HCMVpp65抗原和IgM抗体检测诊断儿童HCMV活动性感染的比较

目的：比较人巨细胞病毒(HCMV)pp65抗原(以下简称pp65)检测和血清HCMV-IgM抗体(以下简称IgM抗体)检测两种方法对儿童HCMV活动性感染的诊断实用意义。方法：采集临床疑似HCMV活动性感染儿童血标本(共251份)，分离血浆和多形核白细胞，分别用于IgM抗体检测和pp65检测。同时进行荧光定量PCR检测HCMVDNA，与pp65抗原作平行比较。结果：pp65抗原检测的结果与IgM抗体检测的符合率为73.3％。与HCMV DNA检测相比pp65抗原检测法的符合率、特异度和敏感度分别为85．5％，85．2％和86．2％。而且高pp65抗原血症与患者的临床症状密切相关。结论：pp65抗原血症反映该病毒活动状况，可监测HCMV活动性感染。由于儿童患者还存在原发感染的可能性，所以．联合HCMV-IgM的监测来提高临床的诊断率。     

人巨细胞病毒pp65抗原血症检测方法的建立和初步临床应用

目的　建立人巨细胞病毒抗原 pp6 5 (HCMVpp6 5 )血症特异、灵敏和低成本的酶免组化和荧光免疫组化方法 ,以利于临床推广应用。方法　以HCMV AD16 9感染的人胚肺成纤维细胞 (HELF)爬片作阳性对照 ,选择试剂和材料组建试剂盒 ,并与商品化的同类试剂盒作比较 ,建立人外周血多形核白细胞 (PMNLs)中HCMVpp6 5抗原阳性细胞的检测方法 ,然后再用荧光定量PCR(FQ PCR)方法做相应考评。 结果　我们建立的HCMVpp6 5抗原血症检测法能成功地检出PMNLs中的 pp6 5阳性细胞。其可检测限分别为 10 2 pfu/ml的AD16 9攻击 2 4h后的HELF细胞爬片和 3～ 5个 pp6 5阳性细胞 / 2× 10 5PMNLs ;用高相对分子质量 (5 0 0 0 0 0 )的葡聚糖能快速、有效地分离PMNLs ;用 4 %中性多聚甲醛固定的细胞片 ,于 - 2 0°C或以下可长期保存 (≥ 6个月 ) ,而且 pp6 5抗原性稳定。 结论　自建的试剂盒与同类进口试剂盒相比 ,检测 pp6 5的结果差异无显著性 ,并与FQ PCR的检测结果相一致 ,其检测特异、灵敏、操作简单、费用低廉 ,适宜临床实验室推广应用。     

巨细胞病毒定量PCR与pp65抗原测定监测异基因造血干细胞移植巨细胞病毒感染的比较

本研究比较巨细胞病毒（CMV）定量PCR检测和CMV—pp65抗原检测在异基因造血干细胞移植CMV感染中的诊断价值。以84例异基因造血干细胞移植患者为研究对象,自预处理开始每周对患者EDTA抗凝外周血血标本进行CMV—pp65抗原及cMV定量PCR动态检测,直至出院,比较观察两者在诊断CMV感染中的作用。结果表明：84例移植患者的732份系列血标本中,26例移植后检出CMV定量PCR阳性,检出率30．95％,其中9例为cMV血症,13例为cMV病,检出中位时间为37．1（7—105）天;22例CMVpp65抗原检测阳性,检出率26．19％,检出中位时间为46．6（10—128）天;所有CMV—pp65抗原检测阳性患者CMV定量PCR均为阳性,4例CMV定量PCR阳性但CMV—pp65抗原检测阴性患者均未发展为CMV病。CMV病多出现于CMV定量PCR中等至高拷贝数或中等至高水平病毒血症（CMV—pp65抗原）病例中。治疗后CMV定量PCR转阴中位时间为17．5（11—28）天。CMV—pp65抗原转阴中位时间为10．0（7—21）天。结论：CMV定量PCR和CMV—pv65抗原检测均能作为异基因造血干细胞移植CMV感染早期诊断的有效手段,CMV定量PCR更敏感,CMV—pp65抗原检测更特异,两者同时使用能更有效地提高CMV感染诊断水平,监控其发生发展。     

儿童抽动-秽语综合征HCMV pp65抗原检测的临床意义

目的探讨儿童巨细胞病毒(Hum an cytom egalov irus,HCMV)活动性感染与抽动-秽语综合征(T ourette’s sym-drom e,TS)的关系。方法离心分离64例抽动-秽语综合征患儿和40例正常儿童外周血单个核细胞(PBM C s)和血浆,分别用免疫荧光法和定量PCR检测HCMV pp65抗原和HCMV DNA,并比较2种方法的一致性。结果64例TS患儿HCMV pp65抗原有14例阳性,阳性率21.9%,40例正常儿童HCMV pp65抗原有1例阳性,阳性率2.5%,2组儿童HCMV感染率有显著性差异(2χ=7.49,P<0.01)。免疫荧光法和实时定量PCR有较好的一致性(89.1%)。结论抽动-秽语综合征儿童HCMV感染率显著高于正常儿童,HCMV活动性感染可能诱发抽动-秽语综合征。     

流式细胞技术检测肾脏移植受者pp65抗原血症的意义

背景:临床对pp65 抗原的检测主要采用免疫荧光技术,但是该方法步骤繁琐,需要对标本进行人工计数,在检测过程中受人为的影响因素较多。目的:探讨使用简便的流式细胞技术检测人巨细胞病毒 pp65 抗原血症的可行性及其特点。设计、时间及地点:对比观察实验,于2007-09/2008-03 在解放军总医院附属二院器官移植中心完成。材料:肾脏移植受者外周血标本145份。方法:分离人外周血白细胞,分别采用免疫荧光技术与流式细胞技术对人巨细胞病毒 pp65 抗原检测。主要观察指标:流式细胞仪在激发波长为 488 nm 处的吸收峰判断阳性检出。结果:对肾脏移植受者进行免疫荧光技术检测,在 15 例受者的 25 份标本中检出阳性,检出的特异性为 76.0%;对肾脏移植受者进行流式细胞技术检测,在 5 例受者的 11 份标本中检出阳性,检出的特异性为 54.5%。使用 Fisher 确切概率法对两种不同检测方法检出的效果进行检验,结果两种检测方法的检出效果差异无显著性意义(P > 0.05)。结论:免疫荧光技术和流式细胞技术两种 pp65 抗原检测方法的检出效果无差异,因此可以通过流式细胞技术对 pp65 抗原进行检测,并且结果更加客观。     

巢式聚合酶链反应和pp65抗原检测早期诊断巨细胞病毒感染

目的 比较人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）巢式聚合酶链反应（ｎＰＣＲ）与抗原ｐｐ６５血症检测技术在活动性ＨＣＭＶ感染中的早期诊断价值。方法 以１８例器官移植病人为研究对象,收集术后２～１２周抗凝血标本,分别采用ｎＰＣＲ和血ｐｐ６５抗原检测技术,观察两者的敏感性、相符率以及在早期诊断活动性ＨＣＭＶ感染中的作用。结果 １８例移植病人的１１４份系列血标本,ｎＰＣＲ检测阳性９７份,ｐｐ６５抗原检测阳性８７份,两者均阳性７６份,ｎＰＣＲ比血ｐｐ６５抗原检测更敏感,两者相符率为６６％。结论 ｎＰＣＲ和血ｐｐ６５抗原检测技术均能作为器官移植病人活动性ＨＣＭＶ感染早期诊断的有效手段,两者同时使用能更有效地提高诊断水平,监控疾病的发生发展。     

人巨细胞病毒pp65抗原血症检测方法的建立和初步临床应用

目的建立人巨细胞病毒抗原pp65(HCMVpp65)血症特异、灵敏和低成本的酶免组化和荧光免疫组化方法,以利于临床推广应用.方法以HCMV-AD169感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)爬片作阳性对照,选择试剂和材料组建试剂盒,并与商品化的同类试剂盒作比较,建立人外周血多形核白细胞(PMNLs)中HCMVpp65抗原阳性细胞的检测方法,然后再用荧光定量PCR(FQ-PCR)方法做相应考评.结果我们建立的HCMVpp65抗原血症检测法能成功地检出PMNLs中的pp65阳性细胞.其可检测限分别为102 pfu/ml的AD169攻击24 h后的HELF细胞爬片和3～5个pp65阳性细胞/2×105 PMNLs;用高相对分子质量(500 000)的葡聚糖能快速、有效地分离PMNLs;用4%中性多聚甲醛固定的细胞片,于-20 °C或以下可长期保存(≥6个月),而且pp65抗原性稳定.结论自建的试剂盒与同类进口试剂盒相比,检测pp65的结果差异无显著性,并与FQ-PCR的检测结果相一致,其检测特异、灵敏、操作简单、费用低廉,适宜临床实验室推广应用.     

人巨细胞病毒pp65抗体检测方法的建立

目的 建立检测人巨细胞病毒pp65IgG抗体(HCMV pp65 IgG)的间接酶联免疫吸附试验(ELISA).方法 通过棋盘滴定法选择包被抗原和酶标二抗的最适浓度;以商品抗HCMV pp65单抗为阳性模拟标本,建立检测抗HCMV pp65 IgG抗体,并对临床收集的各类血清标本进行检测和分析.结果 检测间接ELISAHCMV pp65 IgG的最佳包被抗原浓度为10 ng/孔,酶标二抗的工作浓度为1∶3000.当阳性吸光度(A)值为0.298时,87份不同组的血清标本(HCMV感染活动组、HCMV感染不活动组、HCMV未感染组)阳性检出率分别为51.6%(16/31)、12.1%(4/33)和0.0%(0/23).3组两两间差异均存在显著性(P＜0.01).结论 本研究建立了检测HCMV pp65抗体的方法,应用该方法能从相应人群中检出该抗体,检测不存在假阳性,并发现该抗体与抗HCMVIgM的检出有关.     

荧光定量PCR与PP65抗原检测在诊断儿童巨细胞病毒活动性感染的比较

目的用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和pp65抗原检测儿童人巨细胞病毒(HCMV)感染,并对其诊断HCMV活动性感染进行比较评估。方法分析924例HCMV血清学检测阳性的儿童的全血HCMV-DNA荧光定量PCR及HCMV-pp65抗原检测结果,与临床诊断的符合程度进行比较。结果全血HCMV-DNA荧光定量PCR和pp65抗原检测的一致率为81.17%,其标准误为0.39,Kappa值为0.60;PCR检测HCMV感染的灵敏度为98.4%,特异度为97.3%,Youden指数为0.957,PVP和PVN分别为0.961和0.989;pp65抗原检测用于检测HC-MV感染的灵敏度为59.2%,特异度为100%,Youden指数为0.592,PVP和PVN分别为1.00和0.782。结论全血HCMV-DNA荧光定量PCR和pp65抗原检测的结果有较好的一致性,诊断HCMV感染PCR检测的灵敏度较pp65抗原检测的灵敏度要高,而后者的特异度较前者高。二种方法都可用于CMV活动性感染的诊断。     

Comparison between pp65 antigenemia assay and quantitative real-time polymerase chain reaction for detection of active cytomegalovirus infection in routine diagnostics

Real-time polymerase chain reaction (PCR) and pp65 antigenemia assay for the detection of active cytomegalovirus infection in immunocompromised patients experiencing neutropenia after bone marrow or kidney transplantation have been compared with a special focus on evaluability and embedment in daily routine diagnostics. Investigating 334 specimens from 97 patients, real-time PCR was shown to be the superior assay with regard to the parameters focused on.     

人巨细胞病毒被膜磷蛋白pp65重组抗原酶联免疫吸附法的建立与两种方法的比较分析

目的用我们研制的一种新人巨细胞病毒(HCMV)重组被膜磷蛋白pp65为抗原，建立快速、简便和特异的检测HCMVIgM的间接酶联免疫吸附法(REC—EL．ISA)。方法用自行设计、表达的新的HCMV pp65重组抗原，建立REC—ELISA，并检测100份临床疑似为HCMV感染者血清中HCMV—IgM，同时与全病毒为抗原的间接ELISA法(简称全病毒一ELISA法)和美国BioCheck试剂盒(简称BioCheck法)检测结果进行比较。结果REC—ELISA法重组抗原最适量为3．5μg／孔，HRP标记二抗为1：800，血清稀释度为1：100；稳定性试验阳性变异系数(CV)为9．5％，重复性试验平均CV值：批内CV 4．5％，批间CV 9．6％。REC—ELISA法、全病毒-ELISA法和BioCheck法检测HCMV IgM的阳性率分别为44％、50％和45％；REC—ELISA法的敏感性为95．6％，其特异性(98．2％)高于全病毒-ELISA法(90．9％)；正确指数为92．8％，与BioCheck法一致性为97．0％。结论用pp65重组抗原建立的REC—ELISA法具有高度特异性与敏感性，且操作简单、快速，重复性好；与全病毒抗原相比，重组抗原可规模化、标准化生产，且更安全、经济，具有良好的临床应用前景。     

肾移植受者人巨细胞病毒活动性感染的监测

目的 推广一种肾移植受者人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染的实验室诊断方法.方法 运用免疫组织化学的催化信号扩增法通过抗巨细胞病毒低基质磷蛋白65(pp65)单克隆抗体AAC10对外周血白细胞中的HCMV pp65抗原进行标记识别.结果 检测61例肾移植受者中HCMV pp65抗原阳性36例(59%),有症状的20例(33%),平均抗原指数(98±31)/(2×105)WBC;而无症状的活动性感染HCMV pp65抗原指数平均为(21±22)/(2×105)WBC.同时检测50名健康人,结果pp65抗原全为阴性.结论 该法简便、敏感,可作为肾移植后HCMV病的早期诊断并可指导抗病毒治疗.     

抗巨细胞病毒pp65抗原单克隆抗体的制备及临床初步比对检测

目的：制备抗巨细胞病毒pp65单克隆抗体并建立外周血巨细胞病毒抗原血症免疫荧光检测方法。方法 CM V AD169感染人胚胎肺成纤维细胞M RC‐5后24、48、72h ,超声波破碎和甲醛灭活制备CM V抗原,以及CMV pp65重组抗原免疫BALB／C小鼠,标准方法制备抗巨细胞病毒pp65单克隆抗体。利用所得单克隆抗体建立检测外周血巨细胞病毒抗原血症检测的实验方法,并与进口试剂盒CM V BriteTM Kit进行比对。结果共有两株杂交瘤细胞产生特异性抗体,克隆名称为13D1‐3和29F1‐1,免疫球蛋白亚型分别是IgG1型和IgG2a型,制备的腹水抗体纯化后仍具有良好的免疫学特性。单克隆抗体13D1‐3与 CM V BriteTM Kit试剂盒比对,阳性符合率为88．8％,阴性符合率为98．9％,总符合率为97．3％,Kappa值为0．895,吻合度较高。结论成功制备抗巨细胞病毒pp65单克隆抗体,建立以13D1‐3单克隆抗体为基础的检测外周血巨细胞病毒抗原血症方法,与CM V BriteTM Kit试剂盒比对具有良好的符合性。