病毒性心肌炎抗心肌线粒体ADP／ATP载体抗体检测的临床意义

应用免疫转印技术检测３８例病毒性心肌炎患者血清中抗犬心肌线粒体ＡＤＰ／ＡＴＰ载体抗体，发现病毒性心肌炎患者血清中存在抗心肌线粒体３０千道尔顿多肽自身抗体，这种抗体的阳性率，患者组为２６．３％，正常组为０（Ｐ〈０．０１）。研究提示抗心肌线粒体ＡＤＰ／ＡＴＰ载体抗体可能是引起病毒性心肌炎患者心肌功能损害的原因之一。     

合成SSB/La多肽与DNA共同免疫动物导致DNA抗体产生抑制

目的观察SSB抗原与DNA抗原共同免疫动物时不同抗体滴度的变化，研究合成SSB／La多肽与DNA共同免疫动物是否导致DNA抗体产生抑制。方法根据人SSB抗原cDNA编码的氨基酸序列，设计合成214-225位的12个氨基酸多肽，将人工合成多肽与血蓝蛋白（keyhole limpet hemocyanin，KLH）进行耦联，与ds-DNA、SSB联合DNA、KLH、PBS分别作为抗原对5组家兔进行免疫，用ELISA法检测产生的抗体。并取动物心、肝、肾、脾和皮肤进行组织学检查和免疫荧光检测。结果ELISA法检测发现，不同抗原免疫家兔均能诱导相应抗体产生。联合免疫组SSB／La抗体的滴度明显高于单独SSB免疫组，而dsDNA抗体的滴度明显低于单独免疫组。此外，混合免疫组中同一家兔SSB抗体效价显著高于DNA抗体效价。免疫后未发现动物以上器官组织学改变。结论SSB多肽、DNA免疫家兔后抗体产生规律存在差异，合成SSB／La多肽与DNA共同免疫家兔后可导致DNA抗体产生抑制。     

铁贮存量对大鼠心肌、肝细胞超微结构及能量代谢的影响

用雌性Ｗｉｓｔａｒ大鼠经饮水给予不同剂量的铁，使体内铁贮存量增加，观察铁对大鼠心肌、肝细胞超微结构及能量代谢的影响。结果表明，大鼠心、肝组织中铁贮存量增加可引起心肌、肝细胞线粒体、滑面内质网变性，肝细胞线粒体嵴减少，肝血窦内皮细胞变形，基质颗粒增多。而且给铁组大鼠心、肝组织中三磷酸腺苷（ＡＴＰ）含量和负荷能量（Ｅ．Ｃ）明显低于对照组。表明实验性大鼠体内铁贮存量增加可致心肌、肝细胞超微结构改变，继而影响心肌、肝细胞能量代谢过程。     

铁贮存量对大鼠心肌,肝细胞超微结构能量代谢的影响

用雌性Ｗｉｓｔａｒ大鼠经饮水给予不同的剂量的铁，使体只铁贮存量增加，观察铁对大鼠心肌、肝细胞超微结构及能量代谢的影响。结果表明，大鼠心、肝组织中铁贮存量增加可引起心肌、肝细胞线粒体、滑面内质网变性，肝细胞线粒体嵴减少，肝血窦内皮细胞变形，基质颗粒增多。而且给铁组大鼠心、肝细胞中三磷酸腺苷（ＡＴＰ）含量和负荷能量（Ｅ．Ｃ）低于对照组。表明实验性大鼠体内铁贮存量增加可致心肌、肝细胞超微结构改变，继而影     

生脉注射液对扩张型心肌病的免疫抑制作用研究

应用间接微固相放射免疫法检测了原发性扩张型心肌病（ＩＤＣ）患者的抗心肌线粒体ＡＤＰ／ＡＴＰ转运蛋白（ＡＮＴ）自身抗体，发现抗ＡＮＴ抗体持异存在于ＩＤＣ患者，阳性率３７．５％（１８／４８），表明ＩＤＣ发病与自身免疫反应有关。在强心利尿、依那普利等抗心衰治疗基础上，加用生脉注射液４０ｍｌ／ｄ治疗１８例抗ＡＮＴ抗体阳性的ＩＤＣ患者一月后，１４例患者心功能明显好转，血压稳定；抗ＡＮＴ抗体效价下降，抑制性Ｔ淋巴细胞数量增加，表明在常规抗心衰治疗基础上加用生脉注射液治疗扩张型心肌病具有抑制自身免疫反应，改善心功能的好效果。     

ELF3多克隆抗体的制备及其免疫定位

目的 制备并鉴定兔抗小鼠胚肝血影蛋白3(embryonic liver fodrin 3,ELF3)的多克隆抗体,并探讨其在部分小鼠组织中的免疫定位.方法 合成ELF3氨基端特异性多肽片段,连接载体蛋白钥孔戚血蓝素(keyhole limpet hemocyanin,KLH),免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,用ELISA方法 检测抗体效价,Western blot和免疫组织化学方法 检测抗体特异性及在小鼠组织中的表达情况.结果合成ELF3特异性多肽,并连接KLH后免疫实验兔,制备得到兔抗小鼠ELF3多克隆抗体,ELISA及Western blot检测结果显示此抗体效价及特异性高;Western blot和免疫组织化学检测结果显示ELF3在心、肝、肾组织中表达,尤其是细胞膜上表达明显.结论 本实验成功制备ELF3多克隆抗体,并证实ELF3在小鼠心、肝、肾组织细胞膜表达明显,这将为ELF3功能研究提供有力的工具.     

阿霉素对大鼠心肌细胞膜磷脂损伤及CoQ10的保护作用

用电镜方法观察阿霉素（ＡＤＲ）对心肌细胞膜磷脂损伤及ＣｏＱ１０的保护作用。结果显示：ＡＤＲ大鼠心脏心肌细胞依ＡＤＲ累积量均呈现线粒体明显增生，线粒体膜磷脂不同程度脱失；血浆及心肌丙二醛（ＭＤＡ），血浆乳酸脱氢酸脱氢酶（ＬＤＨ）和肌酸磷酸激（ＣＰＫ）升高，且与心功能及心脏大小相关。培养心肌细胞结构、培养液中的ＭＤＡ、ＬＤＨ及ＣＰＫ含量与ＡＤＲ心脏改变一致。ＣｏＱ１０干预后，心肌细胞线粒体增生程度减轻     

牛磺酸对肾性高血压大鼠心肌血管紧张素Ⅱ及胶原含量的影响

观察牛碘酸对肾血管性高血压大鼠心肌血管紧张素Ⅱ及胶原含量的影响，并探讨左室肥厚的机制。方法：建立二肾一夹（２Ｋ１Ｃ）肾血管性高血压大鼠模型。应用放免法测定ＡｎｇⅡ（ＭＡＣ），羟脯氨酸法测定大鼠心肌胶原含量（ＭＣＣ）。显微镜下观察心肌组织结构改变，测微计测量心肌纤维直径（ＭＦＤ），并对ＭＣＣ及ＭＦＤ与ＭＡＣ进行线性相关性。结果：２Ｋ１Ｃ肾性高血压大鼠ＭＣＣ及ＭＦＤ与ＭＡＣ含量较假手术（Ｓｈａｍ组）显     

钙调神经磷酸酶依赖的信号通路在大鼠心肌肥大中的作用

目的：观察钙调神经磷酸酶（ｃａｌｃｉｎｅｕｒｉｎ，ＣａＮ）信赖的信号通路在大鼠心肌肥大中的作用。方法：通过腹主动脉缩窄复制大鼠压力超荷性心肌肥大模型，观察ＣａＮ特异性抑制剂－环孢素Ａ（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎ Ａ，ＣｓＡ）对大鼠心系数以及血浆及心肌组织心钠素（ａｒｉｔｒｉａｌ ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅ，ＡＮＰ）水平的影响。     

病毒性心脏病抗腺苷酸转位酶自身抗体的研究进展

病毒性心脏病（ＶＨＤ）是指与病毒感染有关的心脏病,包括病毒性心肌炎（ＶＭＣ）及部分扩张型心肌病（ＤＣＭ）。以Ｓｃｈｕｌｔｈｅｉｓｓ为代表的学者发现一种只存在于ＶＨＤ的自身抗体,即抗心肌线粒体腺着酸转位酶（ＡＮＴ）抗体,不仅为ＶＨＤ病因和发展机理研究、亦为其治疗提供了一种新思路。１．抗ＡＮＴ抗体的基础研究线粒体产生的能量需经ＡＮＴ的转移才能进入胞浆,供心肌各种耗能活动所需。ＡＮＴ是位于线粒体内膜最丰富的疏水蛋白质,约占膜蛋白的１２％,分子量约３０ＫＤ,以二聚体形式存在。Ｓｃｈｕｌｚｅ等［１］用分离…     

大鼠ANT1蛋白的原核表达纯化及多克隆抗体的制备

目的：表达和纯化大鼠腺苷酸转运体（ANT1）蛋白并制备其多克隆抗体.方法：通过PCR扩增大鼠脑组织中ANT1的编码区序列,构建ANT基因重组载pET28a-ANT1,转化至E. coli BL21（DE3）,IPTG诱导表达,Ni2＋-NTA离子交换树脂层析纯化;纯化的ANT1蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体并亲和纯化,并通过Western Blot法鉴定其特异性.结果：成功构建重组质粒pET28a-ANT1,经IPTG诱导在大肠杆菌中表达了Mr约为32×10^3的目的蛋白;亲和层析纯化后免疫的新西兰大白兔获得其多克隆抗体;曝光后胶片上均可见Mr32×10^3的阳性条带,与纯化的大鼠ANT1重组蛋白处于同一水平,表明纯化的抗ANT多克隆抗体具有高度的特异性.结论：利用基因重组技术,在大肠杆菌中成功表达了大鼠ANT1融合蛋白并制备了其多克隆抗体,为研究腺苷酸转运体蛋白在癫痫发病过程中的作用机制奠定了基础.     

沙眼衣原体主要外膜蛋白多表位免疫血清中和活性分析

目的 制备高效价E型沙眼衣原体(Ct)主要外膜蛋白(MOMP)168多表位特异性免疫血清并研究其免疫学特性.方法 纯化的Trx-his/Ct MOMP168融合蛋白经弗氏佐剂乳化后,小鼠背部皮下多点免疫注射,间隔2周后加强免疫,共3次,并分别于免疫前和每次免疫后2周取血,采用ELISA法检测血清融合蛋白和E型Ct全菌体特异性抗体水平及变化趋势,通过体外中和反应检测多表位特异性血清的免疫学特性.结果 小鼠用Ct MOMP168多表位融合蛋白全程免疫后产生了抗融合蛋白和E型Ct全菌体特异性抗体,ELISA法检测最高滴度达1:500.ELISA和体外中和实验检测结果显示,该抗体能特异性识别MOMP 多表位蛋白和E型Ct全菌体,并能有效抑制E型Ct感染Hela229细胞.结论 沙眼衣原体MOMP多表位融合蛋白免疫血清可特异性结合并中和E型Ct.     

Cpn0585蛋白的免疫活性及血清学诊断初步评价

目的克隆肺炎嗜衣原体包涵体膜蛋白Cpn0585基因,初步探讨其在血清学诊断中的应用价值。方法构建pGEX-6p-2／Cpn0585重组质粒,诱导表达并纯化重组蛋白,免疫BALB／c小鼠,间接酶联免疫附试验（ELISA）检测小鼠血清抗体滴度,以重组蛋白作为ELBA包被抗原检测血清中CpnIgG抗体和检测36份Cpn-／Ct＋IsG阳性参考血清。结果高效表达和纯化出一相对分子质量约为95kDa的重组蛋白,蛋白质印迹法证明其能与人抗CpnIgG抗体发生反应;在被免疫的BALB／c小鼠体内,特异性IgG抗体的滴度为1：12800;检测104例临床血清标本中的IgG抗体,与以色列SavyonDiagnostics公司SeroCPTMIgGELISA诊断试剂盒的检测结果进行比较,符合率为98．3％。结论表达的Cpn0585重组蛋白具有良好的免疫活性,在Cpn的血清学诊断中具有较高的应用价值。     

日本血吸虫尾蚴抗原模拟表位的筛选及其免疫保护性

目的 筛选日本血吸虫尾蚴抗原的模拟表位，探讨其对日本血吸虫的免疫保护性。方法 用粗提日本血吸虫尾蚴抗原的抗体IgC作配体筛选噬菌体12肽库，按“吸附－洗脱－扩增”的过程进行三轮筛选；随机挑取单个噬菌体克隆进行Dot-ELISA检测；用混和噬菌体克隆免疫小鼠3次，攻击感染45d后剖杀冲虫，计算虫数及肝卵数。结果 经三轮筛选，特异性噬菌体得到富集，挑取11个噬菌体克隆经Dot-ELISA鉴定，均与日本血吸虫尾蚴抗原免疫血清呈特异性反应。与对照组相比，混和噬体克隆免疫小鼠的减虫率为18.79%，减卵率为38.00%。结论 利用噬菌体随机肽库技术获得了日本血吸虫尾蚴抗原的模拟表位，这些表位能诱导对日本血吸虫的保护性免疫。     

Studies on the immunogenicity of Streptococcus equi vaccines in foals

The ability of either formalin-treated or heat-inactivated whole Streptococcus equi cell vaccines or partially purified M-protein of S. equi to give rise to protective antibody levels was studied in Standardbred foals by serological means. Two commercial preparations, i.e. a beta-propiolactone killed whole S. equi cell bacterin and a cell-free extract of S. equi cells were included in the study. The mean passive hemagglutination antibody titers (10 X log2) in sera of foals given either four doses of formalin-treated whole cell vaccine or an initial dose of formalin-treated followed by three doses of heat-inactivated vaccine with or without levamisole were significantly higher two weeks after the final dose. These passive hemagglutination antibody titers were higher in foals given formalin-treated whole cell vaccine (6.7 +/- 1.5) than given commercial bacterin (4.5 +/- 2.1). The passive hemagglutination antibody titers in all the groups decreased at 12 to 16 weeks after fourth dose of the vaccine. Foals given a commercial cell-free extract did not show a significant increase in passive hemagglutination antibody titers even up to four weeks after third dose. A group of six pony foals immunized with partially-purified M protein showed mean passive hemagglutination antibody titers lower than those observed in foals given whole cell vaccines. In a challenge experiment with S. equi, two of six foals vaccinated with partially-purified M-protein and all three controls developed clinical disease. The passive hemagglutination antibody of vaccinated foals increased after challenge, while at 28 days postchallenge the passive hemagglutination antibody titers of vaccinates and recovered controls were similar.     

基因乙肝疫苗接种母鸡的体液免疫应答

目的：探讨基因乙肝疫苗对母鸡免疫效果的影响。方法：用基因乙肝疫苗辅以佐剂皮下注射母鸡，随后加强免疫4次，用ELISA方法检测血清中抗－HBs。结果：在初次免疫母鸡血清中检出低滴度抗体，加强免疫后，抗体水平显著上升，滴度高达1：640，并维持较长时间，其抗体水平及抗体应答持久性与注射次数与注射途径有关。此外，用乙肝疫苗加佐剂比单用乙肝疫苗免疫效果明显要好。结论：应用基因乙肝疫苗能够诱导母鸡产生针对HBsAg的特异性体液免疫应答。     

麻疹疫苗及加佐剂经滴鼻免疫小鼠的抗体应答

目的：观察麻疹减毒活疫苗和灭活疫苗经滴鼻免疫小鼠后的抗体应答。方法：用活的或灭活麻疹疫苗及分别加明胶、植物血凝素(PHA)的疫苗滴鼻免疫小鼠，于末次免疫后10d取血清、唾液、呼吸道分泌物，用间接ELISA法检测特异性IgG，IgA抗体水平，并与皮下注射组及对照组进行比较。结果：各滴鼻组小鼠血清及呼吸道分泌物中均产生一定水平的特异性IgG及In抗体，皮下注射组小鼠呼吸道分泌物中未产生特异性IgA抗体；加明胶后的免疫效果优于加PHA的。结论：麻疹疫苗滴鼻免疫小鼠后可诱导全身及局部抗体应答，明胶可增强其免疫效果，而麻疹疫苗皮下注射免疫小鼠未能诱导局部抗体应答。     

受体破坏酶在流感病毒血清抗体检测中的应用

目的 :检测受体破坏酶 (RDE)对人血清及鸡血清中非特异性抑制素的清除作用。方法 :常规制备正常人、鸡以及流感病毒感染者的血清各 30份 ,应用血凝抑制试验 ,测定RDE处理前后人及鸡血清抗体效价的变化。结果 :30份正常鸡血清在RDE处理前后其抗体效价均 <10 ;30份正常人血清 ,处理前有 5份抗体效价是 2 0 ,12份 10 ,处理后 30份抗体效价均<10。 30份感染者血清使用RDE处理后抗体效价均有不同程度降低。结论 :鸡血清中非特异性抑制素含量低 ,RDE处理与否对其作用不大。而人血清中的非特异性抑制素会对实验结果造成影响。因此进行流感病毒血清抗体检测时特异性鸡抗血清可不用RDE处理 ,而人血清需RDE处理 ,以确保实验结果的准确性。     

CMV抗体免疫金快速检测试剂盒的开发与初步应用

目的: 开发一种低成本、简单易用的基于免疫金渗滤法的试剂盒,以用于检测分析血清中的巨细胞病毒抗体. 方法: 将用人工合成的人巨细胞病毒(HCMV)抗原表位的线性肽和分支多抗原肽分别划线固定于硝酸素纤维膜上,制成免疫层析检测试纸条,血清中IgG与测试条上金标记物结合后沿硝酸纤维素膜移动,与膜上的固相抗原结合形成肉眼可见的红色带条并用GICA和ELISA试剂盒对比检测120份血清标本中抗HCMV抗体. 结果: 分支多抗原肽制成的免疫层析检测试纸条的灵敏度为97.9%,特异度为87.5%,两法符合率为95.8%. 结论: GICA检测血清中的抗HCMV抗体特异性强,灵敏度高,简便快速,有广泛应用价值.     

高强度炎症反应诱导关节软骨特异性瓜氨酸化抗原表达

目的 探讨关节软骨蛋白瓜氨酸表位的表达情况，以及瓜氨酸化表位对抗瓜氨酸蛋白抗体（ACPAs）的免疫应答的影响。方法 体外诱导实验：实验组加不同浓度梯度的脂多糖、热灭活细菌（大肠杆菌、金色葡萄球菌）或二型胶原（CII）特异性单克隆抗体等不同刺激物诱导体外培养关节软骨蛋白瓜氨酸化，等量PBS作为对照组，利用特异性结合瓜氨酸化表位的单克隆抗体ACC4（IgG1）进行免疫组织化学染色，ACC1（IgG2a）作为阳性对照，Hy2.15（IgG1）和L243（IgG2a）分别作为同型阴性对照，显微镜下观察瓜氨酸化蛋白表达；体内诱导实验：SD大鼠右膝关节内注射不同浓度脂多糖作为实验组，左膝关节内注射等量PBS为对照组，3 d后取膝关节组织，制成冰冻切片，利用上述抗体进行免疫组化染色，显微镜下观察瓜氨酸化蛋白表达；建立不同种系的胶原诱导性关节炎（CIA）小鼠模型，评价其疾病发生率和严重程度，同时收集小鼠血清与高滴度抗瓜氨酸化抗体的类风湿性关节炎患者血清，采用液相芯片技术检测小鼠及类风湿患者血清中抗瓜氨酸化蛋白抗体水平，并用免疫组织化学检测关节炎小鼠关节软骨瓜氨酸化蛋白的表达水平。结果 特异性结合瓜氨酸化CII 表位的ACC4抗体未能结合至经不同诱导的关节软骨组织；与健康对照组相比，ACC4抗体和含高滴度的抗瓜氨酸化蛋白抗体的类风湿性关节炎患者血清中的抗体均能结合至CIA小鼠关节炎症关节软骨周围的滑膜组织；成功构建不同种系小鼠类风湿性关节炎模型，其发病率和疾病严重程度无统计学差异（P>0.05）；液相芯片技术分析结果显示，小鼠血清中的抗瓜氨酸化抗体低表达或几乎不表达，但抗CII三螺旋结构多肽的抗体反应性较强。结论 轻度急性炎症反应不足以引起关节软骨蛋白瓜氨酸化，其特异性抗原表位的表达需要高强度的炎症反应。二型胶原诱导的小鼠关节炎模型中炎症关节软骨蛋白可表达瓜氨酸化抗原表位，但瓜氨酸化抗原表位的表达不足以引起小鼠体内抗瓜氨酸化抗体的免疫应答，其免疫应答需要更多的刺激信号来诱导。