PLC-γ1对血小板生长因子介导的细胞增殖的影响

目的 观察磷酸脂酶C-γ1（PLC-γ1）对血小板生长因子(PDGF)介导的细胞增殖的影响。方法 应用无内源性PLC-γ1小鼠成纤维细胞株,观察在PDGF作用下细胞增殖情况（包括细胞内钙离子动员及DNA合成）,并与正常细胞株对照。结果 缺失PLC-γ1的细胞与正常细胞DNA合成显著增强,均出现细胞内钙动员;但PLC-γ1-/-细胞DNA合成时间显著延长,钙流较PLC-γ1+/+值小且峰值出现较晚(P<0.01)。结论 PLC-γ1在PDGF作用下成纤维细胞的增殖过程中有重要作用,当其缺乏时功能可被其他途径代偿。     

磷酸酯酶C—γ1对血小板生长因子介导的细胞迁移的影响

目的 生长因子诱导产生的细胞内信号分子参与调节细胞的增殖分化，磷酸脂酶C－γ1（PLC－γ1）被认为是连接生长因子和其下游信号传递分子之间的主要桥梁，但它在细胞分裂信号传递中是否必需。目前说法不一。本研究旨在阐明PLC－γ1在细胞分裂信号传导中的作用。方法 应用无内源性PLC－γ1小鼠成纤维细胞株，观察在血小板生长因子作用下细胞的迁移情况。结果 缺失PLC－γ1的细胞与正常细胞无显著差异。结论 当PLC－γ1缺乏时，在血小板生长因子作用下，成纤维细胞的迁移过程中其功能可被代偿。     

磷脂酶C—γ1和γ2在PDGF促成纤维细胞克隆形成中的不同作用

目的 探讨磷酯酶Cγ1和γ2（PLC－γ1和γ2）在血小板源性生长因子（PDGF）诱导小鼠成纤维细胞克隆形成信号传导中的作用。方法 将全长PLCγ2cDNA亚克隆进真核细胞表达载体，转染小鼠成纤维细胞株PLC－γ1－／－和PLC－γ1^ / ，使PLC－γ2在成纤维细胞中表达，同时以未插入目的基因的空载体转染这两种细胞作为实验对照。用有限稀释法随机挑选几个单细胞克隆，经Western Blotting鉴定其PLC－γ2表达量，转染细胞及其相应对照被用来测量克隆形成能力。结果 PLC－γ2可在PDGF的作用下活化，对克隆形成有显的正调控作用，而PLC－γ1基因对克隆形成无任何影响。并且γ2利于细胞低密度时的存活，因而，PLC－γ2可显促进低密度细胞的克隆形成,γ1可能有相反作用。结论 PLC－γ1和γ2在PDGF诱导小鼠成纤维细胞克隆形成中的有不同作用。     

磷脂酶C-γ1和γ2对成纤维细胞生长及增殖的影响

目的 观察磷脂酶C-γ1和γ2基因在血小板源性生长因子(PDGF)诱导的成纤维细胞生长和增殖信号转导中的作用。方法 测定PDGF刺激后，敲除磷脂酶C-γ1基因的细胞株及其转染磷脂酶C-γ2基因后的生长和增殖能力，并对数据进行统计学分析。结果 磷脂酶C-γ1和γ2在PDGF引起的细胞生长、增殖信号转导中均有正调控作用，并不是必需的因素，两者有协同作用，但各自的作用力度和时期不同，γ1作用显著，γ2作用较弱且较晚；磷脂酶C-γ1对DNA合成和细胞周期进程有重要影响，缺失时，细胞G1和S期缩短，DNA合成能力增强；γ2对DNA合成无显著影响，但在野生型成纤维细胞中表达时，可使S期提前并相对延长。结论 在成纤维细胞中，磷脂酶C-γ1和γ2对细胞生长和增殖的影响各不相同，有相同处，起不同程度的协同作用；又有不同处，不能相互取代。     

血小板衍生生长因子诱导人血管平滑肌细胞增殖时钙调素的变化

目的:观察血小板衍生生长因子(PDGF)对培养的人血管平滑肌细胞增殖及钙调素含量变化的作用.方法:应用3H-TdR掺入法和磷酸二酯酶法,观察不同浓度(1、10、20、30、40 ng/ml)PDGF-BB对培养的人血管平滑肌细胞DNA合成和钙调素含量变化的影响及其时间效应.结果:不同浓度PDGF-BB作用后,处于静止状态的人血管平滑肌细胞DNA的合成增加,并呈现明显的浓度依赖关系,在40 ng/ml浓度时DNA的合成达到高峰(P＜0.01).平滑肌细胞在进入细胞增殖周期后,细胞内钙调素含量逐渐增加,在9 h时出现一个短暂的高峰,随后逐渐下降;不同浓度PDGF-BB作用后,钙调素含量增加,并呈现出明显的浓度依赖关系,30 ng/ml浓度时作用最为显著(P＜0.01).结论:PDGF可促进培养的人血管平滑肌细胞增殖,该作用可能与增加钙调素含量有关.     

磷酸脂酶C-γ1对血小板生长因子介导的细胞迁移的影响

目的生长因子诱导产生的细胞内信号分子参与调节细胞的增殖分化,磷酸脂酶Ｃ－γ１（ＰＬＣ－γ１）被认为是连接生 长因子和其下游信号传递分子之间的主要桥梁,但它在细胞分裂信号传递中是否必需,目前说法不一。本研究旨在阐明 ＰＬＣ－γ１在细胞分裂信号传导中的作用。方法应用无内源性ＰＬＣ－γ１小鼠成纤维细胞株,观察在血小板生长因子作用 下细胞的迁移情况。结果缺失ＰＬＣ－γ１的细胞与正常细胞无显著差异。结论　当ＰＬＣ－γ１缺乏时,在血小板生长因子作 用下,成纤维细胞的迁移过程中其功能可被代偿。     

黄颜木素对HSC-T6细胞增殖和胶原合成的影响

目的：研究黄颜木素对激活的永生型大鼠肝储脂细胞--HSC-T6细胞增殖和胶原合成的影响。方法：细胞增殖采用结晶紫染色法检测,胶原合成采用3H-脯氨酸掺入法分析。结果：黄颜木素（6.25-50.00μmol/L）以剂量依赖方式显著抑制血小板源生长因子(PDGF)刺激的HSC-T6细胞增殖,并抑制转化生长因子β1(TGFβ1)诱导的细胞内胶原合成。结论：黄颜木素具有抑制激活的肝储脂细胞增殖和胶原合成的作用。     

血小板衍生生长因子对肝细胞游离钙浓度影响

目的观察血小板衍生生长因子（PDGF）对SD大鼠肝细胞内游离钙浓度（[Ca2 ]i）的影响,同时观察钙拮抗剂（Ca－A）对PDGF作用的影响。方法应用Fura－2／AM荧光示踪法检测肝细胞（n=15）内[Ca2 ]i的变化;及PDGF存在下和PDGF、Ca－A同时存在下细胞内[Ca2 ]i变化。结果PDGF可明显升高细胞内[Ca2 ]i,Ca－A具有抑制PDGF的增钙作用。结论PDGF参与SD大鼠肝细胞内Ca2 浓度的转运,Ca－A对肝细胞具有保护作用。     

高糖加高胰岛素对心肌成纤维细胞增殖的影响

目的 利用体外培养的乳鼠心肌成纤维细胞,观察高浓度葡萄糖加高浓度胰岛素对心肌成纤维细胞增殖的影响,并探讨其可能作用机制。方法 以培养的乳鼠心肌成纤维细胞为模型分组给药后,利用结晶紫染色法观察细胞的增殖情况;利用[^3H]thymidine标记法测定细胞DNA的合成;利用流式细胞仪分析细胞周期。结果与正常对照组相比,高糖、高胰岛素、高糖加高胰岛素组分别造成了心肌成纤维细胞数目、DNA合成及S＋G2＋M期细胞的百分比增加,（P〈0．01）,而高糖加高胰岛素组的各项指标值显著高于其它各组,（P〈0．01）。结论 高糖加高胰岛素具有协同促进心肌成纤维细胞增殖的作用。     

牛磺酸抑制血小板衍生生长因子诱导的系膜细胞增殖及细胞外基质分泌

目的：观察牛磺酸对血小板衍生生长因子（PDGF）诱导的系膜细胞增殖及细胞外基质分泌的影响，并探讨其作用的可能机制。方法：体外传代培养的大鼠系膜细胞，经一定量的牛磺酸和（或）PDGF作用48h后，用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞周期，ELISA检测细胞外基质（Ⅳ型胶原及层粘连蛋白）含量，免疫细胞化学方法检测C－jun,C-fos的表达。结果：与对照组比较，10，20ng/ml PDGF可明显促进系膜细胞增殖，影响细胞周期，使G0－G1期细胞减少，S期细胞增加，并能明显促进细胞外基质的分泌及C-jun,C-fos的表达（P＜0．01），而20或40mmol/L牛磺酸作用于系膜细胞后，可明显抑制PDGF（20ng/ml)诱导的细胞增殖，细胞外基质分泌及C-jun,C-fos的表达。结论：牛磺酸对PDGF诱导的系膜细胞增殖及细胞外基质分泌有显著抑制作用，其机制可能与牛磺酸抑制C-jun,C-fos表达有关。     

磷脂酶C—γ1在人胚组织中的表达

目的 研究磷脂酶C－γ1（PLC－γ1）在人胚组织中的表达情况。方法 收集人胚组织（包括软骨、软骨膜、骨骼肌）并行石蜡包埋及切片,采用免疫细胞化学ABC染色法观察人胚组织细胞中PLC－γ1的表达情况。结果 PLC－γ1在这几种细胞中均有较强的表达,主要位于胞质中。结论 PLC－γ1相关的细胞内信号传递途径对于人早期胚胎细胞的发育、增殖具有重要的生物学意义。     

细胞因子对小牛晶体上皮细胞增殖和胶原合成的影响

目的：研究白介素6（IL－6）、白介素1受体拮抗剂（IL－1ra),γ干扰素（IFN－γ）对小牛晶体上皮细胞（BELC）增殖和胶原合成的影响，探讨它们在后囊浑浊形成中的作用。方法：采用MTT比色法测定不同浓度的IL－6，IL－1ra及IFN－γ对体外培养的BLEC增殖的影响，用^3H-脯氨酸掺入法检测这些细胞因子对体外培养的BLEC胶原合成的影响。结果：IL－6 10^2-10^4U/ml显著促进细胞增殖和胶原合成，IL－1ra 10^2-10^4 μg/L显著抑制细胞增殖而对胶原合成无影响，IFN－γ 10^2-10^5U/ml显著抑制细胞增殖，10^3-10^5U/ml显著抑制胶原合成。结论：这些细胞因子可能参与了后囊浑浊的形成；IFN－γ与IL-1ra可用于防治后囊浑浊。     

血小板生长因子在NIH3T3成纤维细胞和MT3转化细胞应答中的作用

血小板生长因子(PDGF)通过促进细胞外Ca~(2 )内流,增加细胞内Ca~(2 )浓度,但在亲代NIH3T3成纤维细胞和转化的MT3细胞中,却表现出不同的作用。在亲代NIH3T3成纤维细胞中,PDGF能够抑制舒缓激肤介导的细胞内Ca~(2 )浓度增加,未能见到细胞内Ca~(2 )波动现象;而在转化的MT3细胞中,PDGF丧失了对舒缓激肽介导的细胞内Ca~(2 )浓度增加的抑制作用,常常引起细胞内Ca~(2 )波动现象。对于DNA的合成,PDGF在两种细胞中,也表现出有时程的差异。     

PDGF-AB对体外培养的成纤维细胞超微结构的影响

目的：观察PDGF－AB对体外培养的成纤维细胞超微结构的影响，探讨PDGF－AB促进创面愈合的机制．方法：取第3～6代培养的成纤维细胞，用0μg／L，12．5μg／L，50μg／L的PDGF－AB分别作用48h，然后用扫描电镜和透射电镜观察．结果：PDGF－AB明显增加成纤维细胞表面突起和纤维样物质，以及增强成纤维细胞的合成功能．结论：PDGF－AB可能通过激活、趋化成纤维细胞、增强细胞合成功能来促进创面愈合．     

rhGM-CSF对小鼠口腔粘膜损伤的防治作用

目的：探讨rhGM-CSF促进口腔腔溃愈合的作用机制。方法：取体外培养的胎儿口腔粘膜成纤维细胞，用rhGM-CSF刺激成纤维细胞后第2、4、6天用细胞计数及^3H－胸腺嘧啶掺入法（^3H-TdR）测定其增殖情况，结果rhGM-CSF对胎儿口腔粘膜成纤维细胞增殖及DNA合成有刺激作用，在80－100ng/ml时，细胞生长达到最佳状态，过高浓度rhGM-CSF的刺激作用反而下降。结论：rhGM-CSF可以通过刺激成纤维细胞增殖及DNA合成促进口腔溃疡愈合。     

Wortmannin与U73122对缺失磷脂酶C－γ1细胞迁移的影响

0 引言 磷脂酶C-γ1(phospholipase C-γ1,PLC-γ1)与三磷酸肌醇激酶(phosphatidylinositol-3 kinase,PI-3K)是生长因子介导的信号传递过程中的两个重要信号分子。尽管敲除plcgl基因后的小鼠不能正常发育，并于胚胎第9天死亡［1］；缺失PLC-γ1小鼠胚胎成纤维细胞(PLC-γ1-/-)在体外却能正常生长，且在表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)刺激下其受体激活与内吞、DNA合成、迁移能力等与正常细胞(PLC-γ1+/+)相似［2］。但PLC-γ1-/-并不出现其近亲PLC-γ2的代偿表达，PLC-γ1-/-细胞株迁移过程中PLC-γ1的信号传递功能是否由其他PLC同工酶或PI-3K通路代偿，目前还不清楚。为探讨PLC-γ1通路在信号传递过程中的代偿机制，本研究检测了PLC、PI-3K特异性抑制剂U73122、Wortmannin对PLC-γ1-/-细胞的EGF介导细胞迁移的影响。     

DDPH和生长因子对肺动脉平滑肌细胞凋亡的作用

运用原位末端转移酶标记技术（TUNEL）和流式细胞分析术（FCM）检测经1－（2，6－二甲基苯氧基）－2－（3，4－二甲氧基苯乙胺基）丙烯盐酸盐（DDPH）、血小板源性生长因子（PDGF）、碱性皮纤维细胞生长因子（b-FGF)、低氧内皮细胞条件培养液（HECCM）作用后，肺动脉平滑肌细胞（PASMC）凋亡的变化；结合FCM对各组PASMC生长周期的分析，比较不同因素对PASMC的影响差异。结果发现：DDPH组平滑肌细胞（SMC）凋亡指数显著高于对照组，PDGF、b-FGF、HECCM各组SMC凋亡指数显著低于对照组；PDGF、b-FGF、HECCM3组通过生长限制点G1／S（S＋G2／M期）细胞的比率均显著高于对照组，尤以PDGF组最高，而DDPH组低于对照组。提示：DDPH能够抑制PASMC增殖并诱导其凋亡，而PDGF、b-FGF等生长因子则起相反作用。     

增生性瘢痕成纤维细胞与正常皮肤成纤维细胞生长差异比较

【目的】探讨增生性瘢痕成纤维细胞与正常皮肤成纤维细胞基因表现型的差异以及EGF、PDGF和bFGF对其的影响。【方法】测定细胞生长曲线;应用液闪计数测定成纤维细胞胶原蛋白的合成。【结果】增生性瘢痕成纤维细胞增殖速度比正常皮肤成纤维细胞慢;胶原蛋白的合成高于正常皮肤成纤维细胞。EGF、PDGF和bFGF均对两种成纤维细胞的增殖具有强烈的刺激作用。EGF和bFGF可减少增生性瘢痕成纤维细胞的胶原蛋白合成,PDGF可以使两种成纤维细胞的胶原蛋白合成增加。【结论】增生性瘢痕成纤维细胞是一种特殊基因表现型的成纤维细胞,它具有自己特殊的生物学特性。EGF、PDGF和bFGF在增生性瘢痕的形成过程中可能具有重要作用。     

Genistein影响人催乳素瘤细胞增殖及机制

目的 研究genistein对人催乳素瘤细胞的增殖代谢和DNA合成的影响,并深入探讨genistein影响催乳素瘤细胞增殖作用的机制,观察genistein作用后催乳素瘤细胞内蛋白激酶C（PKC）及cAMP/cGMP的变化。方法 采用MMT和[^3H]TdR掺入实验检测genistein对人催乳素瘤细胞增殖和DNA合成的影响;通过PKC活性及cAMP和cGMP含量测定。深入探讨genistein影响催乳素瘤细胞增殖分化的分子机制。结果 ①Genistein抑制催乳素瘤细胞的增殖和DNA合成,并呈剂量依赖性;②与空白处理组相比,使用PKC的激动剂PMA处理培养的人催乳素瘤细胞时可使胞膜和细胞总PKC活性浓度均升高,但genistein（10μmol/L）作用15min后,胞浆、胞膜和细胞总PKC活性均下降;③Genistein作用于人催乳素瘤细胞15min后,胞内cAMP水平显著升高,而cGMP没有明显改变。结论 实验结果为探讨genistein抑制催乳素瘤细胞增殖的分子机制提供了重要线索,同时提示,genistein对催乳素瘤细胞增殖分化的调控作用是细胞内多信息系统相互整合的结果。     

宫颈癌HeLa细胞摄取ACM—LDL及游离ACM的比较研究

目的：比较宫颈癌HeLa细胞对阿克拉霉素－低密度脂蛋白复合物（ACM－LDL）及游离ACM的摄取量及ACM0LDL对HeLa细胞DNA及RNA合成的抑制作用。方法：采用保温交换法制备ACM－LDL复合物,观察在相同的作用时间下,HeLa细胞对ACM－LDL及游离ACM的摄取量,应用流式细胞仪测定HeLa细胞内DNA,RNA的含量。结果：（1）相同时间内,宫颈癌HeLa细胞摄取ACM－LDL复合物数量显著高于ACM;（2）细胞对复合物的摄取量可因天然LDL的竞争抑制而减少;（3）细胞对复合物的摄取受LDL受体（LDLR）饱和度的限制;（4）复合物对HeLa细胞DNA,RNA的合成具有较强的抑制作用。结论：LDL与ACM结合,对LDL和ACM的结构,理化性质及代谢特征均无影响,以LDL为化疗药物载体,可提高宫颈癌细胞内的药物含量,增加药物的抑癌效果。