增人外周血γδT细胞,不同浓度的根皮素作用于γδT细胞及胃癌SGC-7901细胞48小时后,MTT法检测γδT细胞及SGC-7901细胞的生长曲线,FCM检测γδT细胞PFP及GraB的表达;LDH释放法检测γδT细胞对SGC-7901细胞的杀伤活性;Western blot检测γδT细胞中Wnt3a的表达情况。结果:IPP作用10天后,γδT细胞比例由3.12%增加到79.6%。与对照组比较,浓度2.35~18.75μg/ml的根皮素作用后γδT细胞的增殖率显著提高(P<0.05),75μg/ml根皮素对SGC-7901细胞生长抑制率显著提高(P<0.05),且2.35~75μg/ml根皮素作用后的γδT细胞对SGC-7901细胞的杀伤活性明显增强(P<0.05),γδT细胞中PFP、GraB及Wnt3a的表达较对照组显著增加(P<0.05)。结论:根皮素能够增强γδT细胞对SGC-7901细胞的杀伤作用,其机制可能与根皮素促进γδT细胞的增殖,提高γδT细胞PFP、GraB表达及活化Wnt信号通路有关。     

尼美舒利提高γδT细胞杀伤胃癌细胞的机制探讨

目的:探讨尼美舒利对人γδT细胞功能影响。方法:按常规方法培养γδT细胞,收集培养第9天的γδT细胞用不同浓度的尼美舒利(分别为0.25、0.5、1、2、4μmol/L)诱导24 h后收集培养上清液检测细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-12,沉淀细胞流式细胞测定穿孔素、粒酶B和NKG2D,LDH法检测γδT细胞杀伤胃癌细胞活性。结果:经尼美舒利诱导后γδT细胞穿孔素、粒酶B表达量(分别为62.8%和72.7%)明显高于对照组(分别为51.4%和60.9%)P0.05,尤其尼美舒利浓度在1μmol/L时最显著;经尼美舒利诱导后γδT细胞分泌IFN-γ和TNF-α浓度(分别为262.3 ng/L和177.5 ng/L)明显高于对照组(分别为196.1 ng/L和158.5 ng/L)P0.05;分泌的IL-12浓度与对照组比较无明显差异(P0.05)。γδT细胞杀伤胃癌细胞SGC-7901和BCG-823的活性在1μmol/L时最高(分别为73%和70%),明显高于对照组(分别为54%和53%)P0.05。结论:经尼美舒利诱导后γδT细胞的穿孔素、粒酶B含量和γδT细胞杀伤胃癌细胞SGC-7901、BCG-823活性明显高于对照组。其培养上清液中IFN-γ和TNF-α浓度也明显高于对照组。这一结果为临床尼美舒利预防和治疗消化道肿瘤提供了实验依据。     

复方苦参对人末梢血γδT细胞杀伤胃癌细胞株SGC-7901作用的研究

目的探讨复方苦参对人γδT细胞杀伤胃癌细胞株SGC-7901的影响。方法用异戊烯焦磷酸法体外扩增人外周血γδT细胞,用不同浓度的复方苦参诱导γδT细胞SGC-7901细胞株24h,用MTT法检测复方苦参对这两种细胞生长抑制率的影响和LDH法检测γδT细胞的杀伤活性,用流式细胞术检测诱导前后的18T细胞和SGC-7901的凋亡率。结果γδT细胞培养10d时从扩增前4．21％增加到70．35％,CD44达94．0％。不同浓度的复方苦参对SGC-7901细胞株的抑制率（22．3％）均明显高于γδT细胞（-22．4％）,且γδT细胞的抑制率呈负的趋势,当复方苦参的浓度在1／50～1／400时γδT细胞负抑制率呈剂量依赖关系,且经复方苦参诱导24h的γδT细胞杀伤活性（83．6％）明显高于先诱导SGC-7901组（71．2％）,同时经复方苦参诱导24h的18T细胞凋亡率（4．64％）明显低于SGC-7901（49．23％）。结论复方苦参在临床常规使用浓度下,能够促进78T细胞的增殖,同时能够抑制肿瘤细胞的生长,且能够增强γδT细胞的杀伤活性,这一结果将有助于肿瘤的过继免疫治疗及为复方苦参应用于肿瘤治疗提供了临床依据。     

辣椒素对人γδT细胞杀伤人骨肉瘤HOS细胞的影响

探讨辣椒素对人γδT细胞体外增殖及杀伤骨肉瘤细胞的影响及作用机制。分离健康人PBMC,加入到含异戊烯焦磷酸(isopentenyl pyrophosphate,IPP)和IL-2的DMEM-F12完全培养基中诱导培养γδT细胞。不同浓度的辣椒素作用于γδT细胞48h后,CCK-8法检测各药物浓度组γδT细胞的增殖能力,采用流式细胞术检测各组γδT细胞穿孔素、颗粒酶B、CD107a及IFN-γ的表达,用LDH释放法检测各组γδT细胞对骨肉瘤HOS细胞的体外杀伤活性。结果显示,培养7d时各组γδT细胞纯度达到了(85.33±6.07)%。浓度为3.2~50μmol/L的辣椒素能显著促进γδT细胞的增殖,在浓度为25μmol/L时其穿孔素、颗粒酶B、CD107a及IFN-γ的表达均显著高于对照组,且对人骨肉瘤HOS细胞的体外杀伤活性显著增强。以上结果提示辣椒素在体外能通过促进γδT细胞穿孔素、颗粒酶B和IFN-γ的表达上调显著增强其抗骨肉瘤细胞活性。     

雷公藤红素经过TRAIL途径增强γδ T细胞对骨肉瘤细胞株HOS的杀伤作用

目的:探讨雷公藤红素经过TRAIL途径增强γδT细胞对骨肉瘤细胞株HOS的杀伤作用。方法:Western blot检测骨肉瘤细胞株HOS死亡受体(DR)的表达。使用唑来膦酸(ZOL)联合IL-2体外扩增人γδT细胞,LDH法检测γδT细胞对HOS细胞株的杀伤活性。结果:雷公藤红素可促进骨肉瘤细胞株HOS死亡受体DR4和DR5的表达(P0.05)。健康人来源的γδT细胞具有杀伤HOS细胞株的能力(P0.05),经过雷公藤红素(1μmol/L)24 h预处理HOS细胞株,γδT细胞杀伤HOS细胞株的能力增强(P0.05),TRAIL中和抗体可阻断雷公藤红素增强γδT细胞杀伤HOS细胞株的能力(P0.01)。结论:雷公藤红素经过TRAIL途径增强γδT细胞对骨肉瘤细胞株HOS的杀伤作用。     

糖原合酶激酶-3β抑制剂TWS119联合细胞因子促进CD45RA~+CD62L~+γδT细胞分化及功能

目的体外研究糖原合酶激酶-3β抑制剂TWS119联合细胞因子IL-7、IL-15和IL-21对CD45RA~+CD62L~+γδT细胞分化、凋亡及其功能的影响。方法采用帕米磷酸二钠和IL-2体外扩增健康人外周血单个核细胞中的γδT细胞或联合加入IL-7、IL-15、IL-21和TWS119进行诱导培养。采用细胞计数仪和流式细胞仪检测各培养组中γδT细胞的增殖、分化、凋亡、细胞因子分泌及其杀伤肿瘤活性。结果 IL-7、IL-15和IL-21联合TWS119可以促进γδT细胞分化、增殖和抗凋亡能力,尤其在TWS119+IL-7/15/21联合组中,CD45RA~+CD62L~+γδT细胞的比例与数量最高,且该群细胞在体外具有持续的增殖、IFN-γ分泌和杀伤人肝癌HepG2细胞活性。结论在帕米磷酸二钠和IL-2的培养条件下,TWS119体外联合细胞因子IL-7、IL-15和IL-21可以有效扩增CD45RA~+CD62L~+γδT细胞,为后期该群细胞体内抗肿瘤活性研究和临床应用提供依据。     

丙戊酸钠在γδT细胞对肺癌A549细胞免疫中的作用

目的:研究丙戊酸钠(Sodium Valproate,VPA)作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂对肺癌A549细胞MICA蛋白的影响,并探讨丙戊酸钠在人外周血γδT细胞对肺癌A549细胞免疫中的作用.方法:用Ficoll密度梯度离心法分离健康人外周血单核细胞(PBMC),用流式细胞仪分选纯化γδT细胞,用IL-2及唑来磷酸刺激γδT细胞扩增.用不同浓度的丙戊酸钠处理肺癌A549细胞,培养24小时后用PCR及Western blot检测MICA的变化.将分离纯化的γδT细胞与处于对数期生长的肺癌A549细胞混合培养,并加入VPA、MICA抗体处理,24小时后用LDH法检测γδT细胞的细胞毒性.结果:加入VPA后,PCR及Western blot结果显示肺癌A549细胞MICA蛋白在转录及表达上均增强；分离纯化的γδT细胞经体外扩增后,对肺癌A549细胞有较强的细胞毒性作用；加入VPA后γδT细胞对肺癌A549细胞的细胞毒性作用较未加入组增强(P＜0.05).结论:体外扩增的γδT细胞对肺癌A549细胞产生较强的细胞毒性杀伤作用；组蛋白脱乙酰酶抑制剂-丙戊酸钠可上调A549细胞MICA的表达,并增强γδT细胞对肺癌A549细胞的杀伤作用.     

双氢青蒿素对γδT细胞杀伤SW1990细胞的增强作用

目的 探讨双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对人外周血γδT细胞体外增殖及抗肿瘤活性的影响.方法 分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),加入到含异戊烯焦磷酸(isopentenyl pyrophosphate,IPP)和IL-2的RPMI 1640完全培养基中诱导培养γδT细胞.不同浓度的DHA作用于γδT细胞4δ h后,MTT法检测各药物浓度组γδT细胞的增殖能力,采用流式细胞术检测各组γδT细胞穿孔素、颗粒酶B和CD107a的表达,用CCK-8试剂盒检测各组γδT细胞对SW1990细胞的体外杀伤效应.结果 培养8d时各组γδT细胞纯度达到了75.46％ ±5.32％.浓度为50～100μmol/ml的DHA能显著促进γδT细胞的增殖.DHA处理后γδT细胞杀伤胰腺癌SW1990细胞能力及其穿孔素、颗粒酶B和CD107a的表达均显著高于对照组.结论 DHA可增强γδT细胞抗肿瘤活性,其机制可能与其促进γδT细胞穿孔素和颗粒酶B的表达上调有关.     

阿司匹林对人γδT细胞杀伤消化系统肿瘤细胞的影响

目的:探讨阿司匹林对人γδT细胞杀伤消化道肿瘤细胞株的影响.方法:用异戊烯焦磷酸法体外扩增人外周血γδT细胞.用不同浓度的阿司匹林诱导γδT细胞和消化道肿瘤SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116、LOVO细胞株, 用乳酸脱氢酶法测定γδT细胞的杀伤活性, 用流式细胞术(FCM)检测阿司匹林诱导前后的γδT细胞和SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞凋亡百分率.结果:γδT细胞培养10 d时从扩增前4.21%增加到70.35%.阿司匹林0.4～0.8 mmol/L诱导24 h后的γδT细胞对5种肿瘤细胞的杀伤活性最高, 浓度超过3.2 mmol/L时杀伤活性呈下降趋势;SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞经不同浓度的阿司匹林诱导24 h后除药物浓度在0.4 mmol/L时γδT细胞对SW-480、SW-1116和LOVO细胞株的杀伤活性略有增强外, 其他组与对照组比较无明显变化.3.2 mmol/L阿司匹林对γδT细胞诱导24 h的凋亡率(52.71%)明显高于SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞株(分别为7.88%、8.89%、6.21%、4.47%和%3.67).结论:阿司匹林在临床常规使用的药物浓度时可增强γδT细胞杀伤肿瘤细胞作用, 超过这一浓度可明显抑制γδT细胞的增殖能力和杀伤活性及增加γδT细胞的凋亡率, 而对SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞株作用不明显.     

99Tc-亚甲基二膦酸盐对胶原诱导性关节炎大鼠骨侵蚀的治疗作用

目的：观察99锝-亚甲基二膦酸盐(99technetium-methylenediphosphonate,99Tc-MDP)注射液对胶原诱导性关节炎（collagen-induced arthritis, CIA）大鼠模型骨侵蚀的治疗作用,探讨其治疗骨侵蚀的有效作用成分及可能的作用机制。方法：建立CIA大鼠关节炎模型,分为模型组、帕米膦酸二钠组、MDP组和99Tc-MDP组,关节炎指数评价关节肿胀程度;放射学评分评价骨质破坏情况;HE染色观察关节病理组织形态学变化;ELISA检测血清中核因子κB受体活化因子配体（receptor activator of NF-κB ligand,RANKL）、骨保护素（osteoprotegerin,OPG）和Dickkopf-1（DKK-1）的水平。结果：99Tc-MDP组、MDP组、帕米膦酸二钠组关节炎指数评分、骨质破坏评分均低于模型对照组（P＜0.05）;99Tc-MDP组与帕米膦酸二钠组、MDP组相比,差异有统计学意义（P＜0.05）;99Tc-MDP组、MDP组、帕米膦酸二钠组血清OPG水平高于模型组（P＜0.05）,血清RANKL和DKK-1水平低于模型组（P＜0.05）;99Tc-MDP组血清OPG水平高于帕米膦酸二钠组和MDP组（P＜0.01）,RANKL和DKK-1水平低于帕米膦酸二钠组和MDP组（P＜0.01）,但帕米膦酸二钠组和MDP组间差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：99Tc-MDP治疗CIA大鼠骨侵蚀的有效作用成分为99Tc与亚甲基二膦酸盐两者的螯合物,并且是通过促进OPG和抑制RANKL和DKK-1的表达发挥作用的。     

IL-21增强γδT细胞体外抗肿瘤活性的实验研究

探讨IL-21对人外周血γδT细胞抗肿瘤活性的影响。分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),分别在有或无IL-21参与的条件下,加入到含异戊烯焦磷酸(isopentenyl pyrophosphate,IPP)、IL-2或IL-15的RPMI 1640完全培养基中诱导培养γδT细胞。在培养的第10天用台盼蓝染色计数细胞;采用流式细胞术检测各组γδT细胞的纯度及γδT细胞穿孔素、颗粒酶B和CD107a的表达;用CCK-8试剂盒检测γδT细胞对K562细胞的体外杀伤效应。结果显示,不同细胞因子组诱导10d后γδT细胞纯度均达到70%以上,IL-2+IL-21、IL-15+IL-21和IL-2+IL-15+IL-21组与IL-2、IL-15组相比,细胞纯度和扩增倍数没有显著性变化;IL-2+IL-21、IL-15+IL-21和IL-2+IL-15+IL-21组γδT细胞穿孔素、颗粒酶B和CD107a的表达及对K562细胞的杀伤活性均显著高于IL-2、IL-15单独组。以上结果表明,IL-21可通过上调γδT细胞穿孔素和颗粒酶B的表达增强其抗肿瘤活性。     

金丝桃苷增强人γδT细胞增殖及杀伤功能研究

目的:研究金丝桃苷对人γδT细胞增殖及功能的影响。方法:以异戊烯焦磷酸法体外扩增人外周血γδT细胞。用不同浓度的金丝桃苷处理,CCK-8法检测细胞增殖。LDH法检测金丝桃苷对前列腺癌细胞DU-145的杀伤活性。流式细胞仪检测处理前后γδT细胞上穿孔素、颗粒酶、CD107a、IFN-γ的表达情况。结果:异戊烯焦磷法能在体外成功培养出高纯度的γδT细胞。金丝桃苷在μg/ml范围内可显著促进γδT细胞增殖。金丝桃苷作用于γδT细胞后杀伤DU-145的能力明显增强,且在3.13~12.5μg/ml浓度时γδT细胞上颗粒酶、穿孔素、IFN-γ的表达显著升高,与对照组相比有统计学差异。金丝桃苷对γδT细胞上CD107a的表达无明显影响。结论:金丝桃苷通过增强γδT细胞上颗粒酶、穿孔素、IFN-γ的表达来增强其杀伤DU-145的作用。