用啤酒酵母基因工程菌筛选新型免疫抑制剂

根据ｒａｐａｍｙｃｉｎ免疫抑制作用机理，应用含有ＲＢＰ基因的啤酒酵母基因工程菌ＲＳ１８８Ｎ及其变株ＲＳ１８８ＮΔｒｂｐ，建立了ｒａｐａｍｙｃｉｎ及其药效基团类似物的筛选模型，对３０００多个微生物次级代谢产物和一些植物提取物进行筛选，获得阳性结果活性物产生菌１株，编号ＳＩＡ９２６８，经菌种鉴定定名为吸水链霉菌东湖变种，其活性代谢产物经理化性质和波谱解析表明与ｒａｐａｍｙｃｉｎ为同一物质     

免疫抑制剂SIIA9268A的研究.Ⅰ.发酵、分离及理化性质

在用含ｒａｐａｍｙｃｉｎ结合蛋白基因（ＲＢＰ）的啤酒酵母ＲＳ１８８Ｎ及其变株ＲＳ１８８Ｎ△ｒｂｐ：：：ＬＥＵ筛选免疫抑制剂的过程中，得到活性菌株Ｎｏ．ＳＩＩＡ９２６８（鉴定为吸水链霉菌东湖变种）。应用硅胶柱层析和制备ＴＬＣ等方法从其发酵液中分离出活性化合物ＳＩＡ９２６８Ａ。经理化性质鉴定与ｒａｐａｍｙｃｉｎ同质。     

吸水链霉菌M—22产生的除草剂的研究

利用竞争性抑制谷氨酰胺生物合成的方法，从福州郊区土壤中分离到除草活性物质产生菌Ｍ－２２，其特征与除草剂双丙磷（ｂｉａｌａｐｈｏｓ）产生菌吸水链霉菌ＳＦ－１２９３相近，Ｍ－２２代谢产物ＦＭ－２２经光谱分析证明与双丙磷同质。     

普卡霉素产生菌SIPI91－81的分类与鉴定

从上海郊区土壤中分离到一株链霉菌，编号ＳＩＰＩ９１－８１，其代谢产物具有抗肿瘤活性。经鉴别该活性物质与普卡霉素为同一物质。该菌株在形态培养特征和生理生化特征上与已知的暗黑橄榄链霉菌相似，但又有一定的差别，故定名为暗黑橄榄链霉菌上海变种（ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓａｔｒｏｏｌｉｖａｃｅｕｓｓｈａｎｇｈａｉｅｎｓｉｓＳＩＰＩ９１－８１）。     

聚醚类抗生素——腐霉素的分离,鉴别与体内外生物活性

腐霉素是由吸水链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ）ＨＳ－８６产生的聚醚类抗生素。经发酵、分离纯化后测定其理化性质、元素分析、红外光谱、核磁共振谱和质谱，认为它与ｃａｒｒｉｏｍｙｃｉｎ 同质。分子式为Ｃ４７ Ｈ８０Ｏ１５，分子量８８４。该抗生素对革兰氏阳性细菌和分枝杆菌有较强的抑制作用，对艾美耳氏球虫引起的鸡球虫病有很好的防治作用和促生长作用     

类链霉菌属的一新种

在筛选免疫抑制剂的过程中,从我国江苏省无锡土壤中分离到一株菌,菌号为ＳＩＰＩ－２８９。该菌株气丝形成非轮生的孢子链,基内菌丝体不断裂。按形态、培养、生理生化等特征及细胞壁化学组分,磷酸类酯,醌的类型,该菌株属于张国伟的类链霉菌属［１］（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｏｉｄｅｓ）,细胞壁水解物中含有ｍｅｓｏ－ＤＡＰ,Ｇｌｙ,即胞壁Ⅱ型。全细胞水解物中只含半乳糖,磷酸类酯ＰＩＶ型,优势醌为ＭＫ９（Ｈ４）。但该菌株又和该属的青黄类链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｏｉｄｅｓｇｌａｕｃｏｆｌａｖｕｓ）有很大不同,认为是该属的一新种,定名为无锡类链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｏｉｄｅｓｗｕｘｉｅｎｓｉｓｓｐ．ｎｏｖ．）。     

硫霉素产生菌卡特利链霉菌A520基因文库的构建

以大肠杆菌／链霉菌穿梭柯斯质粒ｐＫＣ５０５为载体，构建了卡特利链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｃａｔｌｅｙａ）Ａ５２０在大肠杆菌ＤＨ１的基因文库，重组质粒插入外源片段的概率在９５％以上，插入外源片段的大小为２０～３０ｋｂ。以链霉菌染色体分子量为１０４ｋｂ计算，由４０００个转化子构成的基因文库可以概括卡特利链霉菌Ａ５２０约９９％的基因组。用已经克隆的硫霉素环化酶基因上游的１．５ｋｂＤＮＡ片段作为探针杂交，从基因文库得到３２个阳性克隆。用利波曼链霉菌（Ｓ．ｌｉｐｍａｎｉ）中的ＩＰＮＳ基因作为探针杂交，从基因文库得到１个阳性克隆ｐＫＷ２０１／ＤＨ１，并为Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交进一步证实杂交片段在ＢａｍＨⅠ２．７ｋｂ片段上。用来自带小棒链霉菌（Ｓ．ｃｌａｖｕｌｉｇｅｒｕｓ）的克拉维酸生物合成途径中的环化酶基因ｃｓ２作为探针杂交进行筛选，得到１个阳性克隆ｐＫＷ３０１／ＤＨ１，说明所构建的基因文库比较完整，并为进一步研究硫霉素产生菌卡特利链霉菌Ａ５２０中抗生素生物合成基因打下了良好基础     

金霉素链霉菌噬菌体的分布

金霉素链霉菌噬菌体的分布ＤｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅｓｏｆＳｔｒｅｐｔｏｉｎｙｃｅｓａｕｒｅｏｆａｃｉｅｎｓ张菊英ＺｈａｎｇＪｕｙｉｎｇ（福州抗生素总厂，福州３５０００２）（ＦｕｚｈｏｕＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃＧｅｎｅｒａｌＦａ...     

聚醚类抗生素的研究——Ⅰ.Lonomycin A产生菌SIPI-A4-0040的分类与鉴定

从我国海南省琼中县土壤中分离得到一株链霉菌,编号SIPI-A4—0040,它对革兰氏阳性有强烈抑制作用,经鉴别活性物质为聚醚类抗生素Lonomycin A。该菌孢子丝螺旋形,孢子表面多皱,基丝灰粉,气丝浅灰至棕红,吸水后呈褐湿斑,可溶色素土黄至粉灰。在培养特征和生理生化特性上,与已知的吸水链霉菌相似但有一定差别,故定名为吸水链霉菌琼中亚种(Streptomyces hygroscopicus subsp.Qiong Zhong n.subsp.)。     

透明颤菌血红蛋白基因在链霉菌中的克隆和表达

以质粒ｐＩＪ７０２和ｐＩＪ６９９为载体，构建了两个带有透明颤菌（Ｖｉｔｒｅｏｓｃｉｌａ）血红蛋白（ＶＨｂ）基因（Ｖｇｂ）的大肠杆菌－链霉菌穿梭质粒并转化Ｅ．ｃｏｌｉＨＢ１０１、变青链霉菌（Ｓ．ｌｉｖｉｄａｎｓ）ＴＫ６４及蒽环类抗生素阿柔比星（阿克拉菌素）产生菌——加利利链霉菌（Ｓ．ｇａｌｉｌａｅｕｓ）ＡＴＣＣ３１１３３，经ＣＯ结合差光谱法、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ蛋白电泳分析表明Ｖｇｂ在大肠杆菌和链霉菌中得到表达。通过改变培养条件研究溶氧对Ｖｇｂ表达的影响，结果表明在低溶氧的情况下，ＶＨｂ表达量增加。同时发现，在低氧浓度时，ＶＨｂ的表达有利于链霉菌菌体的生长，其菌体生长量高于同样条件下的对照菌株（Ｖｇｂ－）１７％～２９％。     

免疫抑制剂SIIA9268A的研究.Ⅱ.结构鉴定

在筛选免疫抑制剂的过程中，得到具有免疫抑制剂活性的化合物ＳＩＩＡ９２６８Ａ，经理化性质和光谱分析（ＩＲ、ＵＶ、１Ｈ－ＮＭＲ、１３Ｃ－ＮＭＲ、ＡＰＴ、１Ｈ－１ＨＣＯＳＹＮＭＲ、１３Ｃ－１ＨＣＯＳＹＮＭＲ、ＥＩ－ＭＳ），得知该化合物属于新型大环内酯类，与ｒａｐａｍｙｃｉｎ同质。     

微生物产生的免疫抑制活性化合物S-9818的研究Ⅰ.菌株的分类鉴定

从我国山东省济南市郊外千佛山土壤中分离到一株放线菌 ,编号 SIIA- 9818,气生菌丝灰白色或白色 ,基内菌丝分枝、无横隔、不断裂。在大部分培养基上基丝为白色 ,不产可溶性色素 ,分生孢子丝直型 ,波曲或钩状 ,孢子椭圆型或圆柱形 ,孢子表面光滑 ,绝大部分碳源不能利用 ,生长温度偏低 ,细胞壁化学组份分析含 L ,L -二氨基庚二酸和甘氨酸 ,产生新型免疫抑制剂他克莫司 (tacrolimus,FK5 0 6 )。根据分类研究 ,菌株SIIA- 9818归属于链霉菌属 ,与已知近似菌株比较存在明显差异 ,定名为千佛链霉菌新种 SIIA- 9818(Streptomyces qianfoensissp.nov.SIIA- 9818)     

免疫抑制剂SIPI-029-1的研究——发酵、分离、结构鉴定和生物活性

用筛选微生物来源的免疫抑制活性化合物的酵母筛选系统，筛选出的吸水链霉菌（Streptomyces hygroscopcus)sp.SIPI-029的发酵液具有免疫抑制活性，应用乙酸乙酯提取，硅胶柱层析和结晶等方法，从其上清液中分离出活性化合物SIPI-029-1；通过理化性质，质谱，紫外，红外和核磁共振等图谱数据的分析。确定SIPI-029-1化合物为安莎类抗生素，与文献报道的HerbimycinA结构一致，生物学活性研究，发现其具有中等强度的免疫抑制新活性。     

吸水链霉菌应城变种质粒的分离研究

采用蔗糖浓度为13％的YEME培养基培养吸水链霉菌应城变种10-22菌株,能获得生长量较高且分散状况良好的菌丝体。在探索链霉菌质粒DNA的分离方法时,以T.Kieser的方法为基础,提高国产溶菌酶的用量和延长酶解时间,首次从吸水链霉菌应城变种中分离到一种质粒DNA分子,将它命名为pSH_(47)。同时,通过pock形成能力的检测。进一步证实这个质粒的存在。吸水链霉菌应城变种10-22菌株经吖啶橙处理后获得的部分或全部丧失5102抗生素生物合成能力的几个阻遏突变株的质粒检测结果表明,它们都有与10-22菌株相同的质粒带。     

新型强效免疫抑制剂西罗莫司F904的研究

从福建省福州市的土壤中分离到的链霉菌 FC90 4 ,经分类鉴定、菌株培养确定为吸水链霉菌。其发酵代谢产物 F90 4具有抗真菌、抗增殖和比环孢素强的免疫抑制活性。分离、纯化、结晶 ,得 F90 4 ,经理化性质、光谱分析和 X-射线单晶衍射研究证明 F90 4为三烯大环内酯新型强效免疫抑制剂西罗莫司。     

应用基因组重排育种新方法筛选替考拉宁高产菌

本文以稀有放线菌替考游动放线菌SIIA 01-11-25为研究对象，探索稀有放线菌次级代谢产物产生菌的基因组重排育种的基本规律，重点研究四种产量标记亲本的筛选、稀有放线菌原生质体制备、融合、再生的方法、重组子筛选模型等关键技术，并运用建立的基因组重排方法，在1年内对替考游动放线菌进行了三轮基因组重排育种，共筛选了648株。结果表明SIIA05-3-136菌株为0．3％的乙酸钠＋0．8％的甘氨酸＋0．5％二甲胺的三重产量性状的融合菌株，其替考拉宁产量从原始株的1825u／ml提高到3016u／ml，增长65．3％，而传统的诱变育种方法达到此目标，通常需耗时3～4年筛选25000—30000株菌才能实现。目前SIIA05-3-136菌株已应用于中试生产。     

吸水链霉菌FC-904发酵代谢产物29-O-去甲基雷帕霉素的分离和结构鉴定

目的 从西罗莫司产生菌吸水链霉菌FC904的发酵液中分离纯化代谢产物FIM-R85，鉴定其化学结构。方法 采用硅胶柱层析和制备液相分离纯化获得FIM-R85，进行理化性质以及NMR、UV、IR和HRMS等波谱分析，鉴定其化学结构。 结果 纯化获得HPLC纯度为98.7%的FIM-R85，其为西罗莫司类似物，与29-O-去甲基雷帕霉素同质。结论 29-O-去甲基雷帕霉素为西罗莫司产生菌吸水链霉菌FC904的发酵代谢产物之一。     

A new post-PKS modification process in the carbamoyltransferase gene inactivation strain of Streptomyces hygroscopicus 17997

Genetic manipulation of geldanamycin (GDM) producer Streptomyces species is a rational approach to understand biosynthesis processes and create new analogues. In this study, the carbamoyltransferase gene gdmN was inactivated by insertion of an apramycin-resistance gene aac3 (IV) into the genome of the geldanamycin-producing strain Streptomyces hygroscopicus 17997. GDM analogues produced by this mutant strain were isolated and characterized, such as new compound 4,5-dihydro-7-O-descarbamoyl-7-hydroxy-19-O-glycylgeldanamycin. This compound could be converted to compound 4,5-dihydro-19-O-glycylgeldanamycin, another new GDM analogue, by a strain of Streptomyces hygroscopicus 17997 in which the GDM-pks was inactivated. These new compounds exhibited reductions of cytotoxicity against HepG2 cancer cells, but increases of aqueous solubility. These results suggest that a new post-polyketide synthase modification was involved in this process to produce new GDM analogues.     

雷帕霉素二醛的分离和结构鉴定…杨国新，陈夏琴，余辉，等(450)

目的 从雷帕霉素产生菌吸水链霉菌FC904的发酵粗提物中，分离纯化在HPLC图谱中与雷帕霉素相对保留时间(RRT)为0.88的化合物FIM-R24并鉴定其化学结构。方法 采用硅胶柱层析和制备液相分离FIM-R24，并对其进行NMR、UV、IR和HRMS等波谱分析。用SRB测定化合物体外抗肿瘤活性，用沙氏液体培养基二倍稀释法测定化合物的抗真菌活性。结果与结论 FIM-R24的结构为雷帕霉素二醛。FIM-R24的抗肿瘤活性仅比雷帕霉素略低，抗酵母样真菌的活性仅为雷帕霉素的1/8~15。     

A new producer of mevastatin

Mevastatin (compactin)was isolated form culture broth of a fungal strain SIIA-F3933,The strain SIIA-F3933 was isolated from a soil sample collected in Putuo mountain,Zhejiang Province,P,R.China,It was identified as Penicillium janczewskii Zaleski based on its cultural and morphological characteristics and was regarded as a new producer of mevastatin，。