复苏因子促进休眠结核杆菌复苏作用的研究

目的 研究复苏因子蛋白对休眠结核杆菌的复苏作用,探索对休眠结核杆菌的最佳复苏方案.方法 应用含不同浓度复苏因子蛋白的7H9液体培养基培养休眠结核杆菌H37Rv,分别在第6天、第11天、第16天和第30夭检测培养物的OD值、并取10 μL培养液涂于7H1 1平板培养、抗酸染色.结果 低浓度组合有最佳复苏效果.高浓度复苏因子组合抑制休眠结核菌复苏.低浓度复苏因子A和高、低浓度的复苏因子B、C、E均有不同程度的复苏促进作用,复苏因子D和高浓度的复苏因子A均无复苏作用.重复试验结果 相同.结论 结核杆菌复苏因子蛋白对结核杆菌有复苏促进作用.     

噬菌体TM4复苏结核休眠菌的初步研究

目的探索噬菌体TM4对结核休眠菌复苏的作用。方法采用密闭培养对数生长期结核菌构建休眠菌模型;采用药敏检测和透射电子显微镜（电镜）观察作为模型检测方法;采用菌落计数和电镜观察作为复苏的检测指标。结果密闭培养180d休眠菌模型构建成功;培养3d复苏促进因子（Rpf）E组管底菌量多于空白组和TM4组,培养8d噬菌体TM4组管底菌量多于空白组,后续观察见TM4组和RpfE组管底菌量均较前有所增加。混合液培养第1日时,空白组、TM4组和RpfE组的菌落计数均为0;培养第6日时,菌落计数分别是0、0．7×10^2和2×10^4CFU／mL;培养第14日时,菌落计数分别是3．4×10、1．68×10^7和2．1×10^9CFU／mL。培养第17日时,电镜观察发现混合物TM4组有大量薄壁结核菌、部分厚壁结核休眠菌和结核菌细胞碎片,RpfE组满视野薄壁的结核菌,空白组含大量厚壁的结核休眠菌和少数薄壁结核菌。结论噬菌体TM4能够复苏结核休眠菌。     

复苏因子促进休眠结核杆菌复苏作用的研究

目的研究复苏因子蛋白对休眠结核杆菌的复苏作用，探索对休眠结核杆菌的最佳复苏方案。方法应用含不同浓度复苏因子蛋白的7H9液体培养基培养休眠结核杆菌H37Rv，分别在第6天、第11天、第16天、第30天检测培养物的OD值、并取10μL培养液涂于7H11平板培养、抗酸染色。结果低浓度组合有最佳复苏效果，高浓度复苏因子组合抑制体眠结核菌复苏。低浓度复苏因子A和高、低浓度的复苏因子B、C、E均有不同程度的复苏促进作用，复苏因子D和高浓度的复苏因子A均无复苏作用。重复试验结果相同。结论结核杆菌复苏因子蛋白对结核杆菌有复苏促进作用。     

OD450值与金黄色葡萄球菌活菌数目的相关性研究

目的探讨OD450值与金黄色葡萄球菌活菌数目的相关性。方法金黄色葡萄球菌单菌落在LB培养基中培养18h,初步稀释后检测菌液的OD450值;取OD450值在0.9-1.0之间的菌液进一步稀释检测OD450值;最后将菌液再稀释5×105倍后取0.5ml涂LB琼脂平板,金黄色葡萄球菌在LB琼脂平板上培养18h后计算菌落数目。结果 OD450值与金黄色葡萄球菌活菌数目呈线性相关,线性回归方程为Y=1.153 92X＋0.007 68,OD450值（X）,活菌数目（Y×108）/ml。结论用OD450值检测菌液中金黄色葡萄球菌活菌数目具有简便、准确和迅速的特点。     

噬菌体Guo1复苏结核休眠菌的初步研究

目的：探索分枝杆菌噬菌体Guo1对结核休眠菌的复苏作用。方法：采用缺钾Sauton培养基培养对数生长期结核菌构建结核休眠菌模型;采用药敏检测、透射电子显微镜(电镜)观察和金胺O-尼罗红双荧光染色作为模型检测方法;采用菌落计数作为复苏的检测指标。结果：缺钾结核休眠菌模型构建成功。混合培养第1天时,空白对照组、上清组、TM4组、Guo1组菌落计数分别为(2.67±0.58)×102、(3.00±1.00)×102、(2.67±0.58)×102、(2.33±0.58)×102 CFU/mL;培养第15天时,各组菌落计数分别为(7.33±1.53)×104、(6.67±2.08)×1010、(3.00±1.00)×1010、(3.33±1.53)×1010CFU/mL。结论：分枝杆菌噬菌体Guo1能够复苏结核休眠菌。     

应用MPT64为靶标快速检测结核分枝杆菌生长的研究

目的探讨应用MPT64作为快速检测结核分枝杆菌生长指示的可能性,以期建立一种准确、快速、简便、易于普及开展的结核分枝杆菌生长检测方法。方法应用BACTEC MGIT960分枝杆菌快速培养仪器系统培养法对4株结核分枝杆菌1 mg/mL纯培养物菌液进行10倍稀释共7个稀释浓度的32例菌悬液、64例涂片抗酸染色阳性样本及98例非选择性临床送检样本进行培养。同时,对菌悬液,高浓度MPT64检测阳性时,即对下一浓度每天进行1次MPT64检测,对涂片阳性样本培养管每天进行1次MPT64检测,阴性者检测至培养阳性出现或至培养42 d;对非选择性临床送检样本每周定时进行1次MPT64检测,阴性者检测至培养6周。结果(1)4株结核分枝杆菌1 mg/mL纯培养物菌液稀释试验显示:应用MPT64作为快速检测结核分枝杆菌生长指示的最小菌量为10-7～10-6mg/mL,仪器系统培养法为10-6～10-5mg/mL。(2)64例涂片抗酸染色阳性样本63例培养阳性,其中菌种鉴定为结核分枝杆菌的58例样本中56例MPT64检测阳性,检出时间为3～16 d,平均7.8 d,其培养阳性检出时间为6～30 d,平均13.7 d。其余5例非结核分...     

关于结核分枝杆菌定量方法的研究

目的:比较荧光定量PCR法和培养法在结核分枝杆菌定量上是否有差异及探讨应用DNA拷贝浓度替代菌液浓度的可能性。方法:将6种不同浓度的H37Rv标准菌株悬菌液各分为两组:PCR法组和培养法组,并在同一个721型可见光分光光度仪上测定其OD600值。然后,采用荧光定量PCR法,建立结核分枝杆菌DNA拷贝浓度-OD标准曲线,同时对同一标本进行培养并行菌落计数,比较PCR方法和培养法对结核分枝杆菌定量结果是否一致。结果:两种方法对结核分枝杆菌定量无显著性差异(P>0.05)。OD值与DNA拷贝浓度和悬菌液浓度均呈正相关,相关系数分别为1,P<0.01。其回归方程PCR法为:C(H37Rv)=-0.0189+6.991OD,培养法为:C(H37Rv)=-0.0201+6.757OD,OD范围0.1~0.9。结论:荧光定量PCR法和培养法所得结果基本一致,是一种结核分枝杆菌定量新的方法,可替代菌液浓度法应用于动物实验。     

乙酰丙酸-十二烷基硫酸钠对大肠埃希菌、耻垢分枝杆菌、结核分枝杆菌的杀灭作用研究

目的 研究消毒剂乙酰丙酸-十二烷基硫酸钠(levulinic acid,sodium dodecyl sulfate,LVA-SDS)对大肠埃希菌、耻垢分枝杆菌、结核分枝杆菌标准株H37Rv的杀灭作用.方法 按照2002年版卫生部《消毒技术规范》要求,同时参照美国临床和实验室标准协会(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI) M07-A9的试验方法,在96微孔板上采用微量培养法和悬液定量杀菌试验,分别检测LVA-SDS的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)和最低杀菌浓度(minimal bactericidal concentration,MBC)以及不同浓度的LVA-SDS对大肠埃希菌、耻垢分枝杆菌、结核分枝杆菌标准株H37Rv的杀灭作用.结果 LVA对大肠埃希菌作用后的MIC值、MBC值均为0.3％LVA,对耻垢分枝杆菌作用后均为0.6％LVA,对结核分枝杆菌标准株H37Rv作用后均为0.075％LVA.LVA-SDS对大肠埃希菌作用后的MIC值、MBC值均为0.3％LVA+0.03％ SDS,而对耻垢分枝杆菌作用后均为0.6％LVA+0.06％SDS,对结核分枝杆菌标准株H37Rv作用后均为0.075％LVA+0.0075％ SDS.一定浓度范围的LVA-SDS随着时间(1～10 min)的延长,对大肠埃希菌、耻垢分枝杆菌的杀灭作用逐渐增强.5％LVA+0.5％SDS作用3 min对大肠埃希菌、耻垢分枝杆菌的杀灭率均达到100％.结论 LVA-SDS对大肠埃希菌、耻垢分枝杆菌、结核分枝杆菌标准株H37Rv均有较好的杀灭作用,具有较强的实际应用前景.     

应用MPT64为靶标快速检测结核分枝杆菌生长的实验研究

目的 探讨应用MPT64作为快速检测结核分枝杆菌生长指示的可能性,以期建立一种准确、快速、简便、易于普及开展的结核分枝杆菌生长检测方法。 方法 应用BACTEC MGIT 960分枝杆菌快速培养仪器系统培养法对4株结核分枝杆菌1mg/mL纯培养物菌液进行10倍稀释共7个稀释浓度的32例菌悬液、64例涂片抗酸染色阳性样本及98例非选择性临床送检样本进行培养。同时,对菌悬液,高浓度MPT64检测阳性时,即对下一浓度每天进行1次MPT64检测,对涂片阳性样本培养管每天进行1次MPT64检测,阴性者检测至培养阳性出现或至培养42d;对非选择性临床送检样本每周定时进行1次MPT64检测,阴性者检测至培养6周。 结果 （1）4株结核分枝杆菌1mg/mL纯培养物菌液稀释试验显示：应用MPT64作为快速检测结核分枝杆菌生长指示的最小菌量为10--7～10-6mg/mL,仪器系统培养法为10--6～10-5mg/mL。（2）64例涂片抗酸染色阳性样本63例培养阳性,其中菌种鉴定为结核分枝杆菌的58例样本中56例MPT64检测阳性,检出时间为3～16d,平均7.8d,其培养阳性检出时间为6～30d,平均13.7d。其余5例非结核分枝杆菌培养物的MPT64检测阴性全部阴性。（3）98例非选择性临床送检样本中29例培养阳性,其中菌种鉴定为结核分枝杆菌的26例样本MPT64检测全部阳性,培养阳性检出时间为7～39d,平均19.2d,MPT64检测阳性结果均在4周内呈现;在69例培养阴性样本中有2例MPT64检测阳性,分别在培养3、4周末检出,增补结核分枝杆菌DNA扩增实验,结果阳性;其余61例MPT64检测阴性培养样本和3例非结核分枝杆菌培养样本培养物在培养6周末时MPT64检测均为阴性。(4)以BACTEC MGIT 960快速培养系统方法为参照,应用MPT64检测指示结核分枝杆菌生长方法的敏感性为97.61%、特异性为97.43%。 结论 应用MPT64为靶标快速检测结核分枝杆菌生长,结     

生物荧光法检测结核分枝杆菌ATP含量

目的：建立生物荧光技术检测结核分枝杆菌ATP含量的方法并观察几种杭结核药物异烟肼和利福平的作用。方法：结核分枝杆菌标准株H37Rv的菌悬液,经高温裂解,提取ATP,用生物荧光技术检测ATP含量。条件稳定后,观察菌数和ATP浓度的关系,以及加入不同浓度的抗结核药物后1周之内ATP的动态变化。结果：菌液加入裂解液后100℃煮沸8分钟,迅速降至室温,加入荧光素酶,3—5分钟时测荧光值。按上述步骤提取和测定时菌数和ATP浓度成正比关系。含药液体培养情况：随药物浓度增加,ATP量下降,培养至第7天时,药物的敏感性可以初步进行判断。结论：所建立的生物荧光法检测结核分枝杆菌ATP含量,具有简便、快速、敏感、可重复性强等特点,有望成为结核菌体外药敏试验的一种有用的方法．     

Resuscitation of the terminally ill

The CMA believes that there are conditions of ill health and inevitable death for which a “no resuscitation” order, signed by the attending physician, is appropriate and ethically acceptable. The association encourages physicians who are faced with the decision of writing a “no resuscitation” or “do not resuscitate” order to consider the clinical criteria and procedural guidelines in the Joint Statement on Terminal Illness. This protocol is intended as a basic, national guideline for those involved in the care of the terminally ill. Individual institutions may wish to develop their own directives as an adjunct to the national statement.