K-ras基因点突变在肺癌中的研究进展

Ras基因最初是在和Kirston和Hayvey大鼠肉瘤中首先发现的 ,转导了ras基因的NIH 3T3细胞能发生恶性转化 ,从而确定了其癌基因的地位。进一步研究发现多数人类肿瘤中均有ras基因的突变激活 ,其中最常见于胰腺癌、结肠癌和肺癌[1] 。Ras基因家族由K ras、H ras、N ras三个密切相关的成员组成 ,其中K ras基因与肺癌的关系最为密切 ,现将K ras基因在肺癌中的研究进展综述如下。1　K ras基因的激活与p2 1蛋白K ras基因定位于人类的第 1 2号染色体上 ,含有 4个编码外显子和 1个 5′端非编码外显子 ,共同编码含 1 89个氨基酸组成的ras蛋白 ,因…     

拟CAAX肽的Ras蛋白法呢基化抑制剂研究近况

哺乳动物 ras基因编码的 Ras蛋白为小分子 GTP结合蛋白家族成员之一 ,在细胞信号转导 ,细胞的增殖、分化调节中起重要作用。若 ras基因出现突变 ,则变异的 Ras蛋白持续激活靶分子 GTP,引起信号转导紊乱 ,致使细胞大量增殖 ,出现恶性转化。人类肿瘤中约有 30 %以上存在 ras基因的点突变 ,可见抑制致癌性 Ras蛋白的生物学作用 ,是一条值得探索的抗癌研究途径[1] 。研究表明 ,Ras蛋白的生物学功能有赖于翻译后的修饰 ,尤其是其羧基末端 CA1A2 X(半胱 - A1- A2 -丝 /甲硫氨酸 ,A为任何氨基酸 )肽的法呢基化 ,只有其羧基端半胱氨酸残基在…     

胰腺癌相关基因的研究进展

<正>胰腺癌高度恶性,在西方国家中成为第四大消化道肿瘤的死因,在美国更是位列第二位,国内胰腺癌发病率也有逐渐增高的趋势。有研究显示,胰腺癌在确诊后5年生存率小于5%[1]。目前医学界对胰腺癌相关基因已经有了深入的研究,笔者就与胰腺癌发生、发展相关的癌基因进行了综述。1 Ras基因Ras基因首先在鼠肉瘤病毒(Ha2MSV)和Kirsten鼠肉瘤病毒(Ki2MSV)的子代基因中被发现,目前认为Ras基     

检测胰液和粪便中K-ras和p53基因突变对胰腺癌早期诊断的价值

目的 通过检测胰液、粪便癌基因K－ras和抑癌基因p53的突变,探索早期诊断胰腺癌的手段。方法 1994年至2000年5月住院和门诊患者共201例,正常对照60例,通过聚合酶链反应－限制片段长度多态性（PCR－RFLP）方法检测胰液、粪便K－ras突变,PCR－SSCP方法检测p53突变。结果 胰腺癌患者胰液K－ras突变率为87．8％（36／41）,胰腺良性病变为23．5％（4／17）。粪便K－ras扩增成功率为90．0％（235／261）。胰腺癌患者粪便K－ras突变率为88．0％（66／75）,胰腺良性病变为51．1％（24／47）,正常人粪便K－ras突变率为19．6％（9／46）。胰腺癌胰液细胞p53突变率47．4％（18／38）,胰腺良性疾病为12．5％（2／16）。胰腺癌粪便p53突变率为37．1％（23／62）,慢性胰腺炎为19．1％（4／21）。结论 胰腺癌患者胰液K－ras突变的敏感性、特异性高,可以作为胰腺癌诊断的辅助手段。粪便K－ras结合p53检测可以提高敏感性,在胰腺癌筛选中有潜在的价值,联合血清CA19－9等肿瘤标记物检测有助于提高胰腺癌早期诊断率。     

胰腺癌组织中K-ras基因点突变和端粒酶活性的检测与比较

[摘要]许多近期研究已显示出分子生物学特征在胰腺癌发生发展中起着重要作用，现认为K—ras基因是与胰腺癌高度相关的癌基因，其第一外显子12密码子点突变见于90％左右的胰腺癌，远远高于在其它肿瘤的突变发生率。目前资料也显示，在正常组织中均无端粒酶活性检出，而在绝大多数恶性肿瘤组织均显示明显的端粒酶活性。     

PCR—SSP检测人胰腺癌细胞株PC—2 K—ras基因点突变及其方式

目的 检测人胰腺癌细胞株PC－2 K－ras基因点突变及其突变方式，明确基因治疗靶点的碱基序列。方法 针对K－ras基因第12位密码子点突变方式（CGT，CAT，GTT）设计顺序特异性引物（SSP），对人胰腺癌细胞株PC－2进行聚合酶链反应（PCR），扩增产物借助聚丙烯酰胺凝胶电泳判定该细胞株有无K－ras基因点突变及其突变方式。结果 人胰腺癌细胞株PC－2存在K－ras基因点突变，突变方式为CGT。结论 PCR－SSP法简便快速，特异性高，本研究结果为胰腺癌的下一步基因治疗奠定了基础。     

应用肽核酸钳制PCR技术检测胰腺癌K ras基因突变

目的:应用肽核酸钳制PCR技术检测胰腺癌Kras基因突变,探讨其诊断价值。方法:结合特异性肽核酸(针对野生型序列)与实时定量PCR技术建立一步Kras基因检测法,与传统限制性片段长度多态性PCR法检测结果进行比较,评价新方法的诊断价值。结果:肽核酸钳制PCR法可同时对胰腺癌标本中Kras基因的第12、13密码子突变情况进行检测,操作简便;可在105倍的野生型Kras基因背景下检测出突变,灵敏度为0.001%,可检测突变基因最低限为102拷贝;该方法可同时进行较大规模的样品检测,单次检测时间仅需1 h。而传统方法可检测的突变基因最低限为103拷贝,检测灵敏度为0.01%;需花费约2 d完成同样数量的样本检测。结论:肽核酸钳制实时定量PCR法较限制性片段长度多态性PCR法有明显优势,适用于胰腺癌大规模临床样本的Kras基因突变检测,可作为胰腺癌筛查的有效手段。     

PCR-SSP法和基因测序检测人胰腺癌细胞株Patu 8988 K-ras基因第12位密码子点突变及其方式

目的检测人胰腺癌细胞株Patu 8988 K-ras基因点突变及其突变方式，明确基因治疗靶点的碱基序列。方法针对K—ras基因第12位密码子点突变方式（CGT、GTT、GAT）设计顺序特异性引物（SSP），对人胰腺癌细胞株Patu 8988进行聚合酶链反应（PCR），扩增产物经12％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后判断该细胞株有无K-ras基因点突变及其突变方式。逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增人胰腺癌细胞株Patu 8988 K—ras基因，扩增产物直接进行基因序列测定。结果PCR—SSP法检测人胰腺癌细胞株Patu 8988存在K—ras基因点突变，突变方式为GGT→GTT，其结果与基因序列测定完全相符。结论明确了人胰腺癌细胞株Patu 8988 K-ras基因第12位密码子点突变方式（GGP→GTT），为胰腺癌的下一步基因治疗研究打下了坚实的基础；PCR—SSP方法检测K-ras基因点突变简便、快速、经济且特异性高，有望在临床上成为早期诊断和鉴别诊断胰腺癌的实用检测方法。     

K—ras与p33ING1、CyelinE在直肠癌组织中表达及其生物学关系的研究进展

目的：总结K—ras与p33INGl、CyclinE（三基因蛋白）与直肠癌相关情况，探讨其三基因蛋白在直肠癌组织中表达及生物学行为的关系。方法：应用Medline及CNKI期刊全文数据库检索系统，以三基因蛋白、直肠癌等为关键词，检索2006—2012年相关文献。纳入标准，三基因蛋白生物学特性、作用机制；三基因蛋白与肿瘤关系；三基因蛋白与直肠癌作用机制关系。符合要求，纳入分析文献30篇。结果：三基因蛋白表达与直肠癌的发生、发展密切相关，突变型K—ras编码异常蛋白，刺激促进恶性肿瘤细胞增值、生长和扩散；p331NG1功能缺失或突变将导致细胞生长周期恶性循环，细胞生长失控，细胞凋亡下调，促使恶性肿瘤形成；CyclinE过表达对细胞增殖有促进作用，其表达与癌细胞的浸润有关。综述相关性分析示，K—ras基因蛋白表达与p33ING1蛋白表达呈负相关性，K—ras蛋白表达与CyctinE蛋白表达呈正相关，并有统计学意义，揭示三基因蛋白共同参与直肠癌的发生和发展。结论：三基因蛋白在直肠癌形成过程中起重要作用，并参与直肠癌的发生、发展机制，可能为直肠癌早期诊断和治疗提供新的理论依据。现就三基因蛋白生物学特性、作用机制及与肿瘤的关系研究进展作一综述。     

K-ras突变基因的克隆及逆转录病毒pEGZ/MCS HA载体的构建

目的 克隆K-ras癌基因，测定其序列及突变类型，构建逆转录病毒表达载体。方法 通过逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法从胰腺癌细胞株中克隆K—ras基因，与T-Vector载体连接后测序。构建含K—ras基因的逆转录病毒载体。结果 胰腺癌细胞株Bxpc-3、Sw1990未及点突变，Patu8988 12位密码子的GGT突变为GTT，13、61位无突变。酶切证明逆转录病毒表达载体构建成功。结论 K-ras癌基因的成功克隆及逆转录病毒表达载体的构建，为胰腺癌的免疫治疗研究奠定了基础。