正常骨髓基质细胞对全反式维甲酸诱导分化HL-60细胞的作用

目的研究BMSC对ATRA抑制HL-60细胞增殖、诱导其分化的作用。方法分别将融合的基质细胞层(SC)、2%戊二醛固定的基质细胞层(FSC)和基质细胞,条件培养液(SCM)与HL-60细胞共同培养。SC、FSC、SCM组分别加或不加ATRA为实验组,另设阴性对照和ATRA对照组。通过细胞计数观察细胞增殖情况及通过细胞形态观察,NBT还原试验,分析细胞分化状态。结果细胞计数示SC、FSC、SCM各组均能抑制悬浮生长的HL-60细胞的增殖;SC和FSC能增强ATRA对HL-60细胞的抑制增殖作用(P<0·01)。SC、FSC、SCM各组的诱导分化率、NBT还原率等分化指标均与阴性对照组无差异(P>0·05);SC和FSC可促进ATRA对HL-60细胞的诱导分化作用(P<0·01)。结论BMSC可增强ATRA对悬浮生长的HL-60细胞的抑制增殖和诱导分化作用,这可能是通过BMSC与HL-60细胞之间的相互作用调节的。     

骨髓基质细胞在脂多糖诱导的肺损伤小鼠肺组织的定植研究

目的：探讨静脉输注骨髓基质细胞（BMSCs）在脂多糖（LPS）诱导的肺损伤小鼠肺组织定植并向肺泡上皮细胞分化的可能性。方法：绿色荧光蛋白（GFP）转基因C57BL/6J小鼠作为BMSCs移植供体,同种野生型小鼠为移植受体。气道滴入LPS诱导肺损伤。受体分为以下几组：(1) PBS+BMSCs移植（CM）; (2) LPS+BMSCs 移植（LM）; (3) PBS+全身放射+BMSCs移植（CIM）; (4) LPS+全身放射+BMSCs移植（LIM）。移植14 d后,以免疫荧光双标染色检测BMSCs在受体肺组织的定植情况,流式细胞仪检测体外培养的肺泡II型上皮细胞（AEC II）GFP阳性率,荧光定量PCR法检测肺组织表面活性物质蛋白（SP）-A、SP-C和水通道蛋白（AQP）-5 mRNA的表达。结果：移植后14 d,免疫荧光双标染色可见CIM和LIM组有少量肺泡上皮细胞呈GFP和角蛋白双染阳性,而且LIM组较CIM组有较多阳性细胞。与CM和LM组（分别为2.82±1.03%和3.81±0.93%）比较,CIM和LIM组的AEC II GFP阳性率更高（分别为11.10±3.19% 和14.40±2.40%; P<0.05）。LIM组SP-C mRNA表达较CM组增高(2.09±0.18 vs 1.38±0.30;P<0.05)。结论：供体来源的BMSCs能在LPS诱导的受损肺组织定植分化,提示静脉输注BMSCs可能有助于肺损伤的修复。［中国当代儿科杂志,2009,11（5）：321-327］     

骨髓基质细胞组成及造血调控作用的研究进展

基质细胞是构成骨髓造血微环境的重要组成部分,在各系造血细胞增殖、分化、成熟、迁入血窦并最终进入外周循环的过程中发挥重要作用.基质细胞包括树突状细胞、巨噬细胞、成纤维细胞、内皮细胞、脂肪细胞和网状细胞等.这些细胞可以通过分泌细胞因子、胞外基质和细胞直接接触调控造血的全部过程,基质细胞造血微环境的紊乱将直接造成各种血液和免...     

全反式维甲酸对肾硬化大鼠肾脏组织α-SMA表达及细胞外基质代谢的影响

目的 探讨全反式维甲酸(ATRA)对肾硬化大鼠肾脏组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达、Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)和纤维连接蛋白(FN)代谢的影响.方法 80只雄性8周龄Wistar大鼠随机分成4组,假手术组、模型组、苯那普利组和ATRA组,每组20只.采用单侧肾切除加1周后尾静脉注射阿霉素(5 mg/kg)的方法建立肾小球硬化(GS)大鼠模型,造模后12周末处死.肾脏病理切片采用苏木素-伊红(HE)染色,计算肾小球硬化指数(GSI).免疫组织化学方法检测肾脏组织α-SMA、Col Ⅳ和FN的蛋白表达,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肾脏组织α-SMA mRNA的表达.结果 与模型组相比,ATRA组和苯那普利组大鼠GSI显著下降(P<0.01),肾脏组织Col Ⅳ、FN及α-SMA蛋白表达显著减少,肾脏组织α-SMA mRNA表达量显著下降(P<0.05),但两治疗组间差别无统计学意义(P0.05).结论 ATRA可能通过抑制GS大鼠肾脏组织α-SMA表达,减少细胞外基质合成,最终延缓GS进展.     

人胚胎骨髓基质细胞的体外培养观察

为了探讨人胚胎骨髓基质细胞的生物学特性,我们分别在体外培养人胚胎骨髓基质细胞（ＦＢＭＳＣｓ）和成人骨髓基质细胞（ＡＢＭＳＣｓ）,在光镜下观察它们各自的细胞形态,集落形态和大小。结果表明：ＦＢＭＳＣｓ和ＡＢＭＳＣｓ的ＣＦＵ－Ｆ细胞形态,集落形态,集落数,集落大小均无差异,但从出现小丛,形成集落,集落融合交错成片,到集落完全铺满瓶底,ＦＢＭＳＣｓ均晚于ＡＢＭＳＣｓ。表明ＦＢＭＳＣｓ较ＡＢＭＳＣｓ更原始幼稚,可能具有更好的支持造血功能。     

全反式维A酸对缺氧性肾小管上皮细胞Prohibitin1和Prohibitin2表达的影响

目的 探讨全反式维A酸(ATRA)对缺氧性肾小管上皮细胞(RTEC) Prohibitin1(PHB1)和Prohibitin2(PHB2)表达的影响.方法 购自上海生物细胞库的大鼠近端肾小管上皮细胞株NRK-52E,采用混有胎牛血清和双抗的培养基(100 mL培养基中加5 mL胎牛血清和1 mL双抗)在37℃、50 mL/L二氧化碳的培养箱中培养.传代3次后分为正常组、模型组和ATRA干预组.正常组细胞不做任何处理,模型组细胞置于真空罐中,负压吸引器吸尽残余空气,充人缺氧气体(950 mL/L氮气和50 mL/L二氧化碳)密封建立缺氧性RTEC损伤模型,ATRA干预组细胞中加入0.1 μmol/L ATRA后参照模型组的方法进行缺氧.于缺氧24 h、36 h采用实时荧光定量PCR法测定各组NRK-52E细胞PHB1、PHB2、转化生长因子-β1(TGF-β1)的mRNA表达,Western blot法检测各组NRK-52E细胞PHB1、PHB2、TGF-β1的蛋白表达.结果 1.与正常组比较,模型组和ATRA干预组2个时间点NRK-52E细胞的PHB1和PHB2的蛋白表达量及其mRNA表达量均显著下降(P均＜0.05),缺氧时间越长,表达量越低;与模型组比较,ATRA干预组2个时间点NRK-52E细胞的PHB1和PHB2的蛋白表达量及其mRNA表达量均显著上升(P均＜0.05).2.与正常组比较,模型组和ATRA干预组2个时间点NRK-52E细胞的TGF-β1的蛋白表达量及其mRNA表达量均显著上升(P均＜0.05),缺氧时间越长,表达量越高;与模型组比较,ATRA干预组2个时间点NRK-52E细胞的TGF-β1的蛋白表达量及其mRNA表达量均显著下降(P均＜0.05).结论 ATRA可显著增强缺氧性RTEC中PHB1和PHB2蛋白表达量及其mRNA表达量,可能对缺氧性RTEC有保护作用.     

全反式维甲酸对K562细胞的诱导分化作用

目的：全反式维甲酸(ATRA)对肿瘤细胞具有广泛的抑制增殖、促进分化作用。本研究通过体外培养检测ATRA对K562细胞是否具有诱导分化作用。方法：采用联苯胺染色、瑞氏染色、非特异性酯酶染色、硝基四唑氮蓝还原试验4种不同的染色方法及流式细胞术,观察经1μmol/L及2.5μmol/L ATRA诱导1d,4d,5d后,K562细胞出现诱导分化特征。结果：1μmol/L及2.5μmol/L ATRA均可诱导K562细胞向粒系分化。培养4d,1μmol/L ATRA组61.5％的K562细胞、2.5μmol/L组39％的K562细胞显示出向粒系成熟方向分化;培养5d,处理组的分化细胞数仍明显高于对照组(P<0.05),但两种浓度ATRA的诱导分化强度无统计学差异(P>0.05)。且均未出现向红系或单核细胞方向分化的特征。流式细胞仪检测ATRA诱导前后CD13及CD71的表达,1μmol/L ATRA诱导K562细胞1d,CD13抗原表达阳性率为8.0％,2.5μmol/L组则为6.7％,均高于对照组(2.1％)。培养5d,1μmol/L和2.5μmol/L AFRA组的CD13分别升高到28.1％,37.8％,而CD71则分别下降至1.2％和0.9％。与对照组比差异均具有显著性(P<0.05)。结论：ATRA可诱导K562细胞向粒系成熟方向分化。     

骨髓基质细胞对白血病细胞保护作用的研究进展

白血病骨髓基质细胞与其分泌的细胞因子、细胞外基质构成的骨髓微环境在机体造血发育、血液病发生、恶性血液病细胞凋亡等生理病理过程中发挥着重要作用.该文综述了白血病患者骨髓基质细胞与白血病细胞耐药、抗凋亡特性的关系及其机制的相关研究进展.     

骨髓基质细胞对白血病细胞保护作用的研究进展

白血病骨髓基质细胞与其分泌的细胞因子、细胞外基质构成的骨髓微环境在机体造血发育、血液病发生、恶性血液病细胞凋亡等生理病理过程中发挥着重要作用.该文综述了白血病患者骨髓基质细胞与白血病细胞耐药、抗凋亡特性的关系及其机制的相关研究进展.     

造血因子基因修饰的基质细胞诱导造血细胞向巨核系细胞定向扩增的研究

目的　为诱导造血细胞在体外向巨核系细胞定向扩增 ,观察了促血小板生成素 (TPO)、白细胞介素 11(IL 11)基因修饰的成纤维样基质细胞 (HFCL)对纯化的脐血CD 34 造血细胞向巨核系细胞定向增殖分化的影响。方法　以未经造血因子修饰的HFCL支持的造血细胞体外扩增作为对照 ,采用流式细胞仪检测脐血CD 34 造血细胞在TPO基因修饰的HFCL(TPO/HFCL)、IL 11基因修饰的HFCL(IL 11/HFCL)以及TPO和IL 11基因共修饰的HFCL(TPO IL 11/HFCL)的支持下 ,经过 7d的体外扩增后 ,扩增细胞中的CD 34 CD 4 1巨核系祖细胞和表型为CD 4 1CD 61较成熟的巨核系细胞的比例。结果　脐血CD 34 造血细胞经过 7d体外扩增后 ,CD 34 CD 4 1巨核系祖细胞在TPO/HFCL、IL 11/HFCL和TPO IL11/HFCL支持的扩增细胞中的比例分别为 (13.7± 2 .0 ) %、(9.9± 1.1) %、(14.5± 2 .0 ) % ,高于HFCL的 (6 .5± 1.8) % (P <0 .0 1) ;并表现为TPO/HFCL支持的扩增细胞中巨核系祖细胞的比例高于IL 11/HFCL(P <0 .0 5 )。而表型为CD 4 1CD 61的巨核系细胞在扩增细胞中的比例分别为 (11.9±0 .7) %、(2 4.1± 3 .1) %、(17.6± 1.9) % ,其中IL 11/HFCL和TPO IL 11/HFCL支持的扩增体系高于HFCL的 (10 .6± 1.5 ) % (P <0 .0 1) ;且IL 11/HFCL对CD 4 1CD     

全反式维甲酸对足细胞损伤保护作用的研究进展

全反式维甲酸(ATRA)是维生素A类衍生物,在调节细胞聚集、分化、凋亡、增殖及炎症反应中起重要作用。近年来ATRA在肾脏疾病的作用,特别是对足细胞保护作用的研究取得了一定进展。该文就足细胞损伤、ATRA作用特点,以及ATRA诱导足细胞分化及再生、抗增殖与纤维沉积、抑制凋亡等保护作用研究进展作综述。     

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目的 评价全反式维甲酸(ATRA)、三氧化二砷(As2O3)的联合化疗治疗方案对儿童急性早幼粒细胞性白血病(APL)的疗效.方法 1995-07--2005-06在中山大学附属二院及广州市儿童医院共有14例患儿接受了含ATRA、As2O3的联合化疗方案,其中男10例,女4例;年龄2.1～12岁,平均6.7岁.所有病例起病时均有贫血、皮肤瘀斑或牙龈出血等表现;骨髓检查原始+幼稚细胞比例为59.0%～97.5%,其中M3a 9例,M3b 5例;8例患儿行PML-RARα融合基因检测,其中阳性6例.比较不同细胞学类型、化疗方案等对APL的疗效及对复发率的影响.结果 14例中有12例(85.71%)使用上述的诱导缓解方案达到骨髓(BM)缓解CR1,由开始治疗到BM CR1的中位时间为5周(2～9周);该组病例使用As2O3、DA、HA、EA、DEA序贯或同时联合其它化疗的巩固方案,共2例复发,均为M3b;用不同的巩固方案对APL复发影响差异无显著性(P=0.195);含As2O3的方案进行维持治疗可能减少APL患儿的复发;是否加用VP/6MP+MTX序贯维持治疗对控制复发差异无显著性(P=0.66).结论 含ATRA、As2O3的联合化疗方案对儿童APL是一种有效的治疗方法,可以减少复发.     

全反视黄酸对哮喘大鼠气道反应性和气道重塑的影响

目的：观察全反视黄酸(ATRA)对哮喘大鼠气道反应性、气道重塑和肺组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法：40只大鼠随机分为5组,每组8只：盐水组、模型组、ATRA组、棉籽油组和布地奈德（BUD）组。后4组经卵清蛋白（OVA）致敏14 d后激发6周,构建大鼠慢性哮喘模型。ATRA组、棉籽油组和BUD组每次激发前分别给予ATRA 50 μg/kg、棉籽油1 mL和BUD 0.32 mg/kg。5组大鼠行气道反应性检测,并测定肺组织MMP-9表达和气道重塑情况。结果：ATRA干预组的气道反应性与盐水组比较差异无统计学意义（P＞0.05）,MMP-9表达高于盐水组,差异具有统计学意义（P＜0.05）。ATRA干预组的气道反应性和MMP-9表达均明显低于模型组,气道重塑改变减轻,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论：早期预防性ATRA干预通过减少肺组织MMP-9表达,可在一定程度上减轻哮喘大鼠的气道重塑和气道高反应性。     

Analysis of telomerase activity and RNA expression in a patient with acute promyelocytic leukemia treated with all-trans retinoic acid

In this study, we show that all-trans retinoic acid (ATRA) treatment leads to a rapid decrease in telomerase activity, which was associated with the reduction in myeloblasts and occurs before the appearance of myelocytes, in a patient with acute promyelocytic leukemia (APL). Microarray analysis by ATRA treatment for 48 hr in peripheral blood mononuclear cells (in vivo) and in cultured bone marrow mononuclear cells (in vitro) from a patient with APL revealed upregulation of CD11b, CD11c, CCAAT enhancer binding protein epsilon, Rb1, Mad, and tumor necrosis factor-related genes; and downregulation of hTERT, c-Myc, WT1, bcl-2, and eukaryotic translation elongation factor 1alpha2. The results might offer the potential to define the molecular mechanism underlying ATRA-induced granulocytic differentiation in patients with APL, and provide clues to identify novel molecular therapeutic targets.     

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目的观察三氧化二砷(As2O3)联合全反式维甲酸(ATRA)诱导治疗儿童急性早幼粒细胞白血病(APL)能否提高疗效,及改善其毒副反应。方法2000年2月至2005年1月于北京大学人民医院儿科就诊的初治APL患儿12例,观察经As2O3和ATRA联合治疗后的缓解情况、凝血功能恢复及毒副反应等;并与1994～2000年入院的11例单用ATRA治疗的初治APL患儿作对照。结果(1)As2O3联合治疗组完全缓解率高于对照组,11例完全缓解(11/12),缓解率为91.7%;对照组完全缓解8例,1例脑出血死亡,完全缓解率72.7%(8/11)。(2)联合治疗组凝血指标于治疗后(7.82±4.12)d恢复正常,对照组于治疗后(14.33±5.77)d恢复正常,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。(3)联合治疗组胃肠道反应、肌肉疼痛、肝功异常发生率较对照组高,但都为轻度一过性改变;对照组肾功能异常、头痛发生率较高。(4)联合治疗组治疗后白细胞升高的峰值明显低于对照组,且白细胞增高持续时间亦较短。结论As2O3联合ATRA治疗具有更高的诱导缓解率;能较快地改善凝血功能;无严重的不可逆毒副反应发生。     

全反式维甲酸对脐血粒-单系祖细胞HOXB6基因表达的影响

目的探讨脐血造血干祖细胞(HSPC)向粒-单系(CFU-GM)增殖过程中HOXB6mRNA表达及全反式维甲酸(ATRA)对HOXB6mRNA表达的影响。方法1.采用造血祖细胞体外培养技术,以ATRA持续干扰人类造血干祖细胞,观察人脐血HSPC经人粒细胞-单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)诱导后,在培养过程第3天,7天和12天的CFU-GM集落生成情况。2.采用实时荧光定量PCR技术(FQ-RT-PCR)检测造血祖细胞增殖分化过程中HOXB6基因的表达水平。3.结果用DNA相对拷贝数和RNA表达相对量(2-△△Ct)表示HOXB6基因相对表达量。结果1.人类造血干祖细胞向粒单系增殖分化过程中,各组细胞HOXB6基因均表达;2.随时间延长,CFU-GM-HOXB6-mRNA在增殖分化的第7天表达最强烈,第12天表达明显减弱;3.与正常对照组比较,ATRA可上调HOXB6基因的表达。结论1.在脐血CFU-GM祖细胞的不同增殖阶段,HOXB6基因呈现持续稳定的表达,提示HOXB6是人类造血干祖细胞向粒单系正常增殖分化过程中的调控基因之一;2.ATRA能显著上调HOXB6基因的表达。     

外源性视黄酸调节乳鼠心肌细胞Tbx1的表达

目的 研究视黄酸(RA)对心肌细胞Tbx1基因表达的影响.方法 分离培养乳鼠心肌细胞,经不同浓度的RA处理后,采用RT-PCR和Western blot方法分别检测乳鼠心肌细胞Tbx1基因在mRNA和蛋白水平表达的变化.结果 Tbx1基因在乳鼠心肌细胞有少量基础的表达,在予以RA刺激后,1×10-7mol/L RA使细胞内Tbx1基冈mRNA和蛋白含量表达分别增加1.51倍和1.10倍(P均<0.05),1×10-6 mol/L RA使细胞内Tbx1基因mRNA和蛋白含量表达分别增加2.21倍和2.38倍(P均<0.05).结论 RA可以上调乳鼠心肌细胞Tbx1的表达,且此作用呈剂量依赖效应.     

肺动脉高压大鼠模型肺血管维甲酸受体的变化

目的阐明维甲酸受体(retinoic acid receptor,RAR)变化与肺动脉高压发病机制的关系,并评价全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,atRA)对肺高压肺血管重建过程的逆转作用。方法选择3周龄SD大鼠72只,将其平均分为3组,试验组1为野百合碱(Monocrotaline,MCT)诱导建立SD大鼠肺动脉高压模型;试验组2为MCT诱导建立SD大鼠,同时给予atRA 10 mg/(kg.d)灌胃;对照组为生理盐水组。分别于实验第7、14、21、28天每组取6只大鼠,测肺动脉压力后处死;实时定量RT-PCR检测主动脉、肺动脉及肺组织中RAR受体数量与mRNA水平。结果肺动脉高压时,肺血管中RAR各亚型(α、β、γ)转录水平均有下降,且随肺动脉高压加重下降更为明显。结论 RAR可能参与了肺动脉高压的发病机制。