重症监护病房碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌耐药机制及同源性分析

目的分析耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌基因型,进行同源性分析,探讨碳青霉烯类抗生素耐药率升高的原因。方法应用WHONET5.0分析广州医学院第一附属医院重症监护病房(ICU)分离的鲍曼不动杆菌耐药率变化。收集2008年1月至2009年12月ICU碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌35株,应用VITEK-2全自动细菌鉴定仪进行菌株鉴定,采用K-B纸片扩散法测定15种抗菌药物的敏感性,PCR检测金属β内酰胺酶及碳青霉烯酶OXA基因,脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析同源性。结果该院分离的鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素的耐药率显著增加,对美罗培南的耐药率从10.8%升高到62.3%,对亚胺培南的耐药率从13.5%升高到58.8%。PFGE分析存在8个克隆;blaOXA-51、blaOXA-23、blaOXA-58阳性的分别为33株(94.3%)、20株(57.1%)和6株(17.1%)。ISAba1相关blaOXA-23是碳青霉烯酶主要的存在形式。未检测到金属β内酰胺酶。结论该院ICU分离的鲍曼不动杆菌OXA-23型碳青霉烯酶基因检出率最高,并存在交叉感染的情况,应引起临床重视。     

重症监护病房耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌耐药机制研究

目的分析鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因型,探讨其对碳青霉烯类抗生素耐药率升高的原因。方法收集2008年1月—2012年12月某院重症监护病房(ICU)320株碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌。应用VITEK2全自动微生物分析仪进行菌株鉴定与药敏测定,聚合酶链反应(PCR)检测金属β内酰胺酶和OXA碳青霉烯酶基因。WHONET5.4统计软件:分析鲍曼不动杆菌耐药率变化。结果研究期间碳青霉烯类抗生素的耐药率显著增加,鲍曼不动杆菌对美罗培南的耐药率从10.8%升至80.4%,对亚胺培南的耐药率从13.5%升至83.5%。blaOXA-23及ISAba1相关blaOXA-23阳性率均从25.0%升至97.1%。未检测到blaOXA-24和金属β内酰胺酶基因。结论该院ICU鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素的耐药率升高,可能与ISAba1相关blaOXA-23的扩散相关。     

耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌的基因检测与临床意义

目的了解我院耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌的耐药特点、临床分布、基因类型、耐药机制,为临床治疗和控制医院内感染以及流行病学调查提供依据。方法用Microscan-Autoscan-4微生物分析系统和K-B法进行细菌鉴定及药敏试验。用2-巯基丙酸抑制试验检测金属酶。用针对碳青霉烯酶4种基因的特异性引物进行PCR扩增和确定基因型。对扩增的DNA测序并通过网上比对以确定其编码酶基因的类型。结果耐亚胺培南的9株鲍曼不动杆菌金属酶表型筛选均为阴性,IMP、VIM、OXA-24基因引物PER扩增也均为阴性;4株携带OXA-23基因,经测序和网上比对与OXA-23标准株完全相同。结论携带OXA-23基因是我院鲍曼不动杆菌耐碳青霉烯类药物的主要因素。产OXA-23型酶比非产OXA-23型酶的菌株多重耐药性更严重,治疗更棘手。     

泛耐药鲍曼不动杆菌质粒介导碳青霉烯酶的研究

目的 了解泛耐药鲍曼不动杆菌(pan-drug resistant A.baumannii,PDR-AB)的耐药性和产耐药酶的情况及其耐药机制.方法收集泛耐药鲍曼不动杆菌3株,用纸片扩散法进行药敏测定;通过质粒接合试验、质粒提取实验、琼脂糖凝胶电泳、质粒消除试验等方法,研究细菌对碳青霉烯类耐药的分子机制.结果 3株泛耐药鲍曼不动杆菌对包括亚胺培南(IMP)在内的常用抗菌药物均高度耐药.所有菌株接合试验均成功,接合子质粒条带相同.且经SDS质粒消除试验发现其对碳青霉烯类的耐药性随质粒的消除而丢失.结论 碳青霉烯酶的产生是泛耐药鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类耐药的机制之一;其携带的耐药基因能通过质粒在细菌间传递.     

临床分离不动杆菌对耐碳青霉烯类耐药表型与基因分型特征研究

摘要 目的 研究携带不同碳青霉烯酶编码基因不动杆菌的耐药表型与基因分型特征。方法采用药敏试验和Rep-PCR技术,对临床分离不动杆菌进行耐药分型检测和同源性分析。结果检出16株携带blaOXA-72基因与16株携带blaOXA-23-like基因的鲍曼不动杆菌耐药表型相似、基因分型一致。该16株鲍曼不动杆菌对哌拉西林、哌拉西林他唑巴坦、阿米卡星、庆大霉素、环丙沙星、左氧氟沙星等抗菌药物的耐药率均高于携带blaNDM-1基因的不动杆菌。8株携带blaNDM-1基因的不动杆菌分为5个Rep-PCR型,且与携带blaOXA-72或blaOXA-23-like基因的不动杆菌基因分型差异较大。Rep-PCR与MLST分型的结果相符。结论产OXA类与NDM类不动杆菌菌株的耐药表型与基因分型的差异较大。具有相同耐药机制不动杆菌在不同医院的克隆传播可能是我国碳青霉烯类耐药不动杆菌广泛播散的主要原因。     

耐碳青霉烯类抗生素不动杆菌的β内酰胺酶研究

目的了解不动杆菌属细菌对碳青霉烯类药物的耐药机制,耐药菌株的基因同源性和传播机制。方法采用改良Hodge试验和乙二胺四乙酸(EDTA)协同试验筛选耐亚胺培南不动杆菌碳青霉烯酶,等电聚焦电泳(IEF)测定产β内酰胺酶等电点,blaTEM,blaSHV,blaCTX-M-Ga-Gc,blaPER-1,blaOXA-23,blaMBL等,引物的PCR进行β内酰胺酶的基因分型,并对PCR产物进行测序;Southern印迹进行苯唑西林酶OXA-23的基因定位脉冲场电泳(PFGE)研究耐亚胺培南不动杆菌同源性。结果6株耐碳青霉烯类不动杆菌均产OXA-23型酶,其中5株同时产PER-1型ESBLs。6株菌blaOXA-23均定位于染色体。3株琼氏不动杆菌属于同一PFGE分型,3株鲍曼不动杆菌分别属于2种PFGE分型。结论产OXA-23型碳青霉烯酶是导致不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药的重要原因,同时存在blaOXA-23的克隆传播。     

耐亚胺培南鲍曼不动杆菌耐药表型和碳青霉烯酶基因型分析

目的检测广州市第一人民医院20株耐亚胺培南鲍曼不动杆菌的耐药性,研究并分型其碳青霉烯酶基因。方法用法国生物梅里埃公司VITEK2全自动细菌鉴定仪进行菌株鉴定和药敏试验,用6种碳青霉烯酶特异性基因引物进行PCR扩增和基因型的测序分析,并通过网上GenBank进行比对以确定编码酶基因的类型。结果 20株鲍曼不动杆菌对哌拉西林-他唑巴坦、左氧氟沙星和阿米卡星的耐药率分别为85%、50%和25%。对其他所测抗菌药的耐药率均在90%以上。扩增结果显示17株(85%)细菌携带碳青霉烯酶OXA-23基因,16株(80%)携带OXA-51基因,1株(5%)携带OXA 58基因。OXA-24、VIM、IMP基因引物PCR扩增均为阴性,随机抽取OXA-23基因阳性株进行双向测序后在网上GenBank比对与OXA-23标准株99%同源,OXA-51基因阳性株与OXA-66标准株99%同源,OXA-58基因阳性株与OXA-58标准株99%同源。结论我院耐碳青霉烯类抗生素的鲍曼不动杆菌呈现出多重耐药现象,对阿米卡星的耐药率最低,OXA-23型碳青霉烯酶基因检出率最高,OXA-23/OXA-51类基因占60%,应引起临床高度重视,防止在医院内广泛传播。     

鲍曼不动杆菌对β-内酰胺类抗生素的耐药性及耐药基因型研究

目的了解临床分离的鲍曼不动杆菌对β-内酰胺类药物耐药性以及与β-内酰胺酶耐药基因的关系。方法采用K-B纸片扩散法检测20株鲍曼不动杆菌的耐药状况，用聚合酶链反应（PCR）方法检测6种β-内酰胺酶耐药基因（blaTEM、blaVIM、blaOXA-23 、blaSHV、 blaADC、 blaIMP）并加以分析。结果20株鲍曼不动杆菌对头孢菌素类高度耐药，对碳青霉烯类大多敏感。所有菌株均检出blaTEM、blaADC基因，有18株携带blaVIM基因，其余基因均为阴性。结论同时携带blaTEM、blaADC和blaVIM基因是本院鲍曼不动杆菌对β-内酰胺酶类抗菌药耐药的主要原因。     

Carba NP法快速检测鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶的研究

目的了解泛耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶表型及酶基因型,为临床合理使用抗生素,监控医院感染提供依据。方法收集117株鲍曼不动杆菌临床分离株进行常规微生物学检测,K-B纸片法筛选多重耐药鲍曼不动杆菌,通过Carba NP试验及改良Hodge试验进行产碳青霉烯酶表型检测,利用PCR对多重耐药不动杆菌耐药基因型进行确证。结果临床分离的117株鲍曼不动杆菌株有64株属多重耐药鲍曼不动杆菌,其中33株碳青霉烯酶阳性,检出碳青霉烯酶OXA-23耐药基因型,未检出IMP、VIM、NDM-1耐药基因。结论 Carba NP法可以快速检测产碳青霉烯酶菌株,且敏感性强,操作简单,有助于提高产碳青霉烯酶菌株检出率,利于监控医院感染。     

血液病患者鲍曼不动杆菌的耐药性分析及其耐药基因检测

目的了解血液病患者临床分离鲍曼不动杆菌的耐药表型和多种耐药基因的携带情况。方法收集2011年临床分离的非重复鲍曼不动杆菌120株,采用纸片扩散法进行药敏试验,试验结果按照CLSI 2011年版标准判读,采用WHONET 5.6软件进行数据分析;应用聚合酶链反应及测序方法检测10种耐药相关基因（blaOXA-51-like、blaOXA-23-like、blaOXA-24-like、blaOXA-58-like、blaTEM、blaampC、armA、ISAba1、intI 1和intI 2）。结果鲍曼不动杆菌对13种抗菌药物的耐药率范围为48.3%~94.2%,对碳青霉烯类抗菌药物亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为51.7%和48.3%;耐药相关基因blaOXA-51-like、blaOXA-23-like、blaTEM、blaampC、armA、ISAba1和intI 1的阳性率分别为100%、60.0%、46.7%、85.8%、75.8%、86.7%和85.0%,而未检出blaOXA-24-like、blaOXA-58-like和intI 2。结论碳青霉烯类抗菌药物对鲍曼不动杆菌仍具有较好的体外抗菌活性,鲍曼不动杆菌多重耐药相关基因的携带率较高,多重耐药现象非常严重,应加强其耐药性监测,合理使用抗菌药物。     

应用碳青霉烯酶失活法检测产碳青霉烯酶鲍曼不动杆菌

目的评估碳青霉烯酶失活法(carbapenem inactivation method,CIM)试验检测耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌产生碳青霉烯酶的能力。方法收集121株鲍曼不动杆菌,应用全自动细菌鉴定仪进行菌株鉴定和药敏试验,CIM检测鲍曼不动杆菌所含碳青霉烯酶,应用PCR方法检测OXA-23型碳青霉烯酶基因。结果 121株鲍曼不动杆菌中68株对亚胺培南和美罗培南耐药,其中65株菌PCR显示携带OXA-23基因,66株菌CIM试验为阳性。52株鲍曼不动杆菌对亚胺培南和美罗培南均敏感,其中49株菌OXA-23阴性,52株菌CIM试验全为阴性。1株菌对亚胺培南耐药、对美罗培南敏感,CIM试验阴性,OXA-23阳性。CIM试验的敏感性和特异性分别为94.2%和98.1%。结论与PCR方法相比较CIM试验操作简便,成本小,结果易读,易于在实验室开展。应用CIM试验可以检测鲍曼不动杆菌OXA-23型碳青霉烯酶,     

碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌外膜蛋白表达的分析

目的筛选碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌并了解其耐药情况,分析碳青霉烯类耐药菌及碳青霉烯类敏感菌的外膜蛋白表达情况。方法采用琼脂二倍稀释法筛选碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌,运用聚合酶链反应(PCR)技术检测外膜蛋白基因carO;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析细菌外膜蛋白的表达情况。结果 110株临床分离鲍曼不动杆菌中的32株细菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药,此32株碳青霉烯类耐药菌除对多黏菌素B敏感性为100%,对其他所试药物均呈不同程度耐药;碳青霉烯类鲍曼不动杆菌均携带carO基因,SDS-PAGE分析显示碳青霉烯类耐药菌株与敏感菌株相比,在相对分子质量约22×103和50×103等处的蛋白条带存在差异。结论鲍曼不动杆菌对抗菌药物的耐药情况严重,且碳青霉烯类耐药菌与敏感菌的外膜蛋白在表达上存在明显差异。     

鲍曼不动杆菌OXA-23基因和ISAba1基因检测和耐药性关系

目的 了解鲍曼不动杆菌的耐药现状及OXA-23型碳青霉烯酶介导的耐药性。 方法 收集临床分离的200株鲍曼不动杆菌,用K-B(Kirby-Bauer)法进行常见药物的敏感性实验;通过PCR(polymerase chain reaction)扩增、克隆测序等分析OXA-23基因及ISAba1基因。 结果 温州医学院附属第一医院分离的200株鲍曼不动杆菌除对头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南、多粘菌素等保持相对较高的敏感性,对其余常见抗生素的耐药率均已超过了80%;200株鲍曼不动杆菌中共检到155株携带OXA-23基因,168株携带ISAba1基因。 结论 温州医学院附属第一医院鲍曼不动杆菌耐药情况严重,大多带有OXA-23基因,该基因编码的碳青霉烯酶应为其耐药的主要原因,ISAba1常伴随OXA-23型出现。     

鲍曼不动杆菌耐药表型及碳青霉烯酶OXA基因分析

目的 检测鲍曼不动杆菌耐药表型及碳青霉烯酶OXA基因型.方法 用VITEK32鉴定出174株不动杆菌,用K-B纸片检测抗生素的耐药性,用琼脂稀释法测定抗生素的最小抑菌浓度(MIC),用多重PCR方法测定碳青霉烯酶OXA23类,OXA24类,OXA51类和OXA58类基因.结果 检出鲍曼不动杆菌146株(83.91%),耐亚胺培南的鲍曼不动杆菌46株(31.50%).鲍曼不动杆菌呈现出多重耐药性,亚胺培南、奈替米星、左氧氟沙星、头孢吡肟和哌拉西林/他唑巴坦的敏感率分别为70.69%,48.85%,44.83%,43.68%,44.83%.亚胺培南的MIC值为16～64μg/ml;耐亚胺培南鲍曼不动杆菌OXA基因主要为OXA23类,检出率为82.61%,且以OXA23/OXA51类基因为主(60.87%),检出OXA23/OXA58类1株,未测得OXA24类.结论 鲍曼不动杆菌呈现出多重耐药性,以OXA23/OXA51型碳青霉烯酶为主.     

亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因型研究

目的 对临床分离亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌耐药性及碳青霉烯酶基因型进行研究,以指导临床合理应用抗生素.方法 用琼脂稀释法检测最低抑菌浓度(MIC),聚合酶链反应(PCR)检测OXA-23、OXA-24、OXA-58、IMP和VIM碳青霉烯酶基因,并对PCR产物进行测序.结果 鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药率为36.9%,且亚胺培南耐药组菌株对12种抗菌药物耐药率与敏感组比较,差异有统计学意义(P<0.05);在24株亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌中21株PCR扩增出OXA-23基因,2株扩增出VIM基因,检出率分别为87.5%和8.3%,OXA-24、OXA-58、IMP基因均未检出;PCR产物测序表明与Genbank相关基因同源性为100%.结论 该院亚胺培南耐药鲍不动杆菌耐药现象严重;OXA-23碳青霉烯酶基因的产生是鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药的重要机制之一.     

老年人鲍曼不动杆菌的耐药分析

目的分析老年人鲍曼不动杆菌的耐药情况。方法从老年人中分离的鲍曼不动杆菌对10种抗生素的耐药情况,并用PCR方法检测碳青霉烯酶基因。结果64株鲍曼不动杆菌检测出20株携带碳青霉烯酶OXA-23基因。结论鲍曼不动杆菌对碳青霉烯抗生素耐药主要是产生碳青霉烯酶,也有其它耐药机制起作用。     

老年人鲍曼不动杆菌的耐药分析

目的 分析老年人鲍曼不动杆菌的耐药情况.方法 从老年人中分离的鲍曼不动杆菌对10种抗生素的耐药情况,并用PCR方法检测碳青霉烯酶基因.结果 64株鲍曼不动杆菌检测出20株携带碳青霉烯酶OXA-23基因.结论 鲍曼不动杆菌对碳青霉烯抗生素耐药主要是产生碳青霉烯酶,也有其它耐药机制起作用.     

耐碳青霉烯类药物鲍曼不动杆菌的碳青霉烯酶、整合酶基因型研究

目的研究碳青霉烯类耐药的鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶、整合酶基因型情况。方法收集93株碳青霉烯类耐药的鲍曼不动杆菌和16株碳青霉烯类敏感的鲍曼不动杆菌,采用改良Hodge实验检测碳青霉烯酶,EDTA协同试验检测金属β-内酰胺酶;采用聚合酶链反应(PCR)扩增和测序分析碳青霉烯酶和整合子基因。结果耐药株碳青霉烯酶表型检测阳性率为62.4%,金属酶表型检测均为阴性;PCR结果显示耐药菌中OXA-23、Int1检出率为100%,OXA-51检出率为96.8%,OXA-58检出率为1.1%,未检出OXA-24、VIM、IMP和Int2,敏感株除Int1检出率为37.5%外,其余基因均未检出。结论临床分离的碳青霉烯类耐药的鲍曼不动杆菌主要携带OXA-23、OXA-51碳青霉烯酶基因型,并且均携带Ⅰ类整合酶基因。     

多重PCR方法检测多耐药鲍曼不动杆菌基因型

目的建立一种适于临床微生物实验室快速检测多耐药鲍曼不动杆菌基因的多重PCR方法。方法筛选临床分离鉴定的多耐药鲍曼不动杆菌105株;用热煮沸法提取DNA,采用多重PCR技术,优化反应条件,同时扩增OXA酶基因(blaOXA-23-like,blaOXA-24-like,blaOXA-51-like,blaOXA-58-like)和整合酶基因(intI1,intI2),扩增产物经凝胶成像系统分析。结果105株多耐药鲍曼不动杆菌中,76株是blaOXA-51-like blaOXA-23-like intI1基因型,18株是blaOXA-51-like intI1基因型,10株是blaOXA-51-like blaOXA-23-like基因型,1株是blaOXA-51-like blaOXA-23-like blaOXA-58-like基因型。未检测出携带有blaOXA-24-like和intI2基因的菌株。结论多耐药鲍曼不动杆菌的耐药性及流行趋势与其携带的OXA酶基因和整合酶基因相关。     

86株鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶耐药基因分析及同源性研究

目的分析北京康复医院住院患者分离的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的分布特点、耐药性及同源性。方法收集2017年12月至2018年12月北京康复医院临床感染病例中非重复分离的86株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌,采用Phoenix BD 100进行菌株鉴定和药敏试验。采用基因组重测序技术检测其携带的耐药相关基因并进行进化树分析,采用多位点序列分型分析菌株间的同源性。结果86株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌均表现为多重耐药。共检出17种耐药基因,全部菌株均携带OXA-23型碳青霉烯酶耐药基因;检出多种β内酰胺酶基因、外排泵相关基因、抗菌药物修饰酶基因等。多位点序列分型得到15种ST型,同源性分析提示部分菌株间存在较近亲缘关系。结论北京康复医院鲍曼不动杆菌耐药情况严重,OXA-23为主要耐药基因型,菌株之间存在同源相关性,应加强医院感染防控。