转基因Tomoregulin⁃1低表达加速扩张型心肌病小鼠的病理进程

目的：探究Tomoregulin?1对扩张型心肌病（dilated cardiomyopathy,DCM）小鼠病理进程的影响。方法：Western blot方法检测Tomoregulin?1在cTnTR141W DCM小鼠模型心脏组织中的表达水平;于2、4和6月龄对同窝阴性（non?transgenic littermates,NTG）小鼠、心脏组织特异Tomoregulin?1低表达小鼠、cTnTR141W DCM小鼠和心脏组织特异Tomoregulin?1低表达×cTnTR141W双转基因（double transgenic,DTG）小鼠进行M型超声心动图和病理组织学表型分析。结果：Tomoregulin?1在cTnTR141W DCM小鼠模型心脏组织中表达显著增高;M型超声心动图显示,与NTG小鼠相比,心脏组织特异Tomoregulin?1低表达小鼠在2、4和6月龄时心脏均呈现显著的室壁变薄、心腔增大和心收缩功能减退的表型;与cTnTR141W DCM模型小鼠相比,DTG小鼠在2、4和6月龄时心脏均呈现显著的室壁变薄的表型,亦呈现心腔增大和心收缩功能减退的趋势;病理组织学显示,与NTG小鼠相比,心脏组织特异Tomoregulin?1低表达小鼠心肌细胞排列紊乱并出现间质纤维化的表型;与cTnTR141W DCM模型小鼠相比,DTG小鼠的心肌细胞排列紊乱和间质纤维化程度更加严重。结论：转基因低表达Tomoregulin?1加速了cTnTR141W DCM小鼠的病理进程,Tomoregulin?1可能是DCM调节的重要修饰基因。     

HOXC10通过靶向调控CST1的表达对肺癌细胞干细胞样特性的作用研究

目的:探究HOXC10通过靶向调控CST1的表达对肺癌细胞干细胞样特性的作用。方法:肺癌细胞系A549在无血清培养条件下形成肿瘤球,WB分别检测HOXC10及干性标志蛋白CD44、CD133、Nanog、SOX2、OCT4的表达。构建ShNC、ShHOXC10 A549细胞,检测干性标志蛋白CD44、CD133、Nanog、SOX2、OCT4的表达,肿瘤成球实验检测细胞自我更新能力,CCK8法检测细胞增殖能力。构建ShNC、ShHOXC10肺癌小鼠皮下瘤模型,测定肿瘤体积和重量,免疫组织化学法检测HOXC10、CST1和干性蛋白标志蛋白CD44、CD133在肿瘤组织中的表达。q PCR和WB法检测ShNC、ShHOXC10组A549细胞中CST1 mRNA和蛋白表达,ChIP-PCR和ChIP-qPCR检测HOXC10和CST1启动子序列结合,双荧光素酶报告基因验证HOXC10对CST1启动子活性的调控。在ShHOXC10细胞中回补pcDNA3.1-CST1,检测CST1过表达对干性标志蛋白CD44、CD133、Nanog、SOX2、OCT4表达及肿瘤成球和细胞增殖的影响。结果:HOX...     

EdU标记心脏细胞增殖:一种检测心脏再生的新方法

目的:寻找一种简单、快速、更有效的检测心脏细胞增殖的方法,以探讨损伤心脏再生潜能的机制。方法:取小鼠不同时期(胚胎、新生及成年期)及不同生理状态下(健康、心肌梗死后)心脏行组织冰冻切片后,用免疫荧光染色法分别标记心脏细胞:心肌细胞(心脏特异转录因子Nkx 2.5和Gata 4,心肌特异性标记蛋白TnT),内皮细胞(CD34),血管平滑肌细胞(SMMIgG),心脏干细胞(IsL1,Tbx18和Wt1);在此基础上用EdU染色法检测不同心脏细胞的增殖能力。结果:EdU能强烈地标记不同时期及不同生理状态下小鼠心脏细胞的增殖;心梗后心脏细胞进入细胞增殖周期,但增殖能力非常有限。结论:EDU可简单、快速、更有效的检测心脏细胞增殖,为探讨损伤心脏再生潜能机制提供了新的方法。     

TfR⁃Ubi融合蛋白稳定表达株的构建及功能初测

目的：通过构建转铁蛋白受体?泛素（transferrin receptor?ubiquitin,TfR?Ubi）融合蛋白,研究胞内体蛋白分选机制。方法：首先扩增小鼠泛素和人源转铁蛋白受体基因,构建HA?TfR?Ubi表达质粒,转染A431细胞后,采用Western blot验证融合蛋白的表达。在稳定表达TfR?Ubi的A431和Hrs?KO MEF细胞株中,转铁蛋白刺激,免疫荧光法观察TfR?Ubi融合蛋白在细胞内的位置。结果：成功构建HA?TfR?Ubi表达质粒,免疫荧光结果提示TfR?Ubi融合蛋白被分选到晚期内体（late endosome）/溶酶体,Hrs?KO MEF细胞中TfR?Ubi融合蛋白分选受到影响。结论：TfR?Ubi融合蛋白在胞内体被分选,证明了泛素修饰改变了转铁蛋白受体的降解方式,为胞内体分选转运装置（endosomal sorting complex required for transport,ESCRT）分选机制研究提供了实验工具。     

虫草菌丝提取物对二甲基亚硝胺大鼠肝窦内皮细胞损伤和表型改变的影响

目的 探讨虫草菌丝提取物(CME)对二甲基亚硝胺(DMN)肝纤维化大鼠肝窦内皮细胞(SECs)损伤和表型改变的影响.方法 采用DMN复制大鼠肝纤维化模型,分别于3 d、2周、4周作为观察时相点;透射电镜观察肝组织超微结构,免疫组织化学法观察肝窦壁CD44、Ⅷ因子相关抗原(vWF);放射免疫法测定血清透明质酸(HA)含量.造模同时给予CME 0.74 g/kg灌胃,每日1次,共4周.结果 DMN造模后第3天,CD44染色减弱、vWF阳性染色明显增强,SECs窗孔减少,血清HA含量显著升高(P<0.05),4周时可见SECs失窗孔和SECs下基底膜形成;CME早期(3 d)能够使SECs失窗孔减轻;CME灌胃2周、4周后,大鼠血清HA水平下降(P<0.05),肝窦壁CIM4表达增强、vWF阳性染色减弱(P<0.05),SECs失窗孔和SECs下基底膜形成减轻.结论 CME能够减轻DMN大鼠肝窦内皮细胞损伤和表型改变,抑制肝窦毛细血管化形成.     

结肠癌组织中S100A4的表达情况及其与淋巴结转移的关系

目的：研究在结肠癌组织中S100A4的表达情况与结肠癌淋巴结转移之间的关系.方法：采用免疫组织化学方法测定S100A4蛋白在正常结肠组织及结肠癌组织中的表达水平,分析S100A4在结肠癌组织中表达的意义及其与结肠癌淋巴结转移之间的关系.结果：1.在结肠癌组织及正常结肠粘膜中均有S100A4的表达,在出现淋巴结转移的结肠癌组织中S100A4的表达增高.结论：在结肠癌组织及正常结肠组织中均有S100A4的表达,S100A4表达增高与淋巴结转移有关.     

m6A识别蛋白Ythdf3在精子发生中的作用研究

目的：通过基因敲除模型研究N6?甲基腺嘌呤（m6A）识别蛋白Ythdf3在小鼠精子发生过程的调控作用。方法：利用CRISPR/Cas9技术构建Ythdf3基因敲除小鼠,通过免疫荧光和HE染色对敲除小鼠进行表型分析,研究Ythdf3在调控小鼠精子发生过程中的作用。结果：免疫组化染色显示Ythdf3在精原及各级生精细胞核中均有表达;成功构建Ythdf3基因敲除小鼠模型;HE染色显示Ythdf3敲除小鼠睾丸各级生精时相及附睾尾精子与对照相比无明显异常。结论：在正常生理条件下,敲除Ythdf3不影响雄性小鼠精子发生。     

肿瘤转移相关基因的研究进展

肿瘤的分化、侵袭和转移等一系列病理过程受多种基因的调控,它们在肿瘤细胞浸润和转移机制中或被激活,或被抑制,相互协同或拮抗,最终影响肿瘤细胞的生物学特性。nm23基因抑制肿瘤转移,而CD44v、S100A4基因和TIAM1基因促进肿瘤的扩散。     

S100A16转基因小鼠的构建与鉴定

目的:构建系统表达S100A16基因型小鼠,为研究S100A16基因的生物学功能提供模型动物?方法:将S100A16 cDNA插入CMV启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射方法建立转基因小鼠?PCR鉴定转基因小鼠的基因型,采用定量PCR(QPCR)方法筛选高表达品系?结果:成功构建S100A16转基因载体,建立了S100A16转基因小鼠,通过PCR及QPCR方法筛选出两个高表达品系(line A,line B)?结论:建立了系统表达S100A16的转基因小鼠,转入的S100A16基因在脂肪?肝脏?肌肉?肺等组织高表达,为研究S100A16的生物学功能特别是在肥胖中的作用及机制提供了动物模型?     

复方保肝宁减轻小鼠肝纤维化的机制:抑制肝脏组织中的IDO1进而促进树突状细胞表型成熟

目的 观察中药复方保肝宁对肝纤维化模型小鼠的保护作用并探讨其作用机制。方法 本研究分为两部分,第1部分：按 0.6 mL/（kg·d）予以腹腔注射25% CCl4（CCl4∶橄榄油=1∶3）的方式诱导野生型小鼠建立肝纤维化病理模型,随机分为对照组、模型组、阳性对照组及保肝宁低、中、高浓度组,10只/组。造模给药8周后处死小鼠,取小鼠血清检测AST、ALT水平。另取肝组织做HE、天狼星红染色及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫组化染色并检测吲哚胺2,3-双加氧酶1（IDO1）的表达水平。流式细胞仪检测小鼠肝脏树突状细胞（DCs）及T细胞的数量和表型变化。第2部分：按3×1011 v.g/只尾静脉注射IDO1过表达腺相关病毒,取正常野生型小鼠随机分为腺相关病毒阴性对照（AAV9-NC）干预组、IDO1过表达腺相关病毒（AAV9-IDO1）干预组及高浓度保肝宁+IDO1过表达腺相关病毒联合干预组,6只/组。干预4周后,取肝组织做IDO1免疫组化染色并检测小鼠肝脏树突状细胞（DCs）及T细胞的表型变化。结果 与模型组比较,保肝宁高浓度组能有效降低肝纤维化小鼠血清中AST、ALT水平（P< 0.01）;改善肝组织病理损伤,减少肝纤维组织的形成及α-SMA和IDO1的沉淀（P<0.05）。保肝宁高浓度治疗组肝纤维化小鼠肝脏中CD11C+DCs、CD11C+CD80+DCs、CD11C+CD86+DCs、CD11C+CD40+ DCs、CD11C+MHCII+ DCs细胞和CD3+T、CD3+CD4+T细胞比例与模型组相比均呈不同程度的升高（P<0.05）。高浓度保肝宁干预后可显著降低IDO1过表达腺相关病毒干预小鼠肝脏中IDO1的表达水平及上调CD11C+CD40+ DCs、CD11C+MHCII+ DCs和CD3+CD4+T细胞比例（P<0.05）。结论 保肝宁对CCl4所致小鼠肝纤维化具有一定的治疗作用,其机制可能与降低肝组织中IDO1的表达水平继而促进肝脏中DCs表型成熟使DCs刺激T细胞增殖能力增强有关。