弗氏枸橼酸杆菌引起的急性坏死性小肠炎1例报道

1999年11月30日我们从1例患有急性坏死性小肠炎的女患者腹腔引流液及术后回肠、回盲部溃疡面积的分泌物中分离出C.freundii(弗氏枸橼酸杆菌).该菌在血平板,SS,麦康凯及巧克力等平皿上均生长,菌落呈灰白色,中等大小,湿润,SS平皿上产H2S.革兰染色为革兰阴性菌,周身鞭毛,氧化酶(-),将其接种肠杆菌科生化编码鉴定管,结果尿素(-),苯丙氨酸(-),硫化氢(+),发酵葡萄糖产酸产气,乳糖(+),赖氨酸脱羧酶(-),鸟氨酸脱羧酶(+),运动性(+),靛基质(-),柠檬酸盐(+),VP(-),DNA酶(-),甲基红(+),丙二酸盐(+),棉子糖(+),L-鼠李糖(-),麦芽糖(+),纤维二糖(-),硝酸盐还原(+),酒石酸盐(+),参照<全国临床检验操作规程>中肠杆菌科的鉴别及生化编码,此菌为弗氏枸橼酸杆菌.因其分解乳糖,且沙门氏菌血清型鉴定为阴性,从而将此菌与沙门菌区分开.     

弗氏枸橼酸杆菌TaqMan实时荧光定量-聚合酶链反应检测方法的建立

目的 建立针对弗氏枸橼酸杆菌的TaqMan实时荧光定量-聚合酶链反应(real time-PCR)检测方法。 方法 针对弗氏枸橼酸杆菌的特有序列设计引物和TaqMan探针,扩增目的基因建立标准曲线,确定检测方法的灵敏度;对20种其他肠道致病菌及院内感染中常见的致病菌进行检测,评价该检测方法的特异性;使用牛奶模拟标本评价方法在实际检测工作中应用性。 结果 TaqMan real time-PCR检测方法对弗氏枸橼酸杆菌重组质粒的检测灵敏度为1.0101拷贝／反应体系;该检测方法在检测30种其他肠道致病菌及院内感染中常见的致病菌时未出现特异性扩增。该检测方法对牛奶模拟样本中弗氏枸橼酸杆菌检测下限为1.0102cfu/ml的菌量;通过对1.0107、1.0105和1.0103三个浓度质粒标准品的重复检测,确定本方法的组内变异系数为1.90%~3.91%;组间变异系数为1.52%~1.69%。 结论 本研究建立的TaqMan real time-PCR检测方法可作为检测弗氏枸橼酸杆菌灵敏、特异、快速的方法。     

弗氏枸橼酸杆菌CF74的T6SS影响FliC的表达和分泌

目的 研究弗氏枸橼酸杆菌CF74的T6SS基因组岛功能。方法 构建弗氏枸橼酸杆菌CF74的T6SS基因组岛的精确缺失突变株(CF74T6SS)。对弗氏枸橼酸杆菌CF74和其突变株CF74T6SS的全菌蛋白和上清蛋白进行提取,并进行2-DE分析。结果 在CF74T6SS全菌蛋白中,有4个蛋白表达上调,42个蛋白表达下调,并且FliC的表达下调十分明显;在CF74T6SS的培养上清中,有27个蛋白表达上调,36个蛋白表达下调,并且FliC、FlgK和FliD的表达下调十分明显。结论 弗氏枸橼酸杆菌CF74的T6SS可以影响FliC蛋白的表达和分泌。     

一种鉴别与大肠埃希菌O157血清凝集的弗氏枸橼酸杆菌的PCR方法

目的利用基于O抗原翻转酶wzx基因的PCR方法,鉴别与大肠埃希菌O157血清凝集的弗氏枸橼酸杆菌和O157大肠埃希菌。方法用微生物鉴定仪对细菌进行生化鉴定,与O157血清凝集,同时扩增wzx基因。结果25株与大肠埃希菌O157血清凝集的弗氏枸橼酸杆菌及1株不与大肠埃希菌O157血清凝集的弗氏枸橼酸杆菌wzx基因扩增为阳性,8株与O157血清不凝集的弗氏枸橼酸杆菌wzx基因扩增为阴性,20株O157∶H7大肠埃希菌wzx基因扩增为阴性。结论对于可与O157血清发生强凝集的弗氏枸橼酸杆菌,基于O抗原翻转酶wzx基因的PCR方法是一种有效的快速鉴别方法。     

13株杨氏枸橼酸杆菌的黏附、细胞毒性和耐药性检测

目的 了解杨氏枸橼酸杆菌（CY）的黏附、细胞毒性和耐药情况。方法 对从安徽省马鞍山市腹泻病例分离到的13株CY开展黏附HEp-2细胞的检测,同时对HEp-2细胞（MOI:100）作用8 h后的乳酸脱氢酶（LDH）释放情况以及对15种抗生素的药敏实验进行分析。结果 5株CY几乎没有黏附性,黏附指数1;6株CY具有中等黏附性,黏附指数1,且50;2株CY具有强的黏附性,黏附指数50。与HEp-2细胞作用8 h后,3株菌引起的LDH释放量20.00%,其余10株菌引起的LDH释放量均20.00%。13株CY对环丙沙星和妥布霉素均敏感（100%）,对氨苄西林和头孢唑啉的耐药率最高（92.30%）。CY1对7种抗生素耐药,属于多重耐药菌,并且具有强的细胞毒性。结论 本研究共检测出3株强细胞毒性的CY和7株多重耐药的CY,建议临床关注枸橼酸杆菌的毒性和多重耐药情况。     

一起弗氏柠檬酸杆菌所致食源性疾病调查

本文用描述性流行病学分析方法,对一起集体聚餐所致食源性疾病进行分析,根据流行病学调查资料、病例临床特点和实验室检验结果, 证实该起食源性疾病由食用受弗氏柠檬酸杆菌污染的食品所致。     

高原地区107株弗劳地枸橼酸杆菌的鉴定与分析

弗劳地枸橼酸杆菌是一种条件致病菌，广泛存在于自然界和人体，可导致人类原发性和继发性感染。由于其部分菌落具有不发酵或迟缓发酵乳糖等生物特性，在鉴定中容易与沙门菌、大肠埃希菌或醋酸钙不动杆菌等混淆。本文以回顾性方式，分析了107株先后从临床各类标本中分离鉴定出的弗劳地枸橼酸杆菌，并将检验结果和鉴定体会报告如下。     

枸橼酸杆菌医院感染特点及耐药性检测

目的了解枸橼酸杆菌在医院感染中的分布特点及耐药特性,为临床抗感染治疗提供依据。方法细菌分离培养按《全国临床检验操作规程》进行;采用WalkAway-40全自动细菌鉴定仪对临床分离菌株进行菌种鉴定;采用K-B法进行药敏试验,用WHONET5.4软件进行统计分析。结果共分离枸橼酸杆菌属细菌172株,其中弗劳地枸橼酸杆菌最多,占70.3%,其次为丙二酸盐阴性枸橼酸杆菌和异型枸橼酸杆菌,分别占14.0%和5.2%,172株枸橼酸杆菌的感染部位以呼吸道最多（67.4%）,其次为泌尿生殖道（22.1%）;病区分布主要为神经内科病房、呼吸内科病房、肾内科病房和肿瘤病房,分别占29.1%、27.9%、16.9%和11.0%;药敏结果显示,172株枸橼酸杆菌对氨苄西林、头孢唑啉、头孢西丁的耐药率较高,均大于87%,对阿米卡星、亚胺培南、舒普深的耐药率较低,均小于20%。结论医院感染的枸橼酸杆菌以弗劳地枸橼酸杆菌最多见,主要来自呼吸道标本,枸橼酸杆菌已呈现出多重耐药现象,亚胺培南、舒普深、阿米卡星等对其具有良好的抗菌活性。     

Rupture of a dissecting thoracoabdominal aortic aneurysm due to Citrobacter freundii infection

We describe a case of an elderly man with Citrobacter freundii‐associated infectious rupture of a dissecting thoracoabdominal aortic aneurysm. We performed an emergency thoracoabdominal aortic replacement using a rifampicin‐soaked prosthetic graft and omental flap wrapping. The patient was discharged on postoperative day 255, although he experienced pseudomembranous enteritis and paraplegia.     

弗劳地枸橼酸杆菌中质粒介导的KPC-2和NDM-1型碳青霉烯酶基因结构分析

目的对携带bla_(NDM-1)和bl_(aKPC-2)的弗劳地枸橼酸杆菌的碳青霉烯酶基因结构进行分析。方法收集4株耐碳青霉烯类药物弗劳地枸橼酸杆菌(CF-05、CF-17、CF-35、CF-43),琼脂稀释法测定抗菌药物敏感性;脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析细菌同源性;特异性PCR扩增和序列测定分析碳青霉烯酶耐药基因和ESBLs耐药基因、接合试验、耐药基因周围序列分析对菌株的耐药机制进行分子水平研究。结果 4株细菌仅CF-05对阿米卡星敏感,所有菌株对其他检测药物全部耐药;PFGE结果显示4株细菌不同源;特异性PCR扩增和序列分析显示2株(CF-35、CF-43)同时携带blaNDM-1和blaKPC-2、另2株(CF-05、CF-17)仅携带blaNDM-1,CF-35同时携带bla_(CTX-M-15);其中3株细菌(CF-05、CF-17、CF-43)接合成功,CF-05、CF-17接合子(CF-05-1和CF-17-1)携带bla_(NDM-1),CF-43获得2种接合子(CF-43-1携带bla_(KPC-2)、CF-43-2同时携带bla_(NDM-1)和bla_(KPC-2));分析blaNDM-1和blaKPC-2周围序列发现,4株细菌周围序列分别与国内报道携带bla_(NDM-1)和bla_(KPC-2)的肺炎克雷伯菌质粒pNDM-HN380和PK048周围序列高度相似。结论在4株弗劳地枸橼酸杆菌中检测到NDM-1型碳青霉烯酶,其中2株同时携带KPC-2型碳青霉烯酶,bla_(NDM-1)周围序列和bla_(KPC-2)周围序列与国内已知肺炎克雷伯菌相关耐药基因周围序列高度相似。     

Optimum management of Citrobacter koseri infection

Low virulent Citrobacter koseri can cause life threatening infections. Neonates and other immunocompromised patients are particularly susceptible to infection from C. koseri. Any infection due to C. koseri mandates antimicrobial therapy based on the sensitivity of the pathogen microorganism. Various types of antibiotics, including aminoglycosides carbapenems, cephalosporins, chloramphenicol and quinolones, are used for the treatment of C. koseri infections. The rational choice of antimicrobial therapy for Citrobacter infections is a challenge for clinicians because there is a sustained increase in antibacterial resistance. We reviewed antimicrobial agents used for C. koseri infections in this review.     

枸橼酸杆菌对β-内酰胺类抗生素的耐药机制

枸橼酸杆菌(Citrobacter)是一种条件致病菌,近年来在临床上造成的感染越来越多,随之而来的是枸橼酸杆菌对常用抗生素(如-内酰胺类、氨基糖甙类和喹诺酮类等药物)的耐药性日益突出.枸橼酸杆菌对-内酰胺类抗生素的耐药机制主要是产生特异性的-内酰胺酶,而且不同种枸橼酸杆菌对抗生素的敏感性不同.因此,了解枸橼酸杆菌的耐药机制及进展,对预防和治疗由该属细菌引起的感染以及控制耐药性的蔓延有重要意义.     

Infective crystalline keratopathy due to Citrobacter koseri

Rationale: Infectious keratopathy is an ocular emergency with the potential to cause irreversible blindness.Patient's concerns: A 63-year-old diabetic man presented with a 3-day history of painful red right eye. He had a history of multiple ocular surgeries in the affected eye without recent ocular trauma. Diagnosis: Infective crystalline keratopathy secondary to Citrobacter koseri. Interventions: Topical corticosteroids were discontinued, and dual topical antibiotic therapy of moxifloxacin 5％ and gentamycin 0.3％ were applied. Outcomes: Twelve hours after the start of treatment, the crystalline nature of the infiltrate disappeared, with enlargement of the epithelial defect. The antibiotic regime was continued and the lesion healed within a week of presentation with residual scarring. Lessons: Infective crystalline keratopathy classically presents with intrastromal branching fern-like opacities and minimal anterior segment inflammation in an immunosuppressed eye. The mainstay of management is corticosteroid discontinuation and the administration of empirical antibiotics until the results of the culture and sensitivity are available. In Citrobacter-related cases, treatment may result in a suppurative appearance before healing of the lesion.     

37株枸橼酸杆菌的耐药性及PFGE分型分析

目的了解食品及患者来源的37株枸橼酸杆菌的耐药性、毒力基因携带及PFGE的分型情况。方法运用K-B法选择15种抗生素进行药敏试验;以PCR方法检测志贺样毒素（Istx1/I和Istx2/I）、紧密素基因（Ieae/I）及溶血素（Ihly/I）4种毒力基因;用脉冲场凝胶电泳（pulse field gel electrophoresis,PFGE）方法进行同源性分析。结果37株枸橼酸杆菌中,25株为杨氏枸橼酸杆菌,11株为弗劳地枸橼酸杆菌,1株为布雷克氏枸橼酸杆菌。分离菌株对大多数抗生素敏感,但对头孢噻吩100%耐药。其毒力基因检测均为阴性。PFGE结果发现不同菌株带型差异较大。其中5株食品来源,1株为人来源的杨氏枸橼酸杆菌同为MAS007型,具有流行病学相关性。 结论该地区枸橼酸杆菌主要以杨氏枸橼酸杆菌为主;部分菌株具有多重耐药,应加强菌株的耐药性监测;脉冲场凝胶电泳对枸橼酸杆菌有较好的分型能力,有助于分析追踪疫情和来源;患者可能存在食源性感染,应引起疾控部门的重视。     

Origin and evolution of the AmpC beta-lactamases of Citrobacter freundii

To determine whether the widespread clinical use of beta-lactams has been selective for Citrobacter freundii-derived alleles of plasmid ampC genes, we generated a Bayesian consensus phylogeny of the published ampC sequences and compared the MICs of 16 beta-lactam antibiotics for Escherichia coli strains containing cloned copies of the C. freundii ampC alleles. We found that for the majority of compounds investigated, there has been essentially no increase in beta-lactam resistance conferred by those alleles. We also found that ampC alleles from the chromosomes of two beta-lactam-sensitive C. freundii strains isolated in the 1920s, before the clinical use of antibiotics, were as effective at providing beta-lactam resistance in E. coli as were the plasmid-borne alleles from beta-lactam-resistant clinical isolates. These results suggest that selection for increased resistance to beta-lactam antibiotics has not been a significant force directing the evolution of the C. freundii ampC alleles found in beta-lactam-resistant clinical isolates.