新型Rho激酶抑制剂WAR5治疗EAE的初步研究

 目的：探讨新型Rho激酶抑制剂WAR5对实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE）的治疗效果及其可能的作用机制。方法：雌性C57BL/6小鼠,随机分为EAE组和WAR5治疗组。EAE模型采用MOG35-55多肽诱导,免疫后第3天起隔天腹腔注射WAR5或生理盐水至第27天,观察并比较临床症状和体重变化。免疫后第28天处死动物,取脊髓进行HE和髓鞘染色,流式细胞术检测脾细胞M1和M2型巨噬细胞表型。提取脑和脊髓组织蛋白,采用Western blotting检测脑和脊髓诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的表达。结果：WAR5治疗能有效推迟临床发病时间,非常显著减轻EAE临床症状。病理检查发现WAR5治疗减少EAE髓鞘脱失和中枢神经系统炎症浸润。同时,WAR5抑制M1型巨噬细胞CD16/32表达,还可增加M2型巨噬细胞CD206表达,并且能够抑制脑和脊髓中iNOS的表达水平。结论：新型Rho激酶抑制剂对EAE有明显的治疗效果,可能与其诱导炎症性M1型巨噬细胞向抗炎性的M2表型转化、从而抑制中枢神经系统的炎症反应有关。     

Rho相关激酶抑制剂Y27632对小鼠腔前卵泡体外发育的作用

目的 探讨Rho相关激酶（ROCK）抑制剂Y27632在小鼠腔前卵泡体外发育中的作用。 方法 取出生12.5 d的小鼠卵巢,机械法收集单枚腔前卵泡,采用超低吸附96孔板模拟3D环境对其进行培养。设置对照组和含有Y27632的实验组,通过形态学观察、卵泡直径的变化、成熟卵泡的数量、成熟卵母细胞纺锤体的变化等来评估卵泡的整体发育情况。采用Real-time PCR技术检测颗粒细胞中卵泡刺激素受体（FSHR）、卵母细胞中骨形态发生蛋白15（BMP15）、生长分化因子9（GDF9）等以及凋亡相关基因（Bad、Bax和Caspase-3）的表达情况,同时,用细胞存活染料检测卵泡发育过程中颗粒细胞的凋亡情况。 结果 ROCK抑制剂Y27632对卵泡直径增长和基本发育指标（存活数、成腔率和成熟率）无明显影响（P>0.05）,但对照组卵母细胞成熟后纺锤体组装出现异常。培养8 d后,与对照组相比,实验组颗粒细胞特异性基因FSHR上调;卵母细胞特异性基因BMP15和GDF9上调,而叉头框O3（FoxO3)下调;凋亡基因Bax、Bad和Caspase3表达下调,实验组卵泡内的颗粒细胞凋亡明显少于对照组。 结论 小鼠卵泡体外发育过程中,ROCK抑制剂Y27632能够抑制颗粒细胞的凋亡,防止卵母细胞纺锤体组装异常,进而提高卵泡体外发育质量。     

补阳还五汤对EAE 小鼠免疫调节的作用

目的:探讨补阳还五汤对实验性自身免疫性脑脊髓炎的抗炎治疗效果和免疫调节机制。方法:雌性C57BL/6小鼠采用MOG35-55 多肽诱导建立EAE 模型后,随机分为生理盐水组、补阳还五汤组,每组13 只。造模的第3 天给药,生理盐水组给予生理盐水25 ml/ kg 灌胃,补阳还五汤组给予补阳还五汤生药量50 g/ kg 灌胃,共治疗25 d。每天记录临床症状评分和体重变化。HE 染色检测脊髓组织炎细胞浸润,髓鞘染色观察髓鞘脱失情况,免疫荧光技术检测脾脏ROCK 表达。流式细胞术检测脾脏CD4+ T 细胞亚群变化。Western blot 法检测脊髓TLR4、Myd88、NF-B、COX-2、ROCK 和脑ROCK 的表达。结果:与生理盐水组比较,补阳还五汤治疗后明显降低EAE 小鼠神经功能评分(P<0.001),抑制中枢神经系统炎细胞浸润(P<0.05),减轻髓鞘脱失(P<0.05),增加CD25+(P<0.05)、IL-10+(P<0.05)、TGF-β+(P<0.01)、IFN-β+(P<0.05)CD4+ T 细胞的比例;抑制外周和中枢ROCK域的表达(P<0.05);减少脊髓TLR4、Myd88、NF-B、COX-2 的表达(P<0.05)。结论:补阳还五汤可以通过抑制ROCK / TLR4/ NF鄄资B 炎性通路和调节外周T 细胞亚群比例发挥其抗炎和免疫调节作用。     

特异性Rho激酶抑制剂防治缺血性疾病的临床进展

探讨特异性Rho激酶抑制剂盐酸法舒地尔防治缺血性疾病的临床进展.     

Rho激酶抑制剂Y-27632对MRL/lpr狼疮小鼠的保护作用北大核心CSCD

目的探讨Rho激酶抑制剂Y-27632对MRL/lpr狼疮小鼠的保护作用机制。方法 MRL/lpr狼疮小鼠20只随机分为MRL/lpr对照组、5 mg/kg Y-27632处理组,每组10只;野生型对照组C57BL/6小鼠10只。采用ELISA检测各组小鼠血清、脾脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,ELISA检测血清核因子κB(NF-κB)相关炎症因子白细胞介素6(IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;采用Western blot法检测各组小鼠脾脏组织中硫氧还蛋白结合蛋白(Txnip)/硫氧还蛋白(Trx)、丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)相关蛋白胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和p38MAPK以及NF-κB的水平;Western blot法检测各组小鼠脾脏T淋巴细胞Txnip、p38MAPK、NF-κB蛋白水平;ELISA检测T淋巴细胞上清液IL-6、IL-1β、TNF-α水平。结果 Y-27632提高MRL/lpr狼疮小鼠血清及脾脏组织SOD水平;降低血清及脾脏组织MDA水平;降低血清、脾脏组织和脾脏T淋巴细胞上清液IL-6、IL-1β、TNF-α水平;抑制脾脏和脾脏T淋巴细胞Txnip、MAPK相关蛋白ERK、JNK和p38MAPK以及NF-κB表达,增加Trx含量。结论 Rho激酶抑制剂Y-27632对MRL/lpr狼疮小鼠有保护作用。     

2-BFI对EAE大鼠的神经保护作用及其免疫调节机制

目的探讨2-（2-苯并呋喃基）-2-咪唑啉[2-（-2-benzofuranyl）-2-imidazoline,2-BFI]干预大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（ EAE）免疫调节机制。方法50只雌性SD大鼠随机分为5组：对照组、EAE组、2-BFI 低剂量组（1．5 mg/kg ）、2-BFI 中剂量组（3 mg/kg ）和2-BFI 高剂量组（6 mg/kg）。采用豚鼠脊髓匀浆（ GPSCH）免疫诱导建立EAE模型。通过观察大鼠行为学变化进行临床症状评分;采用HE染色观察中枢神经系统（ CNS）的炎性浸润;采用免疫组化观察腰髓中激活的星形胶质细胞和小胶质细胞细胞数量;用酶联免疫吸附法（ ELISA ）检测颈髓中IL-1β、IFN-γ、IL-4和IL-10的含量。结果与EAE组比较,大、中、小剂量2-BFI组大鼠EAE发病率下降,临床症状减轻,潜伏期延长,CNS内炎性细胞浸润减少,但仅中剂量3 mg/kg 2-BFI组在EAE临床症状和病理学改变方面差异有统计学意义（P＜0．05）;免疫组化结果显示,与EAE组比较,中剂量2-BFI组的活化的小胶质细胞数量显著减少,活化的星形胶质细胞数量显著增多（P＜0．05）;组织ELISA结果显示,与EAE组比较,2-BFI干预后,脊髓中的IL-1β、IFN-γ下降, IL-4和IL-10水平上升,中剂量2-BFI 组最为显著（ P＜0．05）。结论中剂量2-BFI对EAE大鼠具有神经保护作用,其作用机制可能与免疫调节作用有关。     

Rho激酶抑制剂Y-27632部分预防烧伤血清诱导的内皮屏障功能损害

目的 :观察大鼠烧伤血清对内皮屏障功能的影响及Rho激酶特异抑制剂Y - 2 76 32的作用。方法 :原代培养的大鼠皮肤微血管内皮细胞按实验分组分别用大鼠对照血清、烧伤血清、Y - 2 76 32单独处理或联合处理。用扫描电镜观察细胞表面超微结构 ,罗丹明 -鬼笔毒环肽荧光染色观察肌动蛋白细胞骨架的改变。通过检测荧光标记白蛋白透过内皮单层的通量分析内皮单层通透性 ,以通透系数Pa表示。结果 :正常内皮细胞生长良好 ,表面有许多凹陷和微绒毛 ,细胞侧面的突起细而长 ,与相邻细胞侧面的小突起相互融合 ,紧密连接。烧伤血清刺激 6h ,细胞表面微绒毛被波浪状皱纹取代 ,细胞侧面突起变短 ,细胞间出现缝隙。正常内皮细胞F -actin主要分布在细胞周边 ,形成周边肌动蛋白丝带 ,在融合的内皮细胞单层 ,周边肌动蛋白丝带相互连接成网状。烧伤血清刺激后 ,肌动蛋白细胞骨架重组 ,出现应力纤维 ,同时周边肌动蛋白丝带模糊 ,内皮单层对白蛋白通透性增高。烧伤血清刺激 6h后 ,加Y - 2 76 32孵育 4 5min ,细胞表面微绒毛与波浪状皱纹并存 ,细胞侧面突起细长 ,与相邻细胞相互融合 ,连接紧密。周边肌动蛋白丝带清晰 ,应力纤维消失。内皮单层Pa值虽较单纯烧伤组低 14 16 % ,但P >0 0 5。细胞用Y - 2 76 32预处理 1h后再用烧伤     

磷酸二酯酶抑制剂的免疫调节和抗炎作用

氨茶碱和选择性磷酸二酯酶（ＰＤＥ）抑制剂具有广泛的免疫调节作用，能够抑制多种炎性细胞的激活和炎性介质的释放，抑制淋巴细胞增殖和嗜酸细胞聚集，降低气道反应性等，有必要对茶碱类在哮喘治疗中的作用和地位给予重新评价，选择性ＰＤＥⅣ抑制剂可望成为新一代的抗炎药物     

Rho激酶抑制剂Y-27632干预大鼠骨髓间充质干细胞增殖及细胞周期的变化

背景：Rho激酶抑制剂可以调节细胞骨架重构,激活转录因子,促进细胞增殖和分化。 目的：观察Rho激酶抑制剂Y-27632对大鼠骨髓间充质干细胞分裂增殖和细胞周期的影响。 方法：采用贴壁细胞培养法体外分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,并传代。取生长状态良好的第2代骨髓间充质干细胞分组：实验组加入10 µmol/L Rho激酶抑制剂Y-27632,对照组正常培养。 结果与结论：①骨髓间充质干细胞增殖：细胞生长曲线呈“S”型,Rho激酶抑制剂Y-27632作用后,3 d左右进入平台期,细胞生长加速,生长曲线上移。②骨髓间充质干细胞的细胞周期：对照组G0/G1期细胞比例为(80.640±5.516)%,S期细胞比例为(13.397±2.511)%;实验组G0/G1期细胞比例为(61.723±8.829)%,S期细胞比例为(29.380±7.630)%,实验组S期细胞比例高于对照组(P < 0.05)。表明Rho激酶抑制剂Y-27632可以促进骨髓间充质干细胞DNA的合成,促进细胞分裂和增殖。关键词：细胞周期;增殖;骨髓间充质干细胞;Rho激酶抑制剂;分离培养; 大鼠 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.19.007     

酪氨酸蛋白激酶抑制剂的研究进展

酪氨酸蛋白激酶 (PTK)广泛存在于细胞的各种生理过程中 ,是主要与细胞的生长增殖和分化有关的信号途径。因此 ,PTK抑制剂具有广泛的多样的生物效应 ,本文回顾了近年来对 PTK抑制剂的研究进展 :新型 PTK抑制剂的结构活性关系 ;PTK抑制剂对肿瘤细胞和正常细胞的影响     

AdCTLA-4Ig对EAE的免疫治疗作用

目的 验证AdCTLA-4Ig对EAE免疫反应的抑制作用及其免疫机制,为AdCTLA-4Ig用于治疗MS奠定实验基础.方法用AdCTLA4Ig通过侧脑室注射到Wistar大鼠EAE模型体内,观察其对EAE发病情况、病理改变及免疫反应的抑制情况.结果 CTLA-4治疗组发病率降低,临床评分降低,发病时间延长.结论 AdCTLA4Ig可抑制EAE大鼠的发病、减轻免疫炎性反应.     

新型酪氨酸激酶抑制剂XCF-43b体外抗血管新生研究

目的 探究XCF-43b 体外抗血管新生机理.方法 鸡胚尿囊膜(CAM)检测化合物抑制血管新生能力,MTT检测其对HUVEC细胞增殖影响,划痕实验和微管形成实验检测化合物对HUVEC迁移和微管形成的影响,Western印迹检测VEGFR2信号通路相关蛋白表达情况.结果 XCF-43b能够抑制CAM血管新生,抑制HUVEC细胞增殖的IC50为(28.42±7.23) μmol/L,对在VEGF刺激下的HUVEC的IC50值为(9.03±1.28) μmol/L,此外,2.5 μmol/L的XCF-43b能够抑制HUVEC细胞的迁移和微管形成;且能够抑制VEGFR2及其下游信号因子的激活.结论 XCF-43b通过抑制VEGFR2信号通路来抑制血管新生.     

Rho GTP酶对肌动蛋白细胞骨架的作用

在所有真核细胞中 ,肌动蛋白细胞骨架介导了许多必需的生物学功能。除提供确定细胞形状和极性所必需的结构框架外 ,肌动蛋白细胞骨架尤其是其动力学变化还与细胞的运动、分裂、粘附以及吞噬等过程密切相关。RhoGTP酶家族是一类参与众多细胞信号转导通路的重要蛋白 ,其家组成员是联系膜表面受体与肌动蛋白细胞骨架的关键调节分子 ,起着分子开关的作用。反应于细胞外信号它们诱导肌动蛋白细胞骨架组织的相应改变 ,以引发大量生物学反应包括 :形态形成、趋化作用及轴突的定向。     

MicroRNA对宿主免疫调节作用的研究进展

microRNA是一类利用RNA干扰方式调节靶基因表达的小分子RNA,是一种重要的免疫调控机制。一些microRNA选择性高表达于免疫细胞中,如miR-17-92簇、miR-155、miR-150、miR-181、miR-223、miR-9和miR-146a等。这些microRNA在髓样细胞(myeloid cell)和淋巴样细胞(lymphoid cell)的成熟、增殖、分化和活化中发挥重要的正/负调控作用。     

穿孔素的免疫调节作用

穿孔素 (Perforin)是存在于CTL、NK细胞杀伤颗粒中的细胞毒性蛋白 ,在保护机体抗胞内病原体如细菌、病毒、寄生虫感染、抗肿瘤和同种排斥应答中起重要作用 ,是免疫系统重要的效应分子。近年来随着FHL病因的阐明 ,逐渐发现穿孔素也是一种重要的免疫调节分子。本文综述了穿孔素在病毒感染、肿瘤免疫、自身免疫病及GVHD中的调节作用 ,以及穿孔素免疫调节的作用机制。     

干扰素的免疫调节作用

干扰素是由有关生物细胞在干扰素诱生剂作用下产生的一类诱生蛋白。国际干扰素命名委员会将其分为三种:α干扰素(IFN-α)、β干扰素(1FN-β)和γ-干扰素(1FN-γ)。根据氨基酸顺序的不同,又分为若干亚型:人α-干扰素至少有20个亚型,β干扰素有4个亚型,γ-干扰素可能也有4个亚型。     

补体的免疫调节作用

补体系统至少由20种血清蛋白所组成其在特异性及非特异性免疫中的作用已有详细的论述.近年来,免疫调节已引起人们的日益重视,本文仅就补体的免疫调节作用从以下二大方面作一小结.     

生长抑素的免疫调节作用

生长抑素是一种抑制性神经肽 ,同时又具有免疫调节功能 ,是神经内分泌免疫网络中重要的信号传导分子。它降低淋巴细胞活性 ,影响细胞因子分泌 ,调节T细胞分化和功能及具有抗炎、抗增殖作用。