苯并(a)芘对不同时相人胚肺成纤维细胞阻滞作用

目的 研究低遗传损伤浓度苯并(a)芘(BaP)对人胚肺成纤维细胞(HELF)的细胞周期调控的影响.方法 0.5%血清饥饿法及10%血清再刺激方法获得处于各细胞周期时相的HELF;分别以二甲基亚砜(DMSO)、2,10和50μmol/L BaP于血清再刺激后10~12,16~18和22~24 h作用HELF2 h;采用流式细胞术分析细胞周期分布;采用蛋白印迹法分析细胞周期调控蛋白Cyclin D、Cyclin E、Cyclin A、Cyclin B、P53、P21和P16表达.结果 BaP针对血清再刺激后10~12,16~18和22~24 h作用均引起明显的S期细胞比例的下降;血清再刺激后10~12 h作用引起G0/G1期细胞比例增加,BaP低、中、高浓度组分别为36.79%,42.73%,43.28%,伴随Cyclin D表达明显下降;血清再刺激后16~18 h作用引起G2/M期细胞比例增加,BaP低、中、高浓度组分别为18.46%,23.55%,28.44%,伴随P53和P21表达增强;血清再刺激后22~24 h作用引起G0/G1期细胞比例增加,BaP低、中、高浓度组分别为38.92%,54.08%,51.69%,伴随P53和P21表达增强.结论 BaP针对不同时相的HELF作用顺序激活了G1和G2 2种周期关卡监控机制,并产生相应的周期阻滞效应.     

苯并(a)芘对雄性小鼠睾丸细胞周期的影响

目的研究苯并(a)芘对雄性小鼠睾丸细胞周期的影响.方法采用流式细胞术研究雄性小鼠睾丸细胞周期.结果不同剂量的苯并(a)芘可以使睾丸细胞各时相的细胞百分数发生变化,随着苯并(a)芘染毒剂量的增加,G0/G1、S时相的细胞百分数明显减少,5,10,20 mg/kg各剂量染毒组与阴性对照组比较差异具有显著性(P＜0.01).G2/M时相的细胞百分数逐渐增多,各剂量组与阴性对照组比较具有显著性差异(P＜0.01).结论苯并(a)芘可以抑制睾丸细胞的DNA合成,引起G2期细胞阻滞,使细胞有丝分裂延迟.     

苯并(a)芘对体外培养人胚肺成纤维细胞活力的影响

目的研究苯并（a）芘[B（a）P]对体外培养的人胚肺成纤维细胞（HELF）活力的影响。方法不同浓度B（a）P、不同染毒时间处理HELF细胞。低浓度染毒组分为10个剂量组,浓度梯度为10.000、5.000、2.500、1.250、0.625、0.313、0.156、0.078、0.039、0.018μmol/L,染毒时间分别为2、4、6、24h;高浓度染毒组分为4个剂量组,浓度梯度为125.0、62.5、31.3、15.6μmol/L,染毒时间分别为2、4、6、24、48、72h;以浓度为0.25%DMSO的无血清DMEM高糖培养基溶液为阴性对照组,应用四甲基偶氮噻唑蓝微量酶反应比色法（MTT法）研究B（a）P对HELF细胞活力的影响。结果与阴性对照组比较,0.018～10.000μmol/L低剂量B（a）P染毒组在所有时间点上对HELF的细胞活力无影响（P〉0.05）。15.6～125.0μmol/LB（a）P染毒HELF细胞,2、4h后对HELF细胞活力无影响。125.0μmol/LB（a）P染毒6h,125.0、62.5、31.3μmol/LB（a）P染毒24、48h,以及15.6～125.0μmol/L染毒72h对HELF细胞活力存在显著抑制作用（P〈0.05）。结论B（a）P对HELF细胞活力的影响存在显著的时间与剂量依赖性。     

Cyelin D1和CDK4正性调节苯并(a)芘所致人胚肺成纤维细胞周期改变

目的 研究苯并(a)芘[B(a)P]对人胚肺成纤维细胞(HELF)的细胞周期分布及细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)蛋白表达的影响,并探讨两种蛋白含量改变与细胞周期效应之间的关系.方法 将反义cychn D1质粒和反义CDK4质粒导入HELF细胞内.建立两种质粒稳定转染的细胞模型.用0.1、0.5、2.5和12.5μmol/L的B(a)P处理HELF细胞24h.用蛋白印迹方法检测cvclin D1和CDK4蛋白表达水平;利用流式细胞技术检测B(a)P处理对HELF细胞及两种稳定转染细胞系细胞周期的影响.结果 成功建立了反义cyelin D1和反义CDK4稳定转染的细胞系.不同剂量B(a)P处理可引起cvclin D1蛋白表达的显著增加,但对CDK4蛋白表达无明显影响;2.5/μmol/L的B(a)P处理HELF细胞24h后,引起其细胞周期G1期显著下降,S期显著增加;2.5μmol/L的B(a)P处理反义cyclin D1和反义CDK4稳定转染的HELF细胞24h后,对其细胞周期的分布无显著影响.结论 Cyelin D1和CDK4基因均参与了B(a)P所致细胞周期改变过程,并发挥正性调节作用.     

DNA修复抑制状态下苯并(a)芘对人胚肺成纤维细胞的DNA损伤作用

目的研究DNA修复抑制状态下苯并(a)芘[B(a)P]对人胚肺成纤维细胞(HELF)的DNA损伤情况,探讨DNA修复机制在外源性化学致癌物诱导真核细胞DNA损伤中的作用。方法代谢活化条件下,以阿糖胞苷(ara-C,0、100μmol/L)与B(a)P(0、10、20、50μmol/L)按2×4联合染毒2h,通过彗星试验观察不同染毒条件下HELF细胞的DNA损伤情况。同时设阴性对照组(0.1%DMSO)和阳性对照组(10μmol/LK2CrO7)。结果与阴性对照组比较,B(a)P各剂量组的HELF的拖尾率、Olive尾矩随剂量增加而显著升高,差异有统计学意义(P<0.01)。100μmol/Lara-C单独染毒组与阴性对照组比较,拖尾率、Olive尾矩升高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。B(a)P ara-C组与相应剂量的B(a)P组比较,其拖尾率、Olive尾矩升高,差异有统计学意义(P<0.01)。析因分析表明,ara-C与B(a)P诱导HELF的DNA损伤存在交互作用(F=3.219,P=0.024)。ara-C可增强B(a)P对HELF的DNA损伤作用。结论DNA修复抑制在外源性化学致癌物诱导真核细胞DNA损伤中存在重要作用。     

Cyclin D1和CDK4正性调节苯并(a)芘所致人胚肺成纤维细胞周期改变

目的研究苯并(a)芘[B(a)P]对人胚肺成纤维细胞(HELF)的细胞周期分布及细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)蛋白表达的影响,并探讨两种蛋白含量改变与细胞周期效应之间的关系。方法将反义cyclin D1质粒和反义CDK4质粒导入HELF细胞内,建立两种质粒稳定转染的细胞模型。用0.1、0.5、2.5和12.5μmol/L的B(a)P处理HELF细胞24h,用蛋白印迹方法检测cyclin D1和CDK4蛋白表达水平;利用流式细胞技术检测B(a)P处理对HELF细胞及两种稳定转染细胞系细胞周期的影响。结果成功建立了反义cyclin D1和反义CDK4稳定转染的细胞系。不同剂量B(a)P处理可引起cyclin D1蛋白表达的显著增加,但对CDK4蛋白表达无明显影响;2.5μmol/L的B(a)P处理HELF细胞24h后,引起其细胞周期G1期显著下降,S期显著增加;2.5μmol/L的B(a)P处理反义cyclin D1和反义CDK4稳定转染的HELF细胞24h后,对其细胞周期的分布无显著影响。结论Cyclin D1和CDK4基因均参与了B(a)P所致细胞周期改变过程,并发挥正性调节作用。     

多氯联苯、苯并(a)芘及其联合作用对人胚肺细胞DNA损伤的影响

目的研究多氯联苯1254(Aroclor 1254)、苯并(a)芘及其联合作用对人胚肺(HEL)二倍体细胞DNA损伤的影响。方法培养HEL细胞,作如下处理:Aroclor1254处理组:细胞接受不同剂量Aroclor1254(6.25、12.50、25.00、50.00μmol/L)处理24 h;Aroclor 1254 BaP联合作用组:细胞先按Aroclor1254处理组方案预处理,24 h后37℃恢复1 h,再以50μmol/L BaP染毒2 h;同时设立苯并(a)芘(50μmol/L,染毒2 h)组和DMSO(10 mL/L)组分别作为阳性对照和溶剂对照。采用碱性单细胞凝胶电泳方法测定DNA损伤情况,并用Dunnett-t检验分析各组彗星的Olive尾矩(OTM)的差异。结果Aroclor1254处理组,不同浓度多氯联苯1254(6.25、12.50、25.00、50.00μmol/L)处理后,OTM值分别为0.79±0.24、0.82±0.19、0.87±0.23、0.94±0.26,与溶剂对照(0.78±0.11)相比均无明显变化(P>0.05),而苯并(a)芘组OTM值(1.86±0.25)高于溶剂对照组(P<0.05);联合作用组的OTM值随Aroclor1254浓度的增加而增加,分别为2.29±0.41、2.37±0.37、2.39±0.5、3.01±0.76,且与溶剂对照组、苯并(a)芘组相比均明显增加(P<0.05)。结论HEL细胞DNA的损伤可能与多氯联苯1254预处理后,协同增强苯并(a)芘的遗传毒性作用有关。     

030 苯并(a)芘对细胞周期、细胞增殖的影响及相关信号传导途径的作用

以苯并(a)芘及其代谢物为模式化学物,围绕着DNA损伤修复、细胞信号传导途径、细胞周期检测点调控等方面,从化学致癌物对细胞周期的影响角度来阐明化学致癌物的致癌机制已成为当前环境毒理学的热点问题与研究前沿.本文就苯并(a)芘对细胞周期分布与细胞周期调节因子的影响、以及相关信号传导途径在苯并(a)芘对细胞周期与细胞增殖影响中的作用等方面,对苯并(a)芘对细胞周期的影响进行了综述.     

苯并(a)芘对小鼠肝细胞凋亡的影响

目的探讨苯并（a）芘（BaP）对小鼠肝细胞Fas／Fas—L凋亡信号通路的影响。方法ICR小鼠灌胃染毒，染毒剂量分别为0，5，10，20，40mg／kg，采用免疫组织化学法检测肝细胞Fas、Fas—L、caspase-3基因表达情况，应用吖啶橙／溴化乙啶（AO／EB）荧光双染法检测肝细胞凋亡情况。结果BaP各剂量染毒组肝细胞凋亡发生率及Fas、Fas—L、caspase-3基因表达阳性率与对照组比较差异均有统计学意义（P〈O．05）。结论BaP可诱发小鼠肝细胞发生凋亡。Fas／Fas—L信号通路改变是引起肝细胞凋亡发生的重要途径之一。     

cyclinD1/E2F通路在苯并(a)芘引起人胚肺成纤维细胞周期改变中的作用

目的探讨细胞周期蛋白D1（cyclinD1）／细胞周期蛋白依赖激酶4（CDK4），E2F-1／4通路在苯并（a）芘[B（a）P]引起的人胚肺成纤维细胞（HELF）周期改变中的作用。方法分别用2μmol／L的B（a）P作用HELF24h和100μmol／LB（a）P作用3次，每次24h，细胞具有转化细胞的部分特征（THELF）。用转染反义cyclinD1和CDK4质粒的HELF（A-D1，A-K4）和T-HELF（T-A-D1，T-A-K4）研究cyclinD1／CDK4与E2F-1／4的上下游关系。用流式细胞仪和Western blot法检测细胞周期、cyclin D1、CDK4和E2F-1／4蛋白表达的改变。结果2μmol／LB（a）P作用24h HELF中G1期细胞数明显减少。在A-D1和A-K4的HELF中，cyclinD1和CDK4表达的抑制阻断了由B（a）P引起的细胞周期从G1期进入S期的变化。B（a）P刺激后HEIF中cyclinD1和E2F-1的表达明显增加。在A-D1中，E2F-1的高表达被抑制。B（a）P作用A-K4细胞后，CDK4表达明显升高，E2F-4表达明显降低。T-A-D1和T-A-K4的T-HELF多数停留在G1期。与HELF相比，T-HELF中cyclin D1的表达明显增加；与T-HELF相比，T-A．D1和T-A-K4中E2F-4表达明显增加。结论在2μmol／L B（a）P作用的HELF中，B（a）P通过cyclinD1／CDK4-E2F-1／4信号转导通路引起细胞周期的改变。在T-HELF中，B（a）P通过cyclinD1／CDK4-E2F-4信号转导通路引起细胞周期的改变。     

苯并（a）芘对人血淋巴细胞的细胞遗传学损伤研究

以不同浓度苯并（ａ）芘（ＢａＰ）对人血淋巴细胞进行体外染毒，运用微核（ＭＮ），染色体畸变（ＣＡ）和姊妹染色单体交换（ＳＣＥ）试验，综合评价了ＢａＰ对人血淋巴细胞的细胞遗传学损伤作用，结果表明，经Ｓ９代谢活化，ＢａＰ可诱发细胞ＮＭ率，ＣＡ率和ＳＣＥ率显著增高，并呈现明浓度－反应关系。上述三指标的变化相互间呈高度正相关。三项指标中与ＢａＰ染毒浓度的对数值呈高度正相关。三项指标中ＳＣＥ试验的浓度－反应关     

卷烟烟气焦油量与B(a)P含量分析

「目的」探讨香烟烟气焦油和苯并（ａ）芘「Ｂ（ａ）Ｐ」含量的关系。「方法」测定９种市售香烟烟气焦油和Ｂ（ａ）Ｐ含量,并测定了滤嘴对焦油中Ｂ（ａ）Ｐ的吸附效果。「结果」香烟烟气中焦油含量为４．６～１９．７ｍｇ／支,焦油中Ｂ（ａ）Ｐ含量为１５．７～２７．１ｍｇ／支,滤嘴对焦油中Ｂ（ａ）ｐ的哨附率达５７．６％～８４．７％。」结论「不同牌号香烟烟气中焦油含量与Ｂ（ａ）Ｐ含量无相关性,滤嘴可胡附部分烟气焦油中     

苯并芘诱发人肺癌组织中p53和Ki－ras基因突变研究

为了研究ｐ５３和ｋｉ－ｒａｓ基因在苯并芘致肺癌过程中的作用，我们用免疫组织化学，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法对人肺癌细胞系（ＢＴ）ｐ５３基因和ｒａｓ基因进行了研究。结果发现ＢＴ癌细胞中有ｐ５３蛋白和ｍＲＮＡ水平增高，ｃｏｄｏｎ２７３出现了Ｇ→Ｔ突变；ｐ２１癌蛋白高表达，Ｋｉ－ｒａｓ基因ｍＲＮＡ水平增高和ｃｏｄｏｎ１２出现Ｇ→Ｔ突变。结果提示二者协同参与了苯并芘致肺癌过程。从分子水平为苯并芘的致肺癌变机制研究提供了证据，支持肺癌变过程中原癌基因和抗癌基因协同作用的假说     

我国水体中苯并(a)芘污染的生态风险评价

目的 对我国部分水体苯并(a)芘[B(a)P]的污染进行生态风险性评价。方法 采用美国佛罗里达洲的海洋和河口沉积物化学品风险评价标准和加拿大淡水水生生物保护临时沉积物质量标准及可能有害生物效应标准两种生态风险评价的标准，对我国主要江河海港水体沉积物中B(a)P的污染水平进行了初步的风险评价。结果 河流、湖泊沉积物中B(a)P的含量为0．06～707．12ng／g，港湾、海域、潮滩表层沉积物中B(a)P的含量为7．1-1492．12ng／g。结论 我国水体普遍受到B(a)P的污染，但基本都还未达到不利生物危害的水平。     

B(a)P作用下的人支气管上皮细胞DNA损伤与XPA、XPC蛋白表达的关系

[目的]探讨苯并(a)芘[B(a)P]作用下人支气管上皮细胞16HBEDNA损伤与着色性干皮病A、C蛋白(XPA,XPC)表达的关系。[方法]用B(a)P(0、1、2、4、8、16、32、64μmol/L)浓度染毒细胞24h,用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测B(a)P对细胞活性的影响。用彗星试验检测细胞DNA损伤并以Olive尾矩值(OTM值)评价DNA损伤程度。并用Western-blot检测XPA和XPC蛋白的表达水平。[结果]B(a)P浓度>4μmol/L的各组细胞活性均显著降低(P<0.05)。各染毒组细胞DNA损伤程度则显著增高(P<0.05)。不同浓度B(a)P染毒细胞中XPA、XPC蛋白的表达量有差异。在1μmol/L B(a)P染毒组,可检出XPA蛋白表达水平增高,但随着染毒浓度增加其表达量逐渐降低(P<0.05)。与对照组相比各染毒组细胞XPC的表达均显著降低(P<0.05)。回归分析显示XPA与OTM值之间决定系数为0.572,XPC与OTM值之间为0.852。[结论]B(a)P引起的XPA和XPC蛋白表达水平的变化与DNA损伤之间存在高度相关。     

苯并(a)芘对热休克因子1的影响

[目的 ]研究苯并 (a)芘 (benzo(a)pyrene ,BaP)对热休克因子 1(heatshockfactor 1,HSF1)的影响。 [方法 ]离体原代培养猪主动脉内皮细胞 ,以不同浓度的BaP( 0、0 .1、0 .5、1、5、10 μmol/L)染毒 2 4h ,分别以Western blot法和凝胶阻滞电泳 (electrophoreticmobilityshiftassay ,EMSA)法检测各浓度组细胞HSF1表达及HSF1与热休克元件 (heatshockelement,HSE)结合水平的变化。 [结果 ]低、中浓度 ( 0 .1～ 1μmol/L)的BaP对HSF1总表达量基本无影响 ,胞质和胞核HSF1表达量与阴性对照组相比没有明显改变 (P >0 .0 5 ) ,但随BaP浓度的升高 ,HSF1有向胞核转移的趋势 ;而高浓度 ( 5、 10μmol/L)的BaP会导致胞浆和胞核HSF1均降低 (P <0 .0 5 )。低、中浓度 ( 0 .1～ 1μmol/L)BaP作用下 ,HSF1 HSE结合水平基本不变或略有上升 ,高浓度 ( 5、10 μmol/L)的BaP使HSF1 HSE结合水平明显降低。[结论 ]BaP作用时 ,内皮细胞HSF1表达水平与分布、HSF1 HSE结合能力的改变可能是BaP导致热休克蛋白 (heatshockprotein 70 ,HSP70 )表达降低原因之一 ;但BaP作用下 ,内皮细胞HSF1表达水平与分布、HSF1 HSE结合能力的改变与HSP70表达改变并不完全一致 ,提示研究HSF1与HSE结合之后的改变对进一步揭示BaP致HSP70的基因表达降低的     

重庆市区主要交通干道苯并(a)芘污染状况及其危害分析

目的 了解重庆市区交通干道苯并(a)芘质量污染状况,分析其对人群健康的危害.方法 测定重庆市区主要交通干道空气中苯并(a)芘质量浓度、总悬浮颗粒、PM10、PM2.5和PM1浓度,分析各污染物之间的关系.结果 除隧道外,重庆市主要交通干道苯并(a)芘浓度最高为0.570 7μg/m3,TSP为1.516 7mg/m3,PM10为0.857 5 mg/m3,均超过国家环境卫生标准.结论 表明重庆市区大气中苯并芘[B(a)P]污染已极为严重,有必要对其引起的人群健康效应进行深入研究.     

苯并（a）芘对淋巴细胞钙稳态的影响及其与免疫抑制的关系

利用一次腹腔注射的染毒方法观察了苯并（ａ）在（ＢａＰ）对小鼠脾淋巴细胞钙稳态的影响，并初步探讨了其与免疫抑制的关系。结果表明，ＬＡＣＡ雌性小鼠一次腹腔注射ＢａＰ２００ｍｇ／ｋｇ后第３天和第６天，胸腺和脾脏明显萎缩，与对照组比其相对重量分别下降４６．０％～４９．２％和２８．７％～３３．０％；全脾细胞数明显减少，同时刀豆素Ａ（ＣｏｎＡ）刺激的淋巴细胞增殖反应也受到明显抑制，抑制率为２１．１％～２７．５％；淋巴细胞内游离钙浓度（［Ｃａ￣(２＋)］ｉ）在染毒后第３天明显升高，第６天明显下降；不同剂量ＢａＰ染毒后第３天淋巴细胞内［Ｃａ￣(２＋)］ｉ与染毒剂量呈明显正相关（ｒ＝０．９８５３，Ｐ＜０．０１）；第６天［Ｃａ￣(２＋)］ｉ与染毒剂量呈明显负相关（ｒ＝－０．９４７３，Ｐ＜０．０１）。此外，还观察到钙离子载体Ａ＿(２３１８７)使正常小鼠脾淋巴细胞［Ｃａ￣(２＋)］ｉ明显升高时，淋巴细胞增殖反应受到明显抑制。结果提示，ＢａＰ可明显影响小鼠脾淋巴细胞的钙稳态，而钙稳态的失衡与ＢａＰ引起的免疫抑制可能有密切的关系。