Gefitinib抑制人胶质瘤U251细胞生长分子机制研究

目的:研究Gefitinib对人胶质瘤U251细胞的生长抑制作用及相关机制.方法:用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同浓度Gefitinib对U251细胞增殖活性的效应.流式细胞术(FCM)分析Gefitinib对U251细胞周期以及凋亡的影响,蛋白质印迹法检测周期、凋亡相关蛋白表达量的变化.罗丹明123/PI双染流式细胞术与吖啶橙(AO)染色荧光显微镜分析凋亡.结果:Gefitinib能显著抑制U251细胞的增殖,并呈剂量依赖关系,半数抑制浓度(IC50)为18.01 μmol/L.通过流式、荧光染色以及蛋白质印迹检测分析发现,随着浓度的增加,Gefitinib能明显阻滞U251细胞于G0/G1期,主要通过降低线粒体膜电位诱导细胞凋亡,0、10、20和40 μmol/L浓度处理后细胞凋亡率分别为1.28％、4.48％、77.97％和90.59％.Gefitinib对U251细胞的周期阻止与诱导凋亡主要是下调细胞周期依赖蛋白激酶CDK2、CDK4和CDK6的表达,同时上调p27Kip1的表达,引起细胞周期阻滞.上调、活化凋亡相关蛋白Bax,下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,导致线粒体膜电位降低,活化Caspase-9,诱导细胞凋亡.结论:Gefitinib在15～60 μmol/L浓度范围内,能明显抑制U251细胞的增殖并能通过周期阻滞诱导其凋亡,其作用呈浓度依赖关系.主要通过下调周期依赖蛋白激酶的表达阻滞U251细胞于G0/G1期,降低线粒体膜电位,活化Caspase途径诱导U251细胞凋亡.     

莱菔硫烷促进神经胶质瘤细胞凋亡的机制探讨

目的探讨莱菔硫烷(SFN)促进神经胶质瘤细胞凋亡的作用机制。方法采用噻唑蓝(MTT)法与流式细胞法检测不同浓度的SFN对神经胶质瘤U251细胞系生长的抑制作用,测定半数抑制浓度,空白对照设为对照组;采用Western blot研究SFN对U251细胞内Cyt-c的表达情况。结果不同浓度SFN组A值均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。不同浓度SFN均对U251细胞生长有一定抑制作用,12.5μmol/l、25μmol/l、50μmol/l、100μmol/l浓度的SFN对U251细胞生长抑制率逐渐增强,各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。但100μmol/l与200μmol/l浓度的SFN对U251细胞生长抑制率比较无统计学意义(P>0.05)。不同浓度SFN诱导细胞凋亡率及Cyt-c蛋白表达均显著高于对照组,且随着SFN浓度递增,U251细胞凋亡率、Cyt-c蛋白表达逐渐增加,各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论SFN可能参与神经胶质瘤细胞的凋亡过程,表现为诱导凋亡U251细胞,可能与Cyt-c表达增高存在关系。     

细胞外信号调节激酶1/2参与三氧化二砷诱导的胶质瘤细胞凋亡

目的:探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号通路在三氧化二砷诱导的胶质瘤细胞U251凋亡中的作用,为应用三氧化二砷治疗胶质瘤奠定基础。方法:50μmol/L三氧化二砷作用U251细胞,不同时间检测胶质瘤细胞增殖活性,半定量PCR检测ERK1/2mRNA表达,Western blot检测ERK1/2蛋白表达;Ho-echst33258染色及流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡;转染ERK1/2上游激酶MEK1,应用ERK1/2激酶抑制剂U0126观察ERK1/2通路在肿瘤凋亡及增殖中的作用;比色分析法检测Caspase-3活性的变化。结果:三氧化二砷诱导胶质瘤细胞发生明显凋亡,抑制肿瘤细胞增殖;增加ERK1/2蛋白的表达,呈时间依赖性;阻断ERK1/2信号通路后胶质瘤细胞凋亡受到抑制,Caspase-3活性下降。结论:ERK1/2信号通路在三氧化二砷诱导的胶质瘤细胞凋亡中起重要作用。     

桑根皮素调控Wnt/β-catenin信号通路影响胶质瘤U251细胞增殖的实验研究

目的 探讨桑根皮素调控Wnt/β-catenin信号通路对脑胶质瘤U251细胞增殖的影响.方法 体外培养人脑胶质瘤细胞U87,采用不同浓度桑根皮素(1、5、25、50、100μmol/L)作用于U87细胞,分别采用MTT法、细胞集落形成法、流式细胞术检测细胞增殖和凋亡活性.采用Western blotting法和细胞免...     

松油烯-4-醇对人多发性骨髓瘤U266细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨松油烯-4-醇（T4O）对人多发性骨髓瘤U266细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制。 方法 不同浓度（5~80 μmol/L）T4O体外作用于U266细胞。CCK-8法检测增殖抑制率;AO/EB染色,倒置显微镜观察细胞凋亡形态;比色法检测Caspase-3酶活性;流式细胞术检测细胞凋亡及周期;JC-1染色检测细胞线粒体膜电位。结果 T4O对U266细胞有增殖抑制作用,呈时间-剂量依赖性（P<0.05）。T4O诱导U266细胞凋亡,呈剂量依赖性（P<0.05）,随药物浓度增加,Caspase-3酶活性逐渐增强（P<0.05）, 线粒体膜电位逐渐降低（P<0.05）,细胞周期被阻滞在G2期。结论 T4O对U266细胞有抑制增殖及促凋亡作用,其机制是激活细胞凋亡途径关键酶Caspase-3,使细胞线粒体膜电位降低,并且使细胞周期阻滞在G2期,进而抑制肿瘤细胞分化与增殖。     

顺铂耐受胶质瘤细胞株诱导和细胞自噬的观察

背景与目的:明确胶质瘤耐药相关分子机制,有助于寻找新的治疗对策。我们将诱导对顺铂耐药的脑胶质瘤细胞株,探讨细胞自噬和胶质瘤细胞顺铂耐受的关系。方法:应用人胶质瘤细胞株U251,采用顺铂剂量梯度爬升筛选方法,诱导耐药胶质瘤细胞株;用MTT法测定该耐药细胞对顺铂的半数抑制浓度(IC50);电镜和GFP-LC3荧光染色检测细胞内自噬体;AnnexinV-FITC染色检测细胞凋亡;Western blot检测自噬相关蛋白LC3、Beclin1以及凋亡分子Caspase-3水平。结果:我们诱导获得的耐药胶质瘤细胞株U251/CP2对顺铂半数抑制浓度(IC50)较亲代U251增加了62.7倍(分别是1.2±0.4μg/ml和76.5±22.5μg/ml)。电镜和GFP-LC3荧光染色观察表明胶质瘤细胞呈现典型的自噬特征,表现为电镜下广泛的自噬性空泡的出现和GFP-LC3斑点状分布,且能够被自噬抑制剂3-MA和ERK抑制剂PD98059抑制。凋亡检测表明,经顺铂处理后,U251/CP2较U251凋亡率低,3-MA和PD98059能够显著增强顺铂对U251/CP2的凋亡诱导作用。Western blot检测表明,U251/CP2较U251具有显著上调的LC3和Beclin1水平,而Caspase-3水平较低。结论:U251胶质瘤细胞能够通过自噬作用保护细胞免受化疗药物顺铂的杀伤,从而免于发生细胞凋亡。     

白藜芦醇诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡作用的研究

目的:探讨白藜芦醇(Res)诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用及可能的机制.方法:MTT法检测不同浓度(0、12.5、25、50、100、200、300、400、600μmol/L)Res处理24、48、72h对HeLa细胞的抑制率;流式细胞仪采用AnnexinV和PI双染检测HeLa细胞的凋亡率.荧光显微镜观测细胞的形态学改变.分光光度法检测Caspase-3活性.结果:Res在一定浓度范围内,以浓度和时间依赖的方式抑制宫颈癌HeLa细胞的生长(P<0.05).以0、200、300μmol/L Res处理细胞48小时,HeLa细胞早期凋亡率分别为2.2%、7.1%、6.23%,晚期凋亡率为7.7%、16.04%、15.43%.荧光显微镜下细胞呈现典型的凋亡性改变.200μmol/L Res处理8h后,Caspase-3活性增加,24h达高峰,后逐渐下降,经50、100、200μmol/L Res处理24h后,Caspase-3活性与对照组相比,分别增加了1.92倍、2.51倍、4.53倍(P<0.05).结论:白藜芦醇通过诱导Caspase-3活性增加以时间和浓度依赖的方式抑制宫颈癌HeLa细胞增殖,诱导细胞凋亡.     

白藜芦醇抑制人脑胶质瘤细胞生长及诱导凋亡比较

 目的 探讨白藜芦醇（Resveratrol，Res）体外抑制U251、U87和SHG-44脑胶质瘤细胞生长及诱导凋亡的不同作用比较，验证Re8确可导致U251细胞凋亡。方法 MTT比色法测量不同剂量的Res作用U251、U87和SHG-44胶质瘤细胞24h后对增殖的影响及不同剂量的Res作用U251、U87和SHG-44细胞6h、24h、48h后的影响。流式细胞仪用Annexin V-FITC和PI双染检测U251、U87和SHG-44细胞凋亡率。HE染色、Hoechst 33342荧光染色、透射电镜（TEM）观察U251细胞形态改变，流式细胞仪测定U251细胞的细胞周期改变。结果 Res明显抑制U251、U87和SHG-44细胞的生长和增殖（P〈0．01）且对U87细胞的抑制作用最强，U251和SHG-44细胞次之；对U251细胞的抑制作用呈浓度及时间依赖性反应；Re8所致的U251、U87和SHG-44胶质瘤细胞凋亡为浓度依赖关系，且对U87细胞的凋亡作用强于U251和SHG-44细胞。U251凋亡细胞的细胞周期主要发生G，期阻滞。结论 Res对U251、U87和SHG-44细胞生长抑制及凋亡作用以U87细胞更明显，对U251细胞的抑制作用呈浓度及时间依赖性反应并引起了其细胞周期改变。     

EGFR抑制剂gefitinib对人胶质瘤细胞U251抑制作用的研究

背景与目的:使用小分子靶向药物治疗胶质瘤是神经肿瘤领域的研究热点。本文探讨EGFR抑制剂gefitinib对人胶质瘤细胞U251的抑制作用。方法:用不同浓度gefitinib作用于U251细胞72h后,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同浓度gefitinib作用后细胞的生存率;流式细胞术分析不同浓度gefitinib作用U251细胞72h后细胞周期的变化;Western blotting法检测不同浓度gefitinib作用后,U251细胞周期相关蛋白表达量的变化。结果:MTT结果显示与对照相比,不同浓度gefitinib作用U251细胞72h后,细胞增殖抑制率均具有显著性差异(P<0.05),并呈浓度依赖关系,半数抑制浓度(IC50)为18.01μmol/L。细胞周期检测结果显示,随着gefitinib浓度的增加,G0/G1期细胞数逐渐增加,而S+G2/M期细胞的比例明显降低,说明gefitinib阻滞U251细胞于G0/G1期。Western blotting分析结果显示gefitinib对U251细胞的G0/G1期阻滞主要通过下调细胞周期依赖蛋白激酶CDK2、CDK4与细胞周期素cyclin E的表达,同时上调p21的表达,介导周期阻滞来实现。结论:gefitinib可能通过细胞周期的G0/G1期阻滞,体外抑制人胶质瘤细胞的生长,这为gefitinib治疗恶性脑胶质瘤提供了一定的理论基础。但对于gefitinib的研究还需进一步深入,以明确其治疗机制及疗效。     

表没食子儿茶素没食子酸酯诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡及机制

[目的]探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的生物学效应及抗肿瘤机制.[方法]通过MTT还原法检测EGCG对该细胞系生长的影响;用普通光镜、流式细胞仪和DNA断裂片段分析研究EGCG诱导的细胞凋亡.S-P免疫组化法检测细胞内Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达.[结果]EGCG能抑制MGC-803细胞的生长,抑制作用呈时间和剂量依赖性关系;EGCG处理MGC-803细胞后,普通光镜下细胞呈凋亡特征性改变;流式细胞仪示同一时间不同浓度EGCG(60、80、100、120μmol/L,48h)处理MGC-803细胞和同一浓度不同时间(80μmol/L,48、72h)处理MGC-803细胞,亚G1期细胞都逐渐增多;MGC-803细胞经EGCG(80、100、120μmol/L,48 h)后,其DNA电泳图中出现梯形条带;S-P免疫组化结果表明80μmol/L EGCG处理细胞48h后,Bcl-2蛋白表达下降,Bax和Caspase-3蛋白表达升高.[结论]EGCG有诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的作用,其机制可能与Bax/Bcl-2比值增高导致Caspase-3的活化从而启动细胞凋亡有关.     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

Assessment of the degree of carcinogenicity of small doses of nitrites

Chronic experiments on CBA and C57B1 mice and acute experiments on CBA mice established: (a) carcinogenic effect of sodium nitrite given continuously with drinking water (0.1; 1.0 and 10.0 maximum allowable concentration) in combination with morpholine fed with bread, and (b) endogenous synthesis of nitrosomorpholine as a result of simultaneous intragastric administration of same doses of sodium nitrite and morpholine. Also, nitrosomorpholine and N-nitrosodimethylamine synthesis was observed in vitro following addition of low-dose sodium nitrite, morpholine and amidopyrine to human gastric juice. Carcinogenic hazard associated with low-dose nitrite consumption in humans is discussed.     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。     

胰头癌手术切除可能性的术前评价

目的通过总结胰头癌病人的临床表现和影象学检查结果来评价手术切除的可能性。方法总结32例胰头癌病人的临床表现和CT、磁共振（MRI）检查结果,判断肿瘤是否已发生邻近浸润或远处转移,以此来评价其手术切除的可能性。结果在22例作CT检查的病例中,判断正确的为17例,准确率为77．3%。作MR检查9例,全部判断正确,准确率为100%。结论某些特殊的临床表现和CT、MR检查对判断肿瘤是否发生邻近浸润或转移有较大价值,为术前评价手术切除的可能性提供依据。