c-FLIP反义寡核苷酸纳米粒抑制人眼眶横纹肌肉瘤裸鼠移植瘤的生长

目的探讨c-FLIP反义寡核苷酸(c-FLIP ASODN)纳米粒(NP)对裸鼠体内人眼眶横纹肌肉瘤移植瘤生长的影响,评估纳米粒作为基因载体的可行性。方法皮下种植法建立裸鼠人眼眶横纹肌肉瘤动物模型,瘤体内分别注射c-FLIP反义寡核苷酸纳米粒(ASODN NP组)、未包裹的c-FLIP反义寡核苷酸(ASODN组)及生理盐水(NS组),观察肿瘤体积、组织形态学改变;应用蛋白质印迹分析法及免疫组化染色检测各组肿瘤组织c-FLIP的表达情况;应用TUNEL细胞凋亡检测试剂盒检测肿瘤组织细胞凋亡情况。结果与其他两组相比,ASODN NP组肿瘤的生长受到抑制;蛋白质印迹分析显示ASODN NP组和ASODN组的c-FLIP表达均较NS组减少(P<0.05);免疫组化显示c-FLIP表达于胞质,ASODN NP组c-FLIP阳性细胞较其余两组减少(P<0.05);ASODN NP组及ASODN组肿瘤组织凋亡细胞增多,ASODN NP组更加明显,NS组仅见个别细胞凋亡。结论 c-FLIP ASODN NP可有效抑制人眼眶横纹肌肉瘤裸鼠移植瘤的生长。NP可作为一种安全有效的ASODN导入载体。     

TWEAK/Fn14在人结肠癌细胞SW480中的表达及对移植瘤血管发生的影响

目的 观察肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂(TWEAK)与其受体成纤维细胞生长因子诱导早期反应蛋白14(Fn14)在结肠癌细胞SW480中的表达及其对裸鼠移植瘤生长的影响.方法 结肠癌细胞系SW480脂质体法稳定转染TWEAK反义寡核苷酸(ASODN)、错义寡核苷酸(SCODN)分别培养;采用四唑盐比色试验(MTT)法检测肿瘤细胞增殖情况,RT-PCR法检测TWEAK及Fn14 mRNA的表达情况,细胞免疫荧光法检测细胞中的TWEAK及Fn14蛋白的表达;分别将空白对照组、LF对照组、ASODN组、SCODN组肿瘤细胞注射裸鼠皮下,观测各组裸鼠移植瘤体积、相对肿瘤增殖率,TUNEL法检测移植瘤细胞凋亡指数;免疫印迹法检测肿瘤组织血管生长因子(VEGF)C、D的表达.结果 空白对照组、LF对照组、SCODN组之间结肠癌肿瘤细胞的增殖情况及裸鼠移植瘤体积、肿瘤相对增殖率及肿瘤凋亡指数差异无统计学意义(P>0.05);与上述3组相比,ASODN组肿瘤细胞增殖受到明显抑制(P<0.05),TWEAK与其受体Fn14 mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.05),裸鼠移植瘤体积、相对肿瘤增殖率明显降低(P<0.05),肿瘤凋亡指数无明显变化(P>0.05),而VEGF-C、D蛋白表达量显著降低.结论 抑制TWEAK表达可能通过抑制VEGF的表达抑制结肠癌细胞及移植瘤增殖.     

存活蛋白反义寡核苷酸诱导食管癌细胞凋亡的研究

目的观察存活蛋白反义寡核苷酸转染对食管癌细胞凋亡、增殖、对化疗药物敏感性的影响。方法设计合成特异性存活蛋白反义寡核苷酸（ASODN）。食管癌EC109细胞系分为6组：空白对照组、空脂质体转染对照组、正义链转染对照组、160、200、240nmol／L ASODN转染组。作用20h后收获各组细胞,Western blot法检测各组细胞生存素表达情况。TUNEL法检测各组细胞的凋亡情况。结果各ASODN转染组细胞存活蛋白表达有不同程度减弱,细胞变圆、折光增强、细胞碎片形成等,而各对照组细胞生长良好。各ASDON转染组细胞凋亡指数明显高于各对照组（P〈0．05）,以240nmol／L转染组最明显（P〈0．05）。结论封闭食管癌细胞存活蛋白基因,能下调存活蛋白的表达,从而诱导食管癌细胞凋亡,抑制食管癌的发展。     

Effects of Survivin antisense oligonucleotide on molecular mechanism of inducing human gastric transplantable tumor apoptosis

目的 研究survivin反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)对人胃癌细胞裸鼠移植瘤生长的影响,并探讨其诱导人胃癌移植瘤凋亡的分子生物学机制.方法 建立SGC-7901胃癌细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为4组,即survivin-ASODN+脂质体组、survivin-ASODN组、脂质体组和空白对照组(蒸馏水).瘤体内隔日给药,停药后48小时处死裸鼠,剥离瘤组织,称取瘤重,计算抑瘤率.western-blot法检测各组凋亡相关蛋白survivin、Caspase-3蛋白的表达.结果 survivin- ASODN+脂质体组的移植瘤生长速度明显减慢,其抑瘤率为:33.19％.survivin-ASODN+脂质体组的survivin蛋白表达量明显低于对照组(P＜0.05),Caspase-3蛋白表达高于对照组(P＜0.05).结论 survivin反义寡核苷酸转染胃癌移植瘤能够明显抑制肿瘤生长,其主要机制与降低survivin蛋白的表达,诱导Caspase-3高表达,从而促进肿瘤细胞凋亡有关.     

Survivin反义寡核苷酸诱导人胃癌细胞裸鼠皮下移植瘤细胞凋亡的研究

目的研究survivin反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)对人胃癌细胞裸鼠移植瘤生长的影响,并探讨其诱导人胃癌移植瘤凋亡的分子生物学机制。方法建立SGC-7901胃癌细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为4组,即survivin-ASODN+脂质体组、survivin-ASODN组、脂质体组和空白对照组(蒸馏水)。瘤体内隔日给药,停药后48小时处死裸鼠,剥离瘤组织,称取瘤重,计算抑瘤率。western-blot法检测各组凋亡相关蛋白survivin、Caspase-3蛋白的表达。结果 survivin-ASODN+脂质体组的移植瘤生长速度明显减慢,其抑瘤率为:33.19%。survivin-ASODN+脂质体组的survivin蛋白表达量明显低于对照组(P<0.05),Caspase-3蛋白表达高于对照组(P<0.05)。结论 survivin反义寡核苷酸转染胃癌移植瘤能够明显抑制肿瘤生长,其主要机制与降低survivin蛋白的表达,诱导Caspase-3高表达,从而促进肿瘤细胞凋亡有关。     

RNA干扰survivin基因对Eca-109细胞体内增殖的影响

目的利用RNA干扰抑制Eca-109细胞survivin基因表达,观察survivin沉默后对食管癌细胞Eca-109体内增殖的影响。方法构建靶向survivin基因的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体,利用LipofectamineTM2000脂质体转染Eca-109细胞,建立稳定转染干扰组细胞Eca-109/si-survivin;同法建立阴性对照组细胞Eca-109/si-control,并以Eca-109为空白对照组细胞;通过Western blot检测survivin基因沉默效果;借助裸鼠移植瘤模型分析survivin干扰前后裸鼠成瘤时间及瘤结节质量的改变,比较各组Eca-109细胞的体内增殖速度;通过末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记技术法检测移植瘤细胞凋亡的变化。结果干扰组细胞survivin蛋白表达显著低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05),而阴性对照组细胞survivin蛋白表达与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。干扰组裸鼠平均瘤结节质量显著低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05),而阴性对照组与空白对照组裸鼠的平均瘤结节质量差异均无统计学意义(P>0.05)。干扰组裸鼠移植瘤细胞凋亡指数明显高于阴性对照组和空白对照组(P<0.05),而阴性对照组与空白对照组裸鼠移植瘤细胞凋亡指数比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论靶向survivin的siRNA能特异性沉默survivin基因表达,诱导细胞凋亡,进而抑制人食管癌Eca-109细胞的体内增殖。     

MMP-9反义寡核苷酸对肺腺癌细胞及其裸鼠移植瘤治疗的实验研究

目的 探讨基质金属蛋白酶-9反史寡核苷酸(MMP-9ASODN)对人肺腺癌(A549)细胞及其裸鼠移植瘤治疗的实验研究.方法 MTT法检测MMP-9ASODN转染对A549细胞生长的影响;流式细胞术检测MMP-9ASODN对A549细胞增殖和凋亡比率;采用皮下注射法建立移植瘤裸鼠动物模型,以脂质体包裹的MMP-9ASODN直接移植瘤内注射.观察肿瘤生长情况,计算抑瘤率和生长指数,利用光镜观察对重要脏器的形态学改变. 结果 在一定范围内,MMP-9 ASODN对A549细胞存活率抑制呈浓度和时间依赖性(反义寡核苷酸浓度为600 nmol/L作用48 h时抑制作用最明显);与对照组相比转染MMP-9ASODN的A549细胞凋亡百分比明显升高(P<0.01);MMP-9ASODN能使A549细胞周期阻滞在G_1/G_0期,MMP-9ASODN组肿瘤生长指数为(3.20±0.14).明显低于对照组(6.40±0.33)(P<0.01).MMP-9ASODN组的肿瘤重量为(1.25±0.03).明显低于对照组(2.43±0.04)(P<0.01),MMP-9ASODN组的抑瘤率为(33.41±1.18)%,而且心肝肾组织观察,结构均基本正常,未见有明显的组织损伤改变.结论 MMP-9ASODN能够有效地抑制肺癌A549细-胞的增殖和促进其凋亡;在体内可以显著抑制裸鼠移植瘤的生长,且无明显毒副作用.     

人端粒酶RNA反义寡核苷酸靶向治疗对裸鼠食管癌移植瘤的作用

目的:观察人端粒酶RNA(hTR)硫代修饰性反义寡核苷酸(ASODN)对裸鼠食管癌移植瘤的治疗作用.方法:10只裸鼠随机等分为ASODN组和对照组.2组裸鼠均给予EC9706细胞悬液皮下注射,当裸鼠食管癌移植瘤长至50 mm3时,ASODN组进行每24 h 1次、连续7 d的ASODN治疗,对照组给予PBS.分别于治疗后4 d、8 d测量2组肿瘤体积,第8 d取裸鼠肿瘤组织常规病理切片观察形态学改变,TUNEL染色观察癌细胞凋亡情况.结果:治疗后第4 d,ASODN组及对照组食管癌移植瘤体积(V/mm3)分别为55.8±12.0和98.5±18.2(P＜0.01),第8 d分别为64.8±21.6和173.0±21.2(P＜0.01).TUNEL染色显示,ASODN组肿瘤组织中可见大量呈片状分布的凋亡细胞,对照组仅见少量散在的凋亡细胞.对照组肿瘤细胞异型性较ASODN组明显.结论:hTR反义寡核苷酸可有效抑制裸鼠食管癌移植瘤的生长及恶性表型的产生.     

Livin反义寡核苷酸对肝癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的 利用Livin反义寡核苷酸在裸鼠体内抑制Livin基因表达,探讨Livin反义核苷酸对肝癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法 设计靶向Livin基因的反义寡核苷酸,以Lipofectamine2000作为载体导入裸鼠皮下移植瘤,观察肿瘤生长情况.采用RT-PCR方法检测实验组和对照组Livin基因表达,TUNEL法检测凋亡指数.结果 ASODN组裸鼠皮下移植瘤后14 d,肿瘤体积明显变小.Livin rnRNA表达明显降低.结论 Livin反义寡核苷酸可以明显抑制肝癌裸鼠移植瘤的增殖.     

survivin反义寡核苷酸对人胃癌细胞裸鼠皮下移植瘤P53蛋白表达的影响

目的研究survivin反义寡核苷酸（ASODN）能否抑制人胃癌细胞皮下移植瘤生长,及与P53蛋白的关系。方法将对数生长期SGC-7901胃痛细胞种植到2只裸鼠皮下,形成母瘤,再分别种植于其他裸鼠背部皮下。成瘤后随机分为4组（survivin-ASODN＋脂质体绢、survivin—ASODN组、脂质体组、对照组,每组n=8）。瘤体内隔日给药,停药后48h处死裸鼠,剥离瘤组织,称取瘤重,计算抑瘤率。Westernblot法检测survivin的表达,免疫组化法检测各组P53蛋白的表达。结果survivin—ASODN＋脂质体组的移植瘤生长速度明显减慢,其抑瘤率为33．19％。survivin—ASODN＋脂质体组的survivin蛋白、P53蛋白表达量明显低于对照组（P〈0．05）。结论survivin—ASODN对胃癌移植瘤生长有抑制作用,能够抑制survivin蛋白的表达,亦能抑制P53蛋白的表达,P53在survivin抑制凋亡的信号通路中亦起到一定作用。     

survivin反义寡核苷酸对肝癌耐药细胞的作用及与化疗的关系

目的研究survivin反义寡核苷酸对人肝癌耐药细胞株的增殖和凋亡情况,以及对阿霉素化疗敏感性的影响。方法将人肝癌耐药细胞系SMMC-7721/ADM分为脂质体转染组、阿霉素组、正义寡核苷酸转染组、正义寡核苷酸转染 阿霉素组、反义寡核苷酸转染组、反义寡核苷酸转染 阿霉素组共6组。MTT法检测细胞相对存活率,流式细胞仪分析细胞凋亡率变化,RT-PCR和Westernblot印迹法检测细胞survivinmRNA和蛋白表达。结果survivin-ASODN作用后的人肝癌耐药细胞SMMC-7721/ADM的细胞凋亡率明显增高(P<0.05)。survivinmRNA和survivin蛋白表达:脂质体转染对照组、阿霉素组、正义寡核苷酸转染对照组、正义寡核苷酸转染对照 阿霉素组之间survivin蛋白表达无明显差异(P>0.05)。400ng/mlsurvivingASODN组和400ng/mlASODN 阿霉素组survivinmRNA较其他4组显著降低(P<0.05),但其两组之间表达无明显差异(P>0.05)。结论survivin反义寡核苷酸能降低肝癌耐药细胞survivin表达,增强人肝癌耐药细胞对阿霉素的化疗敏感性。     

反义硫代寡核苷酸对786-O细胞survivin基因的表达及生长抑制作用

目的研究survivin反义寡核苷酸对肾透明细胞癌786O细胞表达survivin蛋白、细胞凋亡、增殖的影响。方法设计并合成特异性靶向survivin的反义寡核苷酸(ASODN)。肾透明细胞癌细胞株786O分为6组:空白对照组、脂质体转染对照组、正义链转染对照组、200、400和600nmol/LASODN转染组。作用24h后收获各组细胞。倒置显微镜及透射电子显微镜观察细胞形态变化,免疫组化法检测各组细胞survivin表达情况和流式细胞术检测各组细胞周期变化和凋亡指数,MTT法检测survivin反义寡核苷酸对各组细胞的生长抑制率。结果电镜下可以见到典型凋亡样改变,而各对照组细胞生长良好;各ASODN转染组细胞survivin表达有不同程度减弱;各ASODN转染组细胞凋亡指数明显高于各对照组(P<0.05),以600nmol/LASODN转染组最为明显(P<0.05),而各对照组间差异无显著性(P>0.05)。结论不同浓度survivinASODN转染后能下调survivin蛋白表达,诱导肾透明细胞癌786O细胞凋亡,抑制786O细胞增殖。     

生存素反义寡核苷酸对人子宫内膜癌细胞增殖的抑制作用

 目的 探讨生存素（survivin）反义寡核苷酸（antisense oligonucleotide,ASODN）对人子宫内膜癌细胞HEC-1B增殖的抑制作用。方法 实验分空白对照组（control组）、单纯脂质体对照组（Lip组）、正义链转染对照组（SODN组）、ASODN转染组（ASODN组）4组。人工合成正、反义寡核苷酸,经脂质体将survivin正、反义寡核苷酸转染入子宫内膜癌细胞48 h后收集各组细胞。免疫印迹（Western blot）法检测各组细胞生存素表达情况,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,四甲基偶氮唑蓝试验（MTT）法检测细胞生长抑制情况。结果 脂质体介导生存素反义寡核苷酸转染后的子宫内膜癌细胞出现生存素蛋白表达明显下降;ASODN转染组细胞凋亡率和增殖抑制率均明显高于各对照组（P<0.05）,而各对照组间差异无统计学意义（P>0.05）。结论 生存素反义寡核苷酸转染子宫内膜癌细胞能下调生存素蛋白表达,诱导子宫内膜癌细胞凋亡,抑制细胞增殖,对子宫内膜癌是一种有效的基因疗法。     

Survivin基因反义寡核苷酸与大肠癌血管形成的实验研究

目的 研究Survivin反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASODN)对人大肠癌裸鼠移植瘤的细胞凋亡及血管形成的影响.方法 建立裸鼠人大肠癌模型,将成瘤后的裸小鼠分为空白对照组、脂质体转染对照组、脂质体SODN对照组和脂质体ASODN组.测定瘤质量并计算移植瘤抑制率,瘤组织进行HE染色,用S-P法染色检测微血管密度(MVD),TUNEL法检测凋亡细胞.结果 ASODN实验组在第8天后测定最终瘤质量,与各对照组在统计学上均有显著性差异(P＜0.05).常规病理观察ASODN实验组可见肿瘤细胞生长受抑制,肿瘤组织可见片状坏死区,而且这些区域可见大量炎性细胞浸润.空白对照组、脂质体对照组、脂质体SODN对照组MVD分别为(19.57±3.37)、(21.94±4.41)、(20.49±3.91),ASODN实验组MVD为(11.30±2.79),差异显著(P＜0.05).空白对照组、脂质体对照组、脂质体SODN对照组AI分别为(3.53 ±1.89)、(3.86±2.14)、(4.47±2.30),ASODN实验组AI为(28.45±2.76),差异显著(P＜0.05).结论 Survivin基因反义寡核苷酸可显著抑制血管内皮生长因子的表达,导致内皮细胞凋亡和毛细血管迅速退化,从而达到抑制肿瘤生长的目的 .     

HOXA1基因反义寡核苷酸对食管癌细胞生长的影响

  目的  探讨同源异形盒A1(HOXA1)基因反义寡核苷酸（ASODN）对食管癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及机制。  方法  采用蛋白免疫印迹（Western blot）检测正常食管上皮细胞Het-1A和人食管鳞癌TE-1、EC9706和Eca109细胞HOXA1蛋白的表达,筛选高表达的食管鳞癌细胞进行后续实验;设计合成HOXA1 ASODN链、正义寡核苷酸(SODN)链及无义寡核苷酸（N-ODN）链;将筛选出的高表达的食管鳞癌细胞分为HOXA1 ASODN组（5、10、15 μmol/L的HOXA1 ASODN转染Eca109细胞）、对照组（细胞常规培养,不进行细胞转染）、SODN组（细胞转染15 μmol/L的SODN）和N-ODN组（细胞转染15 μmol/L的N-ODN）。采用噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术、Transwell小室分别检测细胞活力、凋亡率及侵袭迁移能力;Western blot检测HOXA1、磷酸化的丝氨酸苏氨酸激酶（p-AKT）、细胞增殖核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、B细胞淋巴瘤-2蛋白（B-cell lymphoma 2,Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。  结果  与正常食管上皮细胞Het-1A比较,人食管鳞癌TE-1、EC9706和Eca109细胞HOXA1蛋白表达均升高,差异有统计学意义（P<0.05）。HOXA1蛋白在Eca109细胞表达最高,因此选用Eca109细胞进行后续实验。转染HOXA1 ASODN的Eca109细胞HOXA1蛋白表达降低（P<0.05）。随着Eca109细胞转染HOXA1 ASODN浓度及时间增加,Eca109细胞活力降低,与对照、SODN、N-ODN组比较差异有统计学意义（P<0.05）。15 μmol/L的HOXA1 ASODN转染Eca109细胞后,与对照组比较,细胞侵袭和迁移能力降低,凋亡率升高,p-AKT、PCNA和MMP-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高（P<0.05）。  结论  HOXA1基因反义寡核苷酸可抑制食管癌细胞增殖、侵袭和迁移能力,并诱导凋亡,机制与抑制磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/AKT信号通路可能有关。     

结缔组织生长因子反义寡核苷酸对肝星状细胞胶原表达的影响

目的:观察结缔组织生长因子(CTGF)反义寡核苷酸对肝星状细胞株(HSC-T6)前胶原α2(Ⅰ)表达的影响。方法:实验分为反义寡核苷酸(ASODN)组、正义寡核苷酸(SODN)组、脂质体对照组、空白对照组。除空白对照组外,其余各组均于转导前提前加入TGF-β1因子刺激。结果:ASODN能显著抑制经TGF-β1活化后的HSC-T6前胶原α2(Ⅰ)mRNA的表达,而SODN和脂质体对照组对HSC-T6前胶原α2(Ⅰ)mRNA的表达均无明显影响。结论:前胶原α2(Ⅰ)表达与CTGF密切相关,进一步提示CTGF可能是肝纤维化发生发展的关键介导者;应用反义寡核苷酸封闭CTGF的表达有望成为肝纤维化治疗的一种新手段。     

5-ALA治疗和hTERT mRNA的反义寡核苷酸联合应用对人卵巢癌细胞的杀伤作用及其机制

目的：观察5-氨基乙酰丙酸（5-ALA）光动力治疗（PDT）和人端粒酶催化亚单位 (hTERT) mRNA的反义寡核苷酸（ASODN)联合应用对人卵巢癌3AO细胞的增殖抑制及促凋亡作用,探讨两种方法联合应用协同促进对人卵巢癌3AO细胞的杀伤作用机制。方法：采用MTT法筛选不同浓度5-ALA 和激光能量照射对人卵巢癌3AO细胞增殖抑制作用的最佳组合参数; RT-PCR法检测hTERT ASODN和SODN转染后hTERT mRNA表达水平的变化。将人卵巢癌3AO细胞分为空白
对照组、hTERT ASODN转染组、hTERT SODN转染组、5-ALA PDT组、hTERT ASODN转染+5-ALA PDT组和hTERT SODN转染+5-ALA PDT组,应用MTT法检测各组人卵巢癌3AO细胞增殖抑制率;应用膜联蛋白V-硫氰酸荧光素(AnnexinV-FITC)/碘化丙啶(PI)双染色结合流式细胞术检测
各组人卵巢癌3AO细胞凋亡率。结果：5-ALA PDT对人卵巢癌3AO细胞的增殖抑制作用随着光敏剂浓度的增加和激光能量的增大而增加(P<0.05);不同浓度hTERT ASODN转染人卵巢癌3AO细胞24 h后,hTERT mRNA表达水平呈浓度依赖性下调(P<0.05),而hTERT-SODN对人卵巢癌3AO细胞hTERT mRNA表达无显著影响(P>0.05)。hTERT ASODN转染+5-ALA PDT (5-ALA浓度为0.5 mmol•L-1,激光能量密度为2.50 J•cm-2)组人卵巢癌3AO细胞的增殖抑制率高于5-ALA PDT组和hTERT ASODN组(P<0.05)。hTERT ASODN转染+5-ALA PDT组人卵巢癌3AO细胞的凋亡率为29.28％,显著高于hTERT ASODN 转染组（12.79％）和5-ALA PDT组（21.19％)(P<0.05）。结论：hTERT ASODN转染与5-ALA PDT联合治疗可协同增强对人卵巢癌3AO细胞的增殖抑制作用,其机制可能与联合作用促进细胞凋亡有关联。     

VEGF—C对胰腺癌细胞凋亡影响的实验研究

目的研究VEGF—C对胰腺癌细胞凋亡的影响。方法建立人胰腺癌细胞株PANC-1裸鼠原位种植瘤模型,原代培养原发和淋巴结转移灶中胰腺癌细胞,通过VEGF—C反义寡核苷酸体外转染抑制其表达,应用RT—PCR及流式细胞术等方法研究对淋巴结转移胰腺癌细胞凋亡及bcl-2的影响。结果体外转染后,原代培养原发和淋巴结转移灶中PANC-1胰腺癌细胞VEGF—C的mRNA表达水平显著降低（P〈0．01）。体外转染VEGF—C反义寡核苷酸抑制其表达后,对照组、SODN组、ASODN组淋巴结转移胰腺癌细胞的凋亡率为（2．83±1．01）％、（4．98±2．05）％、（13．22±2．17）％,ASODN组细胞凋亡率显著提高（P〈0．01）,而原发灶胰腺癌细胞的凋亡率分别为（3．51±1．38）％、（4．79±2．16）％、（5．33±2．18）％,凋亡率无明显影响（P〉0．05）;淋巴结转移胰腺癌细胞的反义组bcl-2表达水平明显下调（P〈0．05）,而原发灶胰腺癌细胞bcl-2表达水平无明显变化（P〉0．05）。结论抑制淋巴结转移灶中胰腺癌细胞VEGF—C的高表达可促进胰腺癌细胞凋亡,这和bcl-2表达下调有关;但对原发灶胰腺癌细胞无明显影响。     

生存素反义寡核苷酸对人胃癌细胞增殖的抑制作用

目的 探讨生存素（survivin）反义寡核苷酸（ASODN）对人胃癌细胞SGC7901增殖的抑制作用。方法 设计合成特异性靶向生存素的反义寡核苷酸。胃癌细胞株SGC7901分为4组：空白对照组、单纯脂质体对照组、正义链转染对照组、ASODN转染组。作用48h后收获各组细胞。Westernblot法检测各组细胞生存素表达情况，流式细胞仪检测各组细胞凋亡率，MTT法检测各组细胞的生长抑制率。结果 脂质体介导生存素反义寡核苷酸转染后的胃癌细胞出现生存素蛋白表达明显下降；ASODN转染组细胞凋亡率明显高于各对照组（P〈0．05），而各对照组问差异无显著性（P〉0．05）；ASODN转染组细胞的抑制率明显高于各对照组（P〈0．05），而各对照组问差异无显著性（P〉0．05）。结论 生存素反义寡核苷酸转染胃癌细胞能下凋生存素蛋白表达，诱导胃癌细胞凋亡，抑制细胞增殖，具有明显的抗癌作用。